Producción de biomasa de Saccharomyces cerevisiae

y Candida utilis usando residuos de pulpa de Coffea

arabica L.

Integrantes:
● Alberto Laymito, Caroly
● Anaya Quiroz, Melissa
● Rafael Rivas, Raquel
 I. OBJETIVO
Producir la levadura Saccharomyces cerevisiae y Candida utilis
utilizando residuos de la pulpa de café.

Evaluar el efecto de la hidrólisis ácida y la adición de sales

nutritivas en el medio de cultivo sobre la producción de biomasa.
II. MATERIA PRIMA
★ PULPA DE CAFÉ:

Principal residuo sólido del beneficio

húmedo del grano de café y constituye
aproximadamente el 41% del peso
húmedo del grano de café.

Dentro de los cultivos no convencionales, el café es uno COMPOSICIÓN:

de los más prometedores para la obtención de proteína Materia seca 90,64%
unicelular o biomasa, debido a su alto contenido de Proteína cruda 7,39%
hidratos de carbono fácilmente hidrolizables. Dentro de Grasa 1,06%
éste contexto esta investigación se inclina al Fibra cruda 10,63%
aprovechamiento del recurso agrícola, pulpa del café, Cenizas 6,20%
como fuente energética en el aprovechamiento de los Carbohidratos 74,42%
productos intermedios del bioproceso como son la
proteína unicelular o biomasa.
★ MATERIAL VEGETAL:

4 Kg
Se recolectaron café variedad caturra
rojo en el sector El Amparo, Vía Los
Chorros de Milla, Mérida-Venezuela. MACERACIÓN 18 h
T° ambiente

Las muestras así procesadas fueron

conservadas en un frasco de vidrio DESPULPADO
cerrado herméticamente a
temperatura ambiente.
SECADO 45 °C
La miel de melaza fue suministrada por 48 h
el Central Azucarero El Tocuyo,
Lara-Venezuela.
MOLIENDA 2 mm
 ★ MICROORGANISMOS
1) Saccharomyces cerevisiae Levospark™(22)
2) Candida utilis ATCC9226

agar
Candida utilis sabouraud
REACTIVACIÓN 5 ºC

Objetivo: adaptar las

Preadaptación: 3 días levaduras en el
solución de substrato y lograr el
Saccharomyces
sacarosa al 0,1% máximo crecimiento
cerevisiae agar sabouraud
+ 0.2% pulpa de
café seca
agar
5 ºC
sabouraud 25 ºC x 24 horas
5 ºC
30ºC x 24 horas
III. PRETRATAMIENTO
3.1. Extracto de pulpa de
3.2. Extracto de pulpa de café hidrolizado
café sin hidrolizar

Se preparó en una relación Hidrolizado

peso pulpa/ácido diluido
1:10 2890 g
CENTRIFUGACIÓN T= 0°C
Precipitado
Se preparó en una
relación peso Ácido sulfúrico diluído:
pulpa/ácido 1:10 en 1, 2, 3%
un equipo Soxhlet a A Presión atmosférica con NaOH 33% ESTANDARIZACIÓN pH 4.5
temperatura de 96° ebullición a reflujo por:
C por 4 horas Presión= 15 psi
Tiempo: ESTERILIZACIÓN T= 121°C
120, 180, 240 min Tiempo= 15 min.

Equipo Soxhlet Extracto

Como fuente de carbono en el medio de
cultivo
IV. CONDICIONES DEL CULTIVO
AEROBIO
4.1. Tratamientos

Medio de cultivo 1, se Medio de cultivo 2, se Medio de cultivo 3, se Medio de cultivo 4

preparó con el preparó agregándole al preparó agregándole al (Control), se
extracto ácido de café extracto ácido, 3g/L de extracto ácido, 3g/L de preparó con
líquido y 3g/L de urea. urea, 2g/L de K2HPO4. urea; 2g/L de K2HPO4 y extracto ácido, sin
1.3g/L de extracto de nutrientes .
malta líquido.
 4.2. Condiciones del 4.3. Obtenciòn de biomasa y
cultivo aerobio sobrenadante
Medio de cultivo
● Temperatura de 30 ºC
● Agitación rotatoria de 90 g Centrifugaciòn Sobrenadante
● se suministró oxígeno al
medio durante todo el Sedimento Diluciones
proceso
● pH 4,5.
Lavado 1/500 1/1000 1/2000
● El tiempo del cultivo
aeróbico fue de 8 horas.
Filtrado
Método de contaje en la cámara de
Azucares totales
Neubauer
Secado
IV. RESULTADOS
Figura 1.. Contenido de azúcares en el sustrato de
cáscara de café.
Tabla 1: Efecto de la hidrólisis ácida de la pulpa de café con producción de
azúcares fermentescibles

Fuente: Carrillo et al. (2011)

Fuente: Gualtieri et al. (2007) La cáscara de café se trituró, para tener un tamaño de partícula: 2 ó 3 mm.
Hidrólisis H2SO4 2% por 4 h, Temperatura 90-100°C.
El hidrolizado ácido se centrifugó a 3000 rpm a 0 °C por 15 min y después se decantó.
Incremento en la concentración de Ajuste de pH 4.5 con NaOH al 33 %, y se esterilizó a 15 libras de presión por 15
azúcares reductores, a medida que minutos, con la finalidad de inhibir el crecimiento de microorganismos no
deseados.
aumentaba el tiempo de hidrólisis.
4.2. EFECTO DE LAS SALES SOBRE EL CRECIMIENTO
CELULAR DE S. CEREVISIAE
Tabla 2: Efecto de las sales nutritivas sobre el crecimiento
celular de S. cerevisiae
Se empleó las siguientes concentraciones:
urea, 3g/L; fosfato ácido de potasio, 2g/L; y
extracto de malta líquido, 3g/L.
Medio de cultivo 1: Extracto ácido de café, 1L; urea, 3g/L.
Medio de cultivo 2: Extracto ácido de café, 1L; urea, 3g/L; K2HPO4,
2g/L.
Medio de cultivo 3: Extracto ácido de café, 1L; urea, 3g/L; K2HPO4,
2g/L; extracto de malta líquido (3g/L).
Medio de cultivo 4: Extracto ácido de café, 1L.
Condiciones experimentales: pH 4,5; 30 °C; con un flujo de aire de 90
litros/hora y un tiempo de fermentación de 8 horas. Cada valor
representa la media de tres ensayos.
 Con el objetivo de estudiar el crecimiento de las levaduras S. cerevisiae y C. utilis
sobre el residuo de la pulpa de café, se realizaron fermentaciones aeróbicas,
empleando el Medio de cultivo 3 y adicionándole melaza de caña de azúcar 30g/L.
Tabla 3: Cultivos aeróbicos utilizando el Medio 3 y melaza (3g/L)

Figura 2: Crecimiento de Saccharomyces Cerevisiae Figura 3: Crecimiento de Candida utilis

Se realizó una comparación con diferentes autores acerca del rendimiento de
levadura obtenido usando diferentes sustratos.
Tabla 4: Cantidad de biomasa en peso seco reportada por
diferentes autores.
Fuente: Carrillo et al. (2011)
En la investigación hecha por Carrillo et al.
(2011) se realizó un análisis bromatológico de
la biomasa la cual presentó un alto contenido de
proteínas, lo que indica que el sustrato no sólo
afecta la cantidad de biomasa
que se obtenga, sino también a la calidad de la
misma.
Tabla 5: Análisis bromatológico de la biomasa
4.3. Efecto de la Hidròlisis en la formaciòn de biomasa
Tabla 6. Composición química de la biomasa obtenida por
cultivos aeróbicos con Saccharomyces cerevisiae

El medio de cultivo Segùn Carrillo (2011),

con extracto de la en la biomasa producida
pulpa de café se encontró en un 41 %
hidrolizado con ácido de proteínas. Los
sulfúrico al 2%, se resultados de este
obtuvo un mayor trabajo se atribuyeron a
crecimiento celular una buena hidrólisis de
de S. cerevisiae, la cáscara.
5,7x104 cel/ml,
4.4. Efecto de la Hidròlisis en la formaciòn de biomasa

Figura 4. Comparaciòn del crecimiento de S. cerevisiae sin hidrólisis ácida de pulpa de cafè hidrolizado y con hidrólisis
ácida.Condiciones de crecimiento;extracto ácido de cafè 1 L, urea 3 g/L, K2HPO 2g/L, extracto de malta líquido 3 g/L.
IV. CONCLUSIONES
Se demostró que S. cerevisiae, tiene la habilidad de utilizar los residuos de la pulpa de
café hidrolizados y constituyen un excelente medio de cultivo con abundante
crecimiento celular, con un alto contenido proteico.La hidrólisis química del residuo de
la pulpa de café y de la cáscara de cafe con ácido sulfúrico al 2% permite obtener
azúcares fermentables por la S. cerevisiae y Candida utilis. Además de ser una
alternativa para el aprovechamiento de estos residuos, ya que a partir de ellos, que
industrialmente son considerados desechos, permite obtener grandes cantidades de
proteínas para consumo humano y animal, de la pulpa de café.
IV. BIBLIOGRAFÍA
Gualtieri, M. J., Villalta, C., Díaz, L. E., Medina, G., Lapenna, E., & Rondón, M. E. (2007). Producción de biomasa de
Saccharomyces cerevisiae y Candida utilis usando residuos de pulpa de Coffea arabica L. Revista del Instituto
Nacional de Higiene Rafael Rangel, 38(2), 31-37.

Carrillo, M. L., Zavala, D., Alvarado, B., Morales, K. S., & Bautista, P. (2011). Obtención de biomasa a partir de
cáscara de café. Tlatemoani: revista académica de investigación, (6)3.