Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
BucuneşTi-MAounci.6
ROMANIA
INSTITUTUL CENTRAL DE FIZICA
RB-3-1980 Noiembrie
îlarkeri de spin
- A p l i c a ţ i i in b i o l o g i e -
6. C O N C L U Z I I , L I M I T E L E METODEI, PERSPECTIVE 56
7. B I B L I O G R A F I E 59
CUVINT ÎNAINTE
cunoscută metoda markerilor de spin, una din cele mai sensibile teh
ţara noastre.
_ 4 -
1. INTROOţJCERE
RES numai atunci cînd conţin centri paramagnetic! din categoria că
lor de pionierat ale lui H.M. McConnell [3,UJ. Ideea este simplă:
M30 /Sex .
un
> CU3
3 ^ particular.p amploare rpecta-
culoasă, nu numai datorită în-
I
u deplinirii eondiţiîioi.' impuse
unei bune grupări-reporter, ci şi următoarelor caracteristici impor
tante ale acestora, din care unele constituie ir. acelaşi tinp şi a-
vantajp suplimentare:
a) gruparea N-0 conţine electronul impar care conferă mole
culelor caracterul paramagnetic. De aici rezultă posibilitatea
- 8
ologice ;
lici;
în mişcare. ) •
2.1. GEKKRALITATI
v = -YS = -g 6 S (1)
&
e e
Planck.
componentele sale după această direcţie pot avea numai valorile *l/2
(Fîg. 1 ) .
lor energetice ;
teptate ;
d) o valoare diferită de zero a probabilităţii ca tranziţia
- 11 -
2.2. INFORMAŢII CASE SE POT GBTIHS DIN SPECTRELE ?..S /.'..• VvtKE'.U i,OR
DE SPIN
flă acestea.
H7 = g H-g.S (6)
it e
hv
= e*e<Hext + K
local> (7)
Hamiltonidnul de spin
care descrie interacţiu
nea magnetică dintre e-
lectronul impar şi nucleu
are forma:
/:hf 8)
posibile slnt permise numai trei şi anume acelea pentru care are loc
AECnij) = ge H + Am (11)
Prin urmare, fiecăreia din cele trei valori ale numărului cuantic
'• J
6.
111 Figura 3. Modul de prezentare al
unui spectru RES tipic pentru radi
calii liberi nitroxilici si defini
rea parametrilor spectrali: a) in
tegrala spectrului de absorbţie;
t>) spectrul de absorbţie; c) deri
mtm+1 m.*0 m.—j vata de ordinul I a spectrului de
absorbţ i e
i- H ^ ±
A ! T2(-1)
250
Am văzut din cele expuse mai sus că factorul g şi despica
g.zz şi respectiv
F A ^ , Ayy, A M ,
" xx' y y zz
precum şi a orientării direcţiei
1/ cîmpului magnetic sfatic în sis
temul de axe al moleculei, ca
racterizată de ungiurile polara
6 şi 9 (Fig. 4) permite cal-
Fiqura *• Reprezentarea schematică lul factorului g si a c o n s -
a sistemului de a x e ataşat m o l e c u
lei unui radical liber n i t r o x i l i c tantei de interacţiune hiperfină
pentru orice altă orientare spaţială a moleculelor:
(12)
8ef <e'*) = g
xxsinae COs2
' +
Syy s i n a ° sin
*» * 8 z z C O S %
a A*,.sina
e- c--o s T% + A* sinae- s i n % + A zZZ (13)
*-*(«,*) X>: yy 2 cos e
'ef
In această situaţie, condiţia de rezonanţă (11) devine:
hv = AE = g e f 8 e H • A e f mj <1«0
g
& > ùg > &g şi A % A « A .
xx yy zz xx yy zz
Acestea sînt caracteristice pentru ma-
lici.
hv ± A I
H = —-—g^- (15,
s
zz e
Importanţa acestui tip de spectre constă în faptul că ele permit de
terminarea rapidă şi precisă a parametrului A , iar prepararea
probelor si înregistrarea spectrelor RES nu pun problemele experi
mentale complicate ale lucrului cu monocristale.
(TC şi S) [22],
nal .
Hecent s-a propus o metodă RES mai elaborată (faţă de cea
- 22 -
3.1. S P E C T R O M E T R Y RE.S
D ublu T magic
(Puntea de micrai mas) RVp
C Wţ - - ! OF
SC ou
Direcţia clmpu-
*laimagnetic
Ai
MOD
toare .
lului. Dacă cel puţin unul dintre ei are valoarea zero, nu se va ob
cepe să scadă.
pul de baleiere trebuie să fie cît mai mare (4-10 minute pentru în
să aibă loc cît mai lent. La valori mici ale timpului de baleiere
sar pentru parcurgerea unei singure linii RES. In caz contrar, are
specii paramagnetice
ţia medie de markeri din probă. Din acest motiv, lărgirea liniilor
cel pai simplu prin barbotarea pentru scurt timp prin soluţiile res
?
4 . CHIMIA SI SIN T^ZA fiAR KtkU-- ' [)J-. ? ? ] !i
mazinei [3], dar compuşii care s-au dovedit cei mai adecvaţi acestui
periţi în 1956. Cei Liai stabili nitroxiJi conţin atomi de carbon ter
O-
y- Hr .
V M '
R
0
*,
N-0
Ri
m //
*2
~*
R
t o- R 2 /?; >0
VI VII
NH a [58] :
0
IODACETAMIDA -h SH
(MM)
- ^ ^ - « w * *
5. APLICAŢII
OH 0 Ţi
*A £/yJc *A
0. 0. 0. 0.
w IX X »
TEMPO TEMPOL TErtPONE TEMPAMfNE
32 -
tf/V, 451
XrY/; C5£
0
if
R-GD-CHy
o
i)
I
*
R- CO- CH
\ 0 '3 , - V CH:
+1
H2C-0- P-0-(Ct/2)P-N-<
2
N-0
ff ' '2 ,
0
r//- /«V /' FSL 1
0
R- CO- CHZ
0
N-CH-CH2I N=C«S
0.
txvrn (XMO (X/X)
- 33 -
nesaturate.
ble lipidice, din care lipsesc orice alţi factori care ar putea să
laterală şi transversală).
^0.5
^0,4 -
1
*
S-au pis în evidenţă separări
jutorul altor marker! de spin (de ex_:..pln, i,.:i ,-iraşi). S-au înre
tranziţie A tosfolipidelor
pare spectrul RES cunoscut, format din trei linii. In acest mod s-a
S-a adus proba la 0°C şi s-a tratat cu acid ascorbic; acidul ascor
răcit din nou proba la 0°C şi s-a distrus iar cu acid ascorbic para-
sebit.
5.2.1. Enzime
G
NH-t-CHoBr
y~\ o o
0'
xx
xx/
SO, F
~\ o
Qf- soz - o ~(M. f/3 47o_ ji, _ .T\,
0
N-0
XXII
xx///
B. Mecanismele de denaturare
cleu diamagnetic
Id aceeaşi er.ziniă
vată mai pregnant în cazul Aûii şi mai puţin ir. cazul tARN care a şi
în tARN).
nelor.
gici care conţin doi sau mai mulţi centri de legare, s-au putut de
H00C-CH2-C-C0DH
XXIV
Ù 0-
numerate în Tab. 3.
TABELUL 1. Definiţi i
Haptene: Molecule mici (GM < 5000) care manifestă proprietăţi anti-
genice numai atunci cînd sînt legate covalent de o macro-
moleculă purtătoare
xice.
dezordonat dînd naştere unui semnal RES izotrop cu trei linii îngus
HHCQCHl0'>(r~~^ OH
h XXV
[136].
marcate cu spin.
lici.
interior.
rnoleculă.
probele de studiat, care pot avea Volume foarte mici (10-30 pi), ne
branele .
- 58 -
etc.
- 59 -
7. BIBLIOGRAFIE
M. Burr şi D.E. Koshland, Ci., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 52_,
1017 (1964)
[34] S.P-. Van, G.B. Birrell şi O.H. Griffith, J. Magn. Reson. lj>,
444 (1974);
T. Porumb şi E.F. Slade, J. Magn. Reson.^2, 219 (1976);
idem, Eur. j . Biochem.£5, 21 (1976)
[3b] L.O. Libertini, C A . Burke, P.C. Jost şi O.H. Griffith, J.
Magn. Reson. ^5, 460 (1974)
[36] R.P. Mason şi C.F. Polnaszek, Biochemistry 17, 1758 (1978)
[j/] J.H. Freed, G.V„ Bruno şi C.F. Polnaszek, J. Phys. Chem. 75,
3335 (1971)
[38] D. Schwarz, B. Fbert şi G. Lassmann, Studia biophysica (Berlin)
7J., 45 (1978)
[39J C.F. Polnaszek, G.V. Bruno şi J.H. Freed, J. Chera. Phys. 5ţi,
3185 (1973)
[40] C.F. Polnaszek şi J.H. Freed, J. Phys. Chem. 7JJ, 2233 (1975)
[4l] S.A. Goldman, G.V. Bruno şi J.H. Freed, J. Phys. Chem. 7_6, 1858
(1972)
[42] R.P. Mason şi J.H. Freed, J. Phys. Chem. 78, 1321 (1974)
[43] R.P. Mason, E.B. Giavedoni şi A.P. Dalmasso, Biocnemistry 1J>,
1196 (1977)
[44] L.R. Dalton, B.H. Robinson, T,.A. Dalton şi P. Coffey In: J.S.
Waugh (editor), "Advances in Magnetic Resonance", Academic
Press, New York, 1976, voi. 8, p. 149
[45] D.D. Thomas, J.C. Seidel şi J. Gergely, J. Mol. Biol. 122, 257
(1979)
[46] A. Baroin, D. Thomas, B. Osborne şi P.F. Devaux, Biochem.
Biophys. Res. Commun. 7£, 442 (1977)
[47] P. Jost şi O.H. Griffith, în: C. Chignell (editor), "Methods in
Pharmacology", Appleton-Century-Crofts, 197 2, voi. 2, p. 223
[48] I.C.P. Smith, în: H.M. Swartz, J.R. Bolton şi U.C. borg (edi
tors), "Biological Applications of Electron Spin Resonance",
John Wiley & Sons, New York, 1972, p. 483
[49] B.J. Gaffp.ey şi C M . McNamee, "Metnods in Enzymology", Academic
Press, New York, 1974, vol. 32 B, p. 161
[SO] A.L. Buchachenko, "Stable Radicals", Consultants Bureau, New
York, 1965
[5l] A.R. Forrester, J.M>. Hay şi R.H. Thomson, "Organic Chemistry of
Stable Free Radicals", Academic Press, Wew York, 1968
- 62 -
[60] E.G. Rozantsev şi V.D. Sholle, Synthesis 1971, 190 (part I);
401 (part II)
(1974)
[74] P.F. Devaux şi H.M. McCounell, J. Amer. Chem. Soc. 94, 4475
(1972)
[76] S.P. Van şi O.H. Griftlth, J. Membrane Biol. 2£, 155 (1975)
[77] Gh. Benga şi û. Chapman, Rev. Roum. Biochim. L3, 251 (1976)
[78] P. Jost, O.H. Griffith, R.A. Capaldi şi G. Vanderkooi, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 7£, 480 (1973)
[b5] Gh. Benga, O. Popescu şi V. Pop, Rev. Roum. Biochim. 1£, 175
(1979)
I.C.P. Smith şi T. Yamane, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 5JI, 884
(1967)
[137] J.C. Hsia şl C.T. Tan> Ann. N.Y. Acad. Sci. 308_, 139 (1978)