Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Micros
Micros
Micros
Bacteriile sunt studiate cu microscoape optice in produse patologice sau in cultura, fie in
stare nativa, vie (preparate umede, necolorate), fie dupa fixare si colorare (preparate colorate).
METODE DE COLORARE:
- simple, cu albastru de metilen sau Giemsa: evidenţiaza morfologia microbilor, dimensiunea,
asezarea, prezenta sporilor sau capsulei si morfologia leucocitelor in cazul unui produs patologic.
Coloratia simpla cu albastru de metilen: pune lama pe suportul de colorare cu frotiul in sus;
acopera frotiul cu solutie coloranta de 3 % albastru de metilen; mentine 30-60 secunde; spala cu
apa, usuca si examineaza la microscop pein obiectivul cu imersie; toate elementele (leucocite,
bacterii) apar colorate in albastru.
Coloratia Giemsa:
Fixarea frotiului: se face cu alcool metilic timp de 1 minut
Colorarea frotiului:
- se pune lama cu frotiul in sus pentru colorare
- se imerseaza cu colorant Giemsa (solutie de lucru ) timp de 10 minute dupa care
se spala cu apa distilata
- se scurge excesul de lichid prin tamponare cu hartie de filtru si se pune lama
vertical in stativ.
Examinarea microscopica: se examineaza lama cu obiectivul de *40 si cel cu imersie
- diferenţiale:
Coloraţia Gram: identifica bacteriile Gram pozitive şi pe cele Gram negative;
Coloraţia Ziehl – Neelsen: identifica bacilii acido – alcoolo – rezistenţi (baar: Mycobacterium
tuberculosis).
Coloratia Gram
Principiu: Germenii Gram pozitivi si Gram negativi sunt colorati neselectiv de violetul de
gentiana. Adaugarea de iod formeaza un complex de cristal violet plus iod in peretele celular al
bacteriei. Decolorantul extrage lipidele din peretele celular a germenilor gram negativ; in plus
peretele este mai subtire si are o structura bidimensionala, laxa. In acest fel peretele permite
migrarea colorantului iar bacteriile devin incolore. Germenii gram pozitivi au peretele celular
mai gros, cu structura tridimensionala, cu ochiuri stranse, drept urmare, colorantul este prins ca
intr-o capcana si bacteriile raman colorate.
Fixarea frotiului: se face prin trecerea lamei cu frotiul in sus prin flacara unui bec de gaz
timp de cateva secunde, dosul maini sa suporte atingerea lamei astfel incalzite
Colorarea frotiului:
Se pune lama cu frotiul in sus pentru colorare
1. se acopera un minut cu violet de gentiana si se spala bine cu apa distilata
2. se acopera doua minute cu solutie lugol si se spala cu apa distilata
3. se acopera cu solutia de decolorare (amestec de alcool-acetona) dand lamei
usoare miscari de inclinare pana ce “norii” de substanta colorata nu se mai degaja din
partile groase ale frotiului
4. se acopera 1 minut cu solutie de fuxina diluata si se spala cu apa distilata
Se scurge excesul de lichid prin tamponare cu hartie de filtru si se pune lama
vertical in stativ.
Examinarea microscopica: se examineaza lama cu obiectivul de imersie, germenii Gram
pozitivi apar in violet purpuriu, iar cei Gram negative se coloreaza in rosu.
Perete G + (gros) Perete G – (subţire)
1. Colorarea: violet violet
2. Mordanţarea: violet violet
3. Diferenţierea: violet incolor
4. Recolorarea: VIOLET ROŞU
Descrierea frotiului:
Bacteriile observate trebuie descrise in termeni de categorie microscopica (forma, marime
relativa, asezare, afinitate tinctoriala), numar si raporturile cu cellule din prelevatul pathologic
(cellule inflamatorii sau cellule epiteliale scuamoase)
Examinarea la microscop
- Se apasa pe butonul on-off
- se deschide becul microscopului cu ajutorul rozetei
- se alege obiectivul de examinare
- pentru examinare cu obiectivul cu imersie se depune o picatura de ulei de cedru pe
frotiul examinat
- se prinde imaginea cu macroviza
- cu ajutorul microvizei se regleaza imaginea pentru detalii fine
La sfarsitul examinarii
- se sterge obiectivul de ulei de cedru cu ajutorul unui servetel curat
- se inchide becul de la rozeta
- se inchide microscopul de la butonul on-off