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Há 50 anos...
Início da década de 1940 –
Chargaff (na foto em 1963)
descobre a proporção 1x1
entre adenina e timina, e
guanina e citosina,
fundamental para o
desvendamento da
estrutura do DNA
A dupla hélice é realmente uma molécula
extraordinária. O homem moderno tem talvez 50
mil anos, a civilização existe há apenas 10 mil
anos. Mas o DNA e o RNA existem há pelo
menos vários bilhões de anos. Durante todo esse
tempo, a dupla hélice esteve por aí, ativa. No
entanto, somos as primeiras criaturas sobre a
Terra a nos tornarmos conscientes da sua
existência.
Decifrando o genoma - A corrida para Francis Crick
desvendar o DNA humano (Kevin
Davies) Ed. Companhia das Letras,
2001
O termo Biologia Molecular até recentemente
vinha sendo aplicado quase que exclusivamente
à
Química de Ácidos Nucleicos
5'
4’ 1’
3’ 2’
Aumento de
temperatura ou
Extremos de pH
(usamos pH
alcalino para
separar as fitas)
Separação das fitas é denominada “FUSÃO”
da molécula de DNA - “MELTING”
MELTING POINT:
TEMPERATURA NA QUAL É
DESFEITA METADE DA ESTRUTURA
EM HÉLICE DO DNA
Tm e % de GC
Quanto maior a
porcentagem de
pares GC, mais
difícil é a
desnaturação
As cadeias dos ácidos nucleicos são sintetizadas a partir de
nucleotídeos trifosfatados - dNTPs (ricos em energia),
por reações de
polimerização
(liberando
pirofosfato
inorgânico) durante
a formação da
LIGAÇÃO
FOSFODIÉSTER
As ligações fosfodiésteres ligam covalentemente os
nucleotídeos e conferem uma polaridade química às
fitas de DNA = extremidades 3’ e 5’
CADEIAS ANTIPARALELAS
Cada par de bases
(purina x pirimidina) 3,34 nm =
corresponde
apresenta uma largura a 10 pares
de bases por
semelhante, mantendo volta (360°)
da dupla
os esqueletos fosfato- hélice
Único sulco
profundo
B-DNA = sob condições fisiológicas (Sol. com baixa concentração de sal), maioria
do DNA das células; A-DNA = sob altas concentrações de sais ou em estado
parcialmente desidratado. Hélice mais curta e larga. Não existe “in vivo”; Z-DNA =
polímeros ricos em G:C, com purinas e pirimidinas alternadas na mesma fita, hélice
menos torcida com movimento em zig-zag do esqueleto fosfato-açúcar. Forma
encontrada “in vitro”.
O DNA no núcleo:
2 H2a : 2H2b
2H3 : 2 H4
Subunidade estrutural
básica da cromatina
Modelo da Dupla Hélice do DNA
alguns postulados...
8 A complementaridade dos 2 filamentos torna o DNA unicamente
adequado a ESTOCAR e TRANSMITIR a informação genética
8 Cada fita de DNA contém uma cópia desta informação (codificada
pela seqüência de nucleotídeos complementares)
8 Importante para a REPLICAÇÃO DO DNA
8 Os GENES carregam a informação biológica que deve ser
precisamente COPIADA e TRANSMITIDA durante a divisão celular
8 A seqüência linear de nucleotídeos em um gene codifica a ordem
de aminoácidos em uma proteína
8 GENOMA = conjunto completo de informações no DNA de um
organismo. A cada divisão, a célula deve copiar o seu genoma para
transmiti-lo a ambas as células filhas
Demonstração experimental da Replicação Semi-
Conservativa (Meselson & Stahl, 1958)
• Após várias gerações de crescimento em meio contendo
Nitrogênio pesado (N15), células de E.coli foram
transferidas para meio contendo o isótopo normal “leve”
(N14)
Helicase +
Primase =
Primossomo
(Procariotos)
Genoma bacteriano (1 ori ); Genoma humano (~10.000 ori ),
o que permite a célula humana replicar seu DNA
relativamente rápido
forquilhas replicação
1 2
2
1
Forquilha de Replicação é Assimétrica
Fita Líder
ou Leading
strand
Fita Tardia
ou Lagging
strand
Replicação Bidirecional
Primase sintetiza o RNA iniciador
~10
nucleotídeos
RNA
polimerase
Fragmentos de Okazaki: Remoção dos primers de
RNA e ligação dos segmentos de DNA
pol III
Procariotos: Três Eucariotos: 5 Polimerases (α,β,γ,δ,ε)
Polimerases ( I e II de γ = replicação nas mitocôndrias
reparo; pol III) β , ε = reparo do DNA nuclear
Proteínas acessórias da
Polimerase: aumentam
junção
a sua atividade e primer +
template
estabilizam a ligação
ao DNA “template”
Sliding-clamp protein
proteína β (E. coli)
Proteína
PCNA (eucariotos) dímera da
e E.coli
Brace protein sliding-
complexo γ (E. coli) clamp
fator de replicação C ou
RFC (eucariotos)
Forquilha de replicação em
procariotos
Replication factor A
(RFA) nos eucariotos
A estrutura detalhada
ainda não é totalmente
conhecida em eucariotos
Complexo multienzimático da forquilha de
replicação: ativado pela hidrólise de ATP
Forquilha de replicação dos eucariotos
PCNA
(RFA)
Brace protein
(RFC)
À medida que as fitas de DNA se desenrolam, o DNA a
frente da forquilha é forçado a enroscar, eventualmente
bloqueando a replicação
(exonuclease 3’ ->5’):