Pagina 1
310 ODDS ET AL.
C. albicans genomics (http: //www-sequence.stanford.
edu / group / candida /; http: //genome-www.stanford.
edu / fungi / Candida /; http://genolist.pasteur.fr/
CandidaDB (30). Împreună, datele secvenței și
adnotarea genomului a furnizat o platformă puternică pentru
grupuri pentru inițierea profilării transcrierii C. albicans ,
proteomică și studii la scară largă de ștergere a genelor (18,
24, 26, 38, 39, 42, 50, 63, 64, 84, 85, 90, 97, 104,
107, 130, 140). Probabil unul dintre cele mai mari impacturi
din noua eră genomică C. albicans a fost
abilitatea de a examina rolurile globale ale unor gene specifice în
o modă relativ imparțială. În mod clar, acest lucru este vital
atunci când se evaluează rolurile genelor specifice în C. albi-
conserve virulenta. Provocarea aici este de a distinge
efectele primare ale mutațiilor sau ale mediului
semnale pe celula fungică de la secundare și
efecte terțiare în seturile de date complexe generate în
experimente de genomică. Proiectare experimentală incisivă
iar aplicarea unor controale stricte sunt esențiale
pentru a realiza acest lucru. Impactul geneticii moleculare și
genomică în ceea ce privește înțelegerea noastră despre patologia C. albicans
biologia este discutată în continuare în capitolele 6 și 40.
FACTORI DE VIRULENȚĂ A C. ALBICANILOR :
PREZENTARE GENERALĂ
Un set de atribute de virulență presupuse în C. albi-
cutii au fost definite folosind combinația de
abordări moleculare și modele de infecție
descris mai sus. Capitolele 4 și 11 până la 14 din
acest volum se concentrează pe rolurile virulenței specifice
atribute. Prin urmare, acestea sunt rezumate doar pe scurt
aici în contextul disecării C. albicans
virulenţă.
Flexibilitate de adaptare la un micro-mediu în schimbare
pare să fie o cerință evidentă pentru o
ciuperca capabilă să infecteze la fel de multe țesuturi diferite ca C. modificări structurale în peretele celular.
albicani . Proprietatea cunoscută sub numele de switch fenotipic-
ing, în care subpopulațiile de celule C. albicans pot
le modifică metabolismul, morfologiile și suprafața celulară
proprietățile feței la frecvențe relativ ridicate, probabil
îmbunătățește bly răspunsurile flexibile la schimbare și servește
ca „regulator principal” al unora, dacă nu chiar al multora, din
proprietăți frecvent considerate ca factori de virulență
în ciupercă (94, 120). Mecanism de comutare fenotipic
anismele joacă, de asemenea, un rol în adaptarea C. albicans
celule pentru un proces de împerechere care ar putea face parte dintr-un
ciclu meiotic care nu a fost încă definit (58, 121).
Pentru a iniția procesele de deteriorare a unui
gazdă de mamifere, C. albicans trebuie mai întâi să poată
adera la suprafete epiteliale. Ca la orice microb, C.
celulele albicans posedă abilități înnăscute de la celulă la celulă
legare rezultată din hidrofoarea lor de suprafață brută
bicity (32). Cu toate acestea, studiile pe mai mulți ani indică
se precizează că suprafața C. albicans poartă adezină
molecule care conferă un nivel ridicat de lipicios fungic
Pagina 2
sa sugerat că termenul „factor de virulență”
să fie rezervat pentru moleculele care interacționează direct cu
componente gazdă și că moleculele care reglează
expresia unor astfel de factori se numește „regim de virulență
ulatori ”(95). Termenul „atribut de fitness” ar putea atunci
fi utilizate pentru a defini moleculele necesare pentru distracție
creșterea gal (16). Acest lucru duce într-un fel la eliminare
Gene „esențiale” din listele de virulență putativă
factori, dar nu constituie o soluție la o problemă
care, în adevăr, se extinde dincolo de considerarea semantică
acțiuni. Dacă scopul este de a defini interacțiunile dintre
ciuperca și gazda ei, este adecvat să se concentreze
multă atenție asupra atributelor de virulență ale suprafeței celulare.
Cu toate acestea, dacă scopul este de a înțelege stabilirea bolii
orizont științific trebuie
includ fitness, precum și atribute de virulență.
DISTRUPȚIE GENERALĂ ȘI VIRULENȚĂ
TESTARE LA C. ALBICANI
De la începutul anilor 1980, cercetări considerabile
bazat pe atenuarea tulpinii prin perturbarea genelor specifice
a generat o lungă listă de virulență presupusă
factori (peste 70 sunt enumerați în referința 14 și
multe sunt revizuite în referința 91). Acestea includ
molecule implicate în aproape toate imaginile
aspectul structurii celulare, metabolismul central, fiziologia
ogie și reglarea genelor. În majoritatea cazurilor,
procedură experimentală pentru determinarea virulenței
rolul unui produs genetic a implicat „ URA- blaster”
perturbarea genei, urmată de evaluarea virulenței
în ceea ce privește supraviețuirea și / sau sarcinile tisulare ale ciupercilor de
provocare intravenoasă la șoareci. Acest experiment
abordarea este supusă criticilor. În unele cazuri nu
tulpina reintegrantă a fost construită pentru a demonstra
redobândiți virulența. (Cu alte cuvinte, o copie de tip sălbatic
a genei nu a fost reintrodus în genomul
mutantul nul de controlat pentru posibilele efecte ale
mutații secundare care ar fi putut apărea în timpul
construirea mutantului nul.) În alte cazuri
mutantul homozigot nul a exprimat URA3
ectopic la locusul celei de-a doua alele perturbate.
Acest lucru este problematic, deoarece nivelul URA3
expresia la un locus perturbat este adesea considerabil
mai mică decât în izolatele de tip C. albicans de tip sălbatic , astfel încât
atenuarea virulenței la mutant poate avea
a rezultat mai degrabă din expresia suboptimală URA3
decât din efectele perturbării genei (14, 125,
127). Acum se recunoaște că aceste efecte de poziție
poate fi ocolit prin reintroducerea
Marker URA3 pe anumite plasmide derivate din
CIp10 (14, 83). Alternativ, gena URA3 și / sau
gena perturbată poate fi restaurată la nivel natural
loci. În astfel de experimente, alegerea promotorului
a genei reconstituite este de asemenea relevantă. În cele mai multe se referă direct la rata de creștere a mutanților C. albicans
cazuri se folosește promotorul natural, dar presupuneri
Pagina 3
312 ODDS ET AL.
provocare inoculum (96). Pentru o anumită tulpină de șoarece,
„fereastra” de dozare în care toate animalele se
legat de C. albicans dezvoltă o infecție și
cumb cu organe țintă deteriorate măsurabil este
îngust (73). O provocare prea mică și infecția este
ușor curățat; o provocare prea mare și animalele
sunt copleșiți în câteva ore. Prin urmare, este posibil
că un mutant cu o pierdere relativ mică
ar putea prezenta diferențe mari în timpii de supraviețuire
sau sarcini tisulare prin provocare intravenoasă. Puțini C.
mutanții albicans sunt în întregime avirulenti. Termenul
„Atenuat” implică un efect în care decesele
și / sau infecții tisulare apar dar cu o rată mai mică decât
este cauzată de tipul sălbatic. O abordare care ar putea
facilitează diferențierea virulenței ciupercilor
atribute de la efecte dependente de susceptibilitatea gazdei
este de a provoca animalele cu doze crescute care
conduc la aceleași perioade globale de supraviețuire ca sălbaticul
tip. Atunci ar fi posibil să comparăm
aspect logic al tulpinilor mutante și de tip sălbatic în
țesuturi infectate (96). O abordare alternativă ar fi
fie să examineze concurența de tip sălbatic și
tulpini mutante in vivo.
FACTORI DE VIRULENȚĂ „BINE Dovediți”
ÎN C. ALBICANII
Implicit în discuția de mai sus este noțiunea
că multe dintre produsele genetice au fost publicate ca putative
factorii de virulență ai C. albicans pot să nu merite acest lucru
Descriere. Cu toate acestea, o serie de molecule au
a fost studiat cu mult dincolo de postul molecular al lui Koch
experimentarea tardivă și sunt bine stabilite de
mai multe linii de dovezi în calitate de contribuabili la abilitatea
ciuperca pentru a provoca daune gazdei sale. niste
urmează exemple proeminente.
De la prima sa descoperire în urmă cu 40 de ani (126),
capacitatea C. albicans de a exprima aspartil secretat pro-
enzimele teinazei (Sap) au fost studiate ca fiind probabile
atribut de virulență. Dovezile pentru Saps ca viru-
Factorii de proveniență provin din mai multe surse, inclusiv
nespecific (62, 74) și specific (54, 111) mutagen-
esis pentru a crea tulpini cu deficit de proteinază. Trebuie,
totuși, să fie recunoscut faptul că multe dintre aceste studii
au fost finalizate înainte de era în care reconstituirea
mutanții tututați au fost folosiți în mod obișnuit ca martori și
natura atenuată a acestor mutanți rămâne să fie
confirmat fără echivoc. Demonstrația că
Producția de sapă este o proprietate a celor mai patetice două
specii genice, C. albicans și C. tropicalis , dar este
rar întâlnit la alte specii de Candida (108)
întărește cazul Saps ca factori de virulență.
Această dovadă a fost întărită de caracterizare
a tiparelor de expresie ale membrilor individuali ai
SAP familia de gene ( de la SAP1 la SAP8 ) în super-
forme oficiale și viscerale ale infecției cu C. albicans în
pentru suprafețe epiteliale și alte suprafețe (21). Multe dintre acestea
adezinele sunt codificate de membri ai familiilor de gene,
precum familia secvenței asemănătoare adezinei ( ALS ) (52).
Este probabil ca membrii acestor familii să afișeze
o oarecare redundanță funcțională, precum și diferențială
reglarea spațială și temporală. Prin urmare, determinant
contribuțiile lor individuale la C. albicans viru-
lence necesită disecția fenotipică atentă a
tulpini care poartă mutații în mai mulți membri
a familiei genetice de interes. În plus, glicanii
din multe proteine din peretele celular pot participa direct la
reacții de adeziune, iar acestea nu pot fi eliminate
prin întreruperea chiar a unor familii întregi de perete celular
proteine (21).
Se pot deteriora penetrant suprafețele epiteliale
rezultă din presiuni aplicate mecanic sau din
activitățile enzimelor hidrolitice: ambele au fost
a studiat în C. albicans mulți ani (45, 87). Dacă cir-
neutrofile culatoare și macrofagele tisulare sunt
linii majore de apărare împotriva diseminării C.
albicans , ciuperca poate avea camuflaj molecular
flage și / sau mecanisme antifagocitare care
capacitatea sa de a supraviețui în prezența neu-
trofile (93). Colonizarea și pătrunderea din
Text original
localizările endoteliale la parenchimul tisular probabil
implică mecanisme similare cu cele ale
albicans, theepiteliului
fungus may possess molecular camou-
penetrare care duce la boli. Comun tuturor acestora
Contribuiesunt
Atributele de virulență „clasice” cu oun
traducere
aspect mai buna sau exo-
superficial
localizare celulară. Adezine și molecule care imită
componentele gazdă trebuie să fie situate la celula fungică
de suprafață, iar enzimele hidrolitice trebuie să fie de suprafață
legat sau secretat pentru a-și exercita efectele în exterior.
Chiar și schimbarea morfologică de la formele de drojdie la
hife, gândite de mulți pentru a explica pen-
proprietăți etrative în C. albicans , este rezultatul
La nivel molecular, căutarea C. albicans
factorii de virulență s-au bazat în principal pe
abordare adesea cunoscută sub numele de „postura moleculară a lui Koch
tardiv ”(35). Dacă întreruperea specifică a unei singure gene
(ambele alele dintr-un organism diploid precum C. albi-
cutii ) generează un mutant atenuat în capacitatea sa de a
poate provoca daune la un model animal și, dacă este reintegrat,
o copie a genei restabilește virulența în
același model, gena poate fi susținută pentru a codifica un virus
factorul
procesdecomplet
ulență. Dificultatea conceptuală cu aceasta
abordarea este că orice genă esențială pentru fizică normală
funcționarea iologică a C. albicans este probabil să
apar ca un factor de virulență presupus; clar, def-
iniția unui factor de virulență bazat pe molecular
Postulatele lui Koch sunt prea generoase pentru că nu
diferențiați fitness in vitro și fitness in vivo. O def
este nevoie de inițiere care să distingă genele esențiale pentru
capacitatea C. albicans de a deteriora țesutul gazdă din
vivo din gene care contribuie la creșterea fungică. Aceasta
CAPITOLUL 22 • CANDIDA ALBICANS VIRULENCE 311
trebuie făcute aproximativ suma de 3! secvență la
include în amonte care va realiza transcripția normală
reglementarea națională. În toate cazurile, grija rămâne aceea
genotipul reconstituit nu este niciodată perfect izogen
la toate locurile, altele decât site-ul perturbat.
Alte preocupări implică alegerea animalului
tulpina testată (Tabelul 1). Tulpini de șoareci învechite,
deși ieftin de cumpărat, nu sunt din ce în ce mai mult
favorizat pentru investigații științifice serioase; practic
toate studiile publicate acum în reviste precum
Imunologie, Jurnal de imunologie și cancer
Cercetarea implică tulpini de rozătoare consangvinizate. In orice caz,
tulpinile de șoarece consangvinizate diferă prin susceptibilitatea lor la
provocare intravenoasă de C. albicans ; fiecare are de obicei
o modificare genetică specifică într-una sau mai multe componente
nente ale funcției sale imune. Aceasta înseamnă că un C.
mutant albicans descoperit a fi atenuat în virulență
într-o anumită tulpină de șoarece consangvinizat poate apărea nor-
mal într-o altă tulpină de șoarece consangvinizat. Astfel de
ar putea transmite informații utile despre
rol patogen jucat de un anumit C. albicans
genă. Cu toate acestea, accentul majorității publicațiilor
dedicat descoperirii unor factori de virulență putatori
este pe știința moleculară a perturbării genelor și
fenotipurile in vitro ale mutanților. Soarecele
provocarea este adesea prezentată minim, chiar și pentru
măsura în care condițiile detaliate ale acestei părți a
experimentarea sunt descrise incomplet. Cu toate acestea, pentru
de exemplu, starea fiziologică a C. albicans
se știe că inoculul este important în determinarea
supraviețuirea șoarecelui (96). Este cel mai excepțional pentru un
cercetător pentru a testa mutanții la mai multe tulpini
de mouse sau mai mult de un model de provocare.
Cu toate acestea, De Bernardis și colab. a arătat convingător
că un mutant perturbat în PHR1 a fost atenuat în
virulența într-un model de provocare intravenoasă dar
în mod normal virulent într-un model de infecție vaginală în timp ce
opusul s-a aplicat unui mutant PHR2 (29). Acest
doar dovezile ar trebui să fie suficiente pentru a încuraja
anchetatorii să testeze mutanții la mai mult de unul
modelul animal ca mijloc de a afla mai multe despre
rolul de virulență al produselor genetice. Considerații etice
costurile ridicate ale muncii cu animale
restricționează în mod adecvat măsura în care patologicul
consecințele perturbărilor genetice pot fi de rutină
urmărit în detaliu.
O posibilă concluzie din cele foarte mari
număr de factori de virulență putatori descoperiți de
abordările de întrerupere a genei este că C. albicans este
extrem de susceptibil la consecințele multor
tulburări genice ferente. De ce este afectat
aceste perturbări pot fi adecvate pentru mutanți
prosperă în sensul cel mai general. Letalitatea șoarecilor
(103) și variază în funcție de mediul utilizat pentru a prepara un
vivo și ex vivo (a se vedea referințele 53, 86 și 87 pentru
recenzii).
Studiul adezinelor la C. albicans datează din urmă
multe decenii, iar C. albicans se știe că se leagă de
multe suprafețe ale celulei gazdă precum și la mai multe tipuri de
plastic (92). Experimente și com-
plementarea tulpinilor de S. cerevisiae slab aderente
cu gene dintr-o bibliotecă C. albicans s-au identificat
produsele genelor ALS1, ALS5, HWP1 și
INT1 ca proteine de suprafață implicate în aderența
ciuperca către diferite suprafețe ale celulei gazdă (20).
Expresia mai multor dintre aceste gene a fost monitorizată
tored în infecții experimentale ex vivo (47) și
proprietățile Int1p ca adezină și virus supus
factorul de lence a fost investigat pe larg de
Hostetter și colegii (51). Cu exceptia
ALS5 , fiecare dintre genele care codifică adezina are
a confirmat postulatele moleculare ale lui Koch cu cerințele
cu privire la modelul de provocare intravenoasă a șoarecelui (8,
40, 41, 124, 131). Această observație este deosebită
interes, deoarece indică în mod clar că
anismele joacă un rol dincolo de cel al colonizării epiteliale
ziune. Genele MNT1 și PMT1 au fost ambele
găsit important pentru aderența la suprafața gazdă din
letalitate vitro și sălbatică pentru șoareci (19, 81, 128),
dar acestea codifică manozil transferaze. Prin urmare, lor
rolurile de virulență pot fi indirecte; adezinele propriu-zise
sunt mai probabil să fie produsele de acțiune
de Mnt1p și Pmt1p. Grupul lui Poulain a făcut un
caz convingător pentru rolul α- și fosforilat
polizaharide oligomananice legate de ß-1,2 ca
adezine și factori de virulență în C. albicans (98). Aceasta
este clar că, în timp ce capacitatea de a adera la gazdă este
fețele pot fi descrise ca un atribut de virulență în sine,
rolul exact al fiecărei adezine la timp diferit
și etapele anatomice din istoria naturală a gazdei
daunele cauzate de C. albicans necesită mai multe detalii
elucidare.
Cea mai intens studiată virulența C. albicans
factor merită menționat aici, deși semnificația sa reală
icance rămâne incertă. Schimb morfologic
între drojdie, pseudohipal și forme hifale este
una dintre cele mai vechi proprietăți recunoscute ale C. albi-
conserve . Dogma pe care o formează hifal sunt invazive
în timp ce formele de drojdie sunt neinvazive a fost perfectă
tratat în literatură de foarte mulți ani. In orice caz,
rămân dovezi neechivoce care susțin acest punct de vedere
indisponibil. Mai multe studii pretind a indica acest lucru
virulența este dependentă de morfogeneză (pentru
vezi referințele 68 și 113). Cu toate acestea, aceste studii
s-au folosit mutații reglatoare cu pleiotrop
efecte asupra numeroaselor procese celulare pe lângă
morfogeneza. Problema nu constă în aceste date
dar în interpretarea acestor date. Cum putem
distingeți proprietățile dependente de forma