CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO

(CICLO DE LOS ÁCIDOS TRICARBOXÍLICOS

O CICLO DE KREBS)
• Tanto en procariontes como en eucariontes, es la ruta
metabólica común para la oxidación de todas las moléculas
combustibles: carbohidratos, grasas y aminoácidos.

• La mayoría de estas moléculas entran al ciclo como acetil-

CoA.

• También provee de intermediarios para biosíntesis, por lo

que se dice que es anfibólico, es decir que opera en el
catabolismo y anabolismo.

• En eucariotes, tiene lugar en la matriz mitocondrial, en

procariotes en el citoplasma.

Rosario A. Muñoz Clares

 MITOCONDRIA

Espacio Matriz
intermembranal

Membrana
mitocondrial
interna

Membrana
mitocondrial
externa

Rosario A. Muñoz Clares

 CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
• Entran dos átomos de carbono como acetil-CoA y salen dos átomos
de carbono como CO2, conservándose la energía liberada para la
síntesis de ATP.

Rosario A. Muñoz Clares

 FORMACIÓN DE ACETIL CoA A PARTIR DE
PIRUVATO

• Piruvato es convertido a acetil CoA por el complejo de la

piruvato deshidrogenasa, que cataliza un paso irreversible
clave que conecta la glucólisis con el ciclo del ácido cítrico.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIÓN DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA

• Consiste en la descarboxilación oxidativa del piruvato

TPP
Lipoamida
FAD

Rosario A. Muñoz Clares

 ETAPAS DE LA REACCIÓN DE LA
PIRUVATO DESHIDROGENASA

• La formación de acetil CoA a partir de piruvato ocurre en tres etapas:

descarboxilación, oxidación, y transferencia del acetilo al CoA.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DEL COMPLEJO DE LA PIRUVATO
DESHIDROGENASA
• La descarboxilación oxidativa del piruvato se lleva a
cabo por un complejo multienzimático formado por tres
tipos de enzimas y cinco cofactores.

• Enzimas:
– El componente piruvato deshidrogenasa (E1).
– La dihidrolipoil transacetilasa (E2).
– La dihidrolipoil deshidrogenasa (E3).

• Cofactores:
– Tiamina pirofosfato (TPP), lipoamida, y FAD, que son grupos
prostéticos.
– CoA y NAD+, que son coenzimas solubles.

Rosario A. Muñoz Clares

COMPLEJO MULTIENZIMÁTICO DE LA
PIRUVATO DESHIDROGENASA

Rosario A. Muñoz Clares

 COMPLEJO MULTIENZIMÁTICO DE LA
PIRUVATO DESHIDROGENASA DE E. COLI

• E2 forma el núcleo del

complejo multienzimático.
• El complejo de mamíferos
es mucho mayor.

Rosario A. Muñoz Clares

 COMPLEJOS MULTIENZIMÁTICOS
• Un complejo multienzimático es un grupo de enzimas
asociadas no covalentemente que catalizan dos o más pasos
secuenciales en una ruta metabólica.
• Constituyen un paso adelante en la evolución de la eficiencia
catalítica.
• Poseen las siguientes ventajas mecanísticas sobre las
enzimas individuales:
– La distancia entre los sitios activos a través de la cual los
sustratos deben difundir se hace mínima, lo que lleva a un
incremento de velocidad de las reacciones.
– Los intermediarios metabólicos se canalizan entre los sitios
activos de enzimas sucesivas, lo que lleva a una minimización de
reacciones laterales.
– Las reacciones catalizadas por estos complejos pueden ser
reguladas en forma coordinada.
Rosario A. Muñoz Clares
• El anillo tiazolio constituye el grupo funcional catalíticamente activo.
• Su C2-H es ácido porque el nitrógeno cuaternario estabiliza el
carbanion formado cuando se disocia el protón.
• El carbanión es la forma activa de la coenzima.

Hidrógeno disociable

Carbono reactivo

Tiamina pirofosfato (TPP)

Rosario A. Muñoz Clares
 TIAMINA PIROFOSFATO
(TPP)
• El TPP es la coenzima más usada en la descarboxilación de α-
cetoácidos, debido a la capacidad de su anillo tiazolio de unirse
al grupo carbonilo y actuar como un “sumidero de electrones”.

• Es también el coenzima de las trancetolasas, por lo que se

considera como acarreador de grupos aldehído activados.

• Se forma a partir de tiamina (vitamina B1), que no es ni

sintetizada ni almacenada por los animales.

• La deficiencia de tiamina produce beriberi, una enfermedad fatal

que se caracteriza por problemas neurológicos que producen
dolor, parálisis y atrofia de las extremidades y/o fallo cardiaco.

• Beriberi era frecuente entre los orientales que consumen mucho

arroz y en personas alcohólicas malnutridas.
Rosario A. Muñoz Clares
• La lipoamida consiste en ácido lipoico unido por un
enlace amida al grupo amino de la cadena lateral de un
residuo de lisina de E2.

Ácido lipoico Rosario A. Muñoz Clares

LIPOAMIDA

• El disulfuro cíclico de la lipoamida se

reduce a un ditiol al tiempo que se oxida
el sustrato.

•El largo brazo de la lipoamida le permite

moverse entre los sitios activos de E1 y
E2, y entre los sitios activos de E2 y E3.

Esto permite que una subunidad E1 pueda

acetilar numerosas lipoamidas de las
subunidades E2, y que una subunidad E3
pueda reoxidar numerosos grupos
dihidrolipoamida de las subunidades E2.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIÓN DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA
• la formación de acetil CoA a partir de piruvato ocurre en
cinco reacciones:
– I. Descarboxilación del piruvato por la E1, que tiene como grupo
prostético al TPP. Esta reacción, que es idéntica a la de la
piruvato descarboxilasa, forma un intermediario hidroxietil-TPP.
– II. Transferencia del intermediario hidroxietil-TPP a la E2, que
tiene como grupo prostético a la lipoamida. El hidroxietilo es
oxidado a acetilo con la concomitante reducción de la lipoamida.
Se forma acetil-lipoamida y se regenera la E1 activa.
– III. Transferencia del grupo acetilo al CoA catalizada por E2. Se
forma acetil CoA y E2-dihidrolipoamida
– IV. Reoxidación de la lipoamida por la E3. La reacción es idéntica
a la de la glutatión reductasa.
– V. Reoxidación de E3 por FAD y NAD+.

Rosario A. Muñoz Clares

 I. DESCARBOXILACIÓN DEL PIRUVATO
• Esta reacción es catalizada por la E1.

Carbanion of TPP

Rosario A. Muñoz Clares

 II. TRANSFERENCIA DEL HIDROXIETIL-TPP A
LA LIPOAMIDA

• El carbanion hidroxietilo es oxidado a un grupo acetilo con la

concomitante reducción del puente disulfuro de la lipoamida.
• Se forma un tioéster, que es una foram activada de un acetilo.
• Esta reacción es catalizada por la E1.

Rosario A. Muñoz Clares

III. TRANSFERENCIA DEL GRUPO ACETILO
AL CoA
• Se forma u nuevo tioéster, ahora con el CoA
• Esta reacción es catalizada por E2.

Rosario A. Muñoz Clares

 IV. REOXIDACIÓN DE LA LIPOAMIDA
V. REOXIDACIÓN DE E3
• Estas reacciones son catalizadas por E3, enzima que tiene un
puente disulfuro .
• Primero ocurre una reacción de intercambio de disulfuro entre la E3
y la dihidrolipoamida (reacción esencialmente idéntica a la de la
glutatión reductasa).
•Después, los grupos tioles de E3 se reoxidan por el FAD.
•Finalmente, el FADH2 es oxidado por NAD+.
• En esta enzima, el par FAD/FADH2 tiene un potencial redox inusual
lo que le permite transferir electrones al NAD +.

Rosario A. Muñoz Clares

ESQUEMA DE LA REACCIÓN DE LA
PIRUVATO DEHIDROGENASA

Rosario A. Muñoz Clares

 REGULACIÓN DEL COMPLEJO
MULTIENZIMÁTICO DE LA PIRUVATO
DESHIDROGENASA
• La formación de acetil CoA a partir de piruvato es un
paso irreversible clave para animales, porque no pueden
convertir de regreso el acetil CoA en glucosa.

• La actividad de este complejo multienzimático está por

ello muy regulada.

• Su regulación se lleva a cabo por:

– inhibición por producto (por NADH y acetil CoA).
– modificación covalente (fosforilación/desfosforilación) de
la subunidad E1. Esta modificación ocurre sólo en células
eucarióticas y está sujeta también a regulación.

Rosario A. Muñoz Clares

 REGULACIÓN POR FOSFORILACIÓN DE LA
PIRUVATO DESHIDROGENASA
• La piruvato deshidrogenasa cinasa y la fosfatasa también forman parte
del complejo multienzimático.

Rosario A. Muñoz Clares

 REGULACIÓN DEL COMPLEJO
MULTIENZIMÁTICO DE LA PIRUVATO
DESHIDROGENASA

• Acetil CoA y NADH son productos de la oxidación de ácidos

grasos, de manera que la inhibición por estos compuestos de la
piruvato deshidrogenasa evita el uso de carbohidratos cuando se
dispone de combustibles lipídicos.

• El Ca2+ es un segundo mensajero que señala la necesidad de

energía (por ejemplo, para la contracción muscular).

• La insulina activa indirectamente a la piruvato deshidrogenasa

fosfatasa. De esta forma promueve la síntesis de acetil CoA, que
además de ser combustible para el ciclo del ácido cítrico es el
precursor de los ácidos grasos.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIONES DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
•Consta de ocho reacciones.
•El ciclo funciona
catalíticamente debido a que
el oxalacetato se regenera,
de manera que se pueden
oxidar un sinnúmero de
grupos acetilo mediante una
sola molécula de oxalacetato.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA CITRATO SINTASA

• Consiste en una condensación aldólica seguida por una hidrólisis

para eliminar el CoA.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA CITRATO SINTASA

• La hidrólisis exergónica del citril CoA desplaza la

reacción hacia el citrato.

• La citrato sintasa sufre un importante cambio

conformacional cuando une al oxalacetato (ajuste
inducido), lo que permite que se una el acetil CoA y que
se desplace al agua del sitio activo.

• La enzima hidroliza al citril CoA pero no al acetil CoA.

Esto se logra porque:
– Acetil CoA no se une hasta que lo ha hecho el oxalacetato.
– Los residuos catalíticos importantes para la hidrólisis no
están correctamente posicionados hasta que se forma el
citril CoA.
Rosario A. Muñoz Clares
 REACCIÓN DE LA ACONITASA
• El citrato debe ser isomerizado para que pueda ocurrir una
oxidación, porque un alcohol terciario no es fácilmente oxidable
pero si lo es un alcohol secundario.
• La isomerización se lleva a cabo por una deshidratación
seguida por una hidratación.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA ACONITASA

• La aconitasa contiene hierro que no forma parte de un

grupo hemo, sino que forma un centro hierro-azufre
(4Fe-4S).

• Sus cuatro átomos de hierro forman un complejo con

cuatro sulfuros inorgánicos y cuatro azufres de
cisteínas.

• La adición no enzimática de H2O al doble enlace del cis-

aconitato produciría cuatro estereo-isómeros, pero la
enzima produce sólo un estereo-isómero del isocitrato.

Rosario A. Muñoz Clares

ESTRUCTURA DE LA ACONITASA

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA ISOCITRATO
DESHIDROGENASA

• El intermediario de la reación, el oxalsuccinato, es un β-cetoácido

que espontaneamente se descarboxila en el sitio activo de la enzima.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIÓN DEL COMPLEJO MULTIENZIMÁTICO DE
LA α-CETOGLUTARATO DESHIDROGENASA
• Consiste en la descarboxilación oxidativa del α-cetoglutarato.
• El mecanismo de reacción es muy parecido al del complejo
multienzimático de la piruvato deshidrogenasa.
• Esta reacción genera un enlace tioéster rico en energía.

TPP, FAD

Lipoamida

Rosario A. Muñoz Clares

 COMPLEJO DE LA α-CETOGLUTARATO
DESHIDROGENASA

• El complejo de la α-cetoglutarato deshidrogenasa está

formado por tres tipos de enzimas:
– El componente α-cetoglutarato deshidrogenasa (E1´).
– La dihidrolipoil transuccinalasa (E2´).
– La dihidrolipoil deshidrogenasa (E3´, que es idéntica a la E3 de
la piruvato deshidrogenasa).

• Los cofactores son:

– Tiamina pirofosfato (TPP), lipoamida, y FAD, que son grupos
prostéticos.
– CoA y NAD+, que son coenzimas solubles.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA SUCCINIL-CoA
SINTETASA
• Se aprovecha la energía del enlace tioéster para sintetizar GTP
a partir de GDP y Pi.
• Se produce por tanto una fosforilación a nivel de sustrato.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA SUCCINIL-CoA
SINTETASA
• ¿Cómo se acopla la energía libre de hidrólisis del
succinil CoA con la síntesis del GTP?
– La energía libre de hidrólisis se conserva gracias a la
formación sucesiva en el sitio activo de la enzima de
compuestos ricos en energía: primero el succinil fosfato,
luego un residuo de fosfohistidina y finalmente GTP.

• GTP puede ser usado directamente como donador de

un grupo fosforilo en la síntesis de proteínas o de ATP
a partir de ADP, o puede funcionar en los procesos de
transducción de señales.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIÓN DE LA SUCCINIL-CoA
SINTETASA

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIONES DEL CICLO DEL ÁCIDO
CÍTRICO

• Hasta este momento un equivalente de acetilo se ha oxidado

hasta CO2 y se han producido dos NADHs y un GTP.
• Para completar el ciclo se tiene que regenerar oxalacetato,
lo que se consigue en tres reacciones.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA SUCCINATO
DESHIDROGENASA

• Esta enzima tiene como grupo prostético al FAD, que es el

aceptor de electrones en reacciones que eliminan dos átomos
de hidrógeno (y por tanto dos e-) de un sustrato.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA SUCCINATO
DESHIDROGENASA
• La succinato deshidrogenasa es una proteína que contiene
tres tipos de centros hierro-azufe (Fe-S).

• A diferencia del resto de las enzimas del ciclo del ácido

cítrico, ésta es una proteína integral de la membrana
mitocondrial interna.

• Esto es fundamental para poder regenerar el FAD a partir

del FADH2 por medio de la cadena de transporte de
electrones de la membrana ingterna mitocondrial.

• Se transfieren los dos electrones del FADH2 directamente a

los centros Fe-S, y de aquí pasan a la cadena de transporte
de electrones mitocondrial que los lleva hasta el O2.
Rosario A. Muñoz Clares
 REACCIÓN DE LA FUMARASA
• La fumarasa cataliza la hidratación del doble enlace del fumarato
para formar L-malato.

Rosario A. Muñoz Clares

REACCIÓN DE LA FUMARASA

• La fumarasa es una enzima altamente

estereoespecífica de manera que sólo
forma el isómero L del malato.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA MALATO DESHIDROGENASA

• La enzima oxida el grupo alcohol secundario del malato a la

cetona correspondiente, con la concomitante reducción del NAD+.

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIÓN DE LA MALATO DESHIDROGENASA

• La reacción está muy desplazada hacia malato por lo

que las concentraciones de oxalacetato son muy bajas.

• Ésta es la razón por la que la síntesis de citrato ocurre

en una reacción muy exergónica, que puede parecer un
desperdicio de energía, para que de esta manera se
lleve a cabo aun cuando las concentracioens de
oxalacetato son tan bajas.

Rosario A. Muñoz Clares

PRODUCTOS DEL CICLO DEL ÁCIDO
CÍTRICO

Rosario A. Muñoz Clares

 ESTEQUIOMETRÍA DEL CICLO DEL
ÁCIDO CÍTRICO
• La estequiometría global del ciclo del ácido cítrico es:

Acetil CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O

2 CO2 + 3 NADH + 2 H+ + FADH2 + GTP + CoA

• Los dos carbonos que entran al ciclo son diferentes de los

dos carbonos que salen como CO2.
• Los tres pares de electrones de los 3 NADHs producen 9
ATPs en la fosforilación oxidativa, y el par de electrones
del FAD produce 2 ATPs. Una vuelta del ciclo produce por
tanto 12 ATPs.

Rosario A. Muñoz Clares

 REGULACIÓN DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO

• El ciclo del ácido cítrico sólo opera bajo condiciones aeróbicas

porque en la mitocondria el NAD+ y el FAD sólo pueden ser
regenerados por transferencia de los electrones del NADH y del
FADH2 al O2.

• La velocidad del ciclo se ajusta en forma precisa a las

necesidades de ATP de la célula, de manera que la entrada de los
fragmentos de dos carbonos y la velocidad del ciclo disminuyen
cuando la célula tiene niveles altos de ATP.

• Los puntos importantes de control son los pasos limitantes de la

velocidad, que son las reacciones catalizadas por:
– La citrato sintasa
– La isocitrato dehidrogenasa
– La α-cetoglutarato deshidrogenasa
Rosario A. Muñoz Clares
 REGULACIÓN DEL CICLO DEL ÁCIDO
CÍTRICO
• El ciclo del ácido cítrico se regula en forma relativamente sencilla
por:
– disponibilidad de sustratos
– inhibición por productos
– inhibición competitiva (retroinhibición) y activación por otros
intermediarios del ciclo.
• Los más importantes reguladores son acetil CoA y oxalacetato (los
sustratos del ciclo), y NADH (el producto).
• ATP, ADP y Ca2+ son reguladores alostéricos.
• En músculo, Ca2+ activa la contracción muscular, la degradación de
glucógeno y la producción de ATP a través del ciclo del ácido cítrico.
• En el hígado la función y regulación del ciclo es más compleja que
en músculo porque el hígado sintetiza muchas sustancias partir de
los intermediarios del ciclo (glucosa, ácidos grasos, colesterol,
porfirinas).
Rosario A. Muñoz Clares
REGULACIÓN DE LA CITRATO SINTASA

Rosario A. Muñoz Clares

REGULACIÓN DE LA ISOCITRATO
DESHIDROGENASA

Rosario A. Muñoz Clares

REGULACIÓN DE LA α-CETOGLUTARATO
DESHIDROGENASA

Rosario A. Muñoz Clares

REGULACIÓN DEL CICLO DEL ÁCIDO
CÍTRICO

Rosario A. Muñoz Clares

REGULACIÓN COORDINADA DEL CICLO
DEL ÁCIDO CÍTRICO

Rosario A. Muñoz Clares

 FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

• El ciclo del ácido cítrico es una importantísima

vía catabólica.

• Sin embargo, sus intermediarios también son

usados en rutas biosintéticas (anabolismo) por
lo que el ciclo cumple una función anfibólica.

Rosario A. Muñoz Clares

CONEXIÓN DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO
CON RUTAS BIOSINTÉTICAS

Rosario A. Muñoz Clares

 REACCIONES CATAPLERÓTICAS
• Son las reacciones que usan intermediarios del ciclo
del ácido cítrico.

• No sólo contribuyen a formar compuestos importantes,

sino que además evitan la acumulación de
intermediarios del ciclo (por ejemplo cuando hay una
alta degradación de aminoácidos).

• Las reacciones catapleróticas tienen lugar en las

siguientes vías metabólicas:
– Biosíntesis de glucosa (gluconeogénesis).
– Biosíntesis de lípidos.
– Biosíntesis de aminoácidos.
– Biosíntesis de porfirinas.
Rosario A. Muñoz Clares
 REACCIONES ANAPLERÓTICAS

• Los intermediarios del ciclo del ácido cítrico sólo se requieren en

concentraciones catalíticas para mantener su función degradativa.

• Todas las rutas biosintéticas que usan intermediarios del ciclo del ácido
cítrico como materiales de partida necesitan energía libre.

• Por ello, la función del ciclo no puede interrumpirse y los intermediarios

que son sacados del ciclo deben reponerse.

• Las reacciones que reabastecen al ciclo de sus intermediarios se llaman

anapleróticas.

• La más importante de éstas es la de la piruvato carboxilasa, una enzima

que también participa en la gluconeogénesis.

Rosario A. Muñoz Clares

 RUTAS DEGRADATIVAS QUE PRODUCEN
INTERMEDIARIOS DEL CICLO DEL ÁCIDO
CÍTRICO

• Algunas rutas degradativas producen intermediarios del ciclo del

ácido cítrico:

– La oxidación de ácidos grasos de cadena impar produce succinil-CoA.

– La degradación de los aminoácidos metionina, isoleucina y valina

también produce succinil CoA.

– La degradación de los aminoácidos aspartato, fenilalanina y tirosina

produce fumarato.

– La transaminación y desaminación de aminoácidos produce

α-cetoglutarato y oxalacetato.

Rosario A. Muñoz Clares

FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

Rosario A. Muñoz Clares

FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

Rosario A. Muñoz Clares

FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

Rosario A. Muñoz Clares

FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

Rosario A. Muñoz Clares

FUNCIONES ANFIBÓLICAS DEL CICLO DEL
ÁCIDO CITRÍCO

Rosario A. Muñoz Clares

 CICLO DEL GLIOXILATO
• Permite a las plantas obtener glucosa a partir de acetil CoA.
• Ocurre en los glioxisomas.

Rosario A. Muñoz Clares