UNIVERSITATEA „VASILE ALECSANDRI”

din BACĂU
Facultatea de Inginerie
Calea Mărăşeşti, Nr. 157, Bacău, 600115, Tel./Fax +40 234 580170
http://inginerie.ub.ro; e-mail: decaning@ub.ro
Specializare: ȘIPAE

PROIECT
Disciplina: Metode verzi e valorificare a principiilor active din surse vegetale

Tema: Obținerea resveratrolului din surse vegetale

Coordonator:
Prof. Univ. Dr. Chim. Adriana Luminiţa Fînaru
Conf. Dr. Ing. Alisa Aruş

Masterant:
Chimist.Cebotari Marina

Bacău 2020
 Cuprins:

Introducere.................................................................................................................... 3
Capitolul I: Activitatea biologică a resveratrolului și a derivaților săi...........................4
Capitolul II: 1.Cercetări privind conținutul și dinamica conținutului de resveratrol în
vinuri și influența acvității lor asupra celulelor..............................................................6
2.2. MATERIAL ŞI METODĂ..................................................................................7
Capitolul III. Rolul resveratrolului în protecția organismului uman contra
radicalilor liberi. Acțiuni benefice.........................................................................10
Bibliografie-web:.........................................................................................................13

2
 Introducere
Resveratrolul este un antioxidant polifenolic care se gaseste in plante, dar si in anumite
alimente sau bauturi. Cea mai mare cantitate de resveratrol este continuta de radacina plantei
Polygonum cuspidatum, originara din Japonia, dar care nu poate fi consumata in stare
naturala.
Alte surse bogate in resveratrol sunt fructele de culoare inchisa, precum strugurii, murele,
rosiile, coacazele, afinele, merisorul, dar si arahidele si fisticul.

Fig.1.:Surse de resveratrol [3].

Strugurele are o valoare calorică mare, de aceea este un aliment-medicament foarte
indicat ca energetic muscular şi nervos, remineralizant, antitoxic, stimulent şi
decongestionant hepatic, diuretic, laxativ şi foarte digestibil. Cei negri conţin cel mai
puternic antioxidant din lume: resveratrolul– care este, totodată, şi un pigment ce conferă
culoarea movalie. Acesta, alături de vitaminele şi mineralele conţinute în boabele de
struguri, are rolul de a preveni şi chiar combate ateroscleroza, precum şi bolile
cardiovasculare secundare acesteia.   Datorită conţinutului său bogat în vitamine din
complexul B, C, A şi K, dar şi săruri minerale de potasiu, fosfor, magneziu, fier, calciu şi
siliciu, strugurele este potrivit pentru tratamentul reumatismului, gutei şi bolilor de piele.
Specialiştii spun că 10% din proprietăţile curative ale strugurilor sunt menţinute prin
conservare, indiferent dacă este vorba despre dulceaţă, compot sau vin [5]. Aceasta
substanta activa este eliberata din coaja si semintele strugurilor in timpul
procesului de fermentare si are numeroase beneficii pentru sanatate, conform
National Institutes of Health din America. In ciuda faptului ca obisnuiesc sa
consume alimente bogate in grasimi, francezii sunt considerati oamenii cu cel
mai sanatos sistem cardiovascular din lume, iar asta se datoreaza consumului
regulat de vin rosu bogat in resveratrol. Tocmai din acest motiv, substanta mai
este denumita si „Paradoxul francez”. In mod normal, organismul are
capacitatea de a se apara de virusuri, bacterii sau de stresul oxidativ, datorita
proteinei SIRT1, denumita si „proteina longevitatii”. Aceasta proteina protejeaza
si pastreaza intacte celulele ADN-ului si repara moleculele care au fost afectate

3
de radicalii liberi. In timp, din cauza numarului ridicat de radicali liberi,
capacitatea de autoaparare a celulelor scade, iar proteinele SIRT 1 sunt solicitate
mai mult pentru refacerea celulelor, procesul de imbatranire fiind accelerat.
Resveratrolul stimuleaza productia de proteine SIRT 1 si ajuta, asadar, la
mentinerea sanatatii celulare,încetinind procesul de imbatranire. Din acest
motiv, resveratrolul este considerat un ingredient-cheie in prelungirea duratei
de viata [1].

4
 Capitolul I: Activitatea biologică a resveratrolului și a derivaților săi.
Molecula de bază, produsă de către vița-de-vie este izomerul trans- al resveratrolului,care
împreună cu derivații săi (fig.2.) posedă proprietăți antioxidante importante.

Fig.2.: Structura chimică a trans- resveratrolului (I), cis-resveratrolului (II) și a derivaților

trans-resveratrolului (II-VI)[2].
Structura chimica a trans si cis resveratrolului [4]

a) cis – resveratrol b) trans – resveratrol

5
 Conform acestei figuri, fiecare grupă hidroxilă a derivaților este protejată de grupe metilice
(III, IV, V) și un derivat cu legătură dublă redusă (VI).
Compararea activității antioxidante a trans-resveratrol și derivaților săi, estimată în testele in
vitro, este raportat în tabelul 1. Rezultatele sunt exprimate prin EQ (testul Citronelal) și EC 50
(microzomi și testele DPPH) din fiecare compus.
Tabelul 1 Activitatea antioxidantă a trans-resveratrolului și a derivaților II-VI [2].
Compound Citronellal EQ Microsomes EC 50 DPPH EC 50
I 135±8,81 0,77±0,08 24,5±1,5
II 241±38,0 1,10±0,09 24,1±1,2
III 661±20,3 2,40±0,34 48,6±4,2
IV 355±7,43 1,22±0,18 30,1±2,1
V >1000 >1000 >1000
VI 260±11,2 1,57±0,17 106,8±6,3
Din datele prezentate, se observă o relație invers proporțională între activitatea
antioxidantă și valorile EQ și EC50 : cu cît e mai puternic antioxidantul cu atît e mai mică
valoarea acestora. În toate cele 3 teste, trans-resveratrol (I) a demonstrat cea mai mare
activitate antioxidantă, în timp ce compusul V nu exercită nici un efect semnificativ. Figura 3
demonstrează efectele trans-resveratrolului (I) și derivatele pe producție TBARS indusă de
TBHP în fibroblaste umane normale.

Fig.3: Activitatea antioxidantă a trans-resveratrolului (I)și a derivaților II-VI [2].

Activitatea antioxidantă a 60 µM trans-resveratrolul (I) sau derivații II-VI, exprimată ca
procent de inhibare a producției TBARS în fibroblaste umane normale tratați cu TBHP (terț-
butilhidroperoxid).
Efectele resveratrolului asupra radicalilor liberi în organism este bine cunoscut, și anume
efectul său inhibitor asupra sintezei ADN-ului. În acest scop, capacitatea trans-resveratrolului
de a inhiba sinteza ADN (polimeraza ɑ și ß) a fost comparat cu ceilalți derivați, atît în
celule,cît și în testele in vitro (fig.4).

6
Fig.4: Efectele tran-resveratrolului(I) și a derivaților săi (II-VI) în sinteza ADN-ului în celule
și în vitro [2].
Rezultatele raportate în fig.4.A arată că printre derivate, numai compusul IV inhibă
încorporarea BrdUrd într-o măsură similară cu trans-resveratrolul. Rezultate comparabile au
fost obținute în testele in vitro privind activitatea ADN polimerazei (fig.4.B) [2].

Capitolul II: Cercetări privind conținutul și dinamica conținutului de

resveratrol în vinuri și influența acvității lor asupra celulelor.
Primele lucrări ştiinţifice ce ţin de resveratrol au fost conduse de Langcane şi Pryce în
1976 (Langcane P., Pryce R.J., 1976). Spre anii 1990, acest subiect a fost reluat la
Universitatea din Bourgogne în jurul a 2 axe, cu P. Jeandet (Jeandet P., Bessis R., Gautheron
B.,1991) asupra biochimiei moleculei şi caracterul său de protejare a viţei de vie contra
infecţiilor micotice şi cu Blanche (Blanche D., Rustan I., Durand P., 1997) asupra activităţii
marcante contra bolilor cardiovasculare.
Cercetările în domeniu au demostrat că variaţia concentraţiei de resveratrol în vin are la
bază o serie de factori, cum sînt: originea geografică, expunerea la infecţii micotice, clima,
solul, soiul, tehnica vinificării. Trebuie, în primul rînd ca varietatea viţei de vie, a soiului, să
fie una producătoare de resveratrol. Printre aceste varietăţi găsim: Pinot noir, Gamay,
Cabernet-Sauvignon şi Mourvedre. După Dr. Goldberg (Goldberg D.M., Yan J., Diamandis
E.P., 1994) de la Universitatea din Toronto care a analizat numeroase vinuri din lume, în faţa
clasamentului se află Pinot noir.
De asemenea, asupra cantităţii resveratrolului influenţează pozitiv perioada de macerare, doza
anhidridei sulfuroase, protecţia mustului şi vinului de acţiunea oxigenului şi oxidazelor etc.
Un interes ştiinţific şi practic prezintă studiul resveratrolilor în vinurile, sucurile
produse şi comercializate Spania şi Franţa (tabelul 2).
Tabelul 2: Conţinutul resveratrolilor în vinurile şi sucurile produse în Spania şi Franţa [2].
Băuturi Cantitatea totală de Cantitatea totală de
resveratrol în 150 ml resveratrol (mg/dm3)
(mg)
Vinuri albe (Spania) 0,01-0,27 0,05-1,80
Pinot noir (Franța) 0,06-0,30 0,40-2,0
Vinuri roze (Spania) 0,06-0,53 0,43-3,52
Vinuri roșii (Spania) 0,29-1,89 1,92-12,59
Vinuri roșii (Franța) 0,30-1,07 1,98-7,13
Suc de struguri (Spania) 0,17-1,30 1,14-8,69
Suc de struguri (Franța) 0,21-1,76 1,37-11,71
Rezultatele obţinute atestă o concentraţie sporită a resveratrolilor în vinurile roşii şi mai
mică în cele albe. Vinurile roşii spaniole conţin mai mulţi stilbeni comparativ cu cele
franceze, în schimb sucurile din struguri produse în Franţa sunt mai bogate în resveratroli în
comparaţie cu cele din Spania [2].

7
 2.2. MATERIAL ŞI METODĂ
Pentru analiza conţinutului de trans - resveratrol, se va utiliza HPLC, care va
permite separarea metaboliţilor şi analiza acestor compuşi cromatografic. Astfel se vor
compara picurii obtinuti prin cromatograma HPLC cu cei standard , putandu-se astfel
identica daca exista resveratrol in produs, şi la ce cantităţi.
Cis-izomerul este, probabil, transformat în timpul procesului de vinificatie, dar de
obicei nu se ajunge la concentraţia trans-izomerul în vin [4].

Metode de extractie- purificare si de determinare ale trans - resveratrolului [4]

• A Metoda de extractie-purificare bazata pe extractia cu solventi;
• B Metode de determinare : HPLC.

A 1. Extracţia din vin

Vinul este evaporat la ½ din cantitate in evaporator sub vid, pentru indepartaea alcoolului. Din
vinul dezalcoolizat, compusii fenolici se extrag cu acetat de etil conform schemei 1:
Vin ( 20 μl)
+ CH3 OH (50 ml )(metanol)
Refluxare ( 30’ )
Separare faza lichida

Filtrare

Evaporare sub vid ( la sec )

Rezidiuu
+ 30 ml. Apa
Extractie cu acetat de etil (50 ml )

Evaporare sub vid ( la sec )

Rezidiul
+ 5 ml metanol

Evaporare sub vid ( la sec)

+ acetonitril

Analiza cromatografica
Schema 1. Extragerea probelor pentru analiză [4]

8
 B. 2. Metoda de separare prin HPLC
Extractele obţinute din prelucrarea probelor de vin sunt injectate în coloană .
Conditii de lucru :
- Coloana Nucleosil-C18 250 mm x 4,6 mm ; debit 1 ml/minut
- Elutie: Sistem gradient = 2 solventi : A – apa
B - apa acetonitril
H 2O / CH3 CN 2:8 (v/v)
Volumul injectat : 20μl

Metoda de separare a compuşilor fenolici prin HPLC are următoarele avantaje:

- este o metodă rapidă pentru separarea, identificarea şi determinarea cantitativă a compuşilor aflaţi în
amestecuri complexe;
- dă posibilitatea separării substanţelor aflate în concentraţii foarte mici în amestecurile de analizat;
- este o metodă simplă şi uşoară pentru interpretarea rezultatelor obţinute; [4]

HPLC: Calibrare Standard

Fi
gura 5. Trans-resveratrol standard . Serii diferite de dilutie: 20 ug/mL (rosu), 10ug/mL
(violet), 5ug/mL (albastru), 2.5ug/mL (verde). ( curba de calibrare) [4].

Figura 6. Cromatrograma HPLC pentru trans-resveratrol standard [4]

9
 HPLC: Extractia vinului rosu

Figura 7. Extractie vin rosu. A)Cromatograma extract vin rosu; tipurile de vin evidentiate
sunt: Merlot din Australia (rosu), Shiraz din Australia (verde), Primitivo din S. Italy
(violet). Cu linie punctata albastra este trans-resveratrol standard . B) Zoomed-in view of the
resveratrol peak region [4].
HPLC: Extractia vinului alb

10
Figure 8. Extravtie vin alb. A)Cromatograma extract vin alb; tipurile de vin sunt Sauvignon
Blanc din France (rosu) si Chardonnay din N. California (violet). Cu linie punctata albastra
este trans-resveratrol standard . B) [4].

Figura 9. Concentratia Resveratrolului calculata cu ajutorul cromatogramele de mai sus şi

curba de etalonare. Eşantioanele de vin rosu sunt reprezentate în roşu, cele pentru vinul alb în
galben. In proba de Chardonnay nu s-a detectat Trans – Resveratrol [4].
• Rezultatele arată clar că vinurile roşii conţin trans-resveratrol în cantităţi semnificative, în
timp ce vinuri albe contin cantitati foarte mici [4].

Capitolul III. Rolul resveratrolului în protecția organismului uman

contra radicalilor liberi. Acțiuni benefice.
Resveratrolul este cel mai puternic antioxidant, el încheagă și îndepărtează radicalii liberi
din organism,în același timp stimulează înmulțirea celulelor sănătoase si capacitatea lor de
regenerare. Resveratrolul menține capacitatea de funcționare normală a trombocitelor, ajută la
scăderea vîscozității sîngelui, îmbunatățindu-se astfel circulația sîngelui. Are proprietatea de a
încetini cu 50% sporirea celulelor cancerigene sau poate chiar să le stopeze [2].
Beneficiile resveratrolului au fost descoperite prima data de cercetatorii care au ajuns la
concluzia ca anumite insecte, bacterii si animale care au fost hranite cu aceasta substanta au
avut o durata de viata mai lunga. Studiile au demonstrat ca resveratrolul are numeroase alte
beneficii pentru organism, precum:
 incetineste procesul de imbatranire - resveratrolul contine antioxidanti care
neutralizeaza radicalii liberi. In timp, acesti radicali liberi ataca celulele sanatoase in
organism si accelereaza procesul de imbatranire. Consumul de alimente bogate in
resveratrol si/sau administrarea de suplimente alimentare au efecte benefice asupra
organismului si reusesc sa mentina tineretea organismului.

11
 are efect anticangerigen - antioxidantii si fitonutrientii pot preveni aparitia cancerului.
Studiile au demonstrat ca resveratrolul poate contribui la blocarea procesului de
carcinogeneza, care favorizeaza dezvoltarea tumorilor canceroase.
 protejeaza sanatatea sistemului cardiovascular - datorita proprietatilor
antiinflamatorii, resveratrolul poate reduce riscul de afectiuni cardiovasculare.
Potrivit studiilor de specialitate, consumul de alimente si bauturi bogate in resveratrol
diminueaza riscul de ateroscleroza (o afectiune care consta in ingrosarea arterelor,
ceea ce impiedica circulatia corespunzatoarea a sangelui), cheaguri de sange sau
fibroza a miocardului.
 poate preveni aparitia obezitatii - resveratrolul poate preveni depunerea grasimilor si
ajuta la reglarea nivelului de insulina. In plus, cercetatorii au ajuns la concluzia ca
aceasta substanta poate ajuta la reducerea greutatii corporale. Acest fapt este sustinut
de studiile care arata ca proteina SIRT 1, activata de catre resveratrol, are capacitatea
de proteja organismul impotriva aparitia obezitatii.
 regleaza nivelul de insulina - resveratrolul reduce nivelulul zaharului din sange si il
regleaza pe cel al insulinei. Prin urmare, poate sa previna si sa amelioreze simptomele
diabetului.
 scade nivelul tensiunii arteriale - datorita proprietatilor sale antioxidante,
resveratrolul poate ajuta la scaderea tensiunii arteriale. Acesta ajuta la
producerea oxidului de azot in organism, care, la randul lui, determina relaxarea
vaselor de sange si, implicit, scaderea tensiunii arteriale.
 scade nivelul de colesterol „rau” - resveratrolul poate influenta nivelul
de colesterol din organism, datorita efectului pe care il are asupra enzimei care
controleaza productia de colesterol. Mai exact, acesta poate ajuta la reducerea
nivelului de colesterol „rau” si la cresterea nivelului de colesterol „bun” din organism.
Acest beneficiu este sustinut de un studiu in cadrul caruia participantii au luat
suplimente cu extract de struguri. Dupa sase luni de tratament, nivelul de colesterol
LDL (colesterol „rau”) a scazut cu 4.5%.
 protejeaza creierul - anumite studii sustin ca un consum moderat de vin rosu poate
ajuta la reducerea riscului de aparitie a bolilor degenerative cauzate de inaintarea in
varsta. Resveratrolul are proprietati antiinflamatorii si antioxidante si poate reduce
oxidarea placilor de amiloid, responsabile cu aparitia bolii Alzheimer. Totodata,
reduce riscul de aparitie a bolii Parkinson sau a sindromului Huntington.
 protejeaza sistemul osos - suplimentele pe baza de resveratrol pot ajuta la mentinerea
sanatatii sistemului osos si pot preveni deteriorarea cartilajelor, arata un studiu
publicat de National Institutes of Health;
 protejeaza sanatatea ficatului - resveratrolul are efecte terapeutice asupra ficatului,
ajuta la reducerea depozitelor de grasimi, prevenind astfel aparitia fibrozei sau a
steatozei hepatice;
 previne pierderea auzului - studiile realizate pe soareci au evidentiat faptul ca
resveratrolul protejeaza organismul de factorii care pot duce la pierderea auzului;
 protejeaza impotriva infectiilor - resveratrolul are proprietati antibacteriene si
antiinflamatorii si poate reduce simptomele anumitor infectii si iritatii ale pielii [1].

12
Făcînd o sinteză a informației anterioare, putem enumera principalele efecte ale
resveratrolului :

13
 Antioxidant

Antibacterian trans-resveratrol
Antiinflamator
Schema 2:Cele mai
importante efecte ale
resveratrolului
asupra organismului
[2].
Neuroprotector Antitumoral

Cardioprotector Antimutagen

14
 Bibliografie-web:
1.***https://www.secom.ro/articles/resveratrolul-un-antioxidant-important-pentru-un-
organism-sanatos-proprietati-si-beneficii realizat la data 08.03.2020 ora 16:45
2.***https://www.scribd.com/doc/205875611/Compusii-Biochimici-Activi-in-Strugure-Si-
Vin realizat la data de 08.03.2020 ora 18:05
3.*** https://www.revista-stil-de-viata.com/antioxidanti/resveratrol realizat la data
08.03.2020 ora 19:00
4.*** https://www.academia.edu/9202998/Determinarea_resveratrolului_din_vin
realizat la data 09.03.2020 ora 18:30
5.***https://adevarul.ro/locale/calarasi/de-mai-sanatosi-strugurii-negri-decat-cei-albi-
antioxidant-puternic-afla-coaja-1_5b8ba154df52022f750c92fd/index.html realizat la data
08.0.2020 la ora 20:15

15