c) de la concentración de la especie absorbente (c)

Estas relaciones pueden ser expresadas por la ecuación

Log Io/It =A =K.b.c (1)

donde:
Io= intensidad de la luz incidente en la muestra
It= intensidad de la luz transmitida por la muestra
A= absorbancia, representa la cantidad de luz absorbida por el soluto de la muestra, en aquella
longitud de onda seleccionada. Es adimensional.
k= constante caracteristica del soluto (absorbancia molar o especifica).
b= espesor del recipiente que contiene la solución, y representa la longitud del camino óptico a
través de la muestra. Expresada en cm
c= concentración del soluto, en gramos / litro o en moles / litro.
     
 La ecuación (1) tambien expresión matemática conocida como la ley de Beer-Lambert y es Y
el corazón de la espectrofotometría aplicada al análisis químico.

4 Cuando la concentración se expresa en g / L y el comprobante del camino óptico (b) en cm, la

expresión anterior se convierte: A = a.b. Cg / donde k = a = absorción molar

4 Cuando la concentración se expresa en mol / L y el comprobante del camino óptico (b) en cm, la
expresión anterior se vuelve: A = ε.b. Cmol / L, donde k = ε = absorción molar

4 Estas dos constantes se relacionan entre sí por: ε = a x PM, donde PM = peso molecular

4.3.2- Relación entre absorbancia (A) y transmitancia (T):

La relación entre la luz transmitida (It) y la luz incidente (Io) se llama transmitancia y el
valor máximo que puede asumir es el 100%

A= It/Io

La solución no absorbe energía, por lo que It y Io tienen el mismo valor (100%) y,

consecuentemente, T = 1. cómo se utiliza la transmitancia porcentual para evitar operaciones con
números decimales, T es entre 0 y (100%)

La ley de beer-lambert Establece la relación entre transmitancia (T) y absorbancia (A):

A= -log T/100

Por esta expresión entender que un valor en porcentaje de transmitancia leído en la escala del
fotocolorímetro podría ser transformado en absorbancia. por ejemplo, el 20% de transmitancia
corresponden a una absorción de 0,699.
TABLA 7 - Términos y símbolos usados en la ecuación de la ley de Beer

PLAZO símbolo ecuación

ABSORBANCIA A A=−log T y A=k . b . c

TRANSMITANCIA T T=(10¿¿− A) X 100 ¿

ESPESOR DE LA CELDA b b= A/k.c

ABSORCION MOLAR ε ε= a.PM

ABSORCION ESPECIFICA a a= ε/PM O a=A/b.cg/L

. ejemplo:

La absorbancia y la transmitancia de una solución 0.00240 M de una sustancia con coeficiente de

absorción molar de 313 M −1 cm 2en una celda de 2 cm de camino óptico

4.4 CURVA DE CALIBRACION:

Una curva de calibración muestra la respuesta de un método analítico a cantidades

conocidas de constituyentes.

. Solubles que contienen concentraciones conocidas de una sustancia Son llamadas soluciones
estándar.

. Solubles que contienen todos los reactivos y solventes usados en el análisis, pero sin la adición de
la sustancia de interés, se llaman soluciones blancas. el "blanco" mide la respuesta del
procedimiento analítico a impurezas o especies interferentes en los reactivos.

La relación entre absorbancia de una solución y su concentración y proporcional, de manera

que es posible utilizar Tales valores para construir curvas de calibración o analíticas.

Los instrumentos actuales están calibrados para hacer lecturas en% de transmitancia, en
absorbancia o en ambas. La figura siguiente ilustra gráficamente las relaciones existentes entre
transmitancia, absorbancia y concentración, en una determinada longitud de onda.

Los valores de absorbancia trazados en papel milimetrado, cuando la ley de Beer es obedecida,
forman una recta perfecta, lo que no ocurre en las curvas hechas con% T.
Una relación lineal (recta) en cualquiera de los gráficos indica que la sustancia en solución obedece
a la ley de Beer, En las condiciones del análisis y puede servir de curva de calibración para la
determinación de la concentración de soluciones de la misma naturaleza. Cuando hay una
respuesta lineal la señal analítica corregida (= señal de la muestra - señal del blanco) es
proporcional a la cantidad de constituyente.

Actualmente la mayoría de los equipos disponen de programas (softwares) Que expresa el

resultado del análisis y construye su curva de calibración Almacenando para cuando sean
necesarias en otras determinaciones.

4.4.1-Procedimiento para la construcción de la curva de calibración en el Espectrofotómetro

1. Se prepara una serie de soluciones estándar Con la especie en estudio, a diferentes

concentraciones perfectamente conocidas cubriendo una franja conveniente de concentración;

2. La respuesta del colorímetro se ajusta en el 100% de T al insertar la solución de referencia

(blanco); si el fotocolorímetro presenta A en lugar de % T, la lectura del blanco se fijará en 0 (cero).

3. Se determina la absorbancia (ou % T) de cada una de sus soluciones estándar y se construye el

grafico de A (absorbancia) en función c (concentraciones de las soluciones estándar), en papel
milimetrado.

4. Puede utilizar la aplicación de Excel para tabular las lecturas y las concentraciones de las
soluciones estándar. El ajuste de la recta se hace por el método de los mínimos cuadrados es una
ecuación de la recta presentada, Facilitando el cálculo de la concentración de la muestra por la
ecuación (ver capítulo 2)

4.4.2-Desviaciones de la ley de Beer-lambert

estas desviaciones pueden clasificarse como positivas o negativas Ocurren cuando

algunas de las siguientes condiciones ideales para las determinaciones no se respetan:

-Longitud de onda determinada para la especie absorbente

-Medio homogéneo (sin turbidez)
 El rendimiento fotométrico de un espectrofotómetro y muy relacionado con el diseño del
sistema óptico. El sistema óptico del instrumento debe:

a) Acoplar eficientemente la luz proveniente de la lámpara

b) las ranuras De entrada y salida deben permitir que los haces de luz puedan pasar sin ocurrir en
pérdida de luz.
c) Focalizar los haces en la muestra
d) Recoger la luz de la muestra y orientarla al detector para causar inestabilidad.

4.7.2-Selector de longitud de onda

Los aparatos que se pueden utilizar para seleccionar regiones particulares de longitud de onda en
la región visible y ultravioleta del espectro electromagnético incluyen el uso de:

a) Filtros ópticos - Se utilizan en el colorímetro fotoeléctrico y sólo permiten la transmisión

de regiones de longitud de onda limitada, Absorber la mayor parte de la radiación de otras
longitudes de onda. El color de la luz absorbida por el cristal y el complemento del color de
la propia solución: un Liquido parece rojo, por ejemplo, por qué transmite la porción roja
del espectro electromagnético, Pero absorbe la verde. Y la intensidad de la radiación verde
que varía con la concentración: un filtro verde, Por lo tanto, debería usarse así, en general,
El filtro más apropiado para un análisis fotométrico será el color complementario de la
solución que se está analizando. consisten en películas delgadas de gelatina Como
diferentes colorantes o en láminas de vidrio Colorido, donde los fabricantes informan las
varias bandas de transmisión para los vidrios. En los días de hoy son raramente usados; Sin
embargo, tiene la ventaja de ser más baratas y muy satisfactorias para medidas que no
requieren mucha precisión.

b) Monocromadores: Permite aislar una banda de longitud de onda más estrecha que es
obtenida por un filtro, Empleados para tener una resolución mayor del espectro, No sólo
en lo visible, sino también en la región UV. Un monocromador desdobla la radiación
policromática en las longitudes de onda que la forman, Y separa Longitudes de onda en
bandas. Y constituido por:

-Una ranura de entrada por donde penetra la radiación policromática de la fuente de luz
(lámpara);
-un espejo o lente, para colimentar (estrechar) el haz admitido;
-un elemento dispersor de la radiación como un prisma o una red de difracción, Que desdobla la
radiación en la longitud de onda componentes (separa la luz en sus varias longitudes de onda);
-Una lente o espejo para enfocar (dirigir) la radiación dispersa;
-Una ranura de salida, que selecciona la longitud de onda de la radiación que va a incidir sobre la
muestra.

 Tipos de elementos de dispersión del monocromador:

Prismas: Los prismas son elementos dispersantes convenientes entre el UV Siguiente y las
regiones del infrarrojo medio. La dispersión depende del índice de refracción del material del
prisma variar con el Longitud de onda. Los prismas de vidrio se pueden emplear en la región
visible, entre 400 y 1000 nm. Una vez que el vidrio absorbe en el ultravioleta. Debajo de 400 nm
(UV)Se utilizan prismas de cuarzo o sílice, fundidos.

Redes de difracción: Se observó que un haz de radiación monocromática, Al pasar por una tarjeta
transparente que posee un gran número de líneas paralelas bien finas rayadas sobre ella. Origina
varios haces. Las redes consisten en una placa Fina de vidrio o plástico, Con varias rayas, Que
difrata la luz dispersando las diferentes longitudes de onda.
en los espectrofotómetros para el UV y visible, las redes tienen entre 10.000 y 30.000
líneas / cm, que proporcionan una dispersión más elevada que la obtenida por los prismas, una
única red puede cubrir la región del espectro entre 200 y 900 nm.
la forma en que la radiación electromagnética sobre difracción a través de una rejilla está
basada en la ley de difracción de bragg, la finalidad de este componente es la de difractar la luz de
modo que diferentes