Genetica – structura ADN

1. Principala proteina de initiere a replicarii

Proteina de replicare A (RPA) este proteina principală care se leagă de ADN monocatenar
(ssDNA) în celulele eucariote. In vitro, RPA arată o afinitate mult mai mare pentru ADNs decât
ARN sau ADN dublu catenar.
În timpul replicării ADN-ului, RPA împiedică ADN-ul monocatenar (ssDNA) să se întoarcă pe
sine sau să formeze structuri secundare. Acest lucru menține ADN-ul desfăcut pentru ca
polimeraza să-l reproducă. RPA se leagă, de asemenea, de ssDNA în timpul fazei inițiale de
recombinare omoloagă, un proces important în repararea ADN și profaza I a meiozei.
2. Dessfacerea legaturilor de H
În timpul replicării ADN-ului, enzima ADN helicază desfășoară cele două catene de ADN și
determină ruperea legăturilor de hidrogen dintre cele două catene de ADN, separând dubla helică
a ADN-ului în două catene individuale, astfel încât să poată fi copiate.
3. Stabilizarea monocatenelor ADN
Proteinele monocatenare care leagă ADN-ul se leagă foarte strâns de ADN, dar cu specificitate
foarte mică pentru anumite secvențe de nucleotide. Acestea realizează acest lucru interacționând
puternic cu coloana vertebrală a ADN-ului, prin legături de hidrogen cu fosfații și ribozele și
interacțiuni de încărcare complementare cu fosfații. De asemenea, au buzunare generice chimic,
adesea căptușite cu aminoacizi aromatici sau hidrofobi, care înconjoară bazele ADN, dar nu
formează contacte specifice cu suprafețele de împerechere a bazelor.
4. Sinteza de primeri
Un primer este o secvență scurtă de acid nucleic care oferă un punct de plecare pentru sinteza
ADN-ului. La organismele vii, primerii sunt fire scurte de ARN. Un primer trebuie sintetizat de o
enzimă numită primază, care este un tip de ARN polimerază, înainte ca replicarea ADN să poată
avea loc. Sinteza unui primer este necesară deoarece enzimele care sintetizează ADN-ul, care se
numesc ADN polimeraze, pot atașa nucleotide ADN noi doar la un fir existent de nucleotide.
Prin urmare, grundul servește pentru a crea și a pune bazele pentru sinteza ADN-ului. Primerii
sunt îndepărtați înainte ca replicarea ADN să fie completă, iar lacunele din secvență sunt
umplute cu ADN prin ADN polimeraze. În laborator, oamenii de știință pot proiecta și sintetiza
primeri ADN cu secvențe specifice care se leagă de secvențe într-o moleculă de ADN
monocatenar. Acești primeri ADN sunt utilizați în mod obișnuit pentru a efectua reacția în lanț a
polimerazei pentru a copia bucăți de ADN sau pentru secvențierea ADN-ului.
5. ADN polimeraza replicativa
O ADN polimerază este un membru al unei familii de enzime care catalizează sinteza
moleculelor ADN din nucleozidele trifosfați, precursorii moleculari ai ADN-ului. Aceste enzime
sunt esențiale pentru replicarea ADN și, de obicei, funcționează în grupuri pentru a crea două
duplexuri ADN identice dintr-un singur duplex ADN original. În timpul acestui proces, ADN
polimeraza „citește” firele de ADN existente pentru a crea două fire noi care se potrivesc cu cele
existente. Aceste enzime catalizează reacția chimică
ADN polimeraza adaugă nucleotide la cele trei prime (3 ') - capătul unei catene ADN, câte o
nucleotidă la un moment dat. De fiecare dată când o celulă se împarte, ADN polimerazele sunt
necesare pentru a duplica ADN-ul celulei, astfel încât o copie a moleculei ADN originale poate fi
transmisă fiecărei celule fiice. În acest fel, informațiile genetice sunt transmise din generație în
generație.
6. Procesarea fragmentelor Okazaki
ADN polimeraza nu poate iniția replicarea, poate adăuga doar nucleotide noi la o catenă existent.
Pentru ca replicarea ADN să aibă loc, un primer ARN trebuie mai întâi sintetizat pentru a oferi
un punct de atașare pentru ADN polimeraza. ADN polimeraza adaugă nucleotide la capătul 3 ’al
primerului, extinzând noul lanț într-o direcție 5’ → 3 ’. Nucleotidele libere există ca trifosfați
deoxinucleozidici (dNTP) - au 3 grupe fosfat. ADN polimeraza clivează cei doi fosfați
suplimentari și folosește energia eliberată pentru a forma o legătură fosfodiesterică cu capătul 3
’al unui lanț nucleotidic. Deoarece ADN-ul cu catenă dublă este antiparalel, ADN-polimeraza
trebuie să se deplaseze în direcții opuse pe cele două catene
Pe catena principală, ADN polimeraza se deplasează spre furculița de replicare și astfel se poate
copia continuu. Pe firul întârziat, ADN polimeraza se îndepărtează de furculița de replicare, ceea
ce înseamnă că copierea este discontinue. Pe măsură ce ADN polimeraza se îndepărtează de
helicază, trebuie să revină în mod constant pentru a copia porțiuni de ADN nou separate. Aceasta
înseamnă că firul întârziat este copiat ca o serie de fragmente scurte (fragmente Okazaki), fiecare
precedată de un primer
Primerii sunt înlocuiți cu baze de ADN și fragmentele unite între ele printr-o combinație de ADN
pol I și ADN ligază
7. Desrasucirea ADN parental in fata buclei de replicare
Un element de desfacere a ADN-ului (DUE sau DNAUE) este locul de inițiere pentru
deschiderea structurii dublei spirale a ADN-ului la originea replicării pentru sinteza ADN-ului.
Este bogat în A-T și se denaturează ușor datorită stabilității sale elicoidale scăzute, ceea ce
permite regiunii monocatenare să fie recunoscută de complexul de recunoaștere a originii.
Desrasucirea ADN-ului permite accesul mașinilor de replicare la noile benzi.În eucariote, DUE
sunt site-ul de legare pentru proteinele de legare a elementelor de dezvăluire a ADN-ului (DUE-
B) necesare pentru inițierea replicării. La procariote, DUE se găsesc sub formă de secvențe
consens tandem care flancează capătul 5 'al domeniului de legare DnaA. Actul de derulare la
aceste elemente bogate în A-T are loc chiar și în absența proteinelor care leagă originea din
cauza forțelor negative de supraîncărcare, făcându-l o acțiune favorabilă energetic.

Anemie falciforma
Mutația care provoacă anemie cu celule secera este o substituție nucleotidică unică (de la A la T)
în codon pentru aminoacid 6. Modificarea transformă un codon de acid glutamic (GAG) într-un
codon de valină (GTG). Ca urmare a acestei modificări, se produce o hemoglobină modificată.
Aceasta este denumită HbS
HbS apare dintr-o mutație care înlocuiește timina cu adenina în al șaselea codon al genei lanțului
beta, GAG la GTG. Acest lucru determină codificarea valinei în locul glutamatului în poziția 6 a
lanțului beta Hb. Hb rezultat are proprietățile fizice de a forma polimeri în condiții deoxi. De
asemenea, prezintă modificări ale solubilității și stabilității moleculare. Aceste proprietăți sunt
responsabile pentru expresiile clinice profunde ale sindroamelor secerătoare.
Această schimbare unică a unui aminoacid, valina pentru substituția acidului glutamic, are ca
rezultat tetrameri de hemoglobină care se agregează în matrice după dezoxigenare în țesuturi.
Această agregare duce la deformarea celulelor roșii din sânge, transformându-le în celule în
formă de seceră și făcându-le relativ inflexibile și incapabile să traverseze paturile capilare.
Ciclurile repetate de oxigenare și dezoxigenare conduc la seceriș ireversibil
Molecula de hemoglobină este modificată astfel încât să devină mai hidrofobă.
Când lanțurile de hemoglobină modificate se pliază în forma lor tridimensională, acestea tind să
se lipească una de cealaltă, formând fibre lungi insolubile de hemoglobină în celulele roșii din
sânge.
Celulele roșii din sânge sunt deformate de această hemoglobină modificată. Acestea devin mai
fragile, se rup cu ușurință și se aderă unul la celălalt ducând la închiderea micilor vase de sânge.