• Genetica bacteriana

Mutacion, reparacien y recombinacien

Es importante que el ADN se replique de forma precisa para que
las bacterias sobrevivan, pero se producen errores y alteraciones
accidentales del ADN. Las bacterias tienen sistemas de reparacion
del ADN eficientes, pero aun se siguen produciendo mutaciones
y alteraciones en el ADN. La mayoria de estas mutaciones tienen
escaso efecto sobre las bacterias o son nocivas, pero algunas
mutaciones pueden proporcionar una ventaja selectiva para la
supervivencia de las bacterias cuando se ven amenazadas por el
entorno, el huesped o el tratamiento antibiotico.

Mutaciones y sus consecuencias

Una mutacion se define como cualquier modificacion de la secuencia
de bases de! ADN. Un cambio de una sola base puede ocasionar
una transicion, en la que una purina es sustituida por otra purina
o una pirimidina es reemplazada por otra pirimidina. Tambien puede
aparecer una transversion, en la que una purina es sustituida por w1a
pirimidina o viceversa. Una mutacion silenciosa es una rnodificacion
de! ADN que no provoca cambios en la secuencia de aminoacidos de
la proteina codificada. Este tipo de mutacion se debe a que un arninoacido
puede estar codificado en mas de un codon. Una mutacion
de sentido erroneo ( missense) es aquella que comporta la insercion de
un arninoacido diferente en la proteina; sin embargo, cuando el
nuevo arninoacido posee unas propiedades semejantes (p. ej., una
valina que sustituye a una alanina) puede tratarse de una mutaci6n
conservadora. Una mutacion sin sentido (nonsense) es aquella en la
que se sustituye un codon que codifica a un aminoacido por un codon
de interrupcion (p. ej., TAG [timidinaadeninaguanina]),
lo que
provoca que el ribosoma pierda el ARNm y finalice prematuramente
la produccion de la proteina. Las mutaciones condicionales, como
las mutaciones termosensibles, pueden deberse a mutaciones conservadoras
que modifican la estructura o la funcion de una proteina
importante cuando la temperatura es elevada.
Se pueden observar modificaciones mas notables cuando la
mutacion afecta a un gran numero de bases. Una pequeria delecion
o insercion que no ocurra en multiples de tres produce una
mutacion de desfase de lectura (Jrameshift mutation) que altera
el sistema de lectura y habitualmente ocasiona la aparicion de un
«peptide absurdo» y la interrupcion prematura de la proteina. Las
mutaciones nulas, que destruyen completamente la funcion de!
gen, aparecen cuando se registra una extensa insercion o delecion
o una acusada reorganizaci6n de la estructura cromos6mica. La
inserci6n de Jargas secuencias de ADN (muchos miles de pares de
bases) por recombinacion, transposicion o tecnicas de ingenieria
genetica puede producir mutaciones nulas por separaci6n de las
partes de un gen e inactivaci6n de este.
En la naturaleza se produce un gran nurnero de mutaciones de
forma espontanea (p. ej., debido a errores de la polimerasa); sin
embargo, las mutaciones tambien pueden ser consecuencia de agentes
fisicos o quimicos. Entre los agentes fisicos utilizados para inducir
la aparicion de mutaciones en las bacterias figuran los siguientes:
el calor, que provoca una desaminacion de los nucleotides, la luz
ultravioleta, que origina la formaci6n de dimeros de pirimidina, y laradiaci6n ionizante (p. ej., rayos X), que produce radicales
hidroxilo
hiperreactivos capaces de abrir la estructura anular de una base o
bien de generar roturas monocatenarias o bicatenarias en el ADN.
Las sustancias quimicas de tipo mutagenico pueden agruparse
en tres clases. Los analogos de nucleotides producen apareamientos
err6neos y frecuentes errores en la replicaci6n de! ADN.
Por ejemplo, la incorporaci6n de 5bromouracilo
en la molecula
de ADN en lugar de timidina permite su apareamiento con guanina
en lugar de adenina, de forma que sustituye un par TA
por
un par GC.
Los mutagenos de desfase de lectura, como algunas
moleculas policiclicas planas (bromuro de etidio, derivados de la
acridina), se insertan (o intercalan) entre las bases a medida que
se enfrentan una a otra en la doble helice de! ADN. El aumento
en el espacio existente entre los sucesivos pares de bases comporta
la adici6n o supresi6n de una unica base y ocasiona la aparici6n
de frecuentes errores durante la replicaci6n de! ADN. Las sustancias
quimicas reactivas frente al ADN actuan directamente
sobre este y modifican la estructura quimica de la base. Entre
estas sustancias quimicas destacan el acido nitroso (HN0 2) y
los agentes alquilantes (p. ej., nitrosoguanidina
y etilrnetanosulfonato),
de los que se sabe que afladen grupos metilo o etilo a
los anillos de las bases de! ADN. Las bases modificadas pueden
aparearse de forma anormal o bien no aparearse. Esta alteraci6n
puede provocar la eliminaci6n de la base de! esqueleto de! ADN.
lntercambio genico en los procariotas
Muchas bacterias, especialmente numerosas especies pat6genas,
utilizan su ADN de forma promiscua. El intercambio de ADN
entre celulas permite el intercambio de genes y caracteristicas entre
ellas, lo que ocasiona la aparici6n de cepas bacterianas nuevas.
Este intercambio puede resultar ventajoso para el receptor, especialmente
cuando el ADN codifica mecanismos de resistencia
a los antibi6ticos. El ADN transferido puede integrarse en el
cromosoma de! receptor o bien mantenerse de manera estable
en forma de elemento extracromosornico (plasmido) o como un
virus bacteriano (bacteriofago) y se transmite a las bacterias hijas
como una unidad dotada de capacidad aut6noma de replicaci6n.
Los plasmidos son pequefios elementos geneticos cuya replicacion
es independiente de! cromosoma bacteriano. La mayoría de los plasmidos son moleculas circulares bicatenarias de ADN
con un numero variable de pares de bases (de 1.500 a 400.000).
Sin embargo, Borrelia burgdorferi, el microorganismo etiol6gico
de la enfermedad de Lyme, y la bacteria afin Borrelia hermsii presentan
una caracteristica peculiar en el grupo de las eubacterias:
la presencia de genomas y plasmidos lineales. Al igual que el ADN
cromos6mico bacteriano, estos plasmidos se pueden replicar de
forma autonorna, por lo que reciben el nombre de replicones.
Algunos plasmidos, como el plasrnido F de E. coli, son episomas,
lo que indica que se pueden integrar en el cromosoma de! huesped,
Los plasmidos portan informaci6n genetica, la cual puede
proporcionar una ventaja selectiva a las bacterias aunque no
constituya una ventaja esencial para la bacteria. Por ejemplo,
los plasrnidos pueden conferir un nivel alto de resistencia a
antibioticos, codificar la producci6n de bacteriocinas, toxinas,
determinantes de virulencia y con ten er otros genes que otorguen
una ventaja respecto a la metabolizaci6n de ciertos sustratos en
comparaci6n con otros microorganismos o en el interior de!
organismo hospedador (fig. 1310).
El nurnero de copias de plasmido producidas por una celula es especifico de cada uno
de ellos. Este numero es la relaci6n existente entre las copias de!
plasrnido y el numero de copias de! cromosoma. Su valor puede
ser bajo (hasta de 1 en el caso de los plasmidos grandes) o alto
(hasta de 50 en los plasmidos mas pequenos).
Los plasmidos de gran tamafio (20120
kb), como el factor F
de fertilidad de E. coli o el factor de transferencia de resistencia
(80 kb), a menudo pueden mediar su propia transferencia de
una celula a otra mediante un proceso denominado conjugacion
(v. apartado «Conjugaci6n», mas adelante en este capitulo). Estos
plasmidos conjugativos codifican todos los factores necesarios
para su propia transferencia. En cambio, otros plasrnidos pueden
ser transferidos a las celulas bacterianas por medio de mecanismos
distintos de la conjugaci6n (p. ej., por transformaci6n o por
transducci6n). Estos terrninos se estudian tarnbien mas adelante
en este capitulo.
Los bacteriofagos son virus bacterianos con un genoma de
ADN o de ARN protegido generalmente por una membrana o
una capa de proteinas. Estos elementos geneticos extracromos6micos
pueden sobrevivir fuera de la celula de! huesped y ser
transmitidos de una a otra celula. Los bacteri6fagos infectan a
las celulas bacterianas y se pueden replicar hasta alcanzar un
gran nurnero y condicionar la lisis celular (infeccion Utica) o, en
algunos casos, integrarse en el genoma de! huesped sin destruirlo
(estado Iisogenico), como sucede en el caso de! bacteri6fago
lambda de E. coli. Algunos bacteri6fagos lisogenicos transportan
genes para toxinas (p. ej., el corinefago beta contiene el gen de la
toxina difterica), El bacteri6fago lambda sigue siendo Iisogenico
mientras se siga sintetizando proteina represora, y esto evita que
el fago deje de estar integrado para poder replicarse y abandonar
la celula. El dano en el ADN de las celulas del huesped por
radiaci6n u otro mecanismo o la incapacidad para producir la
proteina represora es una serial de que la celula hospedadora ya
no esta sana y no es un buen lugar para «vivir de gorra».
Los transposones (genes «saltarines») son unos elementos
geneticos m6viles (fig. 1311)
que pueden transferir ADN de una
posici6n a otra de! genoma o entre distintas moleculas de ADN
dentro de una misma celula (p. ej., de un plasrnido a otro ode un
plasmido a un cromosoma). Los transposones se detectan tanto
en los procariotas como en los eucariotas. Los transposones mas
simples se denominan secuencias de insercion y su longitud comprende
de 150 a 1.500 pares de bases con repeticiones invertidas
de 15 a 40 pares de bases y la informaci6n genetica minima necesaria
para su propia transferencia (es decir, el gen que codifica la
transposasa). Los transposones complejos contienen otros genes,
como genes que proporcionan resistencia a antibi6ticos. En ocasiones,
los transposones se introducen en el interior de los genes
y los inactivan. Si la inserci6n e inactivaci6n tienen lugar en un
gen encargado de codificar una proteina esencial, la celula muere.
Algunas bacterias pat6genas utilizan un mecanismo sernejante
para coordinar la expresi6n de un sistema de factores de virulencia.
Los genes de actividad pueden agruparse en un islote de
virulencia o patogenicidad rodeado por unos elementos m6viles
semejantes a los transposones que les permiten moverse tanto en
el interior del cromosoma como hacia otras bacterias. Cualquier
unidad genetica puede reaccionar ante la presencia de un estimulo
ambiental (p. ej., pH, calor o contacto con la superficie de la celula
de! huesped) como mecanismo de coordinaci6n de la expresi6n
de un proceso complejo. Por ejernplo, el islote SPI1
de Salmonella
codifica 25 genes para un dispositivo de secreci6n de tipo III que
permiten la entrada de esta bacteria en celulas no fagociticas.
Mecanismos de transferencia genetica
entre celulas
El intercambio de material genetico entre las celulas bacterianas
puede tener lugar a traves de uno de los tres mecanismos siguientes (fig. 1312):
1) transformacion, que es una captaci6n
activa y la incorporaci6n de ADN ex6geno o extrafio; 2) conjugacion,
que consiste en un apareamiento o intercambio cuasisexual
de informaci6n genetica entre una bacteria (donante) y otra
bacteria (receptora), o 3) transduccion, la cual se caracteriza por
la transferencia de informaci6n genetica de una bacteria a otra
por media de un bacteri6fago. En el interior de la celula, el transposon
puede «saltar» entre distintas moleculas de ADN (p. ej.,
de plasmido a plasmido ode plasrnido a cromosoma). Varios de
estos mecanismos contribuyen a la generaci6n de Staphylococcus
aureus resistentes a vancomicina

Transformaci6n
La transforrnacion es el proceso mediante el cual las bacterias
captan fragmentos de ADN desnudo y los incorporan a sus
genomas. La transformaci6n fue el primer mecanismo de transferencia
genetica que se descubri6 en las bacterias. En 1928,
Griffith observ6 que la virulencia del neumococo se relacionaba
con la presencia de una capsula de polisacarido y que los extractos
de bacterias encapsuladas productoras de colonias lisas podian
transmitir este rasgo a las bacterias no encapsuladas, las cuales
presentan generalmente una morfologia rugosa. Alrededor de
15 anos despues, los estudios de Griffith permitieron que Avery,
McLeod y McCarty identificaran el ADN como el principio clave
del mecanismo de transformaci6n.

Ciertas especies presentan una capacidad natural de captaci6n

de ADN ex6geno (por lo que se definen como «competentes» ),
como Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y los
generos Bacillus y Neisseria. La competencia aparece al final
de la fase logaritmica de crecimiento. E. coli y la mayoria de las
bacterias carecen de la capacidad natural para captar ADN, y ha
de inducirse la competencia o utilizarse metodos quimicos o la
electroporaci6n (empleo de pulsos de alto voltaje) para facilitar
la captaci6n de ADN plasmidico y de otro tipo.
Conjugaci6n
La conjugacion produce una transferencia unidireccional de
ADN desde un celula donante ( o macho) has ta una celula receptora
(o hembra) a traves de! llamado pilus sexual. La conjugaci6n
se da en la mayoria de las eubacterias, si no en todas, por
lo general entre miembros de la misma especie o de especies
relacionadas, pero se ha demostrado tambien entre procariotas
y celulas de plantas, animales y hongos.
El tipo de acoplamiento (sexo) de la celula depende de la presencia
(celula macho) o ausencia (celula hembra) de un plasrnido
conjugativo, como el plasmido F de E. coli. El plasrnido F se define
como conjugativo porque contiene todos los genes necesarios para
su propia transferencia, como la capacidad de fabricar pili sexuales
e iniciar la sintesis de ADN en el llamado «origen de transferencia»
( oriT). El pelo sexual es un tipo de secreci6n de tipo IV especializado.
Al transferirse el plasmido F, las celulas receptoras se convierten
en celulas macho F'. Cuando un fragmento de ADN cromos6mico
se ha incorporado a la secuencia de! plasmido, se designa como
«plasmido F prima» (F'). Cuando este plasmido se transfiere al
interior de la celula receptora, transporta el fragmento y lo convierte
en un F' macho. Cuando la secuencia de! plasmido se integra
en el interior de! cromosoma bacteriano, la celula se designa como
«celula Hfr» (alta frecuencia de recombinaci6n).
El ADN transferido por conjugaci6n no es una molecula bicatenaria
helicoidal, sino una rnolecula monocatenaria. La movilizaci6n
cornienza cuando una proteina codificada por un plasrnido introduce
una rotura monocatenaria en un punto especifico de! oriT. La muesca
asi formada inicia un replicaci6n por circulo rodante y la cadena
lineal desplazada se dirige hacia la celula receptora. A continuaci6n, el
ADN monocatenario adopta nuevamente una conformaci6n circular
y sintetiza su cadena complementaria. La conjugaci6n comporta la
transferencia parcial de la secuencia plasrnidica y de un fragmento de!
ADN cromos6rnico bacteriano. Como consecuencia de la fragilidad
de la conexi6n formada entre las dos celulas acopladas, la transferencia
se suele interrumpir antes de finalizar el proceso, de modo
que unicamente se transfieren las secuencias cromos6rnicas cercanas
al plasrnido F integrado. La interrupci6n artificial de un acoplarniento
entre un Hfr y una pareja F" ha resultado util para cartografiar el
ADN cromos6mico de E. coli. Este tipo de mapas muestra la posici6n
de cada gen en minutos ( en relaci6n con los 100 minutos que requiere
la transferencia completa a 37 °C) segun su momento de entrada
a una celula receptora respecto a un origen fijo.