Evaluación de la eficacia del

dióxido de cloro gas como

desinfectante de ambientes

Laboratorio de Bacteriología
Dpto. De Análisis Clínico
CEMIC

Agosto de 2020
Objetivo: Evaluar la eficacia del dióxido de cloro gas para desinfectar
ambientes

Producto: ReSTART-OX + ReSTART-OXF, provisto por la empresa H2O

Control SRL, con aplicación a cargo de ALZ Nutrientes SA.

Protocolo para la desinfección de ambientes (ensayo realizado en el Consultorio

14 de Sede Las Heras)

Preparación previa del ambiente: Se calcularon los m3 del ambiente, siendo de 85 m3.
Se cerraron todas las aberturas del ambiente, se sellaron con cinta y se bloqueó la entrada
de luz por las mismas. Se realizaron hisopados de diferentes sitios (pre-exposición).

Colocación de microorganismos indicadores: En sitios elegidos dentro del ambiente (ver

Esquema del Ambiente y controles), se colocaron tubos Falcon (destapados) con tiras de
papel de filtro embebidas con los microrganismos de control (Pseudomonas aeruginosa,
Escherichia coli y Staphylococcus aureus), apropiadamente rotulados (con la bacteria
correspondiente y la palabra “Expuesto”). En cada uno de los sub-ambientes, cada bacteria
fue expuesta en tres niveles de altura diferentes (bajo, medio y alto). También se colocaron
tiras reactivas sensibles al dióxido de cloro (Insta-Test; rango alto: 0 a500 ppm).

Preparación del desinfectante: Un operador, con el EPP adecuado (guantes, antiparras y

máscara de carbón activado), preparó y activó el producto según indicaciones del
fabricante/proveedor. Brevemente, se colocaron tres Reactores, uno en cada sub-ambiente
(consultorio, sala de espera y recepción con baño), consistiendo en una bandeja
contenedora, un burbujeador y un ventilador (sistema de gasificación activo). En cada
bandeja contenedora se agregaron 200 ml de Restart-OX (solución estabilizada de dióxido
de cloro) y 200 ml de Restart-OXF (activador: ácido fosfórico).

Tiempo de exposición: 120 minutos. Durante el transcurso de este tiempo se fueron

monitoreando los niveles de dióxido de cloro, temperatura y % de humedad relativa.

Ventilación del ambiente: transcurrido el tiempo de exposición, un operador con el EPP

apropiado ya descripto ingresó al ambiente, quitó los protectores de luz y abrió las
ventanas. Se dejó ventilar por 30 minutos, monitoreando los niveles de dióxido de cloro.

Agosto de 2020
 Retirada de los indicadores biológicos: el microbiólogo retiró la totalidad de los tubos
Falcon con las tiras conteniendo los microorganismos testigos expuestos, cerrándolos con
las tapas a rosca. Se transportaron al laboratorio de bacteriología dentro de la hora posterior
para su procesamiento microbiológico. Además, se realizaron nuevos hisopados de los
sitios (post-exposición).

Metodología para los controles microbiológicos en el laboratorio de bacteriología

Para cada tira Expuesta y No Expuesta (tiras embebidas con las mismas bacterias, pero sin
exposición al gas), de cada microorganismo, se realizó el siguiente procedimiento:
Con la ayuda de pinzas esterilizadas por llama, se tomaron las tiras indicadoras y se las
colocó dentro de un tubo con 5 ml de solución fisiológica. Se vortexeó por 5 minutos y
luego se realizaron diluciones 1/10 y 1/100 en tubos eppendorf con solución fisiológica. Se
sembraron 100 µl de la resuspensión directa de la tira y de las diluciones 1/10 y 1/100 en
respectivas placas de agar sangre y 100 µl de la resuspensión directa en un tubo con 6 ml
de caldo Tripteina-Soya. Las placas y tubos se incubaron en estufa a 35°C por 48-72 horas.
Se registró si hubo o no desarrollo de cada microorganismo indicador en las placas (número
de ufc) y tubos (turbio o límpido). Se calcularon ufc por tiras “Expuestas” y “No Expuestas”.

Esquema del procedimiento

1 - Agregar 5 ml de
sol. Fisiológica al 3 - Realizar diluciones
tubo con la tira 2 – Vortexear 1/10 y 1/100
5 min

Tubos
4 - Sembrar 100 ul
Ependorff
Tira con de cada tubo en
con SF
Microorganismo una placa de AS
en tubo Falcon

5 - Colocar 100 ul
dentro del tubo
con caldo TS
Placa de AS
Tubo con
6 ml de TS
6 – Incubar placas 7 – Realizar
y tubos en estufa recuentos de ufc y
35°C por 48-72 hs ver turbidez en tubos

Agosto de 2020
Esquema del ambiente y ubicación de los controles biológicos

NA Luz de Emergencias

Camilla

NB Escritorio

NM Consultorio
NB

Sillas NM Referencias

NA Pseudomonas aeruginosa
UGP 1
Escherichia coli

Mesada

Alacena
Staphylococcus aureus

Aire acondicionador NM NA: Nivel Alto

NB NA NM: Nivel Medio

NB NB: Nivel Bajo

NB

Bancas
Bancas NM

NM
Sala de
UGP 2 Espera
NA

NM

Aire acondicionador NB
NA
NM
Inodoro
NB
Espejo Baño
NA
Lavabo
NM NB
Recepción
NM UGP 3
Computadora
NA

NB

Agosto de 2020
Resultados
Tiras Expuestas
Consultorio
Nivel bajo (a ras del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel medio (a unos 80-100 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel alto (a unos 180-220 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.

Sala de espera
Nivel bajo (a ras del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel medio (a unos 80-100 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel alto (a unos 180-220 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.

Agosto de 2020
Recepción con Baño
Nivel bajo (a ras del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel medio (a unos 80-100 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.
Nivel alto (a unos 180-220 cm del suelo)
Pseudomonas aeruginosa: No se obtuvo desarrollo.
Escherichia coli: No se obtuvo desarrollo.
Staphylococcus aureus: No se obtuvo desarrollo.

Tiras No Expuestas (controles de desarrollo e inóculo bacteriano)

Pseudomonas aeruginosa: Se obtuvo desarrollo (6*105 ufc/tira).
Escherichia coli: Se obtuvo desarrollo (5*105 ufc/tira).
Staphylococcus aureus: Se obtuvo desarrollo (3*105 ufc/tira).

Agosto de 2020
Resultados
Hisopados Pre-Exposición
Consultorio
Piso: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Mesada: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Ventana: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Aire-Acondicionador: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas y hongos.

Sala de Espera
Piso: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Bancas: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Ventana: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Aire-Acondicionador: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas y hongos.

Recepción con Baño

Piso: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Inodoro: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Lavabo: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.
Ventana: Se obtuvo desarrollo de bacterias mesófilas.

Hisopados Post-Exposición
Consultorio
Piso: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Mesada: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Ventana: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Aire-Acondicionador: No se obtuvo desarrollo microbiano.

Sala de Espera
Piso: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Bancas: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Ventana: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Aire-Acondicionador: No se obtuvo desarrollo microbiano.

Recepción con Baño

Piso: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Inodoro: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Lavabo: No se obtuvo desarrollo microbiano.
Ventana: No se obtuvo desarrollo microbiano.

Agosto de 2020
Resultados
Valores medidos durante la experiencia de campo

Tiempo (minutos)
ClO2 (ppm) Temperatura (°C) Humedad (%)
post activación

15 40 19,7 56

30 25,7 19,4 60

45 17,6 19,3 52

60 8,4 19,3 72

75 6,4 20,5 70

90 3,9 20,3 56

105 3,0 20,8 68

120 2,3 21 57

+ 30 min post
ventilación 0,0 21 26
(apertura de ventanales)

Concentración de Dióxido de Cloro en ambiente (ppm)

45

40

35

30

25

20
Ventilación

15

10

0
15 30 45 60 75 90 105 120 150

Tiempo (minutos)

Agosto de 2020
Imágenes
Reactor – sistema activo (bandeja contenedora + Burbujeador + Ventilador)

Ventilador

Solución
activadora
(ReSTART-OXF)
Bandeja
contenedora

Solución ClO2 Burbujeador

estabilizada
(ReSTART-OX)

Placas de cultivo de las tiras con bacteria indicadora

Desarrollo de S. aureus No desarrollo de S. aureus

de tiras No Expuestas de tiras Expuestas

Agosto de 2020
 Escala de PPM Tira Insta-Test
de ClO2 de Tira No Expuesta
Insta-Test

Tira Insta-Test
Tira Insta-Test Expuesta debajo de
Expuesta dentro de la tapa del inodoro
un Armario cerrado

Amplificación de foto de la
Tira Insta-Test Expuesta dentro
de un Armario cerrado

Agosto de 2020
Resumen del ensayo
Se utilizó un sistema para desinfección ambiental con dióxido de cloro gas, activado in situ
a partir de la mezcla de en partes iguales de una solución estabilizada de dióxido de cloro
(ReSTART-OX) y de una solución activadora (ácido fosfórico, ReSTART-OXF). Para
facilitar la liberación del gas se empleó un burbujeador y para ayudar la difusión del gas
por el ambiente se usó un pequeño ventilador (ver imagen 1).
Como controles biológicos de la eficacia de la desinfección se utilizaron tiras embebidas
en bacterias (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Staphylococcus aureus),
conteniendo aproximadamente 5*105 ufc/tira. Las mismas se colocaron en los tres sub-
ambientes (consultorio, sala de espera y baño-antebaño) y en tres niveles de altura: bajo (a
nivel del suelo), medio (a 80-100 cm de altura) y alto (a 180-220 cm de altura).
Adicionalmente se realizaron hisopados de diferentes superficies y objetos previos a la
exposición al gas.
Tras sellar aberturas y bloquear la entrada de luz, se dejó actuar el producto por 120
minutos, midiendo la concentración de dióxido de cloro en el aire cada 15 minutos (ver
Resultados en Tabla).
Luego de ese tiempo, se quitaron paneles bloqueantes de luz y se abrieron las ventanas para
permitir la ventilación y difusión del gas remanente por 30 minutos, constatándose niveles
no detectables de dióxido de cloro (0 ppm).
Se retiraron los tubos con las tiras embebidas en las bacterias indicadoras y se transportaron
al laboratorio de bacteriología para su procesamiento y cultivo. Se realizaron nuevos
hisopados en las diferentes superficies y objetos (post-exposición al gas).

Resultados y Conclusiones
No se obtuvo desarrollo en ninguna de las tiras embebidas con las diferentes bacterias
indicadoras, ubicadas en los 3 niveles de altura y en los 3 sub-ambientes, en contraste con
el abundante desarrollo de las tiras no expuestas (controles). Tampoco se obtuvo desarrollo
en ninguno de los hisopados post-exposición, a diferencia de los hisopado pre-exposición,
en los que sí hubo desarrollo microbiano.
El sistema de desinfección de ambientes con dióxido de cloro gas fue extremadamente
efectivo, lográndose evidenciar bactericidia en las condiciones ensayadas.
Agosto de 2020