10.03.

2020

HEMATOLOGIE

Celule rosii (eritrocite) - RBC

Celulele albe (leucocite) - WBC
• Granulocite
ANALIZA o neutrofile
HEMATOLOGICA o bazofile
o eozinofile
• Agranulocite
o monocite
o limfocite
• Trombocite (plachete)

HEMOGRAMA COMPLETA NUMARUL DE ERITROCITE

Hemograma - test screening de bază, reprezintă primul pas în stabilirea statusului Eritrocitele - cele mai numeroase celule din sânge,
hematologic şi diagnosticul diverselor afecţiuni hematologice şi nehematologice. sunt anucleate, au forma de disc biconcav.
Numarul de eritoricite (RBC) - test de bază pentru
evaluarea eritropoezei. Eritrocitele sunt investigate si
Parametrii analizati
prin măsurarea concentraţiei de hemoglobină şi a
1. eritrocitari hematocritului, iar pe baza lor se calculeaza indicii
 numarul de eritrocite; eritrocitari (VEM, HEM, CHEM, RDW) care
 hematocritul (Hct); caracterizeaza din punct de vedere calitativ populaţia
 hemoglobina (Hb); eritrocitară.
 indicii eritrocitari - volumul eritrocitar mediu (VEM), hemoglobina eritrocitara
medie (HEM), concentratia medie a hemoglobinei (CHEM), largimea Recoltare – sange venos recoltat pe anti-coagulant
distributiei eritrocitare (RDW); (EDTA).
Metoda de determinare – analizor automat
(citometrie în flux)
2. leucocitari
Valori normale
 numarul total de leucocite barbati 4.7-6.1 x 106/μL
 formula leucocitara in valori relative (%) si absolute (#) femei 4.2-5.4 x 106/μL

3. trombocitari Semnificaţie clinică

 numarul de trombocite; Evaluarea corectă a masei de eritrocite a organismului
 trombocitocritul (PTC); poate fi obţinută doar în corelaţie cu hematocritul.
 volumul trombocitar mediu (VTM); 1. Scăderea numărului de eritrocite: - anemie
 largimea distributiei trombocitare (PDW). 2. Creşterea numărului de eritrocite - eritrocitoza.

1
 10.03.2020

HEMATOCRIT HEMOGLOBINA
Hematocrit (Hct) - măsoară raportul dintre volumul ocupat de eritrocite şi Hemoglobina (Hb) - componentul principal al eritrocitelor (95% din proteinele
volumul sanguin total. citoplasmatice eritrocitare) şi serveşte ca transportor al O2 şi CO2
Metode de determinare Metoda de determinare
1. Se determina prin centrifugarea sangelui (recoltat pe anticoagulant solid) si 1. metoda colorimetrică Sahli (reactia cu HCl – formarea clorheminei;
raportarea inaltimii coloanei de eritrocite la inaltimea coloanei de sange total. compararea culorii clorheminei obţinute din sângele de analizat cu culoarea
2. Analizorul automat calculează hematocritul prin determinarea numărului de soluţiei standard de clorhemină)
eritrocite/L de sânge (prin corelarea numarului de eritrocite, volumul eritrocitar
mediu si volumul de proba analizata) 2. Metoda spectrofotometrica: Hb este determinată automat în urma
conversiei în SLS-Hb (SLS - sodiu laurilsulfat)
Valori normale Etape: hemoliza eritrocitelor, alterarea conformatiei moleculei de globina,
Barbati 40-52% oxidarea fierului si formarea SLS-Hb care este masurata spectrofotometric.
Femei 35-47%
Valori de referinţă
Valori critice Barbati 13,5 – 17,5 g/dL
Hct < 20% - insuficienţă cardiacă şi deces; Femei 12,0 – 16,0 g/dL
Hct > 60% - coagularea spontană a sângelui

INDICI ERITROCITARI INDICI ERITROCITARI

1. Volum eritoricitar mediu (VEM) – volumul unui singur eritrocit

Hct (%) x 10 2. Hemoglobina eritoricitara medie (HEM) – continut mediu de

VEM = ——————– hemoglobina per eritrocit
Nr. Er. (x106/μL)
Hb (g/dL) x 10
Metoda automata - impărţirea sumei volumelor eritrocitare la numărul de HEM = ——————–
eritrocite. Nr. Er. (x106/μL)

Valori de referinta Valori de referinta

80-100 fL 26-34 pg (0,4 – 0,53 fmol)

Semnificatie clinica Semnificatie clinica

Clasificarea anemiilor (VEM < 80 fL – anemie microcitara; VEM > 100 fL – HEM se coreleaza cu VEM – anemii
anemie macrocitara)

2
 10.03.2020

INDICI ERITROCITARI ANEMII

3. Concentratie eritrocitara medie de hemoglobina (CHEM) – Cauza Tip de anemie Fizipatologie
concentratia medie de Hb dintr-un volum dat de eritrocite ( raport masa Hb
productie insuficienta de aplastica incapacitate de producere a
/ volum eritrocite).
hematii hematiilor
Hb (g/dL) x 100
deficienta de fier necesar pentru hemoglobina
CHEM = ——————–
Hct (%) pernicioasa lipsa vitamina B12 necesara pentru
diviziunea hematiilor
Valori de referinta
32-36 g/dL
falciforma alterari genetice (forme anormale
ale hematiilor)
4. Lărgimea distribuţiei eritrocitare (RDW) – este un indice eritrocitar accelerarea distrugerii hemolitica corpul distruge hematiile cu viteza
care cuantifică heterogenitatea volumului celular al eritrocitelor hematiilor mai mare decat le produce

Deviaţia standard a mărimii eritrocitelor x 100 Pierdere de sange sau boli cronice hemoragii / fluide in excess
RDW (CV%) = ———————————————————— diluarea acestuia
VEM
Valori de referinta
11.6-14.8 coeficient de variaţie a volumului eritrocitar

PARAMETRI LEUCOCITARI PARAMETRI LEUCOCITARI

NUMARUL DE LEUCOCITE FORMULA LEUCOCITARA
constă în diferenţierea numărului total de leucocite circulante în cele cinci tipuri de
Indicaţii – evaluarea infecţiilor, inflamaţiilor, necrozelor tisulare, leucocite, exprimate procentual şi în număr absolut.
intoxicaţiilor, alergiilor, tumorilor maligne, depresiei medulare (iradiere,
Neutrofilele - cel mai numeros tip de leucocite, joacă un rol major în apărarea
medicamente citotoxice, imunosupresoare, antitiroidiene etc.) antiinfecţioasă primară a organismului prin fagocitarea şi digestia microorganismelor
Valori de referinţă: – 2000-8000/µL; 45-80% din leucocite
Metoda de determinare – leucocitele sunt determinate de analizorul
automat (după ce hematiile sunt lizate, iar leucocitele sunt colorate cu o Limfocitele – limfocite de tip B si T (raspuns imun)
substanţă fluorescentă cu afinitate pentru acizii nucleici) prin metoda de Valori de referinţă –1000-4000/µL; 20-55% din leucocite
citometrie în flux cu fluorescenta.
Monocitele – sunt cele mai mari celule din sânge
Valori de referinţă – 0-1000/µL; 0-15% din leucocite;
Valori de referinţă
4000-10000/µL sau 4-10×109/L Eozinofilele (granulocitele eozinofile) – afinitate crescută pentru coloranţii acizi
(eozina), şi în microscopia optică apar colorate roşu-strălucitor.
Semnificaţie clinică Valori de referinţă: 0-700/µL ; 0-7% din leucocite
Leucocitoza: L >10000/µL
Leucopenie: L< 4000/µL (sau <2500/ µL) Bazofilele (granulocitele bazofile) leucocite bazofile (se colorează cu coloranţi bazici)
Valori de referinţă - 0-200/µL ; 0-2% din leucocite

3
 10.03.2020

PARAMETRI TROMBOCITARI INDICI TROMBOCITARI

NUMARUL DE TROMBOCITE (NUMARUL DE PLACHETE) VOLUMUL TROMBOCITAR MEDIU (VTM) – indică uniformitatea de mărime
a populaţiei trombocitare.
Indicaţii
 investigarea unei sângerări neexplicate, unei boli hemoragice sau a PCT (Plachetocrit) (%)
VTM (fL) = ————————————--------- x1000
unei boli trombotice;
Nr. trombocite (x103/μL)
 în cadrul unui profil de coagulare;
 monitorizarea în timpul tratamentelor care pot induce supresie medulară Valori de referinţă – VTM = 7.4-13 fL (sau μm3)
(iradiere, chimioterapie).

Metoda de determinare – trombocitele sunt numărate de analizorul
automat prin aceeaşi metodă ca eritrocitele, prin metoda focusării
hidrodinamice (direcţionarea lor printr-un orificiu)
Valori de referinţă
150-450 x 103/μL
Valori critice
1. Trombocitoza >1.5×109/μL, pacienţii vârstnici şi/sau cu boli cardiovasculare
prezintă risc de tromboză, mai rar de hemoragie.
2. Trombocitopenia <20×103/μL se asociază cu risc de sângerări spontane
interne/externe (risc 1% de hemoragii intracraniene)
Lărgimea distribuţiei trombocitare (PDW)
Deviaţia standard a mărimii trombocitelor x 100
RDW (CV%) = ————————————————————
VTM
Valori de referinţă
8-16.5 coeficient de variaţie a volumului trombocitar.
Semnificaţie clinică – VTM poate fi utilizat împreună cu PDW pentru
distingerea condiţiilor asociate cu producţie scăzută de trombocite de cele
asociate cu distrucţie plachetară crescută.

ANALIZOARE AUTOMATE IN HEMATOLOGIE

Flow-citometre - sisteme in flux de numarare a celulelor care utilizeaza
masuratori de absorbtie si imprastiere a luminii, fluorescenta, impedanta si
conductivitate electrica pentru a realiza o analiza completa a eritocitelor,
leucocitelor si trombocitelor.
ANALIZOARE AUTOMATE HEMATOLOGIE
o Metoda Coulter – variatia impedantei de apertura (numararea celulelor
si determinarea volumului/dimensiunii celulei)
o Imprastierea luminii – dimensiunile si caracteristicile celulei

o Fluorescenta – continut de ADN/ARN

o Conductivitatea electrica (la potentiale mari) – structura

interna/densitatea celulei

4
 10.03.2020

APLICAȚII (DIAGNOSTIC)

STRUCTURA UNUI FLOW-CITOMETRU

- NUMĂRARE DE CELULE
- SORTARE CELULARĂ
• FOCUSAREA HIDRODINAMICA
- DETECȚIE BIOMARKERI
• SISTEM DE MASURARE IMPEDANTA
• SISTEME OPTICE DE DETECTIE

17 18

MOD DE OPERARE REZULTATE

Sangele este aspirat, diluat si divizat in doua probe.
• Proba 1 este utilizata pentru analiza eritrocitelor si trombocitelor
• Proba 2 este utilizata pentru analiza leucocitelor si hemoglobinei

Determinarea modificarii impedantei este utilizata pentru numararea

celulelor (numar pulsuri) si determinarea volumului celulelor (amplitudinea
pulsurilor).
Proba 1
Particule 2-20 fL – trombocite
Particulele >36 fL – eritrocite

Proba 2
Se adauga reactiv pentru liza celulelor RBC si WBC. Se realizeaza
numararea si diferentierea leucocitelor pe baza masurarii marimii
nucleului celulei. Se determina valoarea absoluta si procentul de limfocite,
neutrofile, bazofile, eozinofile, monocite.
Lizatul este apoi transferat intr-un sistem in flux pentru determinarea Hb
(complex imidazol-Hb, absorbanta la 540 nm).

5
 10.03.2020

REZULTATE VITEZA DE SEDIMENTARE A HEMATIILOR

Determinarea VSH

1. Metoda manuala Westergren

Se aseaza tubul in pozitie verticala intr-un suport gradat milimetric si se
citeste nivelul de sedimentare a hematiilor in mm dupa 1 ora.

2. Metoda automata
Se realizeaza cu un analizor automat, ce masoara viteza de sedimentare a
hematiilor VSH cu ajutorul unui sistem optic in IR. Sedimentarea are loc la
temperatura camerei, sub influenta gravitatiei, rezultatele fiind exprimate in
mm/h sau mm/2h, conform metodei Westergren. Pentru ca rezultatele sa fie
reproductibile trebuie ca inaltimea coloanei de sange din tuburile de recoltare
sa nu fie mai mica de 5-15 mm fata de nivelul maxim de umplere a tubului.