Explorați Cărți electronice
Categorii
Explorați Cărți audio
Categorii
Explorați Reviste
Categorii
Explorați Documente
Categorii
Silvia ANTONIU
Parametrii-indicator ai potabilităţii apei:
Indică prezenţa agenţilor patogeni (trebuie să existe o
relaţie între indicator şi apariţia unei infecţii în cadrul
populaţiei);
Se găsesc în număr mare în fecalele omului şi
animalelor, astfel încât pot fi puse în evidenţă la diluţii
foarte mari;
Nu se multiplică în mediu;
Au o durată de supravieţuire în mediu comparabilă cu
cea a majorităţii agenţilor patogeni care ar putea fi
transmişi prin apă;
Pot fi detectaţi prin tehnici rapide, simple, fiabile şi
ieftine.
Numărarea microorganismelor formatoare de colonii
Microorganismele heterotrofe: bacterii şi fungi, capabile de a creşte pe
medii de creştere îmbogăţite, fără agenţi de inhibare sau selectivi, după o
perioadă de incubaţie specificată şi la o temperatură definită.
Includ:
- Microorganisme sensibile la procesul de decontaminare (bacterii coliforme);
Semnificaţie: trebuie să fie în număr cât mai mic posibil, prezenţa lor în număr
mare indicând un tratament inadecvat, formare de biofilm, afectarea
integrităţii sistemelor de distribuţie!
(World Health Organization – Guidelines For Drinking-water Quality, ed. IV)
Detecţia şi numărarea Escherichia coli şi a bacteriilor coliforme
Bacteriile coliforme totale:
- o gamă largă de bacterii aerobe şi facultativ anaerobe;
- bacili Gram-negativi;
- NU formează spori;
- capabile să crească în prezenţa unor concentraţii relativ mari de săruri biliare;
- fermentează lactoza;
- reprezentate de bacterii din genurile Escherichia, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter,
Serratia, Hafnia – specii cu origine fecală (fecale umane şi animale) şi din mediu (capabile
de multiplicare în apă şi sol).
- sunt Indicator al integrităţii şi curăţeniei sistemelor de distribuţie şi al prezenţei potenţiale a
biofilmului
Escherichia coli:
- se diferenţiază de alte bacterii coliforme termotolerante prin: abilitatea de a produce indol
din triptofan şi producerea enzimei β-glucuronidază;
- este prezent în cantitate mare în fecale umane şi animale şi foarte rar în solurile tropicale;
- Este considerat cel mai potrivit indicator al contaminării fecale
Detecţia şi numărarea Escherichia coli şi a bacteriilor coliforme
Documente de referinţă:
SR EN ISO 9308-1:2015 Calitatea apei. Numărarea
Escherichia coli şi a bacteriilor coliforme. Partea
1: Metoda filtrării prin membrană ( ISO 9308-
1:2014)
Calculare număr col. Bacterii coliforme altele decât Escherichia coli prezumtive şi
confirmate (regula de 3 simplă)
Calculare număr col. Bacterii coliforme prezente în 100 ml de probă
(număr col. Bacterii coliforme = număr col. Escherichia coli confirmate + număr col. Bacterii coliforme altele
decât Escherichia coli prezumtive şi confirmate)
Detecţia şi numărarea Escherichia coli şi a bacteriilor coliforme
Raportarea rezultatelor:
- Bacterii coliforme: Absent (0 ufc/ml, <1 ufc/100 ml), Prezent (1-3 ufc/100 ml), Număr (4-10 ufc/100 ml, 10-
200 ufc/100 ml), >200 ufc/100 ml,
- Escherichia coli: Absent (0 ufc/100 ml, <1 ufc/100 ml), Prezent (1-3 ufc/100 ml), Număr (4-10 ufc/100 ml,
10-100 ufc/100 ml), >100 ufc/100 ml, în conformitate cu SR EN ISO 8199:2008 Calitatea apei. Linii
directoare pentru numărarea microorganismelor în mediul de cultură
! 250 ml pentru apa îmbuteliată
Interpretarea rezultatelor: Bacterii coliforme = 0/100 ml, Escherichia coli = 0/100 ml, în conformitate cu
Legea nr. 458/2002 privind calitatea apei potabile, republicată în 201, modificată şi completată
prin Ordonanţa 22/2017.
Document de referinţă:
SR EN ISO 7899-2:2002 Calitatea apei.
Identificarea şi numărarea enterococilor
intestinali. Partea 2: Metoda prin filtrare pe
membrană
Detecţia şi numărarea Escherichia coli şi a bacteriilor coliforme
Măsurare probă de apă(100 ml/250 ml)
Filtrare prin membrană (dm. por 0,45 μ)
Plasarea membranei în placă cu mediul Slanetz-Bartley (SB)
Termostatare la 36±2 °C, 44±4 h
Examinare placă:
Numărarea coloniilor roz-roşii-maronii
(col. Enterococi intestinali prezumtive)
Transfer membrană pe mediul agar esculină bilă azidă de
sodiu pentru confirmare
Termostatare la 44±0,5 °C, 2 h
Examinare placă:
Numărarea coloniilor maronii-negricioase, cu înnegrirea mediului
de sub colonii
(col. Enterococi intestinali prezumtive şi confirmate)
Calculare număr col. Enterococi intestinali prezente în 100 ml de
probă
Detecţia şi numărarea enterococilor intestinali
Raportarea rezultatelor:
- Enterococi : Absent (0 ufc/100 ml, <1 ufc/100 ml), Prezent (1-3 ufc/100 ml), Număr (4-10
ufc/100 ml, 10-200 ufc/100 ml), >200 ufc/100 ml, în conformitate cu SR EN ISO 8199:2008
Calitatea apei. Linii directoare pentru numărarea microorganismelor în mediul de
cultură
! 250 ml pentru apa îmbuteliată
Document de referinţă:
SR EN ISO 14189:2017 Calitatea apei. Numărarea de
Clostridium perfringens. Metoda filtrării prin
membrană
Detecţia şi numărarea Clostridium perfringens
Măsurare probă de apă(100 ml/250 ml)
Filtrare prin membrană (dm. por 0,45 μ)
Plasarea membranei în placă cu mediul: agar triptoză sulfit cicloserină(TSC)
Termostatare la 44±1 °C, 21±3 h, ANAEROBIOZĂ
Examinare placă:
Numărarea coloniilor
negre, gri, galben-maronii
(col. Clostridium perfringens prezumtive)
Selectarea coloniilor pentru confirmare
Pasaj col. prezumtive pe agar cu 5% sânge defibrinat de berbec/agar
Columbia/TSA
Termostatare la 36±2 °C, 21±3 h, ANAEROBIOZĂ
(col. Clostridium perfringens prezumtive, selectate)
Efectuarea testului fosfatezei acide
POZITIV (col. Clostridium perfringens prezumtive, selectate şi confirmate)
Raportarea rezultatelor:
- Clostridium perfringens: Absent (0 ufc/100 ml, <1 ufc/100 ml), Prezent (1-3 ufc/100 ml),
Număr (4-10 ufc/100 ml, 10-80 ufc/100 ml), >80 ufc/100 ml, în conformitate cu SR EN ISO
8199:2008 Calitatea apei. Linii directoare pentru numărarea microorganismelor în
mediul de cultură şi SR EN ISO 14189:2017 Calitatea apei. Numărarea de Clostridium
perfringens. Metoda filtrării prin membrană
! 250 ml pentru apa îmbuteliată
Semnificaţie:
- indicator al poluării fecale a apei INTERMITENTE;
- indicator pentru protozoare şi virusuri enterice în apă;
- sporii de Clostridium perfringens fiind mici, pot traversa membranele filtrante.
(World Health Organization – Guidelines For Drinking-water Quality, ed. IV)
Metode standardizate nespecificate în legislaţia actuală
Detecţia şi numărarea Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa:
- coco-bacili;
- Gram-negativi;
- aerobi;
- necapsulaţi;
- nesporulaţi;
- slab mobili;
- indol-negativi, nu produc H2S, reduc
nitraţii, metabolizează ureea, catalază-
pozitivi.
Detecţia şi numărarea Pseudomonas aeruginosa
Document de referinţă:
SR EN ISO 16266:2008 Calitatea apei. Detecţia şi
numărarea Pseudomonas aeruginosa. Metoda
prin filtrare pe membrană
Detecţia şi numărarea Pseudomonas aeruginosa
•Măsurare probă de apă (100 ml/250 ml)
•Examinare placă:
Numărarea coloniilor
În care:
P=nr. de colonii albastre-verzi;
F= nr. de colonii fluorescente;
R= nr. de colonii roşii-maronii;
nF= nr. de colonii fluorescente testate pentru producţia de amoniac;
cF= nr. de colonii fluorescente pozitive pentru producţia de amoniac;
nR= nr. de colonii roşii-maronii testate pentru producţia de amoniac, producţia de
oxidază şi pentru fluorescenţa pe agar King’s B;
cR= nr. de colonii roşii-maronii pozitive pentru producţia de amoniac, producţia
de oxidază şi pentru fluorescenţa pe agar King’s B.
Detecţia şi numărarea Pseudomonas aeruginosa
Raportarea rezultatelor:
- Pseudomonas aeruginosa: Absent (0 ufc/ml, <1 ufc/100 ml), Prezent (1-3 ufc/100
ml), Număr (4-10 ufc/100 ml, 10-200 ufc/100 ml), >200 ufc/100 ml, în
conformitate cu SR EN ISO 8199:2008 Calitatea apei. Linii directoare pentru
numărarea microorganismelor în mediul de cultură
! 250 ml pentru apa îmbuteliată
Semnificaţie:
- indicator al calităţii igienice a apei;
(World Health Organization – Guidelines For Drinking-water Quality, ed. IV)
Detecţia Salmonella spp.
Salmonella spp.:
- coco-bacili;
- Gram-negativi;
- aerobi;
- necapsulaţi;
- nesporulaţi;
- imobili/mobili;
- indol-negativi, produc H2S, reduc nitraţii,
nu metabolizează ureea, glucoză-pozitivi,
lactoză-negativi, zaharoză-negativi.
Detecţia Salmonella spp.
Document de referinţă:
SR EN ISO 19250:2013 - Calitatea apei – Detecţia
Salmonella spp.
Detecţia bacteriilor din Genul Salmonella în apă
Procedură:
Preîmbogăţire
Cultivare
Însămânţare pe XLD
Termostatare: 36±2 °C
24±3 h
Colonii tipice: colonii negre, înconjurate de o zonă roşiatică
Detecţia bacteriilor din Genul Salmonella în apă
Selectare 5 colonii tipice
Obţinerea de cultură pură
Confirmare biochimică
1. Etalare pe TSI, MIU
Termostatare: 36±2 °C
24±3 h
Salmonella spp.: Lactoză-negativ
Glucoză-pozitiv
Hidrogen sulfurat-pozitiv
Urează-negativ
Detecţia bacteriilor din Genul Salmonella în apă
Rata falselor pozitivea,b Fracţiunea de rezultate pozitive (de ex. colonii tipice) pentru care s-a arătat ulterior că sunt datorate
organismelor ne-ţintă
Rata falselor negativea,b Fracţiunea de rezultate negative (de ex. colonii atipice) pentru care s-a arătat ulterior că sunt datorate
organismelor ţintă
Selectivitateaa,b Raportul dintre numărul de colonii ţintă faţă de numărul total de colonii într-un volum de probă
Limita superioarăa Extremitatea superioară a domeniului de lucru pentru care metoda este folositoare (de ex. numărul maxim de
colonii numărabile/placă, sau alte sisteme de detecţie)
Repetabilitateaa, b Precizia în condiţii de repetabilitate (aceiaşi operatori, aceleaşi condiţii de operare, perioadă scurtă de timp...)
Robusteţeaa O măsură a capacităţii testului de a rămâne neafectat prin mici dardeliberate variaţii ale condiţiilor de testare
(de ex. temperatura)
Recuperarea relativăa Eficienţa cu care o metodă acoperă organismele ţintă dintr-o probă atunci când este comparată cu altă
procedură. Aceasta trebuie să fie făcută atunci când există o metodă alternativă pentru acelaşi organism.
Compararea cu o metodă de referinţă ISO este preferată.
Incertitudinea de numărarea,b Abaterea standard relativă a numerelor replicate ale unei ţinte obţinute prin numărare repetată (plăci,câmpuri,
tuburi, etc.) în condiţii stipulate (aceeaşi persoană, diferite persoane, acelaşi laborator, etc.)