SISTEME DE DETECTARE A PATOGENILOR

PE PCR ÎN TIMP REAL

Ghid de
interpretare a
rezultatelor
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

Microbial oferă sisteme bazate pe PCR în timp real pentru detectarea bacteriilor patogene din probele alimentare
și din mediul înconjurător. Această tehnică este rapidă și robustă, permițând utilizatorului să obțină rezultate
sigure și fără echivoc în mai puțin de două ore. În ciuda simplității operative a PCR în timp real, o interpretare
exactă a rezultatelor ar putea fi complexă fără experiență anterioară. Rezultatele sunt exprimate grafic prin
software-ul care însoțește toți termociclatorii. O interpretare corectă a curbelor de amplificare îl va ajuta pe șeful
de laborator să ofere rezultate fiabile.

Cu acest ghid, Microbial oferă câteva linii directoare de bază pentru interpretarea rezultatelor obținute prin PCR
în timp real atunci când se utilizează sisteme de detectare a patogenilor microbieni.

(Revizuit în septembrie 2009)

CUPRINS

1. FUNDAMENTELE REAL TIME PCR........................................................................................................

3

2. CONTROLUL AMPLIFICĂRII INTERNE..................................................................................................

5

3. SISTEME DE DETECȚIE CU 2 FLUOROFORI...........................................................................................

6

4. SISTEME DE DETECȚIE CU 3 FLUOROFORI...........................................................................................

8

5. SISTEME DE DETECȚIE CU SIGRAN....................................................................................................

10

6. CANTIFICAREA PRIN PCR ÎN TIMP REAL............................................................................................

12

7. CONTAMINAREA PCR ÎN TIMP REAL.................................................................................................

13

8. CURVE DE AMPLIFICARE ATIPICĂ.....................................................................................................

14
1
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

1. FUNDAMENTELE PCR ÎN TIMP REAL

PCR în timp real se bazează pe amplificarea exponențială a unui fragment de ADN specific, folosit ca șablon pentru
a genera milioane de copii. PCR în timp real diferă de PCR convențional, deoarece permite monitorizarea continuă
a ADN-ului produs în fiecare ciclu prin utilizarea coloranților fluorofori. Fluorescența este eliberată de fiecare dată
când se sintetizează o nouă copie ADN și, prin urmare, cantitatea de fluorescență este proporțională cu cantitatea
de ADN produs. Mai mult, sistemele PCR în timp real oferă o sensibilitate și o rezistență mai mari, cu posibilitatea
suplimentară de a cuantifica cantitatea inițială de ADN țintă prezent într-o probă.

Rezultatele PCR în timp real sunt vizualizate într-un grafic de amplificare. Fluorescența este reprezentată pe axa Y,
în timp ce numărul de cicluri PCR este reprezentat pe axa X. Curba de amplificare constă dintr-o fază inițială în care
fluorescența produsă este sub nivelul de detecție al termociclerului, o a doua fază în care crește fluorescența (fiind
acest increment exponențial la începutul fazei) și o a treia fază (platou) în care reacția se termină și fluorescența
este stabilizată (Figura 1). În a doua fază, este posibil să setați o valoare prag, care indică aria de creștere
exponențială. Această valoare este reprezentată în grafic printr-o linie orizontală.

rd
3 etapă

Platou

nd
2 etapă

Creșterea exponențială

Sf
1 etapă Prag

Figura 1. Grafic de amplificare PCR în timp real care arată cele trei faze.

Punctul de intersecție dintre curba de amplificare și linia de prag se numește Ct (Threshold Cycle). Acest punct
indică ciclul în care fluorescența atinge valoarea prag. Cu cât este mai mare cantitatea inițială de ADN, cu atât este
necesar un număr mai mic de cicluri (valori scăzute ale Ct) pentru a atinge pragul (Figura 2). Ca regulă generală,
având în vedere eficiența optimă a reacției, de fiecare dată când o probă este diluată de 10 ori, valoarea Ct va
crește în aproximativ 3,3 cicluri.

3
Ghid de interpretare a rezultatelor

Probă Probă diluată de 10 ori

Ct = 21,05 Ct = 24,40

Prag
NTC

Figura 2. Grafic de amplificare în care o probă diluată trece linia de prag mai târziu decât proba nediluată. Rețineți că NTC (control
non șablon) nu atinge pragul deoarece nu conține ADN șablon inițial de amplificat.

Graficele de amplificare pot fi vizualizate fie cu cele două axe în scară liniară (Figura 3A), fie cu axa Y în scară
logaritmică (Figura 3B), fiind ambele prezentări potrivite pentru interpretarea rezultatelor. Graficul semi logaritmic
poate fi util pentru a regla manual valoarea pragului în cadrul creșterii exponențiale a fluorescenței în a doua fază,
deoarece această creștere apare ca o linie dreaptă folosind acest mod de vizualizare (Figura 3B). Mai multe metode
matematice pot fi utilizate pentru a calcula cea mai bună poziție a pragului, dar, în orice caz, ar trebui să fie
localizată în zona exponențială a celei de-a doua faze. Astăzi, toți termociclatorii includ în software-ul lor un sistem
pentru a calcula automat poziția pragului, deși este, de asemenea, posibil să-l reglați manual în parametrii
recomandați.

A B
PARCEL DE AMPLIFICARE LINEALĂ AMPLIFICARE SEMI-LOGARITMICĂ

Eșantion pozitiv

Eșantion pozitiv

NTC
NTC

Figura 3. Grafic de amplificare în scară liniară (A) și în scară semi logaritmică (3B). Rețineți că, deși curbele de amplificare afișează o
formă diferită, valoarea pragului este aceeași în ambele cazuri.
4
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

2. CONTROLUL AMPLIFICĂRII INTERNE

Fiabilitatea kiturilor de detecție dezvoltate de Microbial este garantată prin intermediul unui control de amplificare
intern (IAC) inclus în Reaction Mix. Sistemul IAC a fost conceput special pentru a valida acuratețea testului,
permițând distincția rezultatelor negative adevărate de rezultatele negative negative cauzate de defecțiunea PCR
(datorită inhibării, deteriorării reactivilor PCR etc.).

Sistemul IAC constă din amplificarea independentă a unei secvențe de ADN artificial, care este coamplificată cu
ADN-ul țintă al agentului patogen în timpul procesului de PCR. IAC este încorporat în amestecul de reacție la o
concentrație care a fost ajustată cu atenție. Astfel, concentrația scăzută a IAC asigură faptul că specificitatea și
sensibilitatea testului nu sunt afectate de amplificarea competitivă a ambelor ADN-uri. În consecință, semnalul de
amplificare IAC poate dispărea în probe pozitive în care ADN-ul patogen este prezent în cantități mari. Cu toate
acestea, semnalul IAC ar trebui să fie întotdeauna detectat în eșantioane negative (absența agentului patogen).
Atunci când nu se produce semnal IAC sau agent patogen, cauza defecțiunii PCR ar trebui să fie elucidată prin
verificarea integrității reactivilor PCR sau prin aplicarea unor soluții alternative pentru a depăși problemele
inhibitoare.

Majoritatea problemelor de inhibare se datorează prezenței particulelor sau substanțelor care rămân în extracțiile
ADN din probe complexe. Aceste probleme pot fi rezolvate prin simpla repetare a analizei folosind o diluție 1/10
sau 1/100 a ADN-ului extras cu apă distilată sterilă fără acid nucleic, deoarece în timp ce diluați ADN-ul extras al
unei probe, inhibitorii vor deveni și ei diluați. Nu sunt recomandați factori de diluție mai mari, deoarece ar putea
duce la o diluare excesivă a ADN-ului țintă sub limita de detecție. Când inhibițiile nu pot fi rezolvate prin diluare, ar
trebui utilizate metode complete de extracție a ADN-ului, inclusiv mai multe etape de purificare (de exemplu
metode pe bază de coloană de silicagel).

5
Ghid de interpretare a rezultatelor

3. SISTEME DE DETECTARE CU 2 FLUOROFORI

Kituri de detectare a agenților patogeni microbieni bazate pe utilizarea a 2 fluorofori includ sisteme de PCR în timp
real pentru detectarea Salmonella spp. (Salmofast®), Listeria monocytogenes (Listerfast®), Campylobacter termofil
(Campylofast) și Legionella pneumophila (Legiofast® MEDIU). Acestea se bazează pe două sonde colorate cu doi
coloranți fluorofori diferiți, FAM și JOE. Sonda colorată cu FAM indică prezența agentului patogen în eșantion, în
timp ce sonda colorată JOE indică o reacție corectă de amplificare prin utilizarea IAC, care permite detectarea
inhibitorilor PCR, evitând rezultate fals negative.

Rezultatul tipic al unei analize PCR în timp real cu un sistem de detecție bazat pe doi coloranți este un grafic de
amplificare cu o curbă pentru fiecare detector (Figura 4). Deoarece nivelul semnalului de fluorescență este variabil
în funcție de colorant, o valoare prag va fi setată independent pentru fiecare curbă. Semnalul de amplificare pentru
fiecare colorant va fi considerat pozitiv ori de câte ori curba detectorului își depășește valoarea prag. Prin urmare,
probele vor fi considerate pozitive (prezența agentului patogen) ori de câte ori afișează un semnal pozitiv FAM. În
schimb, eșantioanele vor fi considerate negative (absența agentului patogen) numai atunci când semnalul FAM
este negativ, dar semnalul JOE este pozitiv.

FAM (probe pozitive)

JOE (pozitiv
probe și NTC)

Pragul FAM
Prag JOE
FAM (NTC)
Figura 4. Grafic de amplificare obținut cu 2 fluorofori: FAM pentru agentul patogen și JOE pentru IAC (controlul amplificării interne). Rețineți că
scara celor doi fluorofori este foarte diferită, deoarece, din motive optice, nivelul de fluorescență FAM este mai mare decât cel al JOE.

Strategia recomandată pentru a analiza cu ușurință rezultatele constă într-o primă vizualizare a curbelor FAM.
Toate probele cu un semnal FAM pozitiv sunt pozitive pentru agentul patogen indiferent de comportamentul
curbei JOE. În eșantioanele cu semnal FAM negativ, prezența inhibițiilor ar trebui exclusă prin verificarea curbei
JOE, care ar trebui să prezinte un semnal pozitiv și să prezinte valori Ct similare cu cele ale controlului non șablon
(NTC). În eșantioanele în care nici semnalele FAM, nici JOE nu sunt pozitive sau dacă este detectat doar semnalul
JOE, dar Ct este sensibil mai mare decât în NTC, reacția PCR va fi considerată a fi inhibată (Figura 5).

6
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

CANALUL FAM JOE CHANNEL

A B

Neinhibat Neinhibat

probă probă

Inhibat
Inhibat probă probă

Figura 5. Inhibarea PCR. A. Grafic de amplificare pentru canalul FAM unde sunt prezentate o probă pozitivă neinhibată și o probă inhibată. B.
Grafic de amplificare pentru canalul JOE în care semnalul eșantionului inhibat apare semnificativ mai târziu (dacă problema de inhibare ar fi
mai mare, nici măcar nu ar trece pragul).

Trebuie să se țină seama de faptul că valorile ridicate ale Ct sau semnale negative pentru JOE se pot datora, de
asemenea, prezenței unor cantități inițiale mari de ADN de la agentul patogen în probe pozitive, care ar putea
provoca o polarizare a reacției PCR favorizând amplificarea FAM. detector (Figura 6).

JOE CHANNEL CANALUL FAM

A B

Eșantionul 2

Eșantionul
1

Eșantionul
Eșantionul 1 2

Figura 6. Tendința amplificării PCR în probe care conțin cantități inițiale mari de ADN patogen. A. Grafic de amplificare pentru canalul JOE în
care semnalul din eșantionul 1 apare mult mai târziu decât în eșantionul 2, similar cu ceea ce s-ar aștepta în caz de inhibare. B. Grafic de
amplificare pentru canalul FAM în care semnalul din eșantionul 1 apare considerabil mai devreme decât în eșantionul 2, indicând faptul că
abundența inițială ridicată a ADN-ului patogen a provocat o prejudecată în reacția PCR favorizând amplificarea acestuia peste IAC (JOE).

Interpretarea rezultatelor pentru determinarea prezenței / absenței unui agent patogen într-o probă poate fi
rezumată în Tabelul 1.

Tabelul 1. Interpretarea rezultatelor pentru 2 sisteme de detectare microbiană bazate pe fluorofor

Detector de patogeni (FAM) Detector IAC (JOE) Interpretare

Semnal pozitiv Irelevant Eșantion pozitiv (prezența agentului

patogen)
Semnal negativ Semnal pozitiv, Ct nu întârziat comparativ cu NTC
Eșantion negativ (absența agentului patogen)
Semnal negativ Semnal negativ / Ct întârziat comparativ cu NTC
Eșantion inhibat

7
Ghid de interpretare a rezultatelor

4. SISTEME DE DETECȚIE CU 3 FLUOROFORI

Bactoplex este sistemul microbian multiplex pentru detectarea simultană a Salmonella spp. și Listeria
monocytogenes bazată pe utilizarea a trei coloranți: FAM pentru detectarea Listeria monocytogenes, JOE pentru
detectarea Salmonella spp. și CY5 pentru detectarea IAC. Acest sistem permite detectarea diferențială și simultană
a doi agenți patogeni într-o singură reacție, cu un al treilea canal dedicat IAC (Figura 7).

FAM

JOE Prag
Prag

Prag
CY5

Figura 7. Grafic de amplificare obținut cu un sistem de detectare bazat pe utilizarea a trei fluorofori: FAM pentru detectarea
agentului patogen 1, JOE pentru detectarea agentului patogen 2 și CY5 pentru IAC. Rețineți că scala pentru fiecare dintre cei trei
coloranți este foarte diferită. În acest exemplu, proba este pozitivă atât pentru agenții patogeni, cât și pentru IAC.

Ca și în cazul sistemelor de detectare cu doi fluorofori, semnalul de fluorescență FAM poate fi mai mare decât cel al
JOE, care, la rândul său, poate fi mai mare decât fluorescența CY5. Prin urmare, analizarea fiecărui detector separat
poate ajuta la interpretarea rezultatelor (Figura 8).

A B C
FAM
CY5
JOE

Figura 8. Grafic de amplificare pentru fluoroforii FAM (A), JOE (B) și CY5 (C).

Interpretarea rezultatelor pentru a determina prezența / absența a doi agenți patogeni diferiți în aceeași probă
atunci când se utilizează un sistem bazat pe trei fluorofori este rezumată în Tabelul 2. După cum sa menționat mai
sus, cantități inițiale mari de ADN țintă (a unuia sau a ambilor agenți patogeni ) în probe pozitive poate provoca o
prejudecată în reacția de amplificare favorizând detectarea agentului patogen împotriva amplificării IAC. Astfel, un
eșantion va fi considerat negativ (absența ambilor agenți patogeni) numai atunci când semnalele FAM și JOE sunt
negative, dar semnalul CY5 este pozitiv și nu este întârziat în raport cu NTC. Probele fără semnal pozitiv de FAM,
JOE și CY5 (sau cu un semnal CY5 întârziat față de NTC) vor fi considerate a fi inhibate.

8
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

Masa 2. Interpretarea rezultatelor pentru 3 sisteme de detectare microbiană bazate pe fluorofor

Agent patogen 1 Patogenul 2 Detector IAC (CY5) Interpretare

detector (FAM) detector (JOE)
Pozitiv pentru ambii agenți
Pozitiv Pozitiv Irelevant patogeni

Pozitiv Negativ Irelevant Pozitiv pentru agentul patogen 1

Negativ Pozitiv Irelevant Pozitiv pentru agentul patogen 2

Negativ pentru ambii agenți
Negativ Negativ Pozitiv, Ct nu întârziat comparativ cu NTC patogeni

Negativ Negativ Negativ / Ct întârziat comparativ cu NTC Inhibitie

9
Ghid de interpretare a rezultatelor

5. SISTEME DE DETECTARE CU SIGRAN

Legionella spp. A microbianului. sistemul de detectare (Legiofast) se bazează pe utilizarea colorantului SYBRGreen,
care emite fluorescență atunci când este atașat la ADN dublu catenar. Folosind Legiofast® SPECII este o singură curbă
de amplificare care integrează atât semnalele ADN IAC cât și cele ale agentului patogen (Figura 9).

PARCEL DE AMPLIFICARE

4
Legionella 10

6
Legionella 10

NTC

Prag

Figura 9. Grafic de amplificare cu SYBRGreen, unde amplificarea NTC apare mai târziu decât amplificarea eșantioanelor cu 10 6 și
104 copii ale agentului patogen.

În acest caz, amplificarea ADN-ului țintă se distinge de amplificarea ADN-ului IAC prin intermediul unei curbe de
disociere, realizată prin citirea continuă a fluorescenței în timp ce crește treptat temperatura până la atingerea
denaturării complete a ADN-ului. Ca rezultat, graficul de disociere va conține cât mai multe vârfuri pe cât sunt
produse fragmente de ADN diferite în timpul PCR. Acest proces permite, de asemenea, analiza Tm (temperatura de
topire) a fiecărui fragment de ADN originar, care este mai mare pentru agentul patogen decât pentru vârful IAC,
deoarece produsul său de amplificare este mai lung (Figura 10). Valorile Tm de referință pentru IAC și agentul
patogen trebuie să fie determinate în reacții NTC și, respectiv, de control pozitiv.

Rezumând, curba de disociere relevă dacă semnalul obținut corespunde agentului patogen, IAC sau ambelor. În
eșantioanele negative, este de așteptat doar vârful corespunzător IAC, în timp ce în eșantioanele pozitive ar trebui
să apară ambele vârfuri (agent patogen și IAC), deși vârful IAC ar putea dispărea atunci când sunt prezente cantități
inițiale mari de ADN șablon de agent patogen. Inhibarea reacției PCR va fi considerată a se produce atunci când nu
este detectat niciun semnal în graficul de amplificare sau atunci când arată un Ct clar întârziat în comparație cu
NTC.

Dacă niciunul dintre vârfurile corespunzătoare IAC sau agentului patogen nu apare în graficul de disociere, analiza
va fi considerată neconcludentă, chiar dacă un semnal pozitiv este detectat în graficul de amplificare. Alte vârfuri
decât cele ale agentului patogen sau IAC în graficul de disociere nu vor fi luate în considerare în interpretarea
rezultatelor.
10
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

Legion
PARCEL DE DISOCIARE

IAC
6
Legio 10
4
Legio 10

NTC

Figura 10. Grafic de disociere a probelor cu 10 6 și 104 copii ale genei țintă a agentului patogen. Sunt prezentate două vârfuri: vârful
la o temperatură mai mare corespunde agentului patogen, iar celălalt la o temperatură mai mică corespunde IAC. Dimpotrivă, NTC
afișează un singur vârf corespunzător IAC.

Interpretarea rezultatelor pentru a determina prezența / absența agentului patogen este rezumată în Tabelul 3.

Tabelul 3. Interpretarea rezultatelor pentru sistemele de detectare microbiană SYBRGreen

Curba de amplificare Curba de disociere Interpretare

Pozitiv Vârfuri patogen + IAC Eșantion pozitiv

Pozitiv Vârful patogen Eșantion pozitiv (PCR părtinitoare)

Pozitiv, CT nu este întârziat în comparație cu
NTC Vârful IAC Eșantion negativ

Negativ / Ct întârziat comparativ cu NTC Irelevant Eșantion inhibat

11
Ghid de interpretare a rezultatelor

6. CANTIFICAREA PE PCR ÎN TIMP REAL

PCR în timp real permite cuantificarea probelor, ceea ce înseamnă determinarea numărului de copii ale genei țintă
prezente într-o probă dată. Pentru a utiliza această aplicație a tehnicii este necesară o curbă standard, care poate fi
construită pur și simplu cu diluții seriale de 10 ori dintr-o probă de concentrație cunoscută de ADN patogen (adică
utilizând standardul de cuantificare PCR microbian sau o soluție purificată, cuantificată de ADN genomic de la
agentul patogen). În diagrama de amplificare a diluției seriale a unei soluții de ADN, valoarea Ct este invers
proporțională cu concentrația inițială de ADN șablon (Figura 11).

7 6 5 4 3 2 1
10 10 10 10 10 10 10

Figura 11. Grafic de amplificare a unei diluții seriale de 10 ori cu un interval de la 10 7 la 101 copii ale genei țintă. Rețineți că
fluorescența finală nu este întotdeauna proporțională cu cantitatea inițială de ADN șablon. În schimb, valorile Ct sunt întotdeauna
invers proporționale cu numărul inițial de gene țintă din eșantion.

Valorile Ct pot fi reprezentate grafic în funcție de concentrația ADN (de obicei sub formă de copii genice / µl) la
scară logaritmică (Figura 12). Apoi, numărul inițial de copii ale genei țintă într-o probă necunoscută poate fi obținut
prin interpolare a valorii Ct a acesteia la ecuația curbei standard. Trebuie să se țină seama de faptul că, în funcție
de sistemul de cuantificare utilizat, numărul de copii de genă este echivalent cu numărul de bacterii patogene
numai atunci când genele cu o singură copie sunt utilizate ca ținte (toate kiturile microbiene se bazează pe gene cu
o singură copie, cu excepția Legiofast® SPECII). Trebuie remarcat faptul că rezultatul cuantificării unei probe
necunoscute ar putea depinde și de eficiența extracției ADN-ului.

1
10 Figura 12. Curba standard
arătând valorile Ct în relație
la concentrația inițială
2 3
10 10 copii ale genei țintă, obținute prin a
diluarea serială de 10 ori a unei probe
care conține 107 copii / µl ale
4
10 5 gena țintă. Prin interpolare
10
în curba standard a Ct de
un eșantion necunoscut este posibil
pentru a calcula numărul de exemplare
6
10 107
a genei țintă pe care o conține.
12
 Sisteme de detectare a agenților patogeni prin PCR în timp real

7. CONTAMINAREA PCR ÎN TIMP REAL

Contaminarea PCR în timp real este detectată atunci când semnalul agentului patogen trece linia de prag în NTC
sau, în cazul sistemelor de detectare bazate pe SYBRGreen, când vârful corespunzător agentului patogen apare în
graficul de disociere în NTC. Prezența contaminării invalidează rezultatele obținute, deoarece face imposibilă
distincția dintre un rezultat pozitiv adevărat și un rezultat pozitiv cauzat de contaminare. Apoi, analiza trebuie
repetată luând toate măsurile posibile pentru a evita noi incidente de contaminare.

Datorită sensibilității mari a tehnicii PCR, nu este neobișnuit ca unele eșantioane negative sau NTC să treacă linia
de prag dincolo de ciclul 35 (Figura 13). Acest semnal slab poate corespunde unei mici contaminări cauzate de
aerosolii ADN țintă produse în timpul pregătirii plăcii PCR sau, de asemenea, unei prezențe minime a agentului
patogen în probă. Dacă se consideră că acest semnal slab se datorează unui efect de contaminare de mică
importanță, șeful laboratorului, întotdeauna pe propria răspundere, poate decide că acest lucru nu afectează
rezultatele și, prin urmare, consideră validă analiza. Cu toate acestea, în caz de îndoială, analiza ar trebui repetată,
îmbunătățind, dacă este posibil, pregătirea probei și încărcarea PCR cu ADN-ul extras.

Eșantion pozitiv
Eșantion pozitiv?

NTC

Eșantion pozitiv?

Figura 13. Grafic de amplificare care arată un eșantion clar pozitiv și două probe îndoielnice care, împreună cu NTC, trec pragul
între ciclurile 35 și 38. Nu este posibil să se verifice dacă aceste probe sunt într-adevăr pozitive sau dacă sunt cauzate de o
contaminare slabă cu aerosoli. În cazul NTC este evident că semnalul pozitiv este cauzat de contaminarea cu aerosoli, deoarece nu
este de așteptat să conțină ADN țintă. Este important să conștientizăm faptul că efectul acestei contaminări slabe este neglijabil în
eșantioanele clar pozitive.

13
Ghid de interpretare a rezultatelor

8. CURVE DE AMPLIFICARE ATIPICĂ

Ocazional, se pot obține curbe de amplificare atipice. Acest lucru se poate întâmpla dacă ADN-ul extras conține
substanțe care modifică emisia de fluorescență de către coloranții fluorofori sau detectarea fluorescenței de către
termociclator. Unele curbe atipice pot fi, de asemenea, cauzate de o configurație greșită a sistemului de citire al
termociclatorului. Orice curbă care nu prezintă cele trei faze descrise anterior în Figura 1 trebuie aruncată și proba
trebuie analizată din nou. Figura 14 prezintă două exemple de curbe de amplificare atipice.

A Figura 14. Curba cu o formă de platou

dublu (A) și curba cu o formă de roller
coaster care trece pragul de mai multe
ori (B).

Mostre pozitive? Eșantion pozitiv

IAC

Eșantion pozitiv

Mostre pozitive?

IAC

14
 Notă juridică

Prezentul ghid este destinat numai utilizatorilor de produse Microbial. Microbial refuză orice responsabilitate derivată dintr-o utilizare incorectă
a acestui ghid sau din aplicarea acestui ghid la seturi și / sau detectoare de la alți producători. Cifrele prezentate în acest document au fost
obținute cu un termociclator Mx3005P (Stratagene), deci pot fi diferite de cele obținute de aceiași detectoare pe alte platforme. Liniile
directoare prezentate în acest document sunt doar informative și nu sunt menite să creeze obligații legale sau obligatorii pentru Microbial SL
 © Microbial SL
Parc Científic de la UdG
Edifici J. Casademont, E
C / Pic de Peguera, 15
E‐ 17003 Girona

Tel. 972 183236

Fax. 972 183256

http://www.microbial‐systems.com
V info @ microbian ‐
systems.com