UNIVERSITATEA „VASILE ALECSANDRI”

din BACĂU
Facultatea de Inginerie
Calea Mărăşeşti, Nr. 157, Bacău, 600115, Tel./Fax +40 234 580170
http://inginerie.ub.ro; e-mail: decaning@ub.ro
Specializare: ȘIPAE

PROIECT
Disciplina: Metode verzi e valorificare a principiilor active din surse vegetale

Tema: Obținerea resveratrolului din surse vegetale

Coordonator:
Prof. Univ. Dr. Chim. Adriana Luminiţa Fînaru
Conf. Dr. Ing. Alisa Aruş

Masterant:
Chimist.Cebotari Marina

Bacău 2020
 Cuprins:

Introducere ..................................................................................................................3
Capitolul I: Activitatea biologică a resveratrolului și a derivaților săi. ..........................4
Capitolul II: 1.Cercetări privind conținutul și dinamica conținutului de resveratrol în
vinuri și influența acvității lor asupra celulelor. ............................................................6
2.2. MATERIAL ŞI METODĂ ................................................................................7
Capitolul III. Rolul resveratrolului în protecția organismului uman contra
radicalilor liberi. Acțiuni benefice. ......................................................................10
Bibliografie-web: .......................................................................................................13

2
 Introducere
Resveratrolul este un antioxidant polifenolic care se gaseste in plante, dar si in anumite
alimente sau bauturi. Cea mai mare cantitate de resveratrol este continuta de radacina plantei
Polygonum cuspidatum, originara din Japonia, dar care nu poate fi consumata in stare naturala.
Alte surse bogate in resveratrol sunt fructele de culoare inchisa, precum strugurii, murele,
rosiile, coacazele, afinele, merisorul, dar si arahidele si fisticul.

Fig.1.:Surse de resveratrol [3].

Strugurele are o valoare calorică mare, de aceea este un aliment-medicament foarte
indicat ca energetic muscular şi nervos, remineralizant, antitoxic, stimulent şi decongestionant
hepatic, diuretic, laxativ şi foarte digestibil. Cei negri conţin cel mai puternic antioxidant din
lume: resveratrolul– care este, totodată, şi un pigment ce conferă culoarea movalie. Acesta,
alături de vitaminele şi mineralele conţinute în boabele de struguri, are rolul de a preveni şi
chiar combate ateroscleroza, precum şi bolile cardiovasculare secundare acesteia. Datorită
conţinutului său bogat în vitamine din complexul B, C, A şi K, dar şi săruri minerale de
potasiu, fosfor, magneziu, fier, calciu şi siliciu, strugurele este potrivit pentru tratamentul
reumatismului, gutei şi bolilor de piele. Specialiştii spun că 10% din proprietăţile curative ale
strugurilor sunt menţinute prin conservare, indiferent dacă este vorba despre dulceaţă, compot
sau vin [5]. Aceasta substanta activa este eliberata din coaja si semintele strugurilor in timpul
procesului de fermentare si are numeroase beneficii pentru sanatate, conform National
Institutes of Health din America. In ciuda faptului ca obisnuiesc sa consume alimente bogate
in grasimi, francezii sunt considerati oamenii cu cel mai sanatos sistem cardiovascular din
lume, iar asta se datoreaza consumului regulat de vin rosu bogat in resveratrol. Tocmai din
acest motiv, substanta mai este denumita si „Paradoxul francez”. In mod normal, organismul
are capacitatea de a se apara de virusuri, bacterii sau de stresul oxidativ, datorita proteinei
SIRT1, denumita si „proteina longevitatii”. Aceasta proteina protejeaza si pastreaza intacte
celulele ADN-ului si repara moleculele care au fost afectate de radicalii liberi. In timp, din
cauza numarului ridicat de radicali liberi, capacitatea de autoaparare a celulelor scade, iar
proteinele SIRT 1 sunt solicitate mai mult pentru refacerea celulelor, procesul de imbatranire
fiind accelerat. Resveratrolul stimuleaza productia de proteine SIRT1 si ajuta, asadar, la
mentinerea sanatatii celulare,încetinind procesul de imbatranire. Din acest motiv, resveratrolul
este considerat un ingredient-cheie in prelungirea duratei de viata [1].

3
 Capitolul I: Activitatea biologică a resveratrolului și a derivaților săi.
Molecula de bază, produsă de către vița-de-vie este izomerul trans- al resveratrolului,care
împreună cu derivații săi (fig.2.) posedă proprietăți antioxidante importante.

Fig.2.: Structura chimică a trans- resveratrolului (I), cis-resveratrolului (II) și a derivaților

trans-resveratrolului (II-VI)[2].
Structura chimica a trans si cis resveratrolului [4]

a) cis – resveratrol b) trans – resveratrol

4
 Conform acestei figuri, fiecare grupă hidroxilă a derivaților este protejată de grupe metilice
(III, IV, V) și un derivat cu legătură dublă redusă (VI).
Compararea activității antioxidante a trans-resveratrol și derivaților săi, estimată în testele in
vitro, este raportat în tabelul 1. Rezultatele sunt exprimate prin EQ (testul Citronelal) și EC 50
(microzomi și testele DPPH) din fiecare compus.
Tabelul 1 Activitatea antioxidantă a trans-resveratrolului și a derivaților II-VI [2].
Compound Citronellal EQ Microsomes EC 50 DPPH EC 50
I 135±8,81 0,77±0,08 24,5±1,5
II 241±38,0 1,10±0,09 24,1±1,2
III 661±20,3 2,40±0,34 48,6±4,2
IV 355±7,43 1,22±0,18 30,1±2,1
V >1000 >1000 >1000
VI 260±11,2 1,57±0,17 106,8±6,3
Din datele prezentate, se observă o relație invers proporțională între activitatea antioxidantă
și valorile EQ și EC50 : cu cît e mai puternic antioxidantul cu atît e mai mică valoarea acestora.
În toate cele 3 teste, trans-resveratrol (I) a demonstrat cea mai mare activitate antioxidantă, în
timp ce compusul V nu exercită nici un efect semnificativ. Figura 3 demonstrează efectele
trans-resveratrolului (I) și derivatele pe producție TBARS indusă de TBHP în fibroblaste
umane normale.

Fig.3: Activitatea antioxidantă a trans-resveratrolului (I)și a derivaților II-VI [2].

Activitatea antioxidantă a 60 µM trans-resveratrolul (I) sau derivații II-VI, exprimată ca procent
de inhibare a producției TBARS în fibroblaste umane normale tratați cu TBHP (terț-
butilhidroperoxid).
Efectele resveratrolului asupra radicalilor liberi în organism este bine cunoscut, și anume
efectul său inhibitor asupra sintezei ADN-ului. În acest scop, capacitatea trans-resveratrolului
de a inhiba sinteza ADN (polimeraza ɑ și ß) a fost comparat cu ceilalți derivați, atît în celule,cît
și în testele in vitro (fig.4).

5
Fig.4: Efectele tran-resveratrolului(I) și a derivaților săi (II-VI) în sinteza ADN-ului în celule
și în vitro [2].
Rezultatele raportate în fig.4.A arată că printre derivate, numai compusul IV inhibă
încorporarea BrdUrd într-o măsură similară cu trans-resveratrolul. Rezultate comparabile au
fost obținute în testele in vitro privind activitatea ADN polimerazei (fig.4.B) [2].

Capitolul II: Cercetări privind conținutul și dinamica conținutului de

resveratrol în vinuri și influența acvității lor asupra celulelor.
Primele lucrări ştiinţifice ce ţin de resveratrol au fost conduse de Langcane şi Pryce în 1976
(Langcane P., Pryce R.J., 1976). Spre anii 1990, acest subiect a fost reluat la Universitatea din
Bourgogne în jurul a 2 axe, cu P. Jeandet (Jeandet P., Bessis R., Gautheron B.,1991) asupra
biochimiei moleculei şi caracterul său de protejare a viţei de vie contra infecţiilor micotice şi
cu Blanche (Blanche D., Rustan I., Durand P., 1997) asupra activităţii marcante contra bolilor
cardiovasculare.
Cercetările în domeniu au demostrat că variaţia concentraţiei de resveratrol în vin are la bază
o serie de factori, cum sînt: originea geografică, expunerea la infecţii micotice, clima, solul,
soiul, tehnica vinificării. Trebuie, în primul rînd ca varietatea viţei de vie, a soiului, să fie una
producătoare de resveratrol. Printre aceste varietăţi găsim: Pinot noir, Gamay, Cabernet-
Sauvignon şi Mourvedre. După Dr. Goldberg (Goldberg D.M., Yan J., Diamandis E.P., 1994)
de la Universitatea din Toronto care a analizat numeroase vinuri din lume, în faţa clasamentului
se află Pinot noir.
De asemenea, asupra cantităţii resveratrolului influenţează pozitiv perioada de macerare, doza
anhidridei sulfuroase, protecţia mustului şi vinului de acţiunea oxigenului şi oxidazelor etc.
Un interes ştiinţific şi practic prezintă studiul resveratrolilor în vinurile, sucurile produse
şi comercializate Spania şi Franţa (tabelul 2).
Tabelul 2: Conţinutul resveratrolilor în vinurile şi sucurile produse în Spania şi Franţa [2].
Băuturi Cantitatea totală de Cantitatea totală de
resveratrol în 150 ml (mg) resveratrol (mg/dm3)
Vinuri albe (Spania) 0,01-0,27 0,05-1,80
Pinot noir (Franța) 0,06-0,30 0,40-2,0
Vinuri roze (Spania) 0,06-0,53 0,43-3,52
Vinuri roșii (Spania) 0,29-1,89 1,92-12,59
Vinuri roșii (Franța) 0,30-1,07 1,98-7,13
Suc de struguri (Spania) 0,17-1,30 1,14-8,69
Suc de struguri (Franța) 0,21-1,76 1,37-11,71
Rezultatele obţinute atestă o concentraţie sporită a resveratrolilor în vinurile roşii şi mai mică
în cele albe. Vinurile roşii spaniole conţin mai mulţi stilbeni comparativ cu cele franceze, în
schimb sucurile din struguri produse în Franţa sunt mai bogate în resveratroli în comparaţie cu
cele din Spania [2].

6
 2.2. MATERIAL ŞI METODĂ
Pentru analiza conţinutului de trans - resveratrol, se va utiliza HPLC, care va permite
separarea metaboliţilor şi analiza acestor compuşi cromatografic. Astfel se vor compara
picurii obtinuti prin cromatograma HPLC cu cei standard , putandu-se astfel identica daca
exista resveratrol in produs, şi la ce cantităţi.
Cis-izomerul este, probabil, transformat în timpul procesului de vinificatie, dar de obicei
nu se ajunge la concentraţia trans-izomerul în vin [4].

Metode de extractie- purificare si de determinare ale trans - resveratrolului [4]

• A Metoda de extractie-purificare bazata pe extractia cu solventi;
• B Metode de determinare : HPLC.

A 1. Extracţia din vin

Vinul este evaporat la ½ din cantitate in evaporator sub vid, pentru indepartaea alcoolului. Din
vinul dezalcoolizat, compusii fenolici se extrag cu acetat de etil conform schemei 1:
Vin ( 20 μl)
+ CH3 OH (50 ml )(metanol)
Refluxare ( 30’ )
Separare faza lichida

Filtrare

Evaporare sub vid ( la sec )

Rezidiuu
+ 30 ml. Apa
Extractie cu acetat de etil (50 ml )

Evaporare sub vid ( la sec )

Rezidiul
+ 5 ml metanol

Evaporare sub vid ( la sec)

+ acetonitril

Analiza cromatografica
Schema 1. Extragerea probelor pentru analiză [4]

7
 B. 2. Metoda de separare prin HPLC
Extractele obţinute din prelucrarea probelor de vin sunt injectate în coloană .
Conditii de lucru :
- Coloana Nucleosil-C18 250 mm x 4,6 mm ; debit 1 ml/minut
- Elutie: Sistem gradient = 2 solventi : A – apa
B - apa acetonitril
H2O / CH3 CN 2:8 (v/v)
Volumul injectat : 20μl

Metoda de separare a compuşilor fenolici prin HPLC are următoarele avantaje:

- este o metodă rapidă pentru separarea, identificarea şi determinarea cantitativă a compuşilor aflaţi în
amestecuri complexe;
- dă posibilitatea separării substanţelor aflate în concentraţii foarte mici în amestecurile de analizat;
- este o metodă simplă şi uşoară pentru interpretarea rezultatelor obţinute; [4]

HPLC: Calibrare Standard

Figura 5. Trans-resveratrol standard . Serii diferite de dilutie: 20 ug/mL (rosu), 10ug/mL

(violet), 5ug/mL (albastru), 2.5ug/mL (verde). ( curba de calibrare) [4].

Figura 6. Cromatrograma HPLC pentru trans-resveratrol standard [4]

8
 HPLC: Extractia vinului rosu

Figura 7. Extractie vin rosu. A)Cromatograma extract vin rosu; tipurile de vin evidentiate
sunt: Merlot din Australia (rosu), Shiraz din Australia (verde), Primitivo din S. Italy
(violet). Cu linie punctata albastra este trans-resveratrol standard . B) Zoomed-in view of the
resveratrol peak region [4].
HPLC: Extractia vinului alb

9
Figure 8. Extravtie vin alb. A)Cromatograma extract vin alb; tipurile de vin sunt Sauvignon
Blanc din France (rosu) si Chardonnay din N. California (violet). Cu linie punctata albastra
este trans-resveratrol standard . B) [4].

Figura 9. Concentratia Resveratrolului calculata cu ajutorul cromatogramele de mai sus şi

curba de etalonare. Eşantioanele de vin rosu sunt reprezentate în roşu, cele pentru vinul alb în
galben. In proba de Chardonnay nu s-a detectat Trans – Resveratrol [4].
• Rezultatele arată clar că vinurile roşii conţin trans-resveratrol în cantităţi semnificative, în
timp ce vinuri albe contin cantitati foarte mici [4].

Capitolul III. Rolul resveratrolului în protecția organismul ui uman

contra radicalilor liberi. Acțiuni benefice.
Resveratrolul este cel mai puternic antioxidant, el încheagă și îndepărtează radicalii liberi
din organism,în același timp stimulează înmulțirea celulelor sănătoase si capacitatea lor de
regenerare. Resveratrolul menține capacitatea de funcționare normală a trombocitelor, ajută la
scăderea vîscozității sîngelui, îmbunatățindu-se astfel circulația sîngelui. Are proprietatea de a
încetini cu 50% sporirea celulelor cancerigene sau poate chiar să le stopeze [2].
Beneficiile resveratrolului au fost descoperite prima data de cercetatorii care au ajuns la
concluzia ca anumite insecte, bacterii si animale care au fost hranite cu aceasta substanta au
avut o durata de viata mai lunga. Studiile au demonstrat ca resveratrolul are numeroase alte
beneficii pentru organism, precum:
 incetineste procesul de imbatranire - resveratrolul contine antioxidanti care
neutralizeaza radicalii liberi. In timp, acesti radicali liberi ataca celulele sanatoase in
organism si accelereaza procesul de imbatranire. Consumul de alimente bogate in
resveratrol si/sau administrarea de suplimente alimentare au efecte benefice asupra
organismului si reusesc sa mentina tineretea organismului.

10
 are efect anticangerigen - antioxidantii si fitonutrientii pot preveni aparitia cancerului.
Studiile au demonstrat ca resveratrolul poate contribui la blocarea procesului de
carcinogeneza, care favorizeaza dezvoltarea tumorilor canceroase.
 protejeaza sanatatea sistemului cardiovascular - datorita proprietatilor
antiinflamatorii, resveratrolul poate reduce riscul de afectiuni cardiovasculare.
Potrivit studiilor de specialitate, consumul de alimente si bauturi bogate in resveratrol
diminueaza riscul de ateroscleroza (o afectiune care consta in ingrosarea arterelor, ceea
ce impiedica circulatia corespunzatoarea a sangelui), cheaguri de sange sau fibroza a
miocardului.
 poate preveni aparitia obezitatii - resveratrolul poate preveni depunerea grasimilor si
ajuta la reglarea nivelului de insulina. In plus, cercetatorii au ajuns la concluzia ca
aceasta substanta poate ajuta la reducerea greutatii corporale. Acest fapt este sustinut
de studiile care arata ca proteina SIRT 1, activata de catre resveratrol, are capacitatea de
proteja organismul impotriva aparitia obezitatii.
 regleaza nivelul de insulina - resveratrolul reduce nivelulul zaharului din sange si il
regleaza pe cel al insulinei. Prin urmare, poate sa previna si sa amelioreze simptomele
diabetului.
 scade nivelul tensiunii arteriale - datorita proprietatilor sale antioxidante, resveratrolul
poate ajuta la scaderea tensiunii arteriale. Acesta ajuta la producerea oxidului de azot in
organism, care, la randul lui, determina relaxarea vaselor de sange si, implicit, scaderea
tensiunii arteriale.
 scade nivelul de colesterol „rau” - resveratrolul poate influenta nivelul
de colesterol din organism, datorita efectului pe care il are asupra enzimei care
controleaza productia de colesterol. Mai exact, acesta poate ajuta la reducerea nivelului
de colesterol „rau” si la cresterea nivelului de colesterol „bun” din organism. Acest
beneficiu este sustinut de un studiu in cadrul caruia participantii au luat suplimente cu
extract de struguri. Dupa sase luni de tratament, nivelul de colesterol LDL (colesterol
„rau”) a scazut cu 4.5%.
 protejeaza creierul - anumite studii sustin ca un consum moderat de vin rosu poate ajuta
la reducerea riscului de aparitie a bolilor degenerative cauzate de inaintarea in varsta.
Resveratrolul are proprietati antiinflamatorii si antioxidante si poate reduce oxidarea
placilor de amiloid, responsabile cu aparitia bolii Alzheimer. Totodata, reduce riscul de
aparitie a bolii Parkinson sau a sindromului Huntington.
 protejeaza sistemul osos - suplimentele pe baza de resveratrol pot ajuta la mentinerea
sanatatii sistemului osos si pot preveni deteriorarea cartilajelor, arata un studiu publicat
de National Institutes of Health;
 protejeaza sanatatea ficatului - resveratrolul are efecte terapeutice asupra ficatului,
ajuta la reducerea depozitelor de grasimi, prevenind astfel aparitia fibrozei sau a
steatozei hepatice;
 previne pierderea auzului - studiile realizate pe soareci au evidentiat faptul ca
resveratrolul protejeaza organismul de factorii care pot duce la pierderea auzului;
 protejeaza impotriva infectiilor - resveratrolul are proprietati antibacteriene si
antiinflamatorii si poate reduce simptomele anumitor infectii si iritatii ale pielii [1].

11
 Făcînd o sinteză a informației anterioare, putem enumera principalele efecte ale
resveratrolului :

Antioxidant

Antibacterian Antiinflamator
Schema 2:Cele mai
importante efecte ale
resveratrolului asupra
organismului [2].

Neuroprotector Antitumoral

Cardioprotector Antimutagen

12
 Bibliografie-web:
1.***https://www.secom.ro/articles/resveratrolul-un-antioxidant-important-pentru-un-
organism-sanatos-proprietati-si-beneficii realizat la data 08.03.2020 ora 16:45
2.***https://www.scribd.com/doc/205875611/Compusii-Biochimici-Activi-in-Strugure-Si-
Vin realizat la data de 08.03.2020 ora 18:05
3.*** https://www.revista-stil-de-viata.com/antioxidanti/resveratrol realizat la data 08.03.2020
ora 19:00
4.*** https://www.academia.edu/9202998/Determinarea_resveratrolului_din_vin
realizat la data 09.03.2020 ora 18:30
5.***https://adevarul.ro/locale/calarasi/de-mai-sanatosi-strugurii-negri-decat-cei-albi-
antioxidant-puternic-afla-coaja-1_5b8ba154df52022f750c92fd/index.html realizat la data
08.0.2020 la ora 20:15

13