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SUJET :
Au terme de ce travail, je tiens à exprimer mes remerciements envers toutes les personnes qui ont
contribué au bon déroulement de ce projet.
Je tiens particulièrement à remercier mon encadreur Mme. Ben mbarek Noura enseignante à
……………, pour sa patience, son assistance, ses directives et ses conseils précieux. Permettez-moi
de vous exprimer ma gratitude pour vos encouragements et vos consignes qui m’ont éclairé lors de
l’élaboration de mon projet de fin d’étude.
Je profite aussi de ce projet pour exprimer mes plus vifs remerciements envers Ms elle. LAHBIB
Karima qui a participé à ma formation et m’ont apportée du soutien et envers tous mes amis qui ont
été toujours près de moi avec leurs encouragements, critiques et conseils.
SOMMAIRE :
Introduction générale............................................................................................................................1
Partie théorique.....................................................................................................................................3
1-Introduction :.................................................................................................................................4
2-leishmania......................................................................................................................................4
2-1 définitions de leishmania........................................................................................................4
2-2-Epidémiologie :......................................................................................................................5
3-Rôle vecteur des phlébotomes...................................................................................................7
4-cycle biologique.........................................................................................................................8
5-Réservoirs :................................................................................................................................9
6-Epidémiologie de leishmaniose.................................................................................................9
6.1- Mode de transmission :..........................................................................................................9
6.2-Répartition géographique des leishmanioses :........................................................................9
6.2.1-Dans le monde :...................................................................................................................9
6.2.2-En Tunisie :........................................................................................................................10
8-Physiopatologie :.........................................................................................................................15
8.1- Facteurs liés au parasite :.....................................................................................................15
8.2-Facteurs liés à l’hôte :...........................................................................................................16
9-Quelques Diagnostics Biologique de Leishmanioses :............................................................17
9.1-Diagnostic parasitologique direct :.......................................................................................17
9.2-Dignostic moléculaire :.........................................................................................................17
9.3-Séeologie :............................................................................................................................19
9.3.1-CIE : contre -immunoélectrophorése.................................................................................19
9.3.2-IFAT : Immunofluorescence indirecte test d’anticorps.....................................................19
9.3.3-DAT : Direct Test D’agglutination....................................................................................19
9.3.4-ELISA : Enzyme Linke dImmunosorbentAssay...............................................................19
9.3.5-Test rapide d’immuno-chromatographie...........................................................................19
9.3.6-test d’immunodiffusion......................................................................................................20
Partie pratique.....................................................................................................................................22
Matériels et Méthodes.....................................................................................................................23
I-Matériels :.................................................................................................................................23
1-cas clinique :............................................................................................................................23
2- Matériels Utilisés :..................................................................................................................23
II-Méthodes :..................................................................................................................................26
1- prélèvement :..........................................................................................................................26
2-Coloeation de May-Grunwald Giemsa:...................................................................................26
2.1-Principe de la coloration :.....................................................................................................26
2.2-Techniques de la coloration :................................................................................................26
3-observation microscopique :....................................................................................................27
III-Résultats et discussion...............................................................................................................27
1-présentation des résultats.........................................................................................................27
1.2-Analyse Des Résultats :........................................................................................................28
1.2.1-Variation de l’infection en fonction des différentes caractéristiques de la population :. . .32
a -Variation de l’infection en fonction du sexe :.........................................................................32
IIII-Discussion :..............................................................................................................................34
1-Discussion méthodologique :...................................................................................................34
CONCLUSION..................................................................................................................................37
Références..........................................................................................................................................38
Liste des tableaux
L: leishmania
LV: leishmaniose viscérale
LC: leishmaniose cutanée
LCS: leishmaniose cutanée sporadique
LCZ: leishmaniose cutanée zoonotique
LCC: leishmaniose cutanée chronique
MGG: May Grunwald Giemsa
PCR: Réaction en chaine par polymérase
CIE: Contre Immunoélectrophorése
IFAT: Indirect ImmunofluorecentAntibody Test
DAT: Direct Agglutination Test
ELISA: Enzyme LinkedImmunoorbetAssay
Introduction générale
Les leishmanioses sont des parasitoses dues à des parasites du genre Leishmania et transmises par
les phlébotomes (Diptera : Psychodidae). Ce sont des maladies émergentes et étroitement liées à
l’état de l’environnement.
La complexe pathogène leishmanie (parasite, vecteur, réservoir), évolue dans une aire géographique
définie par un ensemble de paramètres bioclimatiques. Les modifications environnementales se
répercutent sur le fonctionnement des foyers, leur dynamique et leur extensionTerritoriale.
Laleishmaniose cutanée est la forme la plus commune de Leishmaniose. C'est une infection cutanée
provoquée par un parasite unicellulaire qui est transmis par des piqures de phlébotome (Diptera :
Psychodidae). Ce sont des maladies émergentes et étroitement liées à l’état de l’environnement.
La complexe pathogène leishmanie (parasite, vecteur, réservoir), évolue dans une aire géographique
définie par un ensemble de paramètres bioclimatiques.
Il y a environ 20 espèces de Leishmania qui peuvent causer une leishmaniose cutanée. Elle était
autrefois également connue sous le nom de bouton d'Orient, Clou de biskra ou Bouton d'Alep,
suivant les régions : Bouton d'Orient ou Clou de Biskra sur le Pourtourméditerranéen. Bouton
d'Alep au Proche-Orient.
La leishmaniose cutanée zoonotique (LCZ) est due à L. major et transmise par Phlebotomuspapata
si à partir d’un rongeur réservoir (Psammomysobesus) inféodé aux zones humides salées
(Sebkha). En Tunisie, la LCZ constitue un véritable problème de santé publique. Elle présente,
depuis les années 80, un changement de son profil épidémiologique. Cette situation serait
probablement en rapport avec une pullulation locale du vecteur et/ou du réservoir de cette affection,
suite aux modifications écologiques provoquées par l’aménagement de la biosphère, l’urbanisation
et surtout le vaste programme de mobilisation des ressources hydriques et la création des périmètres
irrigués.
Le développement d’une activité agricole autour d’un point d’eau est souvent accompagné d’un
élevage de bétail et de l’installation de nombreux abris d’animaux aux alentours de la population
humaine dans ces zones rurales. Ces pratiques d’irrigation et d’élevage pourraient :
1
- influencer la distribution et la multiplication de Phlebotomuspapatasi, vecteur prouvé delà LCZ en
Tunisie, soit directement par la création des gîtes favorables à cette espèce, soit indirectement par la
création de microclimat favorable à son activité ;
Les leishmanioses sous leur forme cutanée constituent un problème de sante publique.
2
3
Partie théorique
4
1-Introduction :
La leishmaniose est une maladie chronique à manifestation cutanée et/ou viscérale (on parle de
leishmanioses au pluriel) due à des protozoaires flagellés appartenant au genre Leishmania de la
famille des Trypanosomatidae et transmises par la piqûre de certaines espèces de phlébotomes,
comprenant les mouches du genre Lutzomyia dans le Nouveau monde et Phlebotomus dans
l’Ancien monde.
* leishmaniose cutanée : la forme la plus répandue qui provoque de nombreuses plaies sue le corps,
qui guérit en quelques mois laissant les cicatrices particulièrement inesthétiques.
*la leishmaniose cutanée diffuse : cette forme produit des lésions cutanées étendues qui ressemblent
à celles de la lèpre et sont particulièrement difficiles à traiter.
*La leishmaniose cutanéo-muqueuse : elle début avec des ulcérations cutanées qui s’étendent et qui
endommagent certains tissus (en particulier le nez et la bouche).
2-leishmania
5
Protozoaire flagellé de petite taille appartenant à l’ordre des kinétoplastidés et à la famille de
trypanosomatidae.
*Classification
Embranchement : Protozoa
Ordre : Zoomastigophorea
Famille : Trypanosomatidae
C’est un parasite intracellulaire obligatoire, c’est -à- dire ne pouvant se développer que dans un
organisme vivant .il se multiplie par scissiparité.
2-2-Epidémiologie :
- Agent pathogène :
Le parasite est un protozoaire flagellé tissulaire qui présente au cours de son cycle deux stades
évolutifs distincts :
6
Figure 1:Forme amastigotes de Leishmanie
*Les formes promastigotes sont allongées, mesurant 10 μm à 25 μm de longueur. Le noyau est
central, le kinétoplaste est enposition antérieure et le flagelle libre s'échappe à l'extrémité antérieure.
En culture entre 24 à 28 °C, sur milieu NNN (Novy,McnNeal,Nicolle) ou d’autres les amastigotes
se transforment en promastigotes comme dans l’intestin du vecteur .
Pendant la phase de culture exponentielle les promastigotes dites procycliques se multiplient par
scissiparité
Longitudinale (5).
7
Figure 3:Moelle osseuse : leishmania formes amastigotes ((MGG)*1000)
Les phlébotomes se mettent le jour à l’abri de la lumière et du vent et deviennent actifs la nuit.
Présents toute l’année en zone intertropicale, les phlébotomes apparaissent seulement l’été en
région tempérée ou ils conférent à la maladie un caractère saisonnier(6). (Figure5)
8
Figure 5:Phlébotome
4-cycle biologique
Leishmania a un cycle de vie hétéroxène qui nécessite deux hôtes, l’insecte phlébotomes et
unmammifère qui peut être l’homme ou un autre animal (rongeur, chien, …)
A l’occasion d’un repas sanguin sur un mammifère infecté par la Leishmania, le phlébotomefemelle
se contamine par les amastigotes se trouvant au lieu de piqûre(7).
*Chez le vecteur, les formes amastigotes sont ingérées au cours du repas sanguin. Elles se
transforment en formes promastigotes dans les heures qui suivent. Elles subissent ensuite un cycle
complexe comportant de nombreuses divisions mitotiques, deux étapes de fixation à l'épithélium de
la muqueuse intestinale et une phase de migration vers la partie antérieure du tube digestif, où a lieu
la transformation en formes virulentes dénommées promastigotesméta cycliques infectants. Ces
dernières sont régurgitées lors du repas sanguin suivant dans le derme d'un hôte favorable.
L'inoculation intradermique de promastigotes métacycliques induit, au site même de la piqûre,
une lésion qui passe généralement inaperçue chez l'Homme et dont le devenir dépend du tropisme
cutané, muqueux ou viscéral des différentes espèces de Leishmania. Dès la pénétration
intracellulaire, les formes promastigotes se transforment en formes amastigotes(6). (Figure 6)
9
Figure 6:Cycle de vie du parasite Leishmania
5-Réservoirs :
Les réservoirs naturels des Leishmania sont des mammifères domestiques ou sauvages chez
lesquels le parasite colonise les cellules du système des phagocytes mononucléés. Les mammifères
réservoirs des Leishmania appartiennent à divers ordres : carnivores, rongeurs, marsupiaux, édentés,
primates… ; dans ce cas, la leishmaniose est dite zoonotique. Lorsque l'Homme est l'unique
réservoir du parasite, elle est dite anthroponotique(6).
Les réservoirs de leishmanies sont variables selon l’espèce en cause et selon le foyer. Ondistingue
(Dedet,2000) :
- Les réservoirs I : Constitués par des animaux sauvages comme les rongeurs, les canidéssauvages...
6-Epidémiologie de leishmaniose
6.1- Mode de transmission :
*vectorielle : c’est la plus importante, la présencesphlébotome conditionnant la répartition de la
maladie. C’est un petit diptère de 2 à 3 mm, capable de passer les mailles d’une moustiquaire. La
femelle hématophage pique aussi bien l’homme que les animaux. Elle a besoin de sang pour le
10
développement de ses œufs.Les phlébotomes se mettent le jour à l’abri de la lumière et du vent et
deviennent actifs la nuit (8).
Chez les toxicomanes la transmission par échange de seringue a été démontrée.Les voies
transfusionnelle et congénitale jouent un rôle minime (8).
6.2.2-En Tunisie :
11
Rouge: Lieshmania. Infantum(LCS)
Bleu : Lieshmania.major (LCZ)
Vert : Lieshmaniatropica (LCC)
-C’est forme la plus grave, elle est mortelle si elle n’est pas diagnostiquée et traitée.
-Elle est habituellement secondaire à une leishmaniose cutanée mais elle peut aussi être primitive
d’emblée.
_Elle est alors due à deux sous-espèces de leishmania donovani : L.d.infantum et L .d .donovani , et
décrite sous le nom de kala-azar (10).
Cependant la majorité des cas sont actuellement concentrés au centre du pays. L’agent causal, de
LV est Leishmania infantum,
Le réservoir animal du LV est représenté par le chien, dont le rôle a été clairement établi grâce aux
travaux de Charles Nicolle à Tunis.
12
Le vecteur est un phlébotome du sous–genre Larroussius. L’espèce Phlebotomusperniciosus semble
être le vecteur principal en Tunisie sans négliger le rôle secondaire des autres espèces de ce
sousgenre(9).
*clinique :
Le tableau clinique de la leishmaniose viscérale est complet et de diagnostic facile chez l’enfant.
-Etat : Fièvre désarticulée avec splénomégalie volumineuse, dépassant l’ombilic chez l’enfant
(signe précoce et fréquent), hépatomégalie, anémie(pâleur vieille cire),atteinte marquée de l’état
général avec amaigrissement.
-Evolution : Spontanée chronique, mortelle en plusieurs mois, voie plusieurs années, avec le risque
de surinfection bactériennes, broncho-pulmonaire et intestinal traitée : favorable si le traitement est
précoce et en l’absence d’immunodépression (11).
13
Figure 10:Aspect clinique d’une enfant atteint de leishmaniose
La LCZ qui se trouve au centre et au Sud de la Tunisie et qui sera l’objet d’une étude
climatopathologie dans ce travail. Cette forme est de loin la plus fréquente et la plus importante sur
le plan de la santé publique.
Elle semble avoir toujours été endémique dans le sud tunisien. En 1982, une épidémie de LCZ
aéclaté à proximité du barrage de Sidi Sâad (Gouvernorat de Kairouan). La maladie s’est étendue
depuis, à 9 autres gouvernorats (du sud et du centre) et génère, depuis quelques années, environ
3000à 4000 cas annuels(7).
14
La LCZ se distingue de la forme sèche par son évolution plus rapide,sa plus grande taille le
caractère plus creusant de l’ulcère,sa cicatrice plus importe.Les réservoirs sont les phlébotomes de
genres phlébotomusperfieliewi , phlébotomes papatasi et phlebotomussergenti .
Halophile (chénopodées) qui constitue son alimentation exclusive (BenIsmail et Ben Rachid.,
1989). Merionesshawiest également un réservoir de cette forme deleishmaniose. (7)
15
Figure 12:Cycle évolutif de la leishmaniose cutanée zoonotique à leishmania major
*la Leishmaniose cutanée sporadique du nord (LCS) : Cette forme sévit de façon sporadique,
dans le Nord du pays. Son aire ne dépasse pas la dorsale. L’incidence de la LCS est de l’ordre de 30
à 50 cas par an (Bouratbineet al.,2003).
La LCS se présente dans 90% des cas sous la forme de bouton unique de la face.
Les lésions sont peu inflammatoires et souvent uniques (bouton unique) se situent
préférentiellement au visage.
La LCZ est causée par Leishmania infantum. Le caractère sporadique de cette forme implique
l’existence d’un réservoir animal, inconnu à l’heure actuelle mais qui serait très probablement
lechien Le vecteur de cette forme, appartiendrait au sous-genre Larroussius(Ghrabet al., 2006).
Paranalogie avec la situation dans d’autres pays voisins le Phlebotomusperfiliewi serait
l’espècevectrice de cette forme de leishmaniose(7).
Les lésions de la LCC le plus souvent sont uniques, siègent aussi bien à la face qu’aux membres.
La LCC se caractérise essentiellement par la chronicité des boutons dont la durée d’évolution peut
S’étendre sur plusieurs années. Les lésions sont polymorphes, dominées par les formes
ulcérocroûteuse L’agent causal de cette forme a été isolé et identifié comme étant
Leishmania tropicaMON.8 (7) La LCC rencontrée en Tunisie se singularise par rapport aux formes
à Leishmania tropicadécritesdans le monde, par la survenue de cas isolés et sporadiques, qui font
douter de son caractère etlaissent soupçonner un réservoir zoonotique–anthroponotique.
16
En ce qui concerne le vecteur, il appartiendrait au sous-genre Paraphlebotomus
Phlebotomussergenti, fréquent dans les zones de la transmission, constitue le vecteur le plus
probable de la LCC. (7).
Clinique :
Incubation : Longue> 1 à 4 mois
Invasion : à l’endroit de la piqure,papule indurée, indolore,non prurigineuse, arrondie ou
ovalaire, la plus souvent déjà crouteuse(9).
8-Physiopatologie :
La salive du phlébotome favorise les premières étapes de l'infection car elle contient des substances
pharmacologiquement actives qui produisent une vasodilatation et une immunodépression locales.
L'interaction primaire des leishmanies et des macrophages repose sur la reconnaissance, sur la face
externe du parasite, de molécules de liaison par divers récepteurs présents sur la membrane des
macrophages. L'infection dépend d'une phagocytose rapide des promastigotes et de leur
transformation en amastigotes qui, dans une vacuole parasitophore, résistent aux mécanismes de
défense cellulaire(6).
17
Chez l’homme, la capacité à induire une maladie cutanée ou viscérale varie grandement en fonction
de l’espèce ou de la souche de leishmanie. Ainsi, l’infection par Leishmania braziliensis est
responsable d’affections cutanées et muco -cutanées alors que Leishmania infantum est plutôt
responsable d’affections généralisées.A l’échelle de la sous -espèce, les données sont encore
limitées à ce jour (16).
Après leur entrée dans l’organisme, les promastigotes sont capturés par les cellules phagocytaires
(cellules dendritiques, macrophages).C’est la réponse immunitaire non spécifique. Ces cellules
présentent alors des antigénesleshmaniens aux lymphocytes T via le complexe majeur
d’histocompatibilité et enclenchent la réponse aucune réponse acquise,spécifique.
Schématiquement, une réponse médiée principalement par les cellules T auxiliaires 1(TH1)
entrainera des formes cutanées à guérison à guérison spontanée.l’absences de réponse TH1 (plutôt
que la présence de réponse TH2) donnera lieu à des formes cutanées diffuses , et la superposition
des voies TH1 et TH2 ,associée à une présence élevée d’interféron y évoluera vers les formes
mucocutanées .
L’impact des facteurs immunologiques se retrouve bien dans les études menées dans plusieurs
vallées andines du Pérou ou il est montré que l’immunité acquise (les antécédents de leishmaniose)
influe nettement sur la taille des lésions. Les personnes ayant déjà contracté la leishmaniose
développent ainsi des plaies plus petites (17).
18
Figure 15:Illustration de l’interaction entre les deux types de réponse TH1 etTH2
Sexe :
Ila été démontré expérimentalement que la testostérone est un déterminant majeur de l’évolution
clinique chez le hamster en induisant un effet immunosuppresseur via son action sur le macrophage.
Il s’agit de mettre en évidence le parasite parmicroscopie (examen direct du frottis après coloration
au MGG) et cultures sur milieuxspéciaux (NNN, Schneider) avecantibiotiques (cultures difficiles si
lésions surinfectées). Ilfaut pratiquer un prélèvement au niveau de la bordure inflammatoire de la
lésion (grattage auvaccinostyle, à la curette, biopsie)(16).
Les milieux de culture utilisés peuvent être soit (monophasiques) tels que le milieu Schneider, le
M199,le RPMI,le milieu de Grace,soit (diphasiques) tels que le milieu Novy-McNeal-Nicolle ou
Brain-Heart Infusion une ou deux gouttes d’aspiration ou de fragments d’organes homogénéisés
sont inoculées à ces milieux puis ceux -ci sont mis à incuber à une température de 22°C à 26°C .Les
19
cultures sont par la suite examinées toutes les semaines afin de détecter la présence de
promastigotes.
Les résultats peuvent être très variables à savoir que la visualisation de parasites est possible dès la
première semaine ou bien ils nécessitent
9.2-Dignostic moléculaire :
20
Figure 16:Processus de déroulement d’une PCR quantitative
La cinétique de la réaction PCR met en jeu trois phases : une phase d’initiation, une
phaseexponentielle et une phase plateau. Elle est construite à partir de plusieurs points
d’amplification. Unpoint d’amplification est un point présentant pour coordonnées le nombre de
cycles PCR versusl’intensité de fluorescence émise.
La ligne de base reflète l’intensité du bruit de fond de fluorescence. La ligne seuil correspond
auseuil de détection optique au-delà duquel la variation en intensité de fluorescence suit une
loiexponentielle. Le point d’intersection de la courbe cinétique PCR avec la ligne seuil définit le
cycleseuil Ct qui est le point de départ de la phase exponentielle et qui se trouve directement lié à
laquantité de cible initialement présente dans l’échantillon.
9.3-Séeologie :
9.3.1-CIE : contre -immunoélectrophorése
Il s’agit d’une méthode qualitative pour détecter les anticorps spécifiques antileishmanies Elle est
basée sur la visualisation d’un arc précipité bleu sur une bande de cellogel consécutive à
l’interaction entre les antigénes de leishmanies et les anticorps présente dans le sérum soumis à
l’électrophorése (20).
(20).
21
9.3.3-DAT : Direct Test D’agglutination
Ce test utilise des promastigotes entiers, colorés en suspension ou sous formes séche congelée.
C’est un test simple et peu couteux, utilisable pour les études de terrain comme en laboratoire (20).
Des sérums dilués sont placés dans des micro-cupules recouvertes d’antigènes de leishmanies.
lorsque le patient est séropositif ,une réaction colorimétrique se produit et peut être quantifiée par
spectrophtométrie ,n’impliquant ainsi pas d’ évaluation subjective(20).
9.3.6-test d’immunodiffusion
Cette technique consiste en une double immuno-diffusion sur un gel d’agarose 1% contenant 3% de
polyéthyléne glycol et elle utilise des échantillons de sang et des antigènes solubles de
leishmanies.la formation de bandes est notée après vingt quatre heures à l’aide de coloration avec
du bleu de Coomassie.
Cette méthodes est facile à réaliser, elle ne requirent pas d’équipements sophistiqués et a un débit
élève facilitant grandement l’analyse de plusieurs échantillons en même temps (20).
22
23
L’objectif :
identification parasitologique de leishmaniose cutanée
Etudie statiques de leishmaniose cutanée de gabes
24
Partie pratique
25
Matériels et Méthodes
I-Matériels :
1-cas clinique :
Notre étudie s’est déroulée dans le Laboratoire d’Analyse Médicale de l’Hôpital Militaire de
Gabes, service de parasitologie.
Les cas étudiés sont recueillis durant une année (de 1 janvier 2019 au 31 décembre 2019).
Au total on étudie 255 cas ont été inclus dans notre étude.
2- Matériels Utilisés :
l’eau physiologiquesstérile
26
compresse stérile5x5
27
L’aiguille à Ponction Lombaire
lames
Lamelles
28
microscopie
huile à immersion
29
II-Méthodes :
1- prélèvement :
-Pour préparer le frottis on suite les étapes suivantes :
Prélèvement peut être aussi effectué sous la lésion par ponction à l’aide
D’une seringue.
*Déposer le frottis sur une lame et laisser sécher à l’air à l’abri des Poussières.
2.2-Techniques de la coloration :
Placer la lame sur un support horizontal situé au-dessus d’un bac de coloration.
30
Mette le colorant May-Grunwald pur de façon à recouvrir complétement le frottis.
Laisser agir 3minutes.
Rincer la lame avec de l’eau.
3-observation microscopique :
Les parasites sont des protozoaires dimorphes du genre leishmania. Ils se présentent sous deux
formes :
31
dans la ou les vacuoles parasitophores dans le cytoplasme des macrophages, libérés par rupture du
macrophage, ils sont phogocytés et évoluent dans d’autres macrophages.
Les formes promastigotes sont allongées, mesurant 10 μm à 25 μm de longueur. Le noyau est central, le
kinétoplaste est enposition antérieure et le flagelle libre s'échappe à l'extrémité antérieure.
III-Résultats et discussion
Ce travail à été réalisé dans le Laboratoire d’analyse Médicale de l’hôpital Militaire de Gabes. Les
patients sont adressés par des dermatologistes des secteurs publics et privé pour faire la
confirmation biologique d’une suspicion de LC.
Papule, nodule, plaques crouteuses ou ulcérées. Tous les cas ont été confirmés par la mise en
évidence de leishmanies dans leurs prélèvements lésionnels suite à l’examen direct de frottis
dermiques colorés au MGG.
Nous avons étudié 255cas durant la période de 1 janvier jusqu’au 31 décembre 2019. Nous nous
sommes intéressés dans cette étude à l’âge, le sexe, et l’origine de chaque patient ainsi qu’à les
présences ou l’absence de signes de LC.
Parmiles 255 patients 133 sont atteints de leishmaniose cutanée. On chasse 4 cas.
1éré cas :
32
Une seule lésion au niveau pieds.
Période : 10 jours
Apres coloration de MGG.
Observation :
Apres coloration au MGG et observation microscopie avec l’objectif 100 .
On observe elles sont ovoïdes, mesurent 2 μm à 6 μm et présentent en microscopie optique.
On observe le noyau, arrondi, et le kinétoplaste (origine du flagelle) en bâtonnet plus sombre. Les
amastigotes Se multiplient par scissiparté dans la ou les vacuoles parasitophores dans le cytoplasme
des macrophages, libérés par rupture du macrophage, ils sont phogocytés et évoluent dans d’autres
macrophages.
Pus observe La forme amastigote donc cas clinique 1 attend la leischmania .
33
2émé :
Observation :
Apes coloration de MGGet observation microscopie optique avec l’objectif optique 100
On observe , Le noyau est central, le kinétoplaste est en position antérieure et le flagelle libre
s'échappe à l'extrémité antérieuresont allongées, mesurant 10 μm à 25 μm de longueur.
Pus observé la forme promastigotedonc cas clinique 2 attend leishmania.
34
3 cas :
Observation :
Apres coloration de MGG et observation microscopie optique avec l’objectif optique
100
Elles sont ovoïdes, mesurent 2 μm à 6 μm et présentent en microscopie optique.
le noyau, arrondi, et le kinétoplaste (origine du flagelle) en bâtonnet plus sombre. Les amastigotes Se
multiplient par scissiparté dans la ou les vacuoles parasitophores dans le cytoplasme des
35
macrophages, libérés par rupture du macrophage, ils sont phogocytés et évoluent dans d’autres
macrophages.
Pus observe la forme amastigote donc cas clinique 3 attend leishmania.
*4 cas :
36
1.2.1-Variation de l’infection en fonction des différentes caractéristiques de la
population :
Dans la suite de notre analyse nous nous sommes intéressés à l’ étude de la variation de l’ infection
par la LCen fonction des différentes caractéristiques de la population à fin d’essayer de trouver une
liaison significative entre la maladie et l’un des paramètres.
Féminin 33 11
Tableau 1:Répartition des malades selon le sexe
8%
Maxuli
n
92%
Parmi les 133 patients dont le sexe a été précisé, les hommes (92%) et les femmes (8%) ont été très
différemment représentés (Sex-ratio H/F= 11,5) en faveur des hommes. les hommes infectés sont
presque quatre fois supérieur aux femmes (fig.1).
* 60 ans : vieux
La répartition des patients et des infections selon ces quatre tranches d’âges est présentée dans le
tableau 2 :
(0-19) 60 30
(20-39) 160 75
(40-59) 31 26
<60 4 2
20% 23%
(0-19)
(20-39)
(40-59)
<60
56%
38
Figure 19:Représentation graphiques du nombre d’infections par tranche d’âge.
Une nette prédominance de la population enfant et jeune est retrouvée au sein de cette maladie.
Les cas traités à la cour de ce travail sont généralement de la région de Gabes mais Ilya des patients
qui appartenaient à d’autres origines Le tableau suivant présente la répartition des malades selon
l’origine.
20 18.79
15.03
15 Nombe d'infection
11.27 11.27
10
5.26
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La majorité des malades étaient des résidents du bebbher (26 ,3 %), et des régions qui le côtoient
(El Hamma 18 ,7 %) et sidi boulbaba(15 %) (fig.4).
39
Figure 21:Distribution géographique des malades étudiés
IIII-Discussion :
1-Discussion méthodologique :
Au cours de ce travail, nous avons voulu faire une étudie exhaustive de tous les cas de leishmaniose
cutanée venus consulter dans le servies parasitologie. Nous N’avons pu inclure que 255 cas.
L’examen direct de frottis au microscope optique après coloration au MGG a permis d’observer des
corps de LEISHMAN dans 52 %des cas. Sur 48 % des préparations aucun corps LEISHMAN n’a
été observé.
2-Discussion épidémiologique :
Les tranches d’âge les plus représentées sont celles de 0 à 19 ans et de 20 à 39 ans (23 % et
56%). Les malades Observés au cours de notre étude étaient relativement Jeunes (âge moyen27
ans). La plus forte activé de la Population de ces deux tranches d’âge semble explique.
Cette prédominance des cas liés à une forte exposition aux Piqûres des phlébotomes. D’autre
part cette répartition serait fort probablement liée à l’immunisation progressive avec l’âge suite aux
contacts répétés avec le parasite.
Le sexe masculin représente 88 % des cas .de nombreux auteurs ont noté qu’aucune association
statistiquement significative avec le sexe n’été mise en évidence (9).
40
La dominance masculine dans notre étude peut être explique par la profession de nos malades qui
sont dans la majorité des cas des militaires et cette profession est dominée par le sexe masculin.
Nos patients résidaient surtout le bassin de gabes (BebBher 26 ,3 %), EL Hamma (18.7 %) et Sidi
Boulbaba (15 %). Ceci pourrait s’expliques par leur proximité relative à l’hôpital et par leur climat
régions sont des zones agricoles favorables pour le développement de phlébotomes (vecteur de
leishmaniose), aussi ces régions sont des zones agricoles favorables pour les insectes.
60 % des cas appartiennent au Gouvernorat de Gabes, les 40 % restant sont soit des travailleurs
à Gabes soit des passagers. Ainsi, on ne peut préciser le lieu ou ils ont subit la piqure de l’insecte à
cause de longue période d’incubation de leishmaniose.
La présente étude a été menée dans un but de déterminer les facteurs conjoncturels tant
épidémiologiques qu’écologiques responsables de l’endémicité des LC chez la
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CONCLUSION
Le travail réalisé au cours de ce projet de fin d’étude constitue une contribution à l’étude
rétrospective de la leishmaniose dans la région sud-est de la Tunisie.
Ainsi 255 patients ont été étudiés et la maladie a été confirmée chez 52 % des cas par la détection
des Leishmanies suite à l’examen direct de frottis au microscope optique après
Coloration au MGG. Une étude statistique a montré que le sexe masculin représente 88 % des cas .
Dans la suite du travail, nous avons montré une prédominance de la population jeune et du sexe
masculin au sein de cette maladie pour les cas étudiés avec une localisation de l’infection dans la
région du GOLF de Gabés.
42
Références
(1)Elisabeth Lindgren, Torsten J. Naucke (2006). Leishmaniasis: influences of chmate and climate
change, epidemiology, ecology and adaptation measures. In: Menne B., Ebi K. Climate change
and adaptation strategies for human health, Spriinger.. Darmstadt, p: 154-156.
43
(2):DESJEUX P - Leishmaniasis: public health aspects and control. Clin Dermatot, 1996,
14,p:417-423
(3) OMS Maladies tropicales, Progrès de la recherche 1989-1990 Deuxièmes rapports du
programme TDR, p : 79-87.
(4)Bouratbine A., 1988. Etude éco-épidémiologique de la leishmaniose cutanée zoonotique en
Tunisie (1982-1987). Thèse de doctorat en médecine, Fac. Méd. Université de Tunis.
(5)Koureissi Tall, Etude epidemio-clinique et prise En charge de la leishmaniose cutanée a
Bomako et deux village endimique du mati, p. 20-21.
(6)Unf3s
(7)Emna Fourati„ Enquête entomologique dans un foyer de leishmaniose cutanée zoonotique du
centre tunisien, p : 20-22.
(8) Basset D, Faraut F, Marty P, Dereure J, Rosenthal E. Visceral Leishmaniasis in organ transplant
recipients: 11 new cases. Microbes Infect 2005 ; 7 : 1370-5.
(9) Centre National de Référence des Leishmaniose : www.parasitologie.uniy-mont; 7 .flenr13.htm.
[En linge] novembre 2009
(10) Verge C, Palacios R, Cadena H, et al, Evidence for Leishmania (Viannia) parasites in the skin
and blood of patients before and after treatment, J Infect Dis, vol. 194, 2006, p: 503-511.
(13) -Chaffai M, Ben :Rachid MS, Ben Ismail R, Ben Osman A, Makni N. Formes clinico
épidémiologiques des leishmanioses cutanées en Tunisie. Ann Dermatol Vénéréol 1988; 115, p :
1255-60.
Résumé
Ce travail à été réalisé dans le Laboratoire d’analyse Médicale de l’hôpital Militaire de Gabes.
Les cas étudiés sont recueillis durant une année 1 janvier 2019 jusqu’à 31 décembre Au total 225
cas ont été inclus dans notre étude Parmi 255 cas 133 sont atteints de leishmaniose.
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Notre étudie à pour l’objectif : identification parasitologique de leishmaniose cutanée Etudie
statiques de leishmaniose cutanée de gabes.
Au cours de ce travail, nous avons voulu faire une étudie exhaustive de tous les cas de leishmaniose
cutanée venus consulter dans le servies parasitologie. Nous N’avons pu inclure que 255 cas.
L’examen direct de frottis au microscope optique après coloration au MGG a permis d’observer des
corps de LEISHMAN dans 52 %des cas.
Le sexe masculin représente 88 % des cas .de nombreux auteurs ont noté qu’aucune association
statistiquement significative avec le sexe. La dominance masculine dans notre étude peut être
explique par la profession de nos malades qui sont dans la majorité des cas des militaires et cette
profession est dominée par le sexe masculin. On note aussi que 60 % des cas appartiennent au
Gouvernorat de Gabes, les 40 % restant sont soit des travailleurs à Gabes soit des passagers.
Ainsi, on ne peut préciser le lieu ou ils ont subit la piqure de l’insecte à cause de longue période
d’incubation de leishmaniose. Les leishmanioses constituent au sud-est Tunisien un réel problème
de santé
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