HIV/SIDA

Human Immunodeficiency Virus

Acquired immunodeficiency syndrome
Sindrome d’immunodeficience aquise

1
RETROVIRIDAE
Genom ARN
ONCOVIRINAE
LENTIVIRINAE: HIV Reverstranscriptaza

SPUMAVIRINAE
ADN proviral

Integraza

Integrare ADN celular

genom ARN +PROTEINE

2
1981- primele cazuri AIDS (sindrom de imunodeficienta umana dobandita ) raportate in SUA la
homosexuali tineri, anterior sanatosi
1981-83- grupe de risc, AIDS- boala transmisa parenteral, sexual (hetero si homosexual),
materno-fetal
1983 - se stabileste etiologia virala a bolii prin izolarea virusului
- tulpina numita LAV (Lymphadenopathy Associated Virus) - Luc Montaigner, Françoise Barré-
Sinoussi (Institutul Pasteur din Paris)- Premiul Nobel pentru Medicina 2008
- tulpina numita HTLV III (Human T-cell Leukemia Virus III) - Robert Gallo, Bethesda,
SUA/tulpina ARV AIDS associated retrovirus (J. Levy, San Francisco, SUA)

1985 – cele 3 tulpini sunt demonstrate a apartine aceluiasi virus redenumit HIV (Human
Imunodeficiency Virus), Familia RETROVIRIDAE, GEN LENTIVIRINAE

1985 - sunt livrate primele truse de diagnostic imunoenzimatic

1986 - se descopera HIV2 (Africa de Vest)

1998 – secventierea celei mai vechi probe de plasma HIV1 pozitiva cunoscuta -recoltata în
1959, de la un barbat din Congo. 3
 1992 - 1993 - variantele genomice ale HIV sunt încadrate în clade (A-J), Media distantei intercladale
este de aproximativ 27%, intra- cladal 11% din nucleotide.

HIV1 –inrudit cu SIVcpz-

rezervorul natural -
subspecie din Africa
Centrala, Pan troglodites
troglodites Camerun;
Gabon,
Guineea
Camerun Ecuatoriala

HIV2 (Africa de Vest), inrudit cu SIV sm

(sooty mangabey)

4
Atât virusurile umane cât si cele simiene par a avea un precursor comun. In Coasta de Fildes au fost descrises forme de trecere
SIV HIV – ce determina la om infectii asimptomatice-populatia ruralã, în afara grupelor de risc pentru achizitia infectiei HIV -
continua contaminare a omului cu tulpini simiene.

3 transferuri distincte ale SIV cpz de la aceeasi

specie: Pan troglodites troglodites

Gao.F et al, Nature, 1999, 397, 436-41

Weiss RA, Wrangham RW, Nature, 1999, 397, 385-6.
Keele, BF, 2006 Science www. sciencexpress.org 5
 GENOMUL HIV:
1.Gene structurale:
env (anvelopa-gp120, gp41)
Gp160-precursor
gag : antigene de grup: (capsida, matricea, nucleocapsida;)
pol: cx polimerazic-(reverstranscriptaza, integraza, proteaza)
Gp120- superficiala
2.Gene reglatorii(rev, tat, nef)
3. Gene accesorii (de maturare)
P66-Rt

P55-Rt

Gp41-transmembranara

P32-proteaza

P24- capsida

P17- matricea

p10/11-integraza

p7/9- nucleocapsida

6
Western Blot
CELULE TINTA IN INFECTIA HIV- celule CD4 pozitive :
limfocitele T helper
macrofage
celule foliculare dendritice (CFD)

7
 Tropism HIV
Tulpini ce utilizeaza
Tulpini ce utilizeaza coreceptorii CXCR4
Tulpini R5/X4
coreceptorii CCR5 Dual-trope limfotrope
Macrofagotrope Asociate cu progresia bolii
Asociate cu transmiterea HIV

Linii celulare T
CD4+ CCR5+/CXCR4+

Limfocite T
Macrofage
CD4+ CXCR4+
CD4+ CCR5+
Forma modificata a CCR5- Deletie 32 bp
Alela prezenta in forma homozigota- pacienti expusi, dar neinfectati HIV
Heterozigota- supravietuitori de lunga durata (non-progresori, lent progresori)
Polimorfism populational
In stadiile timpurii ale infectiei, tulpini:
• Macrofagotrope
• Nonsincitizante
• rata replicativa scazuta
In stadiile tardive ale infectiei, tulpini:
•limfotrope
• sincitizante
• rata replicativa inalta
9
Ciclul Replicativ viral: faza de eclipsa
Adsorbtie –gp120 cupleaza receptorul principal CD4 si coreceptorii CCR5 (macrofage) sau CXCR4 ( limfocite Th)

Internalizare prin fuziune: gp41 Decapsidare

10
CRESTEREA LOGARITMICA
NUCLEU

INTEGRAZA HIV
LTR

ARN polimeraza ADN dependenta

–POLII (celulara)

CITOPLASMA

11
FACTORI VIRALI IMPLICATI IN REPLICAREA HIV:
Vpr- transport intranuclear al complexului preintegrativ
Vif- stimuleaza formarea ADN proviral, prin blocarea APOBEC3G celular
Vpu- creste eliberarea virionilor HIV

Tat-transactivator al promoterului HIV

Rev-stimuleaza exportul citoplasmatic al ARNm
Nef- interactioneaza cu proteine celulare implicate in semnalizarea celulara permitand supravietuirea pe termen
lung a LTh infectate si promovarea apoptozei LT neinfectate

PROTEINE CELULARE IMPLICATE IN REPLICAREA HIV:

-TRIM5α (TRIpartite Motif) –la primate intervine in degradarea cx de reverstranscriere in proteazomi
-APOBEC3G citozin deaminaza -converteste citozina in uracil in cursul sintezei ADNss(-) – este inactivata de
proteina vif a HIV

VARIABILITATE HIV :
• Rata mare de erori a Rt-azei: 3x10-5 mutatii/ nucleotid/ ciclu replicativ si rata mare de recombinari in cursul
reverstranscrierii-folosirea alternativa a celor 2 copii genomice
• Rata mare de erori a ARN polimerazei celulare Pol II 1:2,000-10,000

• Rata replicativa inalta: In fiecare zi se produc circa 10 miliarde de virioni; genom HIV 9749 nucleotide; FIECARE
virion progen poate avea cel putin o mutatie!
12
 MATURARE- ASAMBLARE- ELIBERARE

Maturarea-Clivarea precursorilor polipeptidici sub Eliberare prin inmugurire

influenta proteazei virale
13
 TINTE PENTRU INHIBAREA REPLICARII HIV
RALTEGRAVIR
NRTI
NNRTI

Indinavir,
Darunavir
 MEDICAMENTE ANTIRETROVIRALE
INHIBITORI AI FAZEI DE ECLIPSA

Adsorbtie la
coreceptorii CCR5
Internalizare prin fuziune

gp41
gp120
Variable
loops CD4

Inhibitori CD4??- Inhibitori alosterici ai

neaprobati pt utilizare- Inhibitorii Fuziunii
coreceptorilor CCR5
in curs de testare

Maraviroc (R5)
Vicriviroc (R5) Fuzeon (Enfuvirtide)
 Analogii nucleozidici (NRTI)-si
Inhibitorii non-nucleozidici (NNRTI)- nucleotidici (ntRTI) inhibitori ai
ai reverstranscriptazei (Rt) virale reverstranscriptazei virale
blocarea sitului catalitic al RT competitie cu nucleoz(t)idele celulare, cu
stoparea elongarii lantului de ADN proviral

16
 PRINCIPALELE CLASE DE ANTIRETOVIRALE FOLOSITE IN PRACTICA
De prima linie:
Analogii nucleozidici inhibitori ai reverstranscriptazei virale (NRTI) - compusi apartinând clasei
dideoxinucleozidelor (substante chimice formate dintr-o baza azotatã si un rest glucidic a cãrui grupare
hidroxil din pozitia 3' a fost înlocuitã cu un substituent ce nu permite participarea la legãturi fosfodisterice). In
celulele umane, analogii nucleozidici sunt fosforilati de enzimele celulare. Mecanismele care stau la baza
activitãtii lor sunt:
- competitia cu nucleozidele fiziologice la nivelul situsurilor de legare ale reverstranscriptazei si blocarea
elongatiei lantului ADN rezultat prin reverstranscriere, datoritã imposibilitãtii participarii la legãturi
fosfodiesterice cu alte nucleozide-

Inhibitorii nonnucleozidici ai reverstranscriptazei virale (NNRTI) sunt activi direct, fãrã a necesita fosforilare
intracelularã-blocheazã direct activitatea enzimei, fixându-se la nivelul unui "buzunar" hidrofob, situat foarte
aproape de situl catalitic al Rt

Inhibitorii proteazei virale (PI)-blocheaza clivarea precursorului gag-pol în:- proteine structurale gag(p24, p17,
p7) si pol- enzime virale (RT-aza, intrgraza si proteaza p32 însãsi). Sunt medicamente active ca atare-blocheazã
maturarea si inhibã infectivitatea virionilor progeni atât în celulele infectate activ cât si în cele infectate cronic,
penetrarea lor intracelularã fiind bunã (inclusiv în macrofage si celule foliculare dendritice - CFD).

De rezerva- Inhibitorii fuziunii (Fuzeon), antagonistii coreceptorilor CCR5 (Maraviroc, vicriviroc) si inhibitorii
integrazei (Raltegravir)
17
 Strategii terapeutice
Combinatii divergente –medicamente cu mecanisme distincte de actiune: HAART

Highly Highly
Active Expensive
Anti- Anti-
Retroviral Retroviral
Therapy Therapy
HAART: 2NRTI+ 1 PI
2NRTI+ 1 NNRTI
 PROFILAXIA TRANSMITERII MATERNO-FETALE

• ACTG 076: AZT in monoterapie – schema in 3 parti (vezi slide-ul urmator)

Rata transmiterii 25% (placebo) vs < 8% (AZT)

• HIVNET 012 in Uganda - 200 mg nevirapina (NNRTI) per os la inceputul

travaliului + 2 mg/kg oral nevirapina per os nou nascutului in primele 3 zile de la
nastere
Rata transmiterii 25% (placebo) vs. 13% (NVP)

• HAART administrat mamei – rata transmiterii <3-5%

• Cezariana-Scade riscul transmiterii cu 50%, asociata cu tratamentul ARV scade riscul

transmiterii >87%

• De citit articol PMTC HIV –se gaseste pe grup yahoo virusologie la rubrica Files in
folder “cazuri HIV”)
 PMTC- preventia transmiterii materno-fetale

Pregnancy Labor & Delivery Newborn

ZDV

ZDV syrup
ZDV ZDV IV: 2mg/kg q 6
100mg Load 2mg/kg
po 5x/d hr
1 mg/kg/hr x 6 wk
Target: Target: Target:
In Utero Intrapartum Postpartum
 PROFILAXIA TRANSMITERII HIV
• CAPRISA 004 (The Centre for the AIDS Program of Research in South Africa)
- gel vaginal 1% tenofovir, analog nucleotidic inhibitor al Rt
Incidenta HIV :
– la cele care au primit tenofovir : 5.6 per 100 femei anual
– La cele care au primit placebo : 9.1 per 100 100 femei anual
Reducerea risc infectie HIV cu 39% / 54% la cele cu aderenta mare

• Truvada (tenofovir =analog nucleotidic inhibitor al RT si

emtricitabine- analog nucleozidic inhibitor al RT )
•reducere risc infectii HIV la MSM in medie cu 44% - 73% (aderenta mare).
 EVOLUTIA NATURALA A INFECTIEI HIV:
INFECTIA PRIMARA-ASIMPTOMATICA-ARC-SIDA

MONITORIZARE-PARAMETRII:
- CLINIC
- IMUNOLOGIC (numar celule CD4 +)
-VIRUSOLOGIC (incarcare virala= numar copii ARN HIV/ml plasma
 1. Infectia primara (sindrom
retroviral acut)

Titru viral ridicat > 10 milioane copii ARN HIV/ml

•Scadere tranzitorie a nr celule CD4+
• Infectia preponderenta a macrofagelor- cal troian (tulpini
HIV ce utilizeaza coreceptorul CCR5)
•Simptomatologie nespecifica (febra, oboseala, rash,
limfadenopatii,sindrom mononucleosis-like)
•Fereastra serologica- diagnostic-ARN HIV prin Rt-PCR
 2. Infectia asimptomatica- raspuns imun puternic
•Virionii provin din celule CD4+ infectate recent, activate, in curs de diviziune
•Raspuns citotoxic eficient
•Productia de novo de limfocite CD4+ compenseaza liza produsa direct de virus si cea CD8 indusa

CD4
ARN HIV

• Virusul persista in ganglioni limfatici si celule dendritice ; limfocitele CD4+ de

memorie au ADN proviral integrat
Eficienta rãspunsului imun influenteazã nivelul încãrcãrii virale - “set-point” -
concentratie plasmaticã a virusului

Walker BD, Goulder PJ. AIDS. Escape from the immune system. Nature. 2000;407:313-4.
3. ARC-AIDS Related Complex
PATOGENIE HIV
•Replicare viralã masivã în tesutul limfoid-selectie tulpini CXCR4 (SI)
•Depletia limfocitelor T CD4+ infectate
•Hiper-reactivitate imunã generalizatã

4. SIDA/AIDS
•Cresterea masiva a titrului viral –la nivelul din infectia primara
•scaderea nr celulelor CD4+<200/mm3
•IO cu risc vital
 INFECTIE LT CD4 + ACTIVATE SI REPLICAREA HIV

Depletie masiva a LT CD4 +, mai ales la nivelul mucoaselor(GALT)

Translocatie Reactivare
bacteriana- virusuri latente
RI specifice liganzi TLR
anti HIV
umorale si Productie masiva de
celulare proteine specifice HIV
tat, nef, gp120

Sinteza de citokine ACTIVARE IMUNA SISTEMICA

proinflamatorii si
chemokine Epuizarea sistemului imun
Declinul capacitatii regenerative celulare
Imunosenescenta
 Adrese de Internet utile celor interesati de diagnosticul,
tratamentul si prevenirea infectiei HIV

• http://hivatis.org/atisnew.html (HIV AIDS Treatment Information Service)

• http://www.actis.org (AIDS Clinical Trials Information Service) si de aici prin -
http://www.actis.org/relatedwebs.html o suita de alte situri grupate pe capitole de
interes (prevenţie, transmitere, vaccinuri, infectia HIV pediatricã, reagenti pentru
diagnostic, etc.),
• http://hivinsite.ucsf.edu/InSite – extrem de complexa baza de date a Universitãtii
din California, San Francisco, cu statistici de ultimã orã si informatii despre
preventie, transmitere, terapie, cercetări multidisciplinare.
• http//www.medscape.com/Home/Topics/ID/AIDS.html- o adresa indispensabilã
tuturor specialistilor implicati în tratarea pacientilor HIV pozitivi.
• http://www.cdc.gov/std/program- pentru preventia bolilor transmisibile sexual
(STD), a TBC si SIDA
• http://www.atdn.org/access/drugs.html-date actualizate despre medicamentele
antiretrovirale

Catedra de Virusologie UMF Carol Davila