Divulgazione Scientifica CRPR/InForma - rivista semestrale del Centro Regionale Progettazioe e Restauro - N.
1 - Anno 2006
BIOTECNOLOGIE PER I BENI CULTURALI
Innovazioni scientifiche Bio-cleaning, Bio-reinforcing
Franco Palla*
In questi ultimi anni le biotecnologie hanno fornito pro-
cedure innovative utilizzabili, per la caratterizzazione
del deterioramento di substrati sia organici che inorga-
nici, in progetti di conservazione/restauro delle opere
d’arte. In particolare, l’applicazione di questi protocolli
tecnologici fornisce informazioni sia sulla natura dei
consorzi microbici che colonizzano un substrato sia
sulle loro potenzialità biodeteriogene, che sulla possibi-
lità di controllarli e, recentemente, anche per lo sviluppo
di nuove procedure per la pulitura e il consolidamento di
manufatti deteriorati. Nell’attenta revisione pubblicata
da Gonzalez nel 2003, sono presentate molte delle me-
todologie molecolari già in uso o che a breve e lungo ter-
mine saranno utilizzate per una caratterizzazione sempre
più precisa dei consorzi microbici coinvolti nel deterio-
ramento delle opere d’arte e/o presenti nell’aerosol di
ambienti utilizzati per la loro conservazione e fruizione.
Molti microrganismi che colonizzano i manufatti arti-
stici ne inducono il deterioramento poiché producono e
secernono proteine enzimatiche come amilasi, cellulasi,
lipasi, proteasi, in grado di modificare la struttura chi-
mica del substrato. Diversi studi mostrano che l’azione
“distruttiva”, conseguente all’attività metabolica micro-
bica, può essere utilizzata per la rimozione biologica di
patine superficiali su opere d’arte, o addirittura conver-
tita in azione “costruttiva” perché in grado di indurre la
formazione di precipitati di calcite su manufatti a base
carbonatica. La selezione e caratterizzazione moleco-
lare, di ceppi batterici con specifiche attività cellulari
trovano un’interessante applicazione in trattamenti di
biopulitura e biorecupero di manufatti artistici.
LA RIMOZIONE BIOLOGICA, BIOPULITURA, DI
PATINE
Solitamente tra le prime fasi del restauro di un’opera
d’arte è prevista la pulitura, azione che permette la rimo-
zione dei materiali depositati sulla superficie modifi-
cando immediatamente l’aspetto estetico del manufatto.
Poiché i materiali da rimuovere si trovano a diretto con-
tatto con la superficie dell’opera, la pulitura può causare
dei danni irreversibili quindi deve essere seguita in
modo selettivo, deve avvenire attraverso la rimozione di
strati successivi di deposito, differenziando l’azione tra
zona e zona, alleggerendo o rimovendo in profondità,
senza entrare in contatto diretto con i materiali originali.
La biopulitura sembra soddisfare questi canoni d’accu-
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ratezza, in quanto la ricerca nel campo della biologia
molecolare e della microbiologia ha permesso la sele-
zione e caratterizzazione di numerosi ceppi batterici con
specifiche attività cellulari, alcuni già utilizzati per il ri-
sanamento di ambienti inquinati, applicabili con buoni
risultati. In particolare, è stato possibile identificare e
purificare un ampio numero di molecole biologiche di
cui è stata valutata l’efficienza e la selettività d’azione,
proprio da quei biodeteriogeni (batteri, funghi, attino-
miceti) in grado di innescare il deterioramento di sub-
strati organici e inorganici. In generale, i microrganismi
presentano enormi potenzialità nell’indurre trasforma-
zioni biochimiche sia perché utilizzano il substrato co-
lonizzato come fonte nutrizionale, sia perché rilasciano
nell’ambiente circostante diverse proteine con attività
catalitica (enzimi). Gli enzimi sono in grado di favorire
reazioni chimiche che trasformano un substrato, agendo
in maniera specifica e in tempi molto rapidi. Sono clas-
sificati proprio in base alla reazione che catalizzano ri-
correndo per la loro identificazione al suffisso asi,
quindi, parliamo di amilasi, lipasi, proteasi, transferasi,
isomerasi etc. Proteine enzimatiche sono prodotte e ri-
lasciate nell’ambiente circostante da microrganismi
come attinomiceti, batteri, funghi, oppure possono es-
sere presenti in piante, animali o nella saliva dei mam-
miferi (glicosidasi).
Gli enzimi che possono avere un’applicazione pratica
nel campo dei beni culturali appartengono alle idrolasi
(glicosidasi, lipasi, proteasi) e sono in grado di cataliz-
zare il degrado di macromolecole insolubili in acqua
come tali, ma lo diventano quando ridotte in frammenti
più piccoli.
Attualmente è possibile rimuovere patine costituite da
polisaccaridi (amido, cellulosa, gomme vegetali), pro-
teine (albumine, caseine, colle, collagene, gelatine ani-
mali, uovo), lipidi (cere, grassi, oli).
Diverse sono le fonti da cui isolare proteine enzimati-
che come: i) le Amilasi che possono essere sia d’origine
animale (amilasi pancreatica, ptialina della saliva) sia di
derivazione batterica (Bacillus) o fungina (Aspergillus);
ii) le Lipasi che derivano da tessuti animali (pancreas),
da tessuti vegetali (germi di avena e frumento), da spe-
cie batteriche come Bacillus e da funghi come Aspergil-
lus e Penicillum; iii) la Pepsina, la Tripsina e le Proteasi
possono essere estratte sia da pancreas e stomaco di ani-
mali sia da microrganismi come Bacillus e Aspergillum.
L’utilizzo razionale di un enzima o di una miscela di en-
zimi, richiede alcune informazioni preliminari come la

tipologia del materiale che deve essere rimosso (pro-
teine, amidi, oli e grassi), l’attività idrolitica e la speci-
ficità d’azione dell’enzima, la temperatura, il pH e la
concentrazione salina ottimali per il corretto funziona-
mento.
I primi tentativi di pulitura mediante l’uso di enzimi ri-
salgono al 1970 e furono realizzati, inizialmente su ma-
nufatti di natura cartacea e successivamente su opere po-
licrome su tele e tavole, ma rimasero come esperienze
isolate. Wendelbo riportava il trattamento enzimatico
(Tripsina in tampone fosfato a pH 8.0, per 10 minuti a
40°C) di colle animali, che avevano prodotto l’adesione
di pagine di libri. Successivamente, Segal e Cooper ri-
corsero all’utilizzo di un duplice trattamento enzimatico
per la rimozione da pergamene di adesivi a base di
amido e proteine (colla animale), rispettivamente con
Amilasi (in tampone fosfato pH 7.0, incubando a 38°C
sino a 60 minuti) e con Proteasi microbica (in tampone
fosfato a pH 7.5 incubando a 40°C). Nel 1979 Makes ri-
portava la prima applicazione su tele dipinte, successiva-
mente nel 1982 l’uso di Amilasi e Proteasi per la rimo-
zione di colla di pasta dal retro di un dipinto ad olio e
Divulgazione Scientifica
nel 1988 l’uso di una miscela di enzimi per la rimozione
di un legante proteico/oleoso da una superficie pittorica.
La rimozione di una spessa patina proteica dalla super-
ficie di un dipinto a olio su tela fu riportato nel 1994 da
Bellucci e Cremonesi, che utilizzarono Proteasi e Lipasi
microbica, entrambi in forma gelificata a pH 8.0. Sem-
pre nello stesso anno Bonomi, descrive la rimozione di
una patina proteica da una scultura policroma in terra-
cotta, mediante l’uso di Proteasi in soluzione acquosa ri-
scaldata a 40°C. In questi ultimi anni, sono stati definiti
diversi protocolli utilizzabili nel restauro di opere poli-
crome, che permettono di modulare il metabolismo mi-
crobico e l’azione idrolitica degli enzimi. Recente-
mente, Sorlini e collaboratori, ricorrendo all’uso di cel-
lule batteriche vitali abbinato a specifici enzimi degra-
danti la matrice organica della colla animale, hanno rea-
lizzato la ripulitura di uno degli affreschi del Campo-
santo Monumentale di Pisa. In particolare, sono stati uti-
lizzati batteri del genere Pseudomonas, ceppo P. stutzeri
A29 capaci di degradare la colla in tempi rapidi, ridu-
cendo al minimo il rischio d’alterazione dei pigmenti,
con un’efficienza compresa tra 80-90%. L’operazione è
stata eseguita su diverse zone dell’affresco, mantenendo
i batteri sulla superficie per un periodo di 10-12 ore alla
temperatura compresa tra 28-30°C. Questi batteri etero-
trofi sono capaci di degradare la maggior parte della so-
stanza organica, mentre per la rimozione della colla re-
sidua sono state utilizzate proteine enzimatiche come la
Proteasi TypeXIX. Questo protocollo prevede che alla
fine del trattamento, i batteri applicati siano rimossi
dalla superficie per evitare il possibile innesco di pro-
cessi deteriogeni a carico dei pigmenti. Infine, questo
metodo oltre ad essere innovativo ed efficiente, si è ri-
velato anche economico quindi applicabile per la biopu-
litura anche di superfici estese.
Sebastianelli, riporta l’utilizzo di Lipasi Type VII per la
rimozione di residui di sostanze grasse e cerose dalla su-
perficie di dipinti staccati e collocati su supporti in
gesso. Dopo una fase iniziale in cui era stata effettuata
la pulitura (con tampone di cotone idrofilo) con solu-
zioni di White spirit (70%) - alcool Isopropilico (30%)
e diluente nitro (40%)- alcool Isopropilico (40%) – Me-
tilEtiPirrolidone (20%), era stata riscontrata la presenza
di cere e lipidi. Per la rimozione di queste sostanze è
stato utilizzato l’enzima Lipasi TypeVII ad una tempera-
tura di 38°C e ad un pH compreso tra 8.0 e 9.0; in pre-
senza di basse percentuali di carbonato d’ammonio. Per
quanto concerne i tempi d’applicazione, è stata valutata
l’efficienza enzimatica a due e sette minuti. Quest’ul-
timo tempo d’incubazione, si è rivelato il più idoneo e
ha permesso di eliminare tutti i residui di sostanze
grasse e cerose in maniera selettiva senza interagire con
i materiali costitutivi.
La superficie pulita enzimaticamente è stata rifinita ri-
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Divulgazione Scientifica
correndo a mezzia acquosi a tampone e miscele solventi,
al fine di inibire un’eventuale attività enzimatica residua.
LA MINERALIZZAZIONE INDOTTA COME
BIO-RIMEDIO DI SUPERFICI DETERIORATE
Per quanto concerne i manufatti calcarei, una delle prin-
cipali cause di degrado è la conversione di carbonato di
calcio in solfato di calcio, dovuta ad inquinanti chimici
e biologici presenti nell’atmosfera in grado di deposi-
tarsi sulle superfici. In particolare, questo fenomeno si
riscontra nelle opere d’arte esposte all’aria ed è diretta-
mente influenzato dalle condizioni ambientali come
umidità, vento, pioggia, escursione termica, gas inqui-
nanti e polveri. Inoltre l’attività industriale, l’urbanizza-
zione e i trasporti accelerano il processo di deteriora-
mento delle opere d’arte, poiché producono e rilasciano
nell’atmosfera sostanze inquinanti come ossidi di zolfo,
carbonio e azoto, anidride solforosa, particellato [Saiz-
Jimenez 1993, 1995]. Il ricorso all’uso di microrganismi
per la rimozione di patine è stato applicato sperimental-
mente per la biopulitura di manufatti lapidei [Gauri et al.
1992, Heselmeyer et al. 1991] e recentemente, Sorlini e
collaboratori [1997] mostrano l’utilizzo di alcuni ceppi
batterici del genere Desulfovibrio per la rimozione di pa-
tine di solfati da superfici lapidee. Gli autori ricorrono
all’uso della sepiolite come materiale inerte su cui far
crescere il biofilm batterico di D. desulfuricans e D. vul-
garis. La sepiolite, colonizzata con uno dei due ceppi
batterici, è stata stratificata su patine di solfati presenti
sulla superficie di campioni di marmo incubando per 30
ore in condizioni di anaerobiosi. I risultati mostrano che
la maggiore efficienza di rimozione dei solfati si ottiene
utilizzando una coltura pura di Desulfovibrio vulgaris
subs. vulgaris, che ha prodotto una riduzione della pa-
tina sino al 25-33% dopo 36-48 ore d’incubazione, rag-
giungendo il 99% dopo quattro giorni. Efficienze infe-
riori (43-58%) sono state ottenute utilizzando ceppi di
Desulfovibrio desulfuricans. Paragonando l’efficienza di
rimozione della patina di solfati, da campioni di marmo,
mediante sepiolite non-inoculata e sepiolite inoculata
con Desulfovibrio vulgaris subs. vulgaris, si osserva un
notevole incremento nella rimozione della patina che dal
24% passa al 78%.
Un’interessante applicazione di cellule batteriche o di
macromolecole biologiche nel campo dei beni culturali
è rappresentato dai lavori di Tiano e Mastromei in grado
di indurre precipitati di calcite, in substrati calcarei, al
fine di realizzare una ricalcificazione di substrati degra-
dati. Il vecchio approccio basato sull’uso esclusivo di
soluzioni di idrossido di calcio è stato dimostrato non
adeguato da Larson [2000] sia per la limitata solubilità
dell’idrossido di calcio con il conseguente reiterare delle
applicazioni sino all’introduzione nei pori di quantità
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sufficienti di materiale, sia per la lentezza della reazione
di carbonatazione. Un’altra metodologia propone l’in-
duzione di cristalli di calcite nei pori del materiale lapi-
deo mediante un processo di biomineralizzazione in-
dotta. La prima applicazione si basava sull’uso di Ma-
cromolecole da Matrice Organica (Organic Matrix Ma-
cromoleculs, OMMs) estratte dalla conchiglia del mol-
lusco Mytilus californianus. Le glicoproteine ricche in
acido aspartico e glutammico, componenti la conchiglia
di questo mollusco, sono in grado di controllare la for-
mazione di cristalli di calcite. Diversi lavori mostrano
una buona efficienza di induzione di precipitati di cal-
cite in campioni di pietra calcarea dovuti all’uso delle
macromolecole della matrice organica, con conseguente
formazione di nuovi cristalli di calcite fortemente legati
alla struttura minerale in cui le OMMs erano state pre-
liminarmente fatte assorbire. Attualmente, anche se il
recupero di OMMs dalle conchiglie del mollusco è stato
notevolmente incrementato questa pratica rimane an-
cora costosa e necessita di lunghi tempi di realizzazione
Per ovviare a ciò, Levi e collaboratori [1998] hanno uti-
lizzato polipeptidi sintetici, come PolyA (poly-aspar-
tate) o PolyA-L (poly aspartate-leucine), che mostrano
una simile attività nel formare nuclei di cristallizza-
zione.
Nel suolo, nelle acque e nei sedimenti marini la precipi-
tazione di CaCO3 è un processo molto comune ed è
noto che l’attività batterica può controllare la genesi dei
carbonati, che formano inizialmente un nucleo di preci-
pitazione da cui si origina una struttura cristallina com-
plessa che intrappolando all’interno il microrganismo.
Batteri calcinogenici furono evidenziati già da Drew nel
1914 con Bacterium calcis (successivamente riclassifi-
cato come Pseudomonas calcis), e recentemente è stato
messo a punto un protocollo che prevede l’utilizzo di
cellule batteriche vitali di Micrococcus sp. ceppo
BC434 o di Bacillus subtilis ceppo PB19. Paragonando
l’efficienza di induzione di precipitati di CaCO3 su uno
stesso litotipo (Pietra di Lecce) è possibile osservare la
formazione di un nucleo di deposito di CaCO3 che pro-
gressivamente induce la formazione di cristalli. Questo
processo di mineralizzazione bio-controllata sembra
continuare anche dopo la morte dei batteri induttori at-
traverso un meccanismo fisico-chimico non ancora
chiaro.
Recentemente è stato dimostrato che miscele di Bacillus
cereus, sebbene siano in grado di ridurre la porosità
della pietra non mostravano un efficiente effetto conso-
lidante [Castainer et al. 2000], mentre con Micrococcus
xantus la penetrazione sembra incrementare, ma l’effi-
cienza del trattamento è influenzata da altri numerosi
fattori.
Infine, i risultati di trattamenti di bio-rinforzo di mate-
riali lapidei mediante l’applicazione di matrici organi-

che sono ancora in una fase iniziale, ma ugualmente in-
coraggianti soprattutto quando si utilizza PolyAsp sinte-
tico [Tiano] o cellule batteriche frazionate, BCFs, [Ma-
stromei], mentre rimane ancora un procedimento com-
plesso l’estrazione delle OMMs dalle conchiglie e la
successiva applicabilità nel campo dei processi di re-
stauro.
CONCLUSIONI
I materiali che si accumulano sulla superficie di un di-
pinto, sia per processi naturali sia per successivi inter-
venti sull’opera, cambiano nel tempo la loro struttura
macromolecolare che si traduce in un cambiamento
della loro solubilità. E’ noto che in conseguenza a feno-
meni di ossidazione, i composti polisaccaridici, le pro-
teine e i grassi tendono ad incrementare la loro polarità,
rendendo necessario il ricorso all’uso di solventi polari
o sostanze alcaline per la loro rimozione. Solitamente i
solventi polari sono anche penetranti, con valori di ri-
tenzione medio-alti, rappresentando un potenziale ri-
schio d’indebolimento del legante dello strato del co-
lore. Inoltre, se l’azione dei solventi polari non risulta
sufficiente è necessario ricorrere all’uso di altri reagenti
(alcali) che frammentando le macromolecole rendono
questi materiali più solubili, però possono rappresentare
un ulteriore rischio per lo strato pittorico perché pos-
sono causare alterazioni cromatiche dei pigmenti.
Sebbene non siano molte le applicazioni di preparazioni
enzimatiche per la pulitura di superfici di manufatti ar-
tistici gli enzimi idrolitici costituiscono una reale alter-
nativa, perché sono in grado di degradare le macromo-
lecole con un’azione più blanda e con una notevole se-
lettività d’azione. Le conoscenze derivanti dalla ricerca
di base hanno permesso di determinare i vari livelli
strutturali che una proteina può assumere, l’identifica-
zione dei siti di riconoscimento e di catalisi.
Inoltre, numerosi studi di tossicità escludono qualsiasi
potenziale rischio per l’operatore nell’uso di amilasi, li-
pasi e proteasi in soluzione acquosa, dove l’unica cau-
tela riguarda la loro manipolazione in forma di polveri
evitando sia l’inalazione sia un prolungato contatto con
la cute.
Infine, il riconsolidamento bioindotto costituisce an-
ch’esso una procedura innovativa anche se necessita di
ulteriori ricerche per il completo passaggio dalla fase di
laboratorio alle applicazioni pratiche. Comprendere la
correlazione tra sequenze geniche e macromolecole,
chiarire il meccanismo che regola la produzione delle
molecole componenti la matrice organica, standardiz-
zare i processi d’estrazione, non più da molluschi ma ad
esempio da batteri bio-ingegnerizzati, ne implementerà
l’utilizzo.
Posso senz’altro concludere che la biotecnologia mole-
Divulgazione Scientifica
colare è una disciplina che ha rivoluzionato molti campi
della ricerca scientifica e, in questi ultimi anni, anche
quello dei beni culturali, e le ulteriori conoscenze deri-
vanti da questo settore della ricerca non potranno far al-
tro che condurre ad una realizzazione sempre più esatta
dei processi di conservazione e di restauro.
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