Croissance bactérienne :

Cinétique et méthode d’évaluation

Introduction :

La croissance bactérienne est l’accroissement ordonné de tous les composants de la bactérie.

Elle aboutit à l’augmentation du nombre de bactéries.
Au cours de la croissance, il se produit, d’une part, un appauvrissement du milieu de culture
en nutriments et, d’autre part, un enrichissement en sous-produits du métabolisme,
éventuellement toxiques. La croissance peut être étudiée en milieu liquide ou solide.
La croissance d’une bactérie s’étudie en milieu liquide.

I. Les phases de croissance

Il existe 6 phases dont l’ensemble constitue la courbe de croissance.

● Phase de latence : le taux de croissance nul (μ = 0). La durée de cette phase dépend de
l’âge des bactéries et de la composition du milieu. C’est le temps nécessaire à la bactérie pour
synthétiser les enzymes adaptées au nouveau substrat. (pas de phase de latence si repiquage
sur milieu identique au précédent).
● Phase d’accélération : il se produit une augmentation de la vitesse de croissance.
● Croissance exponentielle : le taux de croissance atteint un maximum (μ=max). Cette phase
dure tant que la vitesse de croissance est constante. Le temps de doublement des bactéries est
le plus court. La masse cellulaire est représentée par des cellules viables (mortalité nulle).
● Phase de ralentissement : la vitesse de croissance régresse. Il y a un épuisement du milieu
de culture et une accumulation des déchets. Il existe un début d’autolyse des bactéries.
● Phase maximale stationnaire : le taux de croissance devient nul (μ = 0). Les bactéries qui
se multiplient compensent celles qui meurent. Il se produit une modification de l’expression
des gènes. Les bactéries en état de déprivation synthétisent des protéines de manque qui
rendent la cellule plus résistante aux dommages : augmentation du pontage du
peptidoglycane, fixation des protéines à l’ADN des cellules de manque, chaperones qui
empêchent la dégradation protéique et renaturent les protéines endommagées ;
● Phase de déclin : le taux de croissance est négatif (μ < 0). Toutes les ressources nutritives
sont épuisées. Il y a accumulation de métabolites toxiques. Il se produit une diminution
d’organismes viables et une lyse cellulaire sous l’action des enzymes protéolytiques
endogènes.
3

L’étude la croissance sur milieu liquide, peut se faire sur milieu non renouvelé ou batch
(discontinue) ou bien la culture en continue sur milieu renouvelé.

*culture continue : le milieu est renouvelé, dans une telle culture, les bacteries sont mises a
croître en milieu liquide dans un appareil appele chimiostat. Il y a, pendant la croissance, entree
continue de milieu sterile frais et sortie simultanee à la meme vitesse de culture. Dans l’industrie ce
procede est utilise pour obtenir des cultures ou des metabolites microbiens en grande quantite.

*culture discontinue : un milieu non renouvelé est un milieu pour lequel on n'apporte pas de
nouveau substrat en cours de culture ainsi la croissance est limitée et elle s'arrête par
épuisement des substrats et accumulation des déchets. En pratique, c'est ce qui se produit dans
un erlen ou un tube de bouillon.

La production d'un métabolite peut se faire soit par :

Association entre la croissance et la biosynthèse: METABOLTTES PRIMAIRES exp :

alcool, ethanol (levure), acide lactique (bac lactique)

Dissociation entre croissance et biosynthèse: METABOLTTES SECONDAIRES exp :

antibiotique, péniceline par la moisisure pénicellium

II. Techniques d'étude de la croissance:

Il existe des méthodes directes et indirectes pour évaluer la croissance microbienne

II.1. Evaluation de la biomasse (poids sec, turbidimétrie)

Mesure du poids sec : II s'exprime en g/L de culture. C'est la méthode de référence, car la
plus précise quand elle est bien maîtrisée, mais elle est délicate à mettre en oeuvre. (masse de
microorganismes complètement déshydratés dans une culture).

Mesure de la turbidimétrie :

Le trouble d'un milieu ou sa densité optique est directement proportionnel à la concentration

cellulaire dans le milieu, selon la loi de Beer-Lambert:
A=Ɛxcxl
Les mesures d’absorbance se font entre 550 et 650 nm.
Avantages: Simples à mettre en oeuvre; Peu couteux.
Inconvénients: Domaine de linéarité : λ= 650nm. Inapplicable lorsque le milieu est trouble.
Valeur estimée par excès: on compte ici les cellules vivantes et les cellules mortes donc on
surestime la quantité de biomasse.
Mesure de la quantité d’un constituant cellulaire :

Exp protéines, ADN, ATP, ou chlorophylle.

Utile si la quantité d’une substance est constante dans chaque cellule d’une population

II.2. Evaluation du nombre de cellules

L’évaluation du nombre de cellules peut se faire soit par dénombrement sur lame (de Malassez,
Thomas…) ou bien par la mise en culture et comptage des colonies)

II.3. Evaluation de l’activité cellulaire

II est possible de suivre par des techniques biochimiques la consommation d'un substrat (ex : suivi de
la consommation de glucose par dosage enzymatique) ou l'apparition d'un produit (ex:dosage de
l'éthanol).
On peut également suivre l'activité des micro-organismes en étudiant le maintient d'un paramètre
régulé.
Exp: le pH est en général un paramètre régulé au cours d'une fermentation. Donc sa valeur ne donne
pas d'information sur l'activité des micro-organismes, mais l'action nécessaire pour maintenir le pH
constant sera représentative du niveau d'évolution de la réaction de fermentation. Ainsi, en suivant la
quantité de base injectée par unité de temps,

Les paramètres cinétiques :

Temps de génération ; interval de temps entre deux générations successive ou temps de

dédoublement de la population
G= t/n
Taux de croissance ou vitesse de croissance :
µ= 1/G= n /t
N= N0X2t/G

Les paramètres de la croissance

On définit principalement 2 paramètres pour évaluer la croissance microbienne:

1/ Vitesse Spécifique de Croissance μx = Qx

Qx = « quotient de Biomasse »
On évalue l'accroissement de la biomasse (x = nbr d'individu en g/L)
Définition: accroissement de la Biomasse (dx) / unité de temps (dt) ramené à l'unité de
biomasse (x)
Qx=(dx / dt) x 1/x => Qx=(dx / x) / 1/dt => Qx=d lnx x 1/dt => d lnx=Qx x dt
=> ∫ d lnx=∫ Qx dt => [ lnx2 – lnx1]=[Qx (t2 – t1)]
=> Qx=(lnx2 – lnx1) / (t2 – t1) = coefficient directeur de lnx = f(x) à tout moment!
Qx peut se mesurer à n'importe quel moment, Le plus souvent on calcul Qx pendant la phase
exponentielle car à ce moment Qx est maximal.

2/Temps de Génération : G

C'est le temps de doublement de la population pendant la phase de croissance exponentielle,

cad le temps qui sépare deux divisions cellulaire (cad Tmin = G).
G = t2 – t1 quand x2 = 2x1
Qx expo = (lnx2 – lnx1) / (t2 – t1) or en phase exponentielle x2 = 2x1 d'où:
Qx expo = (ln 2x1 – lnx1) / G => Qx expo = Ln 2 + lnx1 – lnx1 / G => G = ln 2/Qx expo

Détermination graphique de G:
On prend lnx1, ce qui nous donne t1 puis pour avoir t2 on prend un second point avec ln 2 +
ln x1, car il faut x2 = 2x1 cad ln x2 = ln 2 + ln x1
Donc si on a ln x2 alors on a t2, alors G = t2 – t1

Suivi de Fermentation et calculs de rendements

Lorsque l'on réalise une production en fermenteur on peut suivre en plus de l'évolution de la
biomasse, l'utilisation du substrat et l'apparition du produit. On calcul alors des rendements de
production:
Vitesse de Consommation du Substrat:
rs = d[S] / dt exprimé en qté S / t (ex: g/L / H)

Vitesse d'Apparition du Produit:

rp = d[P] / dt exprimé en qté P / t (ex: g/L / H)

Vitesse Spécifique de consommation du Substrat:

ramené à l'unité de Biomasse
Qs = ( d[S] / dt ) x ( 1/x )

Vitesse Spécifique de consommation du Substrat:

Qp = ( d[P] / dt ) x ( 1/x )

Rendement:
Y x/s = rendement en biomasse par rapport au Substrat
Y x/s = d[x] / d[S] = rx / rs exprimé en quantité de Biomasse par quantité de substrat
consommé
Y p/s = d[P] / d[S]

Facteurs de variation de la croissance

La cinétique de croissance d'un micro-organisme est influencée par:

- des facteurs qualitatifs: nature de la source de C, N ...
- des facteurs quantitatifs: [S], température, pH ...

Les facteurs physico-chimiques

La teneur en O2:
Détermine le type de métabolisme (fermentaire ou respiratoire); influe sur la production des
métabolites primaires (comme l'éthanol); influe sur la vitesse de consommation du Substrat
(on joue sur l'agitation du milieu).

Le pH:
Influe sur la vitesse de catalisation des enzymes, sur la vitesse de synthèse des métabolites,
influe sur la vitesse de croissance (lors de pH acides la croissance peut-être rapidement
inhibée).

La température:
Influe la dure de la phase exponentielle mais ne modifie pas la quantité de biomasse finale.
Peut aussi influencer les métabolites synthétiser car la température peut-être un facteur de
stress.