TÉCNICAS DE BIOTECNOLOGÍA DE ÁCIDOS NUCLEOICOS

Técnicas de separación

ELECTROFORESIS

Es un método de separación basado en la movilidad de biomoléculas en fase

líquida bajo la acción de un campo eléctrico. El aparato de electroforesis moderno
tiene los siguientes componentes: un recipiente para evitar la contaminación y el
desbordamiento de biomoléculas, dos polos que atraerán biomoléculas, una
fuente de energía que genera un campo eléctrico ajustable, una matriz que
permite una segunda resolución y, finalmente, una solución tampón de pH que
puede mantener las biomoléculas.

 Electroforesis de ácidos nucleicos

los ácidos nucleicos son polímeros de carga negativa unidos por enlaces
covalentes fosfodiéster. De esta manera, el ADN y el ARN se moverán en un
campo electroforético hacia el polo positivo.

• La composición de los nucleótidos es: ribosa, base nitrogenada y ácido fosfórico.

Allí se puede ver la estructura de los ácidos nucleicos que contienen timina,
adenina, ETC. Por otro lado, la visualización de ácidos nucleicos en electroforesis
requiere reactivos. Suelen ser compuestos con una estructura plana intercalada
entre los enlaces de hidrógeno de los ácidos nucleicos, como el bromuro de etidio.
Cuando estas moléculas se excitan con luz ultravioleta, la fluorescencia que
emiten indica la ubicación del ácido nucleico, que es función de su tamaño
molecular.

La electroforesis en gel
Se basa en el desplazamiento de partículas con carga en un campo eléctrico.
Los geles de polímeros, como el de agarosa y el de poliacrilamida, se emplean
de manera frecuente como medio de soporte para la electroforesis. Estos
geles se preparan y moldean como una matriz continua de polímeros
entrecruzados, lo que origina una malla porosa. La elección de gel de agarosa
o de poliacrilamida depende del tamaño de las moléculas que se desean
separar. La agarosa se emplea para fragmentos más grandes y la
poliacrilamida para los más pequeños.
Es importante recalcar que los ácidos nucleicos y los fragmentos de
oligonucleótidos tienen carga negativa a PH neutro, debido a la presencia de
sus grupos fosfato.

 Electroforesis de proteínas
Es un detergente que simultáneamente desnaturalizar las proteínas y las cubre
de una carga neta mente negativa para que miren hacia el Polo positivo
durante la electroforesis este método es Útil para el seguimiento de los niveles
de acumulación de proteínas así como para su purificación separación
hibridación con anticuerpos en existencia en qué consiste en someter a las
proteínas al campo eléctrico en presencia de un gradiente de pH usualmente
de 2 a 6 cargas a las proteínas en su punto isoeléctrico
Endonucleasas de restricción
Es aquella que puede reconocer una secuencia característica
de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto
en concreto, llamado sitio de restricción. Los sitios de restricción cuentan con
entre cuatro y seis pares de bases, con las que son reconocidos.
El mecanismo del corte de ADN se realiza a través de la ruptura de
dos enlaces fosfodiéster en la doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de
DNA. Una vez que se corta el ADN con una enzima particular, los fragmentos
de ADN de diferentes fuentes pueden unirse siempre y cuando ambos se
hayan cortado con la misma encima de restricción.

Clonación
La clonación de and es el proceso de hacer multiples copias idénticas de un
fragmento particular de ADN.

Detección de biomoléculas por hidratación

Cuando los ácidos nucleicos o las proteínas en solución interactúan con
superficies sólidas, pueden ser absorbidos Las superficies más utilizadas son
las membranas de nitrocelulosa y las membranas de nailon.