Tema 7: Fosforilación Oxidativa

Una persona de 70 kg sin hacer ejercicio extra (deporte, gimnasio) requiere~ 2000 kcal para su
actividad diaria
Para obtener esa energía necesitaría ~83 kg

1. ATP, más ATP, el mismo ATP

Cada molécula de ATP se recicla ~ 300 veces al día, es decir, estamos constantemente
fabricando y gastando ATP.
La mayor parte del ATP del cuerpo se genera en un proceso de fosforilación oxidativa.
La fosforilación oxidativa ocurre en las mitocondrias, en los cloroplastos y en la membrana de
las bacterias.

La fosforilación oxidativa es el proceso de fosforilación enzimática del ADP a ATP acoplado a la

transferencia de electrones de un sustrato reducido al oxigeno molecular.
La enzima responsable de esta síntesis de la ATP sintasa, también denominada complejo V,
ATPasa mitocondrial o cloroplástica, o F1F0-ATP asa.

2. La fosforilación oxidativa

La respiración celular o el flujo de e- desde el NADH (o el FADH2) al O2 es un proceso

exergónico.
La síntesis de ATP es endergónica
¿Cómo se acopla el proceso exergónico del transporte electrónico a la síntesis endergónica de
ATP a partir de ADP o Pi en las mitocondrias?
3. El modelo quimiosmótico

A mediados del siglo XX el principal reto de la bioenergética era elucidar el nexo entre la
formación de ATP y la fuente de energía requerida para hacerlo: luz (fotosíntesis) u oxidación
(cadena respiratoria mitocondrial).
La hipótesis mas probable era que la energía liberada en el transporte electrónico sirviese para
generar una molécula rica en energía que fosforilaría al ADP para formar ATP, algo similar a la
fosforilación a nivel de sustrato.
P.Mitchell postulo la existencia de un potencial electroquímico generado por la distribución
asimétrica de los protones a ambos lados de la membrana que haría posible la síntesis de ATP
a partir de ADP y fosfato.

Petter Mitchell en 1961 formulo su modelo quimiosmótico que se resume así: la síntesis de ATP
y el transporte electrónico se acoplan mediante la formación de un gradiente protónico a través
de la membrana mitocondrial interna que impulsa la síntesis de ATP.

Recibió el Premio Nobel en Química en 1978.

La energía libre del transporte electrónico se conserva en el gradiente electroquímico generado

por el flujo de H+ a través de la membrana mitocondrial interna.

Ese gradiente electroquímico genera una fuerza protón-motriz (Δp) que va a utilizarse para
sintetizar ATP, tiene dos componentes: un potencial químico debido a la diferencia de pH a
ambos lados de la membrana y un potencial eléctrico provocado por el movimiento de q+.
Figure 19.17
 1. La fosforilación oxidativa requiere de una membrana mitocondrial interna intacta.
2. La membrana mitocondrial interna es impermeable a iones como H+, OH-, K+, Cl-
3. El transporte electrónico promueve el transporte de H+ al espacio intermembrana,
creando un gradiente electroquímico medible a través de la membrana mitocondrial
interna
4. Los compuestos que aumentan la permeabilidad de la membrana mitocondrial interna a
los H+, disipan el gradiente electroquímico inhibiendo la síntesis de ATP.

3.1. El modelo quimiosmótico: demostración experimental (I)

a) Mitocondrias aisladas: no hay ni gradiente protónico ni presencia de sustratos oxidables.

b) Las mitocondrias se incuban en un medio con un pH menor formándose un gradiente de pH;
se añade valinomicina porque transporta K+ hacia el exterior contribuyendo a aumentar el
gradiente electroquímico
Resultado: se genera un gradiente electroquímico (químico: pH, electro: carga) que impulsa la
síntesis de ATP en ausencia de sustratos oxidables.

Figure 19-22
3.2. El modelo quimiosmótico: demostración experimental (II)

La Bacteriorrodopsina (BR) es una bomba protónica dependiente de la luz característica de

Halobacterias.
EXPERIMENTO: se construyen unas vesículas lipídicas con BR y ATP sintasa. Al iluminarlas
hay un bombeo H+ por parte de la BR al interior de la vesícula, generando un gradiente H+ y
observándose la síntesis de ATP.
CONCLUSIÓN: en el gradiente protónico está contenida la energía necesaria para sintetizar
ATP.

Muy importante: saber succinato (examen)

4. Acoplamiento del transporte electrónico y la fosforilación oxidativa:

demostración experimental en mitocondrias aisladas.

La adición ADP+ Pi incrementa muy poco la respiración (consumo de O2) o la síntesis de ATP;
la adición de succinato incrementa rápidamente la respiración y la síntesis de ATP. La adición
de cianuro (CN-) detiene ambos procesos.
En otro experimento, se le añade oligomicina (inhibidor de la ATP sintasa) y se observa que
cuando se inhibe la síntesis de ATP, el consumo de O2 también se ve reducida.

5. La ATP Sintasa

La ATP sintasa es la enzima responsable de la síntesis de ATP empleando la fuerza protón-

motriz. También puede hidrolizar ATP a ADP +Pi y generar un gradiente protónico.
La ATP sintasa tiene dos dominios: FO (unido a la mb. Mitocondrial) y F1 que tiene la actividad
catalítica.
La ATP Sintasa se encuentra en mitocondrias, cloroplastos y bacterias.

ADP+Pi+n (H+)  ATP+H2O+n(H+)

¿Cómo el gradiente protónico promueve la síntesis de ATP?

Los experimentos de intercambio isotópico con H 2 18O (en ausencia del gradiente protónico) y la
subunidad F1 demuestran que en la superficie de la enzima la reacción: ADP+Pi  ATP+
H2O.
Es fácilmente reversible y el complejo enzima-ATP se forma sin necesidad de la fuerza protón-
motriz.

El valor de AGº de la reacción catalizada por el dominio F1 de la ATP sintasa en la superficie

del enzima es próximo a 0 (= -2.2 kJ/mol), es decir, la reacción está casi en equilibrio.

Mecanismo catalítico de F1.

Enz-ATP + H2 18O  Enz – (ADP +Pi)

Experimento de intercambio isotópico con H2 18O: se observa que, al cabo de unos minutos, el
Pi contiene todos los átomos de O marcados.

¿Cómo se debería interpretar este resultado?

6. Coordenadas de reacción para una enzima convencional y para la ATP sintasa

Con la ATP sintasa la principal barrera energética a superar es la liberación del ATP del enzima
y la fuerza protón-motriz proporciona la energía libre necesaria para superar esa barrera.
El gradiente protónico es necesario para sintetiza ATP y para que el ATP abandone el centro
catalítico de la ATP sintasa.
Figure 19.24

7. Estructura de la ATP Sintasa

Dos dominios funcionales Fo y F1.

Fo es un canal protónico y F1 realiza la catálisis.
Figure 19.25.
7.1. Dominio F1: α3 β3 γ δ ε: actividad catalítica.

-Cada subunidad beta está unida a una subunidad alfa y puede: i) unir ADP + Pi, ii) sintetizar
ATP, iii) liberar ATP.
-Las subunidades γ (gamma) y ε (épsilon): forman parte del tallo central y tiene capacidad de
rotar.
-La subunidad δ: forma parte de la columna externa que junto con b2 fijan (impiden que rote)
F1.

7.2. Dominio Fo: a b2 cn (8-15). Canal protónico

-Anillo c (c8 a c15): un conducto protónico que forma parte del roto junto con γ y ε
- Subunidad a: forma parte del canal protónico y esta unida al anillo c.
-Subunidad b2: dos cadenas que forman parte de la columna externa.

8. Rotor y Estator de la ATP sintasa

El complejo γ y ε -cn es el Rotor: hay un movimiento de rotación del anillo c y de la subunidad y

provocando por el paso de protones.

El complejo b2 δ (delta) impide que el ordenamiento α3 β3 rote junto con la subunidad γ.

El movimiento de la subunidad γ provoca cambios conformacionales en las subunidades β que
afectan a su actividad catalítica.

9. ATP Sintasa: catálisis rotacional

La ATP sintasa es el motor molecular más pequeño del mundo. Los protones fluyen a través de
Fo provocando la rotación del tallo γ y ε.
La subunidad γ rota en dirección contraria a las agujas del reloj, provocando cambios
conformacionales en la subunidad β.

Cada subunidad β puede:

- Unir ADP +Pi
- Sintetizar ATP
- Liberar el ATP de la enzima
Cada subunidad β cambia su estado conformacional al rotar la subunidad γ (gamma):
1) Estado L (Loose, relajado): une ADP +Pi
2) Estado T (Tighthm, tenso: sintetiza ATP
3) Estado O (Open, abierto): libera el ATP
La energía para la rotación de la subunidad γ proviene del gradiente protónico (del paso de H+
por el canal protónico en Fo).

L T  O
OLT
TOL

Demostración experimental

La adición y posterior hidrolisis del ATP promueve la rotación del filamento de actina en sentido
contrario a las agujas del reloj.
Gira la subunidad gamma.

Rotación del filamento de actina marcado con una sonda fluorescente) visto por microscopía de
fluorescencia (fotos cada 133 ms).

Complejo
gamma alfa 2
beta 3

Cola de poliHis Superficie del cristal recubierta con iones Niguel

(se une a los
iones Ni)
10. Translocación del ATP/ADP y del Pi

La fuerza protón-motriz es, por tanto, responsable tanto de la síntesis de ATP como del
transporte de sustratos (ADP, Pi) y productos (ATP).
Intercambio ATP /ADP equivale a la salida de una q- y por lo tanto esta favorecido por el
gradiente H+.

11. Reversibilidad de la ATP sintasa

Respiración normal + hipoxia

Hidroliza ATP para generar el gradiente protónico porque es importante también para muchas
otras cosas dentro de la célula, a parte de la síntesis de ATP.

12. El inhibidor IF1

En condiciones de hipoxia es peligroso que la ATP sintasa hidrolize ATP para bombear
protones al exterior. ¡despilfarro de ATP!
El inhibidor IF1 se une simultáneamente a 2 moléculas de ATP sintasa e inhibe su actividad
ATPasa, pero solo si está dimerizado.
La dimerización de IF1 esta favorecida por un pH inferior a 6,5 y ese medio ácido esta
favorecido por la condiciones de hipoxia que activan la glucolisis que genera acido pirúvico y
ácido láctico.

13. En la cadena respiratoria, ¿Cuántos ATPs se producen en la oxidación

completa de la Glucosa a CO2 y H2O?

C6H12O6 + 6 O2  6 CO2 + 6 H2O

Cálculos antiguos: por cada NADH se forman 3 ATP y por cada FADH2 se forman 2 ATP.
Cálculos actuales: por cada NADH se forman 2,5 ATP y por cada FADH2 se forman 1,5 ATP.

Los virus son seres vivos por dos razones: porque tienen material genético, porque son
capaces de evolucionar.

14. Cálculo de los ATP de la oxidación de una molécula completa de glucosa.

15. El gradiente protónico interviene en muchos procesos bioquímicos

16. Desacoplantes del transporte electrónico y la fosforilación oxidativa

17. Diferencia entre Desacoplantes e Inhibidores

Los inhibidores bloquean la cadena respiratoria

Los desacoplantes impiden la fosforilación oxidativa porque disipa el gradiente protónico. No se

genera esa fuerza protón-motriz. Pero los desacoplantes permiten la cadena de transporte
electrónico.

17.1. Agentes desacoplantes: ionóforos y proteínas desacoplantes

Los agentes desacoplantes evitan que el flujo de electrones genere un gradiente protónico
provocando que:
- No haya síntesis de ATP
- La energía se disipe como calor
- Se incrementa el consumo de O2
- Se incrementa la oxidación de NADH

Son de dos tipos:

- Moléculas trasportadoras de H+ (ionóforos)
- Proteínas desacoplantes (UCP)
17.2. Agentes desacoplantes: ionóforos

Son un tipo de sustancias que se unen a iones y las transportan atravesando las membranas
celulares.
DN-4 dinitrofenol.

17.3. Agentes desacoplantes: el 2,4-DNP

Hace años, a pesar de las advertencias de los científicos de la Universidad de Stanford (CA,
USA) algunos médicos comenzaros a tratar a enfermos con dinitrofenol. Los resultados fueron
sorprendentes: los pacientes adelgazaron mucho, pero, lamentablemente, muchos de ellos
fallecieron.
El alto número de efectos adversos y muertes provocadas por el DNP hizo que la FDA (Food
and Drug Administration) (USA) lo prohibiera en 1938 y lo catalogara como una “sustancia
extremadamente peligrosa y no apta para el consumo humano”. La OMS también considera
esta sustancia muy peligrosa.

¿Por qué tomar desacoplantes puede conducir a la muerte?

Porque se queman las grasa y las proteínas corporales. El metabolismo celular tiene demanda
de ATP como ese ATP no se consigue da al orden al tejido adiposo de que se produzca la
movilización de las grasas.

No hay síntesis de ATP, no hay reoxidación de los coenzimas hasta que se produce el colapso
del metabolismo.
¿Por qué tomar desacoplantes adelgaza?

18. El caso de Eloise

Eloise A.P. era una joven de 21 años que padecía bulimia.

Quería adelgazar rápidamente.
Murió en mayor de 2015 tras tomar ocho pastillas con DNP.
Además del caso de Eloise ha habido recientemente otros casos de jóvenes que han adquirido
esta sustancia ilegal y han fallecido como consecuencia de su ingestión.

19. Las proteínas desacoplantes (UCP).

Las proteínas desacoplantes son canales en la membrana mitocondrial interna que permiten el
paso de H+.
El cortocircuito protónico evita que la energía se conserva en forma de gradiente protónico y se
disipa en forma de calo r (Termogénesis).
UCP-1 (UnCoupling Portien-1) o Termogenina es un canal protónico en la membrana
mitocondrial interna.

20. El Tejido Adiposo Marrón (BAT)

- Es un tipo de tejido adiposos, muy rico en mitocondrias, que esta presente en muchas
especies de mamíferos incluida la humana y está especializado en la producción de
calor (termogénesis).
- La elevada cantidad de citocromos le da un aspecto marrón.
- BAT es Brown Adipose Tissue.
Su función principal es proporciona calor al recién nacido y a los animales hibernantes.

21. Mecanismo de la Termogénesis

Sistema que permite generar calor.

Figure 23-34

El proceso fisiológico se desencadena en el hipotálamo, donde sus células producen unas

señales que provocan la termogénesis. La señal hormonal desencadenado por el cerebro) va a
desatar la termogénesis dentro del adipocito. La señal es norepinefrina (noradrenalina).

Epinefrina = adrenalina
Norepinefrina = noradrelina

La noreprinefrina es reconocida por su receptor en la membrana. La transducción de la señal

esta mediada por proteína G, que va a llevar a la producción de AMPc (alostérico activador de
la protein kinasa). La protien kinasa va a fosforilar sus dianas, se van a activar una serie de
procesos y se va a producir la degradación de los triacilglicéridos. Y se van a movilizar las
grasa (triacilglicéridos). En el núcleo se va a activar la transcripción de la UCP-1. Los ácidos
grasos van a la mitocondria y van a sufrir la beta-oxidación, convirtiéndose en Acetil-CoA, este
se va a introducir en el ciclo de Krebs y se va a generar. Energía. Pero como esta la UCP-1 no
se va a formar el gradiente protónico. Entonces esa energía se va a dispersar en forma de
calor.

Los Ffa abren el canal protónico y con el sustrato para la cadena de transporte electrónico al
convertirse en Acetil-CoA y …

UCP-2 & UCP-3: otros tejidos contienen proteínas homólogas a UCP-1, estas proteínas
podrían tener un rol en homeostasis energética y en la regulación del peso corporal.

22. La hibernación del oso Grizzly.

Durante su letargo de varios meses, el oso mantiene su Tª corporal alrededor de 31ºC (Tª
normal, sin hibernar,38ºC) gracias a la termogénesis. También reduce los latidos del corazón
de 40-50 LPM a 6-10 LPM

Durante la hibernación no comen, no beben y, prácticamente, no defecan ni orinan. Los

productos de desecho los reciclan.

El glicerol proveniente de la degradación de la grasa lo emplea como precursor gluconeogénico

y la urea formada durante la degradación de aminoácidos se recicla para formar nuevos
aminoácidos y mantener las proteínas corporales.
La oxidación de las grasas mantiene su Tª corporal y proporciona energía para otras
actividades metabólicas. La oxidación de las grasas también produce agua que repone la que
se pierde en la respiración.