PRÁCTICA DE ADN

Química orgánica II
Mayo de 2020

1. Siga el procedimiento descrito en la guía para la extracción de ADN de una cebolla

de huevo, registra fotográficamente cada etapa del proceso y realice un diagrama
de flujo que resume la extracción del ADN.

1. Se puede ver el recipiente con las 3 cucharadas de jabón lavavajilla, 1 cucharada

de sal y el agua que fue previamente hervida.
 2. Se puede ver el filtrado en un vaso previamente enfriado, en este ya están
agregados las 3 cucharadas de jugo de papaya, acá se dividió en 2 la cantidad de
filtrado obtenido antes.

3. Acá se ve el filtrado junto con las cucharadas de papaya pasado el tiempo de

reposo (3 minutos)

4. Acá se agregó el alcohol poco a poco por las paredes formándose una capa
blancuzca en la superficie.

5. Acá se dejó reposar la mezcla del filtrado, jugo de papaya y alcohol sin
mezclarse por unos 2 minutos hasta que se pudo observar la formación de una
interfaz.

6. Acá se observan las fibras de ADN, las cuales fueron sacadas directamente de
la interfaz mediante una cuchara.

2. El procedimiento llevado a cabo para la extracción de ADN de la cebolla, ¿puede

ser realizado en otras frutas y verduras? ¿Debería realizarse alguna modificación?

El procedimiento llevado a cabo para la extracción de ADN de la cebolla si puede

ser realizado en otras frutas o verduras, ya que básicamente lo que se busca es
extraer ADN de células vegetales, porque como es sabido en las células
eucariotas el ADN se encuentra en el núcleo de las mismas empacada entre varias
proteínas, por lo que hay que buscar una técnica la cual permita llegar allá y
obtener su fibra.

Aunque algunas grutas no necesitan la adición de la papaína, ya que ellas cuentan

con sus propias enzimas que ayudan a la ruptura de las paredes celulares y a la
eliminación de proteínas que puedan degradar el ADN.
Al licuar la solución jabonosa junto al material vegetal, asegura que se rompan las
uniones entre las células y su pared celular facilitando así el efecto de lisis; el jabón
lo que hace en sí es romper las membranas celulares compuestas por lípidos
liberando así el ADN del núcleo.

Lo que hace la sal que en este caso es cloruro de sodio es ayudar a separar algunas
proteínas unidas al ADN, a su vez hace que estas proteínas sean disueltas en una
capa acuosa, para prevenir que a la hora de agregar el alcohol no precipitan junto
con el ADN en la interfaz y nos de falsos positivos.
 Porque al ser eliminados los lípidos y proteínas del ADN, esto le confiere al grupo
fosfato una carga positiva y haciendo que el ADN se vuelva polar y este sea
soluble en soluciones acuosa e insoluble en alcohol.

3. Si quisiera conocer el orden en que los nucleótidos se encuentran unidos en el

ADN de la cebolla ¿qué procedimiento debería seguir? Describa brevemente de
qué se trata la técnica.

Se utiliza la técnica didesoxi de sanger la cual involucra reacciones enzimáticas el

cual procede de la siguiente manera:

 El fragmento de restricción tiene que ser secuenciado.

 Un pequeño segmento de ADN llamado cebador (o molde), cuya
secuencia es complementaria a la del extremo 3’ del fragmento de
restricción.
 Los cuatro trifosfatos de 2’-desoxirribonucleótidos (dNTPs).
 Cantidades muy pequeñas de los cuatro trifosfatos de 2',3'-
didesoxirribonucleótidos (ddNTPs), cada uno de los cuales se marca con
un colorante fluorescente de un color diferente (un trifosfato de 2',3'-
didesoxirribonucleótido es aquel en el que faltan los grupos - O H 2 ' y 3 '
de la ribosa)

Se adiciona a el ADN polimerasa a la mezcla y una cadena de ADN complementaria

al fragmento de restricción empieza a crecer desde el extremo del ADN cebador.
La mayor parte del tiempo sólo se incorporan en la cadena de crecimiento
desoxirribo-nucleótidos normales, debido a su concentración mucho mayor en la
mezcla, pero a menudo se incorpora un didesoxirribonucleótido. Cuando esto
sucede, se detiene la síntesis de ADN debido a que el extremo de la cadena ya no
tiene un grupo 3'-hidroxilo para que adicione más nucleótidos.
Cuando se completa la reacción, el producto consiste en una mezcla de
fragmentos de ADN de todas las longitudes posibles, cada uno terminado por uno
de los cuatro didesoxirribonucleótidos marcados con un colorante. Esta mezcla
de productos se separa por electroforesis en gel de acuerdo con el tamaño de las
piezas y la identidad del didesoxirribonucleótido terminal en cada pieza (y, por lo
tanto, la secuencia del fragmento de restricción) se identifica simplemente
notando el color con que fluoresce el colorante fijado.

4. Si quisiera realizar una copia del ADN extraído de la cebolla ¿qué técnica utilizaría?
Describa brevemente la técnica.
 Se copiará el ADN extraído de la cebolla mediante clonación.
Se inserta primero en un fragmento circular de ADN llamado plásmido. La
inserción se realiza con enzimas que "cortan y pegan" ADN y se obtiene una
molécula de ADN recombinante, ADN ensamblado de fragmentos provenientes
de múltiples fuentes. Se inserta primero en un fragmento circular de ADN llamado
plásmido. La inserción se realiza con enzimas que "cortan y pegan" ADN y se
obtiene una molécula de ADN recombinante, ADN ensamblado de fragmentos
provenientes de múltiples fuentes.

5. ¿Qué es un cromosoma? ¿Qué es un gen? ¿Qué es una mutación?

Cromosoma: Un cromosoma es una estructura microscópica que se encuentra

presente en todas las células del organismo. Contiene los genes que determinan
todos los rasgos genéticos, como el color de los ojos y del cabello, y que controlan
el crecimiento y el desarrollo de cada componente de nuestro sistema físico y
bioquímico.

Gen: El gen es la unidad de almacenamiento de información de los seres vivos.

Son también las unidades que se heredan, que pasan de padres a hijos. Un gen es
un segmento de ADN que codifica para una proteína. Codificar significa en este
caso que cada gen contiene información para la producción de una proteína que
llevará a cabo una función específica en la célula, en el organismo. En realidad es
algo más complejo, puesto que algunos genes no codifican para proteínas, sino
que son reguladores y algunos genes dan lugar a más de una proteína.

Mutación: Una mutación es el cambio al azar en la secuencia de nucleótidos o en

la organización del ADN (genotipo) de un ser vivo, que produce una variación en
las características de este y que no necesariamente se transmite a la
descendencia. Se presenta de manera espontánea y súbita o por la acción de
mutágenos.

6. Considere la estructura general de un nucleótido (Fosfato-Azúcar-Base). ¿Qué

estructura es obtenida durante la hidrólisis ácida de un nucleótido? ¿Qué
estructura es obtenida durante la hidrólisis básica de un nucleótido? ¿Qué utilidad
tiene llevar a cabo la hidrólisis química de un nucleótido?
Hidrólisis acida:
.
NH 2 NH 2
NH 2

N O N
O N O N
N N H
H –
– – O P O +
O P O O P O + O N
–
O N N H3O+ –
O N N O
– N
O O +
+ H 2O O H

OH H
OH OH

NH 2
O
H O NH 2 N
– O N
O P O + H H
H 2O – –
+ O
–
O O P
–
O
O
+
OH
N
N
O P O
O
+
N N
OH
O
+ NH
O
–

N OH
OH
OH OH

O
–
O P O
O OH
–
O
+ H3O+
OH

Hidrólisis básica:
NH 2 NH 2

O N O N
N N
HO P O HO P O
O O
– N N N
O N
hidrólisis básica OH
O
O
O OH N
NH O O
N
O P O NH
O P
–
O N N NH 2 – O
O O O N N NH 2

O OH
– O O
O P O
– O P
O
–
O

Su utilidad tiene que ver con el aislamiento y caracterización de ácidos nucleicos,

en una hidrolisis satisfactoria del ARN, se obtiene una mezcla de bases púricas y
nucleótidos pirimidínicos. En la hidrolisis básica se obtienen cuantitativamente
nucleósidos 3’-fosfato.