Proyecto Final

“Interacción de sumo-1 y mage-a2 en

la regulación del oncosupresor p53”

Investigador: Martin Monte

Estudiantes: Litman y Stermann

Año: 2008
EL proyecto de investigación a cargo del doctor Martin Monte del cual
orgullosamente participamos tiene como punta de partido el conjunto de
enfermedades llamado comúnmente CANCER, es por esto que creemos pertinente
incluir una breve reseña sobre esta, así también como sobre algunos términos que
aparecerán a lo largo del proyecto:

El término 'cáncer' se utiliza como el nombre general para referirse a un grupo de más
de cien enfermedades en las cuales las células en una parte del cuerpo comienzan a
crecer sin control. Existen muchos tipos de cáncer y pueden comportarse de maneras
muy diferentes. Por ejemplo, el cáncer del pulmón y el cáncer del seno son dos
enfermedades completamente distintas, crecen a distinta velocidad y responden a
distintos tratamientos
Sin embargo todos comienzan debido al crecimiento sin control de las células anormales.
Los cánceres que no se someten a tratamiento pueden causar graves enfermedades e
incluso la muerte.
Las células normales del cuerpo crecen, se dividen y mueren en una forma ordenada.
Durante los primeros años de vida de una persona, las células normales se dividen con
más rapidez hasta que la persona alcanza la edad adulta. Posteriormente, las células
normales de la mayoría de los tejidos sólo se dividen para reemplazar las células
desgastadas o moribundas, así como para reparar lesiones.
Debido a que las células cancerosas continúan creciendo y reproduciéndose, éstas
difieren de las células normales, y en lugar de morir, viven más tiempo que las células
normales y continúan produciendo nuevas células anormales conformando, en la mayoría
de los casos, un tumor. Pero sin embargo una de las características más preocupantes
del cáncer es que a pesar de que puede originarse en muchas partes del cuerpo las
células cancerosas pueden viajar a otras partes del cuerpo a través del torrente
sanguíneo o mediante el sistema linfático donde comienzan a crecer y a reemplazar el
tejido normal. A este proceso de propagación se le llama metástasis.

Las células cancerosas surgen como consecuencia de daños en el ADN. La mayoría de las
veces en las que el ADN se daña, la célula puede repararlo, o bien, ésta muere. En las
células cancerosas, el ADN no se repara. Las personas pueden heredar ADN dañado que
es responsable de los tipos de cáncer hereditarios. Aunque muchas de las veces, el ADN
de una persona se daña por factores en el entorno, como la exposición a sustancias
químicas, virus, humo del tabaco o demasiada exposición al sol. Es así, que los genes
pueden ser alterados o mutados de muchas maneras. El cambio genético más común
involucra un mal apareamiento de base individual--un mal deletreo--colocando a la base
equivocada en el ADN. En otras ocasiones, una base individual se puede eliminar o añadir.
Y algunas veces secciones grandes de ADN se repiten o suprimen por error
Cuando un gen contiene una mutación, la proteína codificada por ese gen es muy probable
que sea anormal. Algunas veces la proteína podrá funcionar imperfectamente; en otros
casos, estará totalmente incapacitada. La gravedad de este hecho no depende
exclusivamente de cómo se altera la función de una proteína sino mas bien de qué tan
vital es esta para la supervivencia.

Existen diversos tratamientos contra el cáncer, la cirugía, la radioterapia, entre otros;

pero el que se encuentra más involucrado con nuestro trabajo es la quimioterapia. Esta,
de forma general, consiste en cualquier tratamiento médico basado en la administración
de sustancias químicas.

Sin embargo el término quimioterapia suele reservarse a los fármacos empleados en el

tratamiento de las enfermedades neoplásicas1 que tienen como función el impedir la
reproducción de las células cancerosas. Esta terapia tiene una gran limitación, que radica
en su limitada especificidad; que es debido a su mecanismo de acción. Este consiste en
provocar una alteración celular ya sea en la síntesis de ácidos nucleicos, división celular o
síntesis de proteínas, afectando a otras células y tejidos normales del organismo, sobre
todo si se encuentran en división activa (tales como las células del cabello y la uñas).

1
es decir las enfermedades en las cuales una proliferación anormal de células en un tejido u órgano desemboca
en la formación de un tumor
Existen más de 100 fármacos que se suelen usar en combinación; uno de los más
importantes son el grupo de los agentes alquilantes cuyo mecanismo de acción general, es
el daño inducido al ADN celular (tanto neoplásico como sano) al incorporar grupos alquilo,
y de esta manera alterar o evitar la duplicación celular. Ejemplos: clorambucil, melfalan.

INVESTIGACIÓN:

El factor de transcripción p53 también llamado el "guardián del genoma", se encuentra

en el brazo corto del cromosoma 17 (17p13) y codifica una proteína nuclear de 53 KDa,
de ahí su nombre. Este es un sensor de diversos estímulos tales como la
hiperproliferacion celular, daños en el ADN, o cuando las celulas han completado un
número dado de ciclos celulares, los cuales ponen en peligro el control y el normal
funcionamiento de las células. A partir de estos estímulos p53 induce la transcripciones
de distintos genes dependiendo de la ocasión; ya sea arrestar y reparar las células que
ponen en peligro la estabilidad genomica y si el estimulo persiste llegar a la apoptosis2
para eliminar la células dañadas. Esto en su conjunto reduce la probabilidad de que una
célula en un organismo multicelular se transforme en una célula cancerígena.

Por otro parte existen proteínas desreguladas en células tumorales como los miembros
de la familia Mage. Este constituye una de las familias multigenicas mas grandes con
expresión especifica tumoral. El primer miembro de la familia Mage fue descubierto en
células de melanoma3 humano, buscando antigenos específicos tumorales reconocibles por
linfocito T. Estudios realizados en los años siguientes demostraron la existencia de una
gran familia de proteínas agrupadas por un dominio común conservado(MHD). La
importancia de Mage radica en que estudios realizados demuestran un alto nivel de
expresión en células tumorales y ausente en tejido sano.

MAGE A2 (un miembro de la familia Mage) se une e inhibe la función transcripcional de

P53 en los tumores, haciendo que estos se han refractarios al tratamiento con agentes
quimioterapeuticos.
PML-IV es una proteína que estimula la actividad de P53 y provoca un arresto celular
permanente llamado senescencia. Las células tumorales que poseen defectos en el eje
PML-p53 continúan dividiéndose en forma indefinida, lo que constituye una característica
fundamental de las celulas tumorales. La activación de P53 por PML-IV incluye una serie
de modificaciones como la acetilación de P53 y requiere que PML-IV mismo este
modificado por la conjugación a un péptido llamado SUMO-1. Es nuestra intención evaluar
si la expresión de MageA2 altera la acetilación de P53 y si MageA2 puede inhibir la
actividad de PML-IV a las moléculas de SUMO-1 conjugadas sobre PML-IV inhibiendo
así, el arresto celular y la acción de la quimioterapia.

Por otro lado se ha demostrado MageA2 causa resistencia a ciertos agentes

quimioterapicos en las celulas del melanoma humano. Este mecanismo inhibe la función
pro-apoptotica de P53. MageA2 recluta eficaces inhibidores transcripcionales (tales
como las histonas deacetilasas HDAC) al sitio de unión del p53 formando el complejo
p53/MageA2/HDAC el cual es inactivo como factor transcripcional (o en otras palabras

2
La apoptosis es la función que controla la muerte de una unidad biológica, de forma
programada
3
Melanoma es el nombre genérico de los tumores pigmentados
se imposibilita la trascripción) dándonos a entender que la expresión de algunos
miembros de MageA2 podría conferir resistencia a la apoptosis p53 dependiente
inducidas por fármacos quimioterapicos en celulas del melanoma humano.

Luego de varios estudios ya realizados se cree que solo algunos miembros de la familia
MageA, para ser precisos los que contienen la secuencia de aminoácidos SBM, son los
capaces de unirse a SUMO-1 y producir la consecuente inactivación de P53

Método de acción:

se comparan los efectos que ejercen sobre la actividad transcripcional de P53

inducida por PML-IV los MageA que contienen las secuencias SBM (mage a2) y los
que no la tienen (mage a1 y mage A4). También se estudian los efectos de Mage A2
que posee la secuencia SMB mutada (Mage- A2mSMB) donde se han cambiado las
valinas (V) por alaninas (A). (Los vectores de expresión para Mage-A1, Mage A-2,
Mage-A2mSMB y Mage A4 están en uso de laboratorio.)
Se realizaran ensayos de cotransfeccion con gen reporter, en este caso el gen de
luciferaza el cual emite una señal de fotones que es posible cuantificar con un
luminometro utilizando el promotor PIG-Luc y p21-Luc que responden a p53,

Por otro lado se estudia el efecto de las proteínas mage A y mutante de mage A2 en
las modificaciones post-traduccionales inducidas por PML-IV sobre p53. PML-IV
induce la acetilación de P53 en la lisina 386 de p53. La acetilacion de p53 es
estudiada por inmunoflourecencia mediante el uso del anticuerpo específico anti-
acetilp53. Este anticuerpo se llama anticuerpo primario. Una vez unido, el anticuerpo
primario es reconocido por un anticuerpo secundario, que está conjugado a alguna
señal detectable. (En el caso del la inmunofluorescencia, el anticuerpo secundario
esta unido a una molécula fluorescente que permite visualizarlo en el microscopio de
fluorescencia)

Por lo tanto, para un determinado Mage, podemos averiguar, a partir “1”, como cambia la
actividad transcripcional de P53 y, a partir “2”, como se afecta la acetilacion; y es, en base a
estos resultados, que se dilucida, en el caso de que se haya registrado un cambio en la
actividad transcripcional, si se debe a la no acetilacion de P53 o a otro motivo a averiguar.

Bibliografía

http://www.cancer.org/
http://www.cancer.gov/espanol/cancer/entendiendo/pruebas-geneticas/Slide10
http://www.wikipedia.com/sambayon/5468465/pokemon/lkki/stereosound