UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

CURSO: MICROBIOLOGÍA PESQUERA

INFORME: N°6: COLIMETRÍA

ALUMNO: DEYRA CUEVA, JEANFRANCO PAÚL

PROFESORA: MARTÍNEZ ORDINOLA, NANCY

FECHA DE PRÁTICA: 25/08/2020

FECHA DE ENTREGA: 03/09/2020

1. INTRODUCCIÓN

En los últimos años, el consumo de alimentos de origen marino ha aumentado

considerablemente, esto debido a que constituyen una fuente balanceada de proteínas, vitaminas
y minerales con un contenido calórico relativamente bajo, además, muchos de estos productos
poseen ácidos grasos poliinsaturados, principalmente del tipo omega 3, los cuales están
relacionados con la prevención de las enfermedades cardiovasculares (Kinsella 1988).

El pescado es un producto altamente perecedero, por lo que los procesos de captura y

comercialización deben ser monitoreados y así asegurar que es apto para el consumo humano.
Un producto puede tornarse nocivo para el consumidor, debido a la presencia de cualquier
sustancia o agente, incluyendo residuos químicos alimentarios (antibióticos, plaguicidas, etc.),
exceso de aditivos, materiales extraños (insectos, pelos de roedores, etc.) y microorganismos
(Napomuceno ,1999).

La materia fecal es una forma de contaminación alimentaria, debido a la facilidad con que los
alimentos la pueden adquirir. Se da por mala manipulación del producto y por la exposición del
mismo a fuentes de materia fecal (Arias y Antillón 2000). El indicador de contaminación fecal
más utilizado es Escherichia coli, que pertenece a los coliformes fecales y constituyen el 10%
de los microorganismos intestinales de los seres humanos y otros animales de sangre caliente
(Prescot y Harley ,2002).

Según Madera (2014) “Existen tres situaciones las cuales contribuyen con la mortalidad de
peces y estas situaciones al menos dos ellas están asociadas a sustancias presentes en las aguas
residuales. La primera causa de mortalidad es la deflexión de oxigeno generada por un aumento
de la carga orgánica del agua que alimenta el sistema de lagunas, ya que esta materia orgánica
hace que los microorganismos en su descomposición demanden oxigeno; la segunda es la
reducción del oxígeno en el agua producto de la respiración de una gran cantidad de
fitoplancton, condición que se presenta en horas de la noche; y la tercera es la alta
concentración de amonio, que está presente en el agua de alimento al sistema de lagunas. Estas
tres causas han sido reportadas en estudios de cultivos de peces con aguas residuales”

Por lo mencionado el objetivo del presente trabajo es usar el método de colimetría para evaluar
la presencia del grupo de coliformes y coliformes fecales, por su importancia como indicadores
de contaminación fecal y los productos pesqueros.
2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

2.1. CONCEPTO

Todo bacilo Gram negativo, capaz de desarrollarse en presencia de sales biliares u otros agentes
(tensoactivos) que tengan propiedades similares inhibitorias del crecimiento y que sean capaces
de fermentar la lactosa a temperaturas de 35º ó 37ºC, con producción de ácido, gas y aldehido
en un lapso de 24 a 48 horas; también son oxidasa negativas, no esporágenas (no producen
esporas) y reducen el nitrato a nitrito. Este grupo comprende, según la clasificación de Clark y
Pagel en los géneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter pertenecientes a la
familia de las enterobacterias (mencionado Goez et al, 1996).

2.1.1. Valor como indicador. El grupo de los coliformes totales incluye microorganismos
que pueden sobrevivir y proliferar en el agua. Por consiguiente, no son útiles como
índice de agentes patógenos fecales, pero pueden utilizarse como indicador de la
eficacia de tratamientos y para evaluar la limpieza e integridad de sistemas de
distribución y la posible presencia de biopelículas. No obstante, hay mejores
indicadores para estos fines. El análisis de los coliformes totales, como indicador de
desinfección, es mucho más lento y menos fiable que la medición directa de la
concentración residual de desinfectante. Además, los coliformes totales son mucho más
sensibles a la desinfección que los protozoos y virus entéricos. El RHP detecta una
gama más amplia de microorganismos y se considera generalmente un mejor indicador
de la integridad y limpieza de los sistemas de distribución.
2.1.2. Fuentes y prevalencia. Las bacterias pertenecientes al grupo de los coliformes totales
(excluida E. coli) están presentes tanto en aguas residuales como en aguas naturales.
Algunas de estas bacterias se excretan en las heces de personas y animales, pero
muchos coliformes son heterótrofos y capaces de multiplicarse en suelos y medios
acuáticos. Los coliformes totales pueden también sobrevivir y proliferar en sistemas de
distribución de agua, sobre todo en presencia de biopelículas.
2.1.3. Aplicación en la práctica. Los coliformes totales se miden generalmente en muestras
de 100 ml de agua. Existen diversos procedimientos relativamente sencillos basados en
la producción de ácido a partir de la lactosa o en la producción de la enzima β-
galactosidasa. Los procedimientos incluyen la filtración del agua con una membrana
que después se incuba en medios selectivos a 35–37 °C; transcurridas 24 h, se realiza
un recuento de colonias. Otros métodos son los procedimientos de «número más
probable» en los que se utilizan tubos de ensayo o placas de microvaloración y pruebas
de presencia/ausencia (P/A). Existen equipos de análisis para uso sobre el terreno.

2.1.4. Relevancia de su presencia en el agua de consumo. Debe haber ausencia de

coliformes totales inmediatamente después de la desinfección, y la presencia de estos
microorganismos indica que el tratamiento es inadecuado. La presencia de coliformes
totales en sistemas de distribución y reservas de agua almacenada puede revelar una
reproliferación y posible formación de biopelículas, o bien contaminación por la
entrada de materias extrañas, como tierra o plantas.
2.2. MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE

El NMP proporciona una estimación de los organismos viables existentes en un

sustrato. Es un concepto estadístico derivado de la teoría de probabilidades aplicables a
la enumeración de microorganismos bajo ciertas condiciones:

a) Los microorganismos se distribuyen de un modo homogéneo y al azar en el medio

que los contiene
b) Fracciones iguales que puedan separarse del modo original contendrán igual
número de células.
c) Las células se consideran como unidades independientes. El método perderá
exactitud si se presentan agrupaciones celulares
d) En el caso de que se encuentre una sola célula, el medio de cultivo empleado
permitirá detectarlo en función de su crecimiento

Consiste en sembrar las diluciones de la muestra por triplicado o quintuplicado (3, 5,10
tubos etc). En un caldo de cultivo, que permita la observación de reacción positiva por
presencia de determinados microorganismos.

El número de m.o. de la muestra original, se conoce por una tabla estadística diseñada
para obtener el número más probable de microorganismos.

Este método es muy utilizado para la Numeración de coliformes totales, fecales y

estreptococos, y algunas veces se ha utilizado para la numeración de Salmonella,
Vibrio y Staphylococcus
3. MATERIALES

Materiales Medios de cultivo y reactivos

- Tubos de ensayo - Caldo lactosa verde brillante bilis

- Tubos Durham de 1.5 y 10ml (flujo - Caldo lauril sulfato triptosa
total) - Caldo Escherichia coli
- Incubadoras de 37°C - Solución buffer fosfato
- Baño de agua 44.5 +/- 0.5°C

4. MÉTODOS

Prueba presuntiva
 Prueba confirmativa

5. RESULTADOS

5.1. Prueba presuntiva

Repetición

disolución 1 2 3 4 5

10-1 Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo

10-2 Positivo Positivo Negativo Positivo Positivo

10-3 Positivo Positivo Negativo Negativo Negativo

5.2. Prueba Confirmativa

Disolució Coliformes NPM NMP c. Coliformes Fecales NPM NMPc.

n Totales tab fecales
tab

10-1 4 4
 10-2 3 33 3.3*10 2 22 2.2*10

10-3 1 0

NPM/ml o g = (NPMtablaxf)/100

Los valores de coliformes totales y fecales fue de 3.3*103 NMP/100ml y 2.2*103

NMP/100ml respectivamente.

6. DISCUSIONES

- Cuando se detecta la presencia de coliformes fecales en cualquier fuente de agua, se

considera a la especie bacteriana Escherichia coli como el indicador de contaminación fecal
más adecuado, ya que está presente en grandes cantidades en las heces humanas y animales,
en las aguas residuales y en el agua que ha estado expuesta recientemente a contaminación
fecal. Sin embargo, existen otras especies de los géneros de Klebsiella, Enterobacter y
Citrobacter que también son termotolerantes (Fernández, 2017). En la prueba confirmativa
de coliformes se encontró 3.3*103 NMP/100ml de coliformes totales.

El Medio EC fue desarrollado por Hajna y Perry1 en un esfuerzo por mejorar los métodos
para la detección de bacterias del grupo de coliformes y de E. coli. Este medio consiste de
un caldo tamponado de lactosa con la adición de un 0,15% de una Mezcla de Sales Biliares.
El crecimiento de las bacterias formadoras de esporas y estreptococos fecales es inhibido
por las sales biliares, mientras que el crecimiento de E. coli es intensificado por su
presencia. Este medio puede ser utilizado a 37°C para la detección de organismos
coliformes o a una temperatura de 44,5°C o 45,5°C para el aislamiento de E. coli.
(Acumedia, 2015). La prueba confirmativa realizada para coliformes fecales muestra
valores de 2.2x103 NPM/100ml de E. coli.
- Los altos valores de coliformes totales y fecales en la muestra de agua es evidencia de la
mala calidad de esta , no cumple con los estándares de calidad ambiental para ser
considerado como un recurso que se pueda utilizar como agua potable ,en la industria
pesquera acuícola , agricultura, recreación , etc.

Para Aguas superficiales destinadas a la producción de agua potable los valores de

coliformes totales y de coliformes termotolerantes no tienen que superar los 50 y 20
NPM/100ml respectivamente ; Aguas superficiales destinadas para recreación los valores
de coliformes termotolerantes deben ser menores a 1000NPM/100ml si se tratan de
contacto secunadario y menor a 200NPM/100ml si son de contacto primario; para la
Extracción y cultivo de especies hidrobiológicas en lagos o lagunas los valores de
coliformes termotolerantes deben ser menores a 200NPM/ml (MINAM,2017).

7. EVALUACIÓN

De los resultados del cuadro de las diferentes muestras de agua, hallar el NMP correspondiente
 Tubos positivos con Tubos positivos con Tubos positivos en NMP/ml NMP/ml
CLST CLVBB CE.C. (CLVBB)
(CE.C)

N 10-3 10-4 10-5 10-3 10-4 10-5 10-3 10-4 10-5

1 5 4 3 5 3 3 5 3 2 1.8*104 1.4*104

10-2 10-3 10-4 10-2 10-3 10-4 10-2 10-3 10-4

2 5 5 5 5 4 2 5 4 1 2.2*103 1.7*103

10-4 10-5 10-6 10-4 10-5 10-6 10-4 10-5 10-6

3 4 4 4 4 4 0 4 3 0 3.4*104 2.7*104

10-5 10-6 10-7 10-5 10-6 10-7 10-5 10-6 10-7

4 2 1 0 2 0 0 1 0 0 5*104 2*104

10-1 10-2 10-3 10-1 10-2 10-3 10-1 10-2 10-3

5 4 3 1 4 3 0 4 2 0 27 22

8. CONCLUSIONES

Con el método de colimetría se determinó los coliformes totales y fecales, los valores en
ambos casos fueron 3.3*103 NMP/100ml y 2.2*103 NMP/100ml de agua respectivamente.
Los altos valores de coliformes totales y fecales en la muestra de agua es evidencia de la
mala calidad de esta , no cumple con los estándares de calidad ambiental para ser
considerado como un recurso que se pueda utilizar como agua potable ,en la industria
pesquera acuícola , agricultura, recreación , etc.

9. BIBLIOGRAFÍA

- Fernández, M.2017. Determinación de coliformes totales y fecales en aguas de uso

tecnológico para las centrífugas. ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caña de Azúcar [en
linea], consultado 11 de mayo de 2019] Disponible
en:<http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223154251011> ISSN 0138-6204. Instituto
Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar Ciudad de La Habana,
Cuba.
- Goez López, M; Vázquez García, M. J.; Pena Caamaño, P.1996. Determinación y
Diferenciación de Escherichia coli y Coliformes Totales usando un mismo sustrato
cromogénico. Laboratorio Central. Aquagest Galcia. Rua Isidro Parga Pondal 7 E-15702
Santiago de Compostela. España
- Kinsella J. 1988. Fish and Seafoods: Nutritional implications and quality issues. Food
Technol. 42: 146-150.
- Madera, C.2014. Las aguas residuales y su uso en la piscicultura: normas de Calidad y
tecnologias de tratamiento. Universidad del Valle, Escuela EIDENAR.
- Marin, C.2009. Carga bacteriana de los peces Cynoscion squamipinnis (Perciformes:
Scianidae) y Lutjanus gutattus (Perciformes: Lutjanidae) en la cadena de comercialización,
Costa Rica. Rev. Biol. trop [en línea].consultado 11 de mayo de 2019. Disponible en:
<https://www.scielo.sa.cr/pdf/rbt/v57n1-2/art05v57n1-2.pdf>. 
- Napomuceno, E. 1999. Tecnóloga avançada de carnes e derivados. Contaminação e
deterioração da carne. Manual. UNICAMP, Rio de Janeiro, Brasil.
- Prescot, L., J. Harley & D. Klein. 2002. Microbiology. Mc Graw-Hill, Nueva York, EEUU.