Bilirubina totala Abbott Clinical Chemistry

Documente de referinta

- standardul SR EN ISO/CEI 17025/2005,

- Manualul calitatii laboratorului,
- Protocolul de lucru al kitului,
- Manualul de utilizare al analizorului.

Utilizare

Se foloseste pentru determinarea cantitatii de bilirubina totala din ser uman sau plasma .

Introducere

Eritrocitele sunt distruse in special in splina. Hemul rezultat, dupa imdepartarea fierului,
este transformat inh bilirubina. Prin acest proces se formeaza aprox. 80% din totalul de
300mg bilirubina formata zilnic. Alte surse de bilirubina sunt distrugerea mioglobinei si
citocromilor si catabolismul eritrocitelor imature in maduva osoasa. Odata formata
bilirubina se leaga de albumina (proteina transportoare) si este transportata la ficat.
Aceasta fractiune de bilirubina reprezinta bilirubina indirecta sau neconjugata. La nivelul
ficatului bilirubina este conjugata cu acidul glucuronic sub actiunea enzimei uridyl
difosfat glucuroniyl transferaza. Bilirubina conjugata sau directa este transportata prin
sistemul biliar pana in intestin unde este metabolizata de catre o bacterie pana la un grup
de produsi cunoscut sub denumirea de stercobilinogen. Eliminarea este aproape completa
si nivelul de bilirubina din ser este neglijabil.
Bilirubina totala reprezinta suma dintre fractiunile de bilirubina conjugata si neconjugata.
Nivelul de bilirubina este important in obstructii hepatice, hepatite, ciroze, deficiente
enzimatice ereditare.

Principiul procedurii

Metodele traditionale de masurare a bilirubinei se bazeaza pe reactia dintre bilirubina cu

un reactiv diazo formand azobilirubina, un compus colorat. Reactia poate fi accelerata
prin adaugare de metanol, cafeina, dimetil sulfoxid (DMSO). Modificarea acestor metode
consta in adaugarea agentilor de solubilizare.
Bilirubina totala se cupleaza cu reactivul diazo in prezenta agentului de solubilizare si
formeaza azobilirubina. Reactia este accelerata prin adaugarea agentului de solubilizare.
Cresterea absorbantei la 548nm, datorita azobilirubinei, este direct proportionala cu
concentratia de bilirubina totala din proba de analizat.
Reactivi

Kitul contine 2 reactivi sub forma de solutie gata de folosire :

Reactiv 1 (R1) 10x39mL
Reactiv 2 (R2) 10x13mL

Compozitia reactivilor

Reactivi Concentratie
R1: agent de solubilizare 1.3%

R2 : 2,4 dicloroanilina 0.81g/L

HCl 5.563g/L
Azotat de sodiu 0.345g/L
Agent de solubilizare 2.00%

Manuirea si pastrarea reactivilor

Manuire

Se indeparteaza bulele de aer, daca acestea sunt prezente in recipientul cu reactiv. Pentru
a evita risipirea reactivului, bulele de aer nu se indeparteaza folosind micropipeta ci se
lasa reactivul la temperatura de pastrare. Bulele de aer pot impiedica detectarea corecta a
nivelului de reactiv.

Pastrare

Reactivul nedeschis este stabil pana la data expirarii, daca se pastreaza la 2-80C.
Reactivul trebuie sa fie limpede.
Stabilitatea reactivului este de 28zile, daca acesta se pastreaza desfacut in suportul pentru
reactivi de la nivelul aparatului.

Avertismente si precautii

Precautii pentru utilizatori :

- se foloseste numai pentru diagnosticul in vitro,

- nu se foloseste dupa data expirarii,
- nu se amesteca reactivii din loturi diferite,
- reactivul R2 contine acid hidrocloric(HCl) care poate cauza arsuri. Este iritant pentru
piele si ochi. In cazul contactului cu ochii se spala imediat cu multa apa si se consulta
medicul. Cand se lucreaza cu reactivii se folosesc manusi de protectie si, de asemenea ,se
protejaza fata si ochii. Materialul nefolosit si recipientii se arunca in locuri special
amenajate
Recoltarea probelor

Se utilizeaza serul sau plasma.

Nu se lucreaza probele lipemice sau hemolizate.
Serul : sangele se colecteaza in vacuete de sticla sau plastic prin recoltare din vena. Dupa
formarea completa a chiagului serul se separa prin centrifugare. Pentru unele probe, in
special cele provenite de la pacientii care fac tratament cu anticoagulant timpul de
formare a chiagului este mai mare. Daca probele sunt centrifugate inainte de formarea
completa a chiagului, prezenta fibrinei poate duce la rezultate eronate.
Plasma : sangele se recolteaza in eprubete cu anticoagulant. Plasma se separa prin
centrifugare.

Se recomanda ca materialele provenite din surse umane sa fie manuite cu atentie.

Pastrarea probelor

Temperatura ser/plasma
20-250C 1zi
2-80C 7zile
-200C 6luni
-800C 6luni

Probele nu se ingheata pe perioade mai lungi de timp decat cele specificate.

Inainte de a fi testate serul sau plasma trebuie sa atinga temperatura camerei.

Materiale furnizate

Reactivi de bilirubina.

Materiale necesare nefurnizate

 Analizor Aeroset System sau Architect

 Calibrator – calibrator 1: 3x5mL
- calibrator 2: 3x5mL
 Controale
 Solutie salina necesara diluarii probelor , atunci cand este cazul. ( se dilueaza cu
solutie salina probele care se afla in afara limitelor procedurii)

Analizorul are posibilitatea diluarii automate a probelor de analizat. Pentru informatii

suplimentare se consulta sectiunea 2 din manualul de operare al analizorului.

Procedura de lucru

Se respeta modul de lucru al analizorului.

Calibrarea

Calibrarea este stabila 14 zile si se reface in cazul schimbarii lotului de reactiv.

Calibrarea se verifica cu cel putin 2 nivele de control. Daca rezultatele controalelor sunt
in afara limitelor admise se reface calibrarea.
Pentru detalii despre cum se calibreaza un test se consulta sectiunea 6 a manualului de
operare al aparatului.

Controlul calitatii

Se recomanda procesul de control al calitatii pentru a asigura in permanenta calitatea

echipamentului si a reactivilor folositi in laborator, pentru a intreprinde eventuale actiuni
corective si pentru obtinerea unor rezultate corecte in urma analizarii probelor.
- se folosesc 2 nivele de control ( normal si patologic) la fiecare 24ore, odata cu probele
pacientilor,
- daca rezultatele controalelor nu se incadreaza in limite, valorile pacientilor pot fi puse la
indoiala. In acest caz se reface calibrarea.

Valori normale

Ser/plasma Limite normale(mg/dL)

Adult 0.2-1.2

Se recomanda ca fiecare laborator sa-si stabileasca propriile valori normale bazate pe

particularitatile locale si caracteristicile populatiei.