Lactoferrina en Leche Humana de Lactancia

Artículo

Prolongada
Matylda Czosnykowska-Łukacka 1,*, †, Magdalena Orczyk-Pawiłowicz 2,*, †, Barbara Broers 1 y
Barbara Królak-Olejnik 1
1 Neonatology Department, Wroclaw Medical University, Borowska 213, 50-556 Wroclaw, Poland;
barsamut@gmail.com (B.B.); barbara.krolak-olejnik@umed.wroc.pl (B.K.-O.)
2 Department of Chemistry and Immunochemistry, Wroclaw Medical University,
M. Skłodowskiej-Curie 48/50, 50-369 Wrocław, Poland
* Correspondence: matylda.czosnykowska-lukacka@umed.wroc.pl (M.C.-Ł.);
magdalena.orczyk-pawilowicz@umed.wroc.pl (M.O.-P.)
† These authors contributed equally to this work.

Recibido: 19 de julio de 2019; Aceptado: 23 de septiembre de 2019; Publicado: 2 de octubre

de 2019

Resumen: Entre los factores bioactivos inmunológicamente importantes presentes en la leche humana, la
lactoferrina (Lf) se ha convertido en un jugador clave con características de amplio alcance que protegen directa e
indirectamente al recién nacido contra la infección causada por una variedad de patógenos. La concentración de
Lf en la leche humana está relacionada con la etapa de lactancia; El calostro contiene más de 5 g / L, que luego
disminuye significativamente a 2–3 g / L en la leche madura. La leche de las madres que están amamantando
durante más de un año tiene un valor estándar, ya que contiene macronutrientes en una composición similar a la
de la leche humana en etapas posteriores. El objetivo de este estudio fue evaluar la concentración de lactoferrina
en la lactancia prolongada desde el primer hasta el 48 ° mes posparto. Las mujeres lactantes ( n = 120) hasta 48
meses después del parto fueron reclutadas para el estudio. El valor medio de la concentración de lactoferrina fue
el más bajo en el grupo de 1 a 12 meses de lactancia (3,39 ± 1,43 g / L), aumentando significativamente en el
grupo de 13 a 18 meses (5,55 ± 4,00 g / L; p < 0,006), y permanecer en un nivel comparable en los grupos de 19-
24 meses y más de 24 meses (5.02 ± 2.97 y 4.90 ± 3.18 g / L, respectivamente). La concentración de lactoferrina
en la leche materna también mostró una correlación positiva con la concentración de proteínas durante la
lactancia desde el primer mes hasta el 48 (r = 0.3374; p = 0.0002). Nuestros resultados demuestran el alto
potencial inmunológico de la leche humana durante la lactancia prolongada y que la concentración de Lf está
cerca de la concentración de Lf en el calostro. La evidencia de niveles de inmunoproteína estables o en aumento
durante la lactancia prolongada proporciona un argumento para renunciar al destete; sin embargo, la lactancia
materna debe combinarse con alimentos sólidos que cumplan con los nuevos requisitos de un bebé de seis meses
o más de rápido crecimiento.

Palabras clave: lactancia materna; lactoferrina; lactancia prolongada; nutrición

infantil

1. Introducción

La leche humana (LH) sirve como el estándar de oro en nutrición infantil y neonatal. Además de los nutrientes
principales, LH contiene muchas proteínas bioactivas, factores de crecimiento, células y otros componentes, que
son cruciales en la modulación del desarrollo de un sistema inmunitario competente para proteger al bebé de
término y al recién nacido prematuro contra los patógenos [1]. Entre los factores bioactivos inmunológicamente
importantes presentes en la leche humana, la lactoferrina se ha convertido en un jugador clave con características
de amplio alcance que protegen directa e indirectamente al recién nacido contra la infección causada por bacterias
y otros microorganismos.
La lactoferrina (o lactotransferrina, Lf) es una glucoproteína de aproximadamente 78 kDa de la familia de proteínas
transferrina. Lf fue identificado por primera vez por Sørensen y Sørensen en 1939 en la leche bovina como una
proteína roja en el suero [2], y luego aislada en 1960 de la leche humana y bovina [3–5]. Lf es expresada y
secretada por las células epiteliales en las principales secreciones fisiológicas [6–8]. Lf juega un papel clave en
sistemas especializados para unir hierro, afectando la proliferación y diferenciación celular, dependiendo del grado
de saturación de hierro [9,10]. Los ensayos clínicos han demostrado funciones para Lf en la prevención de diarrea
[11,12], sepsis neonatal y enterocolitis necrotizante en recién nacidos prematuros [13-15]. Lf puede afectar
significativamente el desarrollo, así como el bienestar de los bebés y los resultados posteriores, que están
directamente relacionados con la lactancia materna. Los factores maternos pueden afectar la concentración de Lf
en la leche humana, pero también afectan los factores infantiles. Las concentraciones de Lf son consistentemente
más altas en calostro, luego disminuyen gradualmente. Sin embargo, se desconocen los factores específicos
relacionados con la concentración de Lf en la leche materna. Se han considerado factores como la ubicación
geográfica, el origen étnico, los polimorfismos genéticos, el nivel socioeconómico, el estado nutricional, así como
las infecciones infantiles, el tipo de parto y la prematuridad [16-18].
En la leche humana, Lf es la proteína más abundante en la fracción de suero [7]. La concentración de Lf en la leche
humana está relacionada con la etapa de lactancia: el calostro contiene más de 5 g / L, que luego disminuye
significativamente a 2-3 g / L en la leche madura. Múltiples estudios han evaluado las concentraciones de Lf en el
calostro humano y la leche madura, en la leche de término y prematura [7,19,20].
Lf provoca efectos antibacterianos contra bacterias; sin embargo, Lf tiene actividad protectora debido a la alta
afinidad por el hierro. La forma libre de hierro de Lf (apo-Lf) es una causa de deficiencia de hierro en los
microorganismos, ya que el hierro es necesario para la vida y la tasa de crecimiento [21]. La investigación ha
demostrado que la interacción directa entre Lf y bacterias produce un efecto bactericida [22]. Lf se asocia con la
lipoproteína de las células bacterianas y forma complejos receptores. La unión de Lf inhibe la ingesta de hierro de
bacterias o elimina el efecto protector de la membrana. Lf provoca la liberación de lipopolisacáridos de la pared
celular, aumenta la permeabilidad de la membrana y finalmente mata las bacterias Gram-negativas. Lf une las
moléculas aniónicas (p. Ej., Ácido lipoteicoico) en la superficie celular de las bacterias Gram-positivas con mayor
efectividad que las lisozimas y los antibióticos [23]. El efecto antiviral de Lf se observa en la fase temprana de la
infección por inhibición del crecimiento de virus. Los péptidos derivados de Lf y Lf pueden actuar eficazmente en
un amplio espectro de especies fúngicas, como Candida albicans, Candida krusei y Aspergillus fumigatus [24] al
aumentar la permeabilidad de la membrana, lo que conduce a su muerte y además produce efectos de privación de
hierro. Lf tiene una superficie cargada positivamente, que produce un efecto antiinflamatorio. Lf interactúa con
proteoglicanos en la superficie de las células inmunes. Esta asociación puede desencadenar vías de señalización
que conducen a respuestas antiinflamatorias fisiológicas [25,26].
Con referencia a la investigación sobre la evolución de los mamíferos, la función protectora fue la primera en la
glándula mamaria ancestral, que posteriormente evolucionó para nutrir a la descendencia. Los componentes
protectores de la leche permanecen altamente conservados [27,28].
La leche materna después de un año de lactancia tiene un valor nutricional para los niños [29]. Según nuestros
resultados anteriores, la leche de las madres que amamantan a sus hijos durante un año o incluso durante dos años
es leche de valor estándar, y su composición en cantidad de macronutrientes es comparable hasta el primer año de
lactancia [29]. Sin embargo, se necesitan más datos cuantitativos detallados sobre la concentración y la variabilidad
de las proteínas de leche humana bioactivas e inmunomoduladoras más importantes. El objetivo de este estudio fue
evaluar la concentración de lactoferrina, la principal glucoproteína con actividad antipatógena, en la leche materna
durante la lactancia prolongada de 1 a 48 meses de lactancia e identificar si existe alguna correlación entre la
lactoferrina y las concentraciones de proteínas durante un período de lactancia saludable de la madre . Esto es
particularmente importante porque Lf es un elemento que proporciona inmunidad innata que se transfiere a los
lactantes amamantados y es crucial en la configuración y desarrollo de su sistema inmunológico inmaduro.

2. Material y métodos

Las madres durante la lactancia fueron reclutadas para el estudio desde febrero de 2017 hasta junio de 2018
utilizando grupos locales para mujeres que amamantan en Facebook. Inscribimos 120 participantes en el estudio.
Se registraron la edad de la madre, el estado socioeconómico, la raza, el estado de salud, los medicamentos
concomitantes, la paridad, el modo de parto y la frecuencia de la lactancia materna. Se recogieron muestras de
leche en el Banco Regional de Leche Humana y el Hospital Universitario (Wroclaw, Polonia) entre las 08:00 y las
14:00. Proporcionar un intervalo de unas pocas horas entrega una mayor uniformidad de las muestras. Teniendo en
cuenta la eficiencia de la extracción de leche, se utilizó un extractor de leche eléctrico (Medela Symphony, Baar,
Suiza). Cada madre recibió un conjunto estéril y una taza para la recolección de leche. Muestras para análisis
tomadas inmediatamente después del vaciado completo de la mama (dos partes alícuotas de 2–3 ml cada una). Una
sesión de extracción de leche no debería privar al bebé de su volumen nutricionalmente requerido. Las muestras de
leche se dividieron en cuatro grupos según los meses posparto: el primer grupo fue de hasta 12 meses ( n = 24), el
segundo grupo de 13 a 18 meses (n = 33), el tercer grupo de 19 a 24 meses (n = 37) y último grupo más allá de 24
meses (n = 26). Las muestras de leche después de la recolección se enfriaron inmediatamente y se congelaron a -20
° C. Este estudio recibió la aprobación ética Nr KB – 65/2018 del Comité de Ética de la Universidad. Todos los
participantes dieron su consentimiento informado y por escrito antes de la recolección de la muestra.

2.1. Análisis de las muestras

Cada muestra se calentó inicialmente a 40 ° C como se recomienda por el productor analizador de la leche humana
y se homogeneizaron usando un aparato de ultrasonidos (Sonicator ®,MIRIS, Uppsala, Suecia) a 1,5 s/ml, para
separar la fase lipídica y evitar la agregación de proteínas. Cada alícuota se homogeneizó de manera diferente
inmediatamente antes de la medición. Los análisis se realizaron por triplicado. La concentración de
macronutrientes en la leche materna se midió utilizando un analizador de leche humana (HMA) (MIRIS, Uppsala,
Suecia) calibrado previamente con estándares de leche humana. El HMA se basa en la espectroscopía de infrarrojo
medio, lo que permite la evaluación del contenido de grasa, proteína, lactosa, energía y sólidos totales. La proteína
es el contenido de proteína basado en la cantidad total de nitrógeno (N) en una muestra. Esto significa que los
compuestos de nitrógeno no proteico (NPN) también se incluyen en este valor. La "proteína verdadera" se corrige
para esto y representa solo el contenido de proteína real, de ahí la denotación "verdadera". El Miris HMA
(Uppsala, Suecia) mide la proteína cruda y la proteína verdadera para evitar malentendidos. Los resultados
obtenidos se expresan en g / L. Una descripción detallada del método de medición se describió en un estudio
anterior [29].

2.2. Preparación de la muestra de leche desnatada

Todas las muestras recolectadas de leche materna se transfirieron inmediatamente a los tubos de plástico
etiquetados WHAT para congelar y se almacenaron a -20 ° C hasta el análisis. Para obtener la fase acuosa de la
leche (leche descremada), todas las muestras de leche se centrifugaron a 3500 × ga 4 ° C durante 35 min. A
continuación, se eliminó la capa de grasa de la leche y las células [30]. Las muestras de leche desnatada se
dividieron en alícuotas y se almacenaron a -20 ° C. Todas las muestras de leche fueron manejadas por la misma
persona. Antes de las determinaciones de la concentración de lactoferrina, las muestras de leche descremada se
descongelaron a temperatura ambiente durante una hora.

2.3. Análisis de la lactoferrina en la leche desnatada

La concentración de lactoferrina en las muestras de leche descremada se determinó de acuerdo con un

procedimiento modificado informado anteriormente [31]. Para las pruebas, 100 μL de 5 × 10 3, 10 × 103, 25 × 103y
50 × 103 veces muestras de leche descremada diluida y un estándar paralelo de lactoferrina derivada de la leche
humana en concentraciones que varían de 0.8 a 50 ng por 100 Se añadieron μL (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE.
UU.) en tampón Tris-HCl con cloruro de sodio (pH = 7,5) a los pocillos individuales de la placa de microtitulación
(Nunc International, Naperville, IL, EE. UU.) y se incubaron durante 2 ha 37 ° C. La concentración de lactoferrina
se analizó utilizando anticuerpos anti-lactoferrina de conejo marcados con fosfatasa (Jackson ImmunoResearch
Europe Ltd., Ely, Reino Unido) en tampón TRIS-HCl (pH = 7,5) con Tween 20 al 0,2% durante 1 hora a 37 ° C y
luego detectado por la reacción con sustrato de fosfatasa, 4-nitrofenil fosfato, sal disódica (SERVA, Heidelberg,
Alemania). La absorbancia se midió después de detener la reacción enzimática en un Stat Fax 2100 para
Microplate Reader (Awareness Technology Inc., Palm City, FL, EE. UU.) Utilizando un filtro de 405 nm y 630 nm
como filtro de referencia. La absorbancia de fondo para la prueba ELISA fue baja (por debajo de 0.04 AU) cuando
se agregó solución salina tamponada con Tris a la placa de microtitulación en lugar de muestras estándar de leche o
lactoferrina. Como control negativo, se utilizó una albúmina humana (Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.). Todas las
muestras de leche desnatada se analizaron en cuatro diluciones diferentes de muestra de leche desnatada por
duplicado. Los coeficientes de variación intraensayo e interensayo fueron 4.8% y 5.6%, respectivamente.

2.4. Análisis estadístico

 El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete de software TIBCO STATISTICA 13.3 (StatSoft, Inc., Tulsa, OK,
EE. UU.). La prueba de chi-cuadrado se utilizó para comparar los datos de la población de estudio. Debido a las
diferencias interindividuales más altas informadas para muchos factores de la leche humana, así como al tamaño desigual
de la muestra en los grupos analizados, se utilizaron pruebas no paramétricas para el análisis. Las comparaciones entre los
grupos analizados se realizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis. Los datos obtenidos se presentan como la media ±
DE y la mediana con los percentiles 25 a 75. Para determinar si existía alguna relación entre la concentración de
lactoferrina y los factores analizados, las correlaciones se evaluaron de acuerdo con el coeficiente de Spearman. Un
pvalor deinferior a 0.05 se consideró significativo. Los gráficos se prepararon mediante regresión lineal con un nivel de
confianza del 95%.

3. Resultados
Las características clave de la cohorte se detallan en la Tabla 1. Todos los lactantes fueron amamantados exclusivamente
hasta seis meses.

Tabla 1. Características de la población de estudio.

3.1. Lactoferrina

Para determinar si la concentración de lactoferrina en la leche materna está relacionada con el mes de lactancia
prolongada, se calculó la correlación; sin embargo, el resultado obtenido no mostró correlación ( r = 0.1675; p = 0.0674)
con lactancia prolongada desde el primer hasta el 48º mes, como se muestra en la Figura 1A.
El valor medio de la concentración de lactoferrina fue el valor más bajo en el grupo de 12 meses de lactancia (3,39 ± 1,43
 g / L), aumentando significativamente en el grupo de 13-18 meses (5,55 ± 4,00 g / L; p < 0,006) y restante estable a partir
de entonces en los grupos de 19-24 meses y más de 24 meses (5.02 ± 2.97 y 4.90 ± 3.18 g / L, respectivamente) (Tabla 2).

Tabla 2. Concentraciones de lactoferrina y proteínas en la leche materna durante la lactancia prolongada.

3.2. Proteína total

La concentración de proteína en la leche materna se correlacionó positivamente con la lactancia prolongada durante el período
analizado hasta 48 meses; sin embargo, el valor del coeficiente de correlación fue débil (r = 0.25; p <0.05).
Los valores medios de las concentraciones de proteínas fueron comparables en los grupos de 1-12 y 13-18 meses de lactancia
(10.5 ± 2.3 y 10.4 ± 3.4 g / L, respectivamente). En los períodos de lactancia analizados posteriores, es decir, 19-24 y más de 24
meses de lactancia, las concentraciones de proteína aumentaron significativamente y alcanzaron 11.2 ± 2.7 g / L (p <0.05) y 19.1
± 10.7 g / L (p < 0.0001), respectivamente ( Tabla 2).

3.3. Relación de lactoferrina / proteína

Para identificar la existencia de cualquier relación entre la concentración de lactoferrina y la concentración de proteína total, se
calculó el coeficiente de correlación. La lactoferrina de la leche materna se correlacionó positivamente con la concentración de
proteínas (r = 0.3374; p = 0.0002), como se muestra en la Figura 1B, para el conjunto analizado de muestras derivadas durante 1-
48 meses de lactancia. Sin embargo, tanto para las concentraciones de lactoferrina como de proteínas, se observaron diferencias
interindividuales altas entre las madres y este resultado puede ser característico de nuestro conjunto de datos en particular
solamente. En contraste, el coeficiente calculado de lactoferrina a la concentración de proteína (Lf / Proteína) no mostró
correlación con la progresión de la lactancia durante 1–48 meses (r = −0.0904; p = 0.3259) como se muestra en Figura 1C. El
coeficiente calculado de Lf / Proteína en el grupo de 1-12 meses de lactancia alcanzó 0.32 ± 0.12, aumentando significativamente
en el grupo de 13-18 meses (0.49 ± 0.21, p <0.002) y permaneciendo en un nivel comparable en el 19 Grupo de 24 meses (0.43 ±
0.21), disminuyendo en el grupo de> 24 meses a 0.29 ± 0.17 (p <0.009; Tabla 2, Figura 2).
Figura 1. La correlación de (A) lactoferrina y (B) la proporción de lactoferrina a la concentración de proteína con la progresión de la lactancia
desde el 1er al el mes 48 y (C) la correlación de las concentraciones de lactoferrina y proteína para todas las muestras analizadas. Una línea
continua indica regresión lineal, y los intervalos de confianza del 95% se muestran mediante líneas punteadas; azul hueco: muestras individuales;
círculo sólido: 2 o más muestras individuales con los mismos valores o muy cercanos. *:multiplicados

Figura 2. El coeficiente de lactoferrina a la concentración de proteína en los cuatro grupos analizados: Grupo1 hasta 12 meses ( n = 24 ), grupo 2
de 13 a 18 meses (n = 33), grupo 3 de 19 a 24 meses (n = 37) y grupo 2 por encima de 24 meses (n = 26).

3.4. Concentración de lactoferrina en relación con los macronutrientes

Las dependencias entre la concentración de lactoferrina y los macronutrientes en la leche materna se analizaron durante todo el
período de lactancia, 1–12, 13–18, 19–24 y> 24 meses de lactancia. Los valores del coeficiente calculado, que son
estadísticamente significativos (p <0.05), se dan en la Tabla 3. En contraste con la falta de correlación entre la concentración de
lactoferrina y el mes de lactancia durante 1-48 meses de lactancia, se encontró una correlación positiva para lactancia prolongada,
específicamente por encima de 24 meses. La concentración de lactoferrina durante 24 meses se correlaciona negativamente con la
concentración de carbohidratos (r = −0.50) y positivamente con la concentración de grasa (r = 0.58),
proteína (r = 0.56), proteína verdadera (r = 0.58), masa seca (r = 0.65) y energía (r = 0.65). Se encontró una correlación negativa
estadísticamente significativa entre la concentración de lactoferrina y carbohidratos (r = −0.32) y correlaciones
positivas entre lactoferrina y grasa (r = 0.19), proteína (r = 0.25), proteína verdadera (r = 0.24), masa seca (r =
0.18) y energía (r = 0.19) en la lactancia del mes 1 al 48. Sin embargo, las correlaciones observadas fueron mucho más fuertes en
la lactancia prolongada por encima del mes 24. En contraste, no se encontraron correlaciones en los otros períodos analizados de
lactancia. es decir, hasta el mes 12, los meses 13-18 y 19-24.

Tabla 3. Correlaciones entre lactoferrina y macronutrientes durante la lactancia prolongada del mes 1 al 48 y por períodos particulares.
3.5. Concentración de lactoferrina en la leche materna en relación con el número de alimentaciones

La relación entre la concentración de lactoferrina de la leche materna y el número de alimentaciones durante el período analizado
del mes 13 al 48 y las tres etapas de la lactancia prolongada, a saber, los meses 13-18, 19– 24 y> 24 de lactancia fueron
analizados. No encontramos correlaciones significativas para los meses 13–48 (Figura 3A) ni para los meses 13–18 y 19–24; sin
embargo, para la lactancia durante 24 meses, observamos una débil tendencia negativa entre el número de alimentaciones y la
concentración de lactoferrina (r = −0.26; p = 0.2868; Figura 3B). Además, no encontramos correlación entre la concentración
de lactoferrina y la edad materna, paridad o tiempo de parto-edad gestacional.
Figura 3. Relación entre la concentración de lactoferrina y el número de alimentaciones de leche materna (A) durante 13–48 meses de lactancia,
(B) durante 24 meses de lactancia. Una línea continua indica regresión lineal, y los intervalos de confianza del 95% se muestran mediante líneas
punteadas; azul hueco: muestras individuales. *: multiplicado.

4. Discusión

LH es un fluido dinámico que cambia significativamente en su composición desde el inicio de la lactancia hasta la lactancia
prolongada por encima de un año posparto [29,32]. La concentración total de proteínas de la leche disminuye durante el período
de lactancia, pero esta tendencia no es general para todas las proteínas. En nuestro trabajo anterior, demostramos que las
concentraciones de macronutrientes cambian en la lactancia prolongada. Como continuación del estudio anterior, se evaluaron los
cambios de lactoferrina en la lactancia prolongada en este estudio. Durante el primer mes de lactancia, Lf disminuye y luego
permanece relativamente estable [33]. El contenido más alto de Lf está en el calostro a 5.5 g / L, mientras que la leche madura
contiene solo 1.5–3.0 g / L, dependiendo de la etapa de lactancia en el primer año posparto [32,34,35]. Affolter y col. [36]
informaron que la concentración de lactoferrina disminuye durante el período de lactancia desde el quinto día hasta los ocho
meses de 3.30 a 1.17 g / L. Sin embargo, esta disminución fue constante durante la lactancia hasta uno o dos meses (1.24 g / L), y
luego se estabilizó hasta el octavo mes. Los cambios en el contenido de Lf pueden reflejar diversas funciones biológicas de la
leche durante las diferentes etapas del desarrollo del recién nacido y el lactante [33]. Nuestros resultados muestran que la
concentración de Lf durante la lactancia prolongada varía de 4.9 a 5.02 g / L.
Estudios anteriores han demostrado que la concentración de Lf se correlaciona negativamente con el volumen de expresión de la
leche, así como con la etapa de lactancia y paridad [33,37]. Los resultados mostraron que el mayor contenido de Lf se registró
entre 12 y 24 meses de lactancia. Por encima de 24 meses, la concentración disminuye, aunque no significativamente, a 4.9 g / L.
Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que evalúa la concentración de Lf en la leche humana durante la lactancia
prolongada. Estos datos han demostrado que el contenido de Lf por encima de los 12 meses de lactancia es mayor y cercano a la
concentración de Lf en el calostro.
La concentración de lactoferrina en la leche materna mostró una correlación positiva con la concentración de proteínas durante la
lactancia desde la etapa inicial hasta cuatro años después del parto. El coeficiente de concentración de Lf a proteína no mostró
correlación con la progresión de la lactancia. La concentración de Lf y las composiciones lácteas están influenciadas por diversos
factores, como las condiciones de salud y / o los indicadores bioquímicos de la sangre [33-36].
También se ha observado una notable variabilidad interindividual del contenido de lactoferrina, lo que sugiere una falta de
regulación estricta en la síntesis y / o transferencia de la sangre a la glándula mamaria [34]. De este modo, la leche mejora la
supervivencia de la descendencia al promover la competencia inmunológica. Las crecientes concentraciones de proteínas
bioactivas, que ocurren a medida que avanza la lactancia, son probablemente una respuesta fisiológica a las diversas demandas
ambientales del bebé humano, que adquiere progresivamente independencia nutricional [38].
La leche materna cruda contiene una concentración relativamente alta de Lf, lo que conduce a una inhibición más efectiva del
crecimiento de bacterias patógenas en comparación con la leche materna pasteurizada. Como se muestra por Woodman et al.
[38], la Lf humana es mucho más efectiva que la Lf bovina en la inhibición del crecimiento bacteriano, aunque dosis más altas de
Lf bovina también mostraron actividad contra Bifidobacterium breve y Staphylococcus epidermidis. Dado lo anterior, sugerimos
que la leche humana de lactancia prolongada, que contiene un nivel comparable de Lf, podría considerarse una fuente alternativa
de leche / lactoferrina proporcionada en la alimentación de los recién nacidos prematuros, aunque es necesario un análisis más
detallado. Los diferentes métodos utilizados para preservar la bioactividad de la leche humana afectan significativamente la
concentración de Lf [31]. Solo otros estudios que involucren pruebas detalladas de la concentración de lactoferrina en muestras
de leche de lactancia prolongada antes y después de la pasteurización ayudarán a responder esta pregunta.
La fortaleza de nuestro estudio es que es una colección única y bien caracterizada de muestras de leche de madres con lactancia
prolongada de hasta 48 meses, lo que afecta la credibilidad de los resultados obtenidos. Para determinar la concentración de Lf,
se utilizó un método inmunológico específico, ELISA, para evitar la obtención de resultados falsos positivos. Una limitación de
nuestro estudio es el grupo de prueba homogéneo, que puede no permitir establecer una relación causal entre los factores que
pueden influir en la concentración de Lf en la leche, ya que, según lo informado por Yang et al. [33], las concentraciones de Lf en
la leche varían entre las diferentes regiones geográficas de la población china.
La evidencia de niveles estables o crecientes de inmunoproteína durante la lactancia prolongada proporciona el argumento
adicional para permitir el no destete; sin embargo, la lactancia materna debe combinarse con alimentos sólidos para cumplir con
todos los nuevos requisitos de un bebé de seis meses o más de rápido crecimiento. Se han realizado varios ensayos clínicos para
determinar la influencia de Lf en la protección contra las infecciones neonatales [39,40]. Según los estudios publicados sobre la
administración de suplementos de Lf para prevenir la infección, es importante determinar la concentración de Lf durante la
lactancia no solo en los primeros seis meses. Si la concentración cambia durante la fase de lactancia, el calostro tiene la
concentración más alta de Lf y disminuye significativamente durante los días posteriores al parto. Ahora sabemos que la leche de
madres que amamantan mucho tiene una concentración similar a la del calostro. Los médicos deben considerar esto para
fomentar la lactancia materna exclusiva, especialmente en grupos de riesgo como los bebés prematuros [41].
Hasta donde sabemos, según las bases de datos de Internet como Web of Science y pubmed, este es el primer estudio a gran
escala realizado sobre la concentración de lactoferrina en la leche materna durante la lactancia prolongada y la influencia de
varios factores en su concentración. Coincidiendo con la falta de aceptación pública de la lactancia materna más allá del primer o
incluso el segundo año, estos hallazgos han sido ignorados durante décadas.

5. Conclusión

Los resultados muestran que la concentración de Lf durante la lactancia prolongada varía de 4.9 a 5.02 g / L. El mayor contenido
de Lf se registró entre 12 y 24 meses de lactancia. Por encima de 24 meses, la concentración disminuye, aunque no
significativamente. Estos datos han demostrado que el contenido de Lf por encima de los 12 meses de lactancia está cerca de la
concentración de Lf en el calostro.

Contribuciones de los autores: MC-Ł. y MO-P .: Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo. Conceptualización, MC-Ł.,
MOP y BK-O .; Metodología, MO-P. y MC-Ł .; Análisis formal, MO-P. y MC-Ł .; Escritura: preparación del borrador original, MC-Ł.
BK-O., MO-P y. CAMA Y DESAYUNO; Redacción: revisión y edición, BK-O., MO-P .; Visualización, MO-P .; Supervisión, BK-O.

Financiación: Esta investigación no recibió financiación externa.

Agradecimientos: Nos gustaría agradecer a Zuzanna Sycz y a las madres que vinieron al Banco Regional de Leche Humana en el
Hospital Universitario de Wrocław y expresaron la leche materna al estudio. También queremos agradecer a Robin y Barbara Royle por
su ayuda en la corrección del texto del texto.

Conflictos de intereses: los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Referencias

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