Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Transcription de l’ADN
• La transcription est l’étape qui consiste à
transformer en ARN un fragment d’ADN
contenant un gène.
• Ce processus est généralisable à l’ensemble
des gènes pour la synthèse des ARNr, ARNt et
ARNm (Ribosomal, de transfert et messager) .
• Il existe quelques particularités pour des
procaryotes et pour des eucaryotes.
• La transcription nécessite la présence de
plusieurs éléments indispensables:
1
14/04/2015
Eléments de transcription
Élement Fonction
Fragment d’ADN (gène) Définit la région à transcrire
ARN polymérase Enzyme synthétisant l’ARN
Facteurs de transcription Permettent la reconnaissance
du gène et interviennent
dans les différentes étapes
de la transcription
NTP: ATP, CTP, GTP, UTP Nucléosides triphosphates
constituant la chaine
polynucléique
Notion de Gène
*Un gène est un fragment d’ADN à l’origine de la synthèse
d’un ARN.
• Certains gènes ne codent que pour des ARN de structure
(ARNt et ARNr) alors que d’autres permettent de produire
des ARNm pour la synthèse des protéines.
• La notion de gène est définit indépendamment des
facteurs régulateurs de son expression car certains gènes
régulateurs sont proches physiquement alors que d’autres
peuvent être très éloignés.
• La structure du gène est différente entre procaryote et
eucaryote et entre des gènes codant pour des ARN de
structure (ARNr et ARNt) et les ARNm pour les protéines.
• Un schéma général du gène peut être proposé.
4
2
14/04/2015
Structure du gène
Site d’initiation Terminateur
de la transcription de la transcription
(+1) (t)
- Les gènes non régulés s’expriment dans tous les types cellulaires et
tout au long de la vie de la cellule.
- Les gènes régulés s’expriment de manière différente selon le type de
cellule, selon la période de développement ou la présence de stimulus.
3
14/04/2015
(+1) (t)
5’ P P 3’OH
5’ UTR 3’ UTR
Protéine
7
4
14/04/2015
5’ P P 5’OH
5’ UTR 3’ UTR
5
14/04/2015
11
12
6
14/04/2015
13
14
7
14/04/2015
15
16
8
14/04/2015
17
Mécanisme de transcription
► La transcription d’un gène en ARN se fait en trois étapes:
Initiation, Elongation et Terminaison.
► Le mécanisme est différent chez les Procaryotes de celui chez
les Eucaryotes.
9
14/04/2015
L’initiation de la transcription
► Pour qu’un gène soit transcrit il doit obligatoirement posséder
un promoteur qui va fixer le complexe de polymérisation qui se
compose d’ARN polymérase + facteurs de transcription.
19
Elongation de la transcription
► L’élongation de la transcription débute avec la synthèse de
premier nucléotide.
10
14/04/2015
Terminaison de la transcription
► Cette étape permet à l’ARN polymérase de se décrocher de la
matrice d’ADN et de libérer l’ARN synthétisé.
21
Sens de la transcription
► Deux gènes différents portés par le même fragment d’ADN
peuvent être transcrit dans deux sens différents.
P P
Brin non 5’ P 3’ OH
ARNm Brin transcrit
transcrit
22
11
14/04/2015
Transcription chez
les Procaryotes
► L’ARN polymérase chez les Procaryotes est un gros complexe
de 385 kDa constitué de cinq sous-unités parfaitement bien
caractérisées.
23
Structure 3D de l’ARN
chez les Procaryotes
24
12
14/04/2015
Structure 3D de l’ARN
chez les Procaryotes
Sous-unité Nombre Taille Fonction
α 2 36 kDa Rôle dans la fixation à l’ADN et l’assemblage
des sous-unité β et β’
25
Initiation de la transcription
chez les Procaryotes
► Structure du promoteur: La comparaison de nombreuses
séquences en amant de site d’initiation de la transcription (+1)
fait apparaitre deux séquences nucléotidiques conservées
(consensus).
26
13
14/04/2015
Promoteur
82% 84% 78% 65% 54% 45% 80% 95% 45% 60% 50% 96%
5’ T T G A C A T A T A A T 3’
3’ A A C T G T A T A T T A 5’
-35 -10
Promoteur
► C’est la position du facteur σ70 par rapport aux deux boites qui
détermine le brin matrice et permet de faire la transcription dans
la bonne orientation.
28
14
14/04/2015
29
Etape de l’initiation
► Le core ARN polymérase sans le facteur σ70 a une forte affinité
pour l’ADN mais aucune spécificité de séquence.
► Cette forte affinité limite son déplacement sur l’ADN pour la
transcription.
► Le facteur σ70 réduit cette affinité de 10000 et permet la
reconnaissances des boites TATA et -35.
► Lorsque l’ensemble ARN polymérase facteur σ est stabilisé
sur le promoteur il y a formation d’un complexe dit complexe
fermé.
► Le double brin va s’ouvrir au niveau de la bite TATA pour
permettre le début de la synthèse. Le complexe est alors appelé
complexe ouvert. Le premiers nucléoside fixer va former
l’extrémité 5’ phosphate de l’ARN.
► Le facteur σ70 se décroche pour permettre l’élongation.
30
15
14/04/2015
Etapes de l’élongation
► Le facteur σ70 se dissocie et il est remplacé par le facteur de
l’élongation.
► Le brin d’ADN va s’ouvrir en suivant le déplacement de l’ARN
polymérase. Il se referme lorsque l’ARN est synthétisé.
► L’ouverture du double brin se fait sur 30 à 45 nucléotides.
► La liaison ADN/ARN se fait sur un longueur de 15 nucléotides.
► L’ouverture du double brin va provoquer une contrainte
topologique qui est géré par la topoisomérase I qui va relâcher le
surenroulement qui résulte de l’ouverture de la double hélice.
► La vitesse de transcription est estimée à 30 nucléotides/sec.
Cette vitesse dépendra de la torsion de l’ADN.
► Le taux d’erreur de la transcription est de 10-4.
31
Terminaison de la transcription
32
16
14/04/2015
Terminaison de la transcription
33
17
14/04/2015
ARN polymérase I
35
ARN polymérase I
36
18
14/04/2015
ARN polymérase II
► Initiation: Elle est la plus décrite dans les ouvrages pourtant
elle ne concerne que les gènes qui codent pour des protéines.
► La structure de ces promoteurs est difficilement généralisable
car selon les gènes, on peut trouver des éléments spécifiques
liés à la régulation.
► Les facteurs de transcription associés à l’ARN polymérase II
sont appelés TFII (Transcription factor) (TFII A, TFII B, etc.) qui se
fixent à quatre régions spécifiques dont la plus conservée est la
TATA box.
Boites Position Séquence Facteurs de
transcription
BRE -37 à -32 5’ GGGCGCC 3’ TFII B
(TFII B Recognition Element)
TATA Box -31 à -26 5’ TATAAA 3’ TBP
Inr (Initiator) -2 à -4 variable TFII D
DPE +38 à 32 variable TFII D 37
ARN polymérase II
► La boite BRE permet la fixation du facteur TFIIB.
► La boite TATA peut légèrement varier comme chez les
Procaryotes (on parle de promoteur fort et faible). Elle joue un rôle
essentiel dans l’initiation car elle fixe le facteur TFIID via l’une des
protéines qui le compose TBP (TATA Binding Protein).
► La boite Inr est peu conservée. Elle reconnait le facteur TFIID.
► La boite DPE est aussi peu conservée. Elle reconnait le facteur
TFIID en absence de TATA Box. C’est une situation assez rare.
38
19
14/04/2015
39
ARN polymérase II
40
20
14/04/2015
41
42
21
14/04/2015
43
44
22
14/04/2015
45
46
23
14/04/2015
47
48
24
14/04/2015
49
Polyadénylation
► L’ARN polymérase va terminer sa synthèse jusqu’au
terminateur de transcription (t) mais l’ARN sera clivé et
polyadénylé avant même que la polymérase n’est atteint ce
site.
► Le site de polyadénylation (A) correspond à un point de
coupure de l’ARN par le complexe de polyadénylation qui
est constitué de plusieurs proteines à activité endonucléase
pour cliver l’ARN et de polyA polymérase pour ajouter les
adénosines à l’extrémité 3’ OH de l’ARN qui a pour rôle de
protéger l’extrémité de la dégradation et faciliter la
traduction.
50
25
14/04/2015
Polyadénylation
► La reconnaissance du site de polyadénylation (A) se fait
par deux séquences consensus: 5’ AAUAAA3’ en amant du
site de coupure et une région en aval riche en GU. Elle sont
distantes de 20 à 30 nucléotides et la coupure se fait
approximativement au centre de ces signaux.
► Il existe des différences au niveau de la position du site
de coupure entre deux gènes mais on a toujours le même
site pour un gène donné.
51
26