Fijador de Nitrógeno

Azospirillum s...p.

Antecedentes

La Spirillum lipoferum, ahora llamada

Azospirillum, fue descrita por primera vez en
1925 por Martinus Willem Beijerinck, luego de
lo cual la bacteria permaneció en el olvido por
varias décadas.
Las observaciones de Juan José Peña-Cabriales
Johanna Döbereiner, en 1973, inician la época
moderna de este microorganismo.
Actualmente, se reconocen seis especies del
genero azospirillum.

Las dos primeras en ser descritas fueron A.

lipoferum y A. brasilense, siendo estas las más
ampliamente estudiadas.
Posteriormente, fueron descritas las especies
A. amazonense, A.halopraeferans, A. irakense y A. largimobile.

Pocos años después del redescubrimiento del Azospirillum y hasta 1993, este género fue el
más estudiado entre las bacterias asociadas a plantas. Esto se debió a la capacidad del
Azospirillumpara estimular el crecimiento de las plantas y aumentar el rendimiento de los
cereales, lo cual promovió numerosos estudios sobre la ecología, fisiología y genética de
esta bacteria.

Características

Se considera que uno de los principales

mecanismos reacción del Azospirillum radica en
su capacidad reproducir sustancias promotoras
durante la colonización de las raíces. Esto
estimula la longitud, la densidad délas raíces
laterales y el incremento del área superficial de las
raíces. Estos y otros cambios fisiológicos
favorecen la mayor absorción de agua y nutrientes
minerales que ayudan al rápido crecimiento de las
plantas.
También, se plantea como factor decisivo la fijación no simbiótica de nitrógeno por parte
de esta bacteria.
Para lograr estos efectos positivos, el microorganismo debe infestar las raíces. Esto se
consigue cuando se garantiza un elevado número de bacterias por gramo del formulado a
aplicar y unaalta viabilidad del microorganismo en el suelo que le permita sobrevivir aún
en condiciones adversas y colonizar las raíces.

Biología del organismo

 Forma de reproducción: División celular

 Patogenicidad, toxicidad y alergenicidad y clasificación en grupos de riesgos: No

procede.

 Mecanismos que utiliza el organismo para sobrevivir, multiplicarse, difundirse y

competir enel medio ambiente. Azospirillum produce y acumula gránulos de poli-
beta-hidroxibutiratolos cuales son empleados por la propia célula como fuentes de
carbono y energía durante períodos de inanición e incluso son capaces de formar
quistes en condiciones muy desfavorables.

 Predadores y competidores:El crecimiento de este microorganismo en la rizosfera

viene determinado fundamentalmente por la disponibilidad de sustratos que estén
presentes en elmedio rizosférico y que sean necesarios para su desarrollo. También
diversas sustancias de origen vegetal y microbiano que estén presentes en la
rizosfera pueden afectar el desarrollode estas bacterias mediante efectos
estimuladores e inhibidores. Se considera que los aminoácidos derivados de las
plantas pueden estimular o reprimir la actividad de la enzimanitrogenasa en ciertas
cepas de Azospirillum . De igual forma las condiciones ambientales (clima, tipo
de suelo, temperatura y humedad del mismo) influyen en los procesos interactivos
que determinan la estructura de la comunidad microbiana así como también enla
asociación Azospirillum-planta , la fijación del nitrógeno y su contribucióna la
nutrición vegetal.

 Resistencia a la desinfección en el caso del microorganismo:Practicamente nula.

 Capacidad de transferencia de material genético a otros organismos. Especificar

losparentales que existan en el medio ambiente y posibilidad de cruzamiento:No se
hanrealizado estudios.

 Capacidad de mutación y adaptabilidad a condiciones medio ambientales:

Adecuad adaptabilidad al medio ambiente.

 Ciclo productivo: 24 horas.

Mecanismos de estimulación del crecimiento de las plantas

La capacidad de Azospirillum para estimular el crecimiento de las plantas se ha

demostrado endecenas de experimentos, tanto de campo como de invernadero. En
numerosos estudios de inoculación con Azospirillum, además del mejor crecimiento de las
plantas, fueron observados incrementos en el contenido de nitrógeno total de las plantas
inoculadas. No obstante, en la mayoría de estos estudios, no se observaron diferencias
significativas en el porcentaje de nitrógeno o en el contenido de proteína entre plantas
inoculadas y no inoculadas. Esto contribuyó a desechar la idea de que la fijación biológica
de nitrógeno era el mecanismo responsable de los efectos benéficos observados. Debido a
que los efectos de la inoculación conAzospirillum sobre el crecimiento de la raíz y la parte
aérea de las plantas son similares a los quese presentan cuando las plantas son tratadas
confitohormonas, se sugirió que estas sustancias podrían ser responsables del mejor
crecimiento de las plantas, así como de los incrementos observados en el contenido de
minerales y en el rendimiento de los cultivos.

Recientemente, ha sido revisada la función de las fitohormonas en las asociaciones planta

microorganismo.
Azospirillum tiene la capacidad de producir auxinas2, citocininas y giberelinasen medios
de cultivo. No obstante, el mecanismo analizado con mayor amplitud ha sido la
producción de auxinas, que puede modificar el contenido de fitohormonas3 de las plantas
conduciendo a la estimulación del crecimiento de las mismas. En cultivos de Azospirillum,
se han encontrado otros elementos promotores del crecimiento y maduración de las
plantas.

Distribución

El Azospirillum muestra una amplia distribución geográfica. Aún cuando son más
abundantes enlas regiones tropicales, también se les encuentra en las regiones templadas,
frías y desérticas. ElpH del suelo juega un papel importante en la presencia de las especies
del género Azospirillum.
Las especies de A. brasilense y A. lipoferum se encuentran en mayor abundancia en
suelos con valores de pH cercanos a la neutralidad. También se hallan esporádicamente en
suelos con unpH abajo de 5, pero cuando el pH es menor a 4.5 no se logra su aislamiento.
Un estudio en el que se evaluaron 23 tipos de suelos con características diferentes mostró
que el porcentaje de arcilla, contenido de materia orgánica, capacidad de retención de
agua contenido de nitrógeno afectan positivamente la sobrevivencia de A. brasilense, en
tanto que el tamaño de las partículas de arena y especialmente la alta concentración de
carbonato de calcio afectan negativamente la sobrevivencia de esta especie en ausencia de
plantas. No obstante, la sobrevivencia de A. brasilense en la rizosfera es independiente de
la aridez del suelo.
Aislamiento

El aislamiento de las bacterias Azospirillum

es, por lo general, bastante simple. El
procedimiento puede hacerse ya sea a partir de
suelo rizosférico o de la superficie de las
raíces (rizoplano) de numerosas plantas
hospederas. También se le aísla del interior
de las raíces o tallos de algunas plantas.

El medio de cultivo usado por excelenciapara

elenriquecimiento del Azospirillum ha sido el
NFb semigelificado "libre" de nitrógeno y con malato como fuente de carbono. No
obstante, en este medio de cultivo son aisladas predominantementecepas de las especies
A. lipoferum y A. brasilense.

Elmedio NFb con algunas modificaciones en su composición y pH permiten el

aislamiento predominante de otras especies de Azospirillum. Estos medios son usados
frecuentemente para evaluar la actividad reductora de acetileno , como indicativo de la
fijación de nitrógeno.
El cultivo puro se logra en diferentes medios de laboratorio. Se usa comúnmente un medio
adicionado del colorante rojo Congo8, en el cual A. lipoferum y A. brasilense toman un
color rojo escarlata que permite la diferenciación de otros géneros bacterianos.
Además de los medios y métodos descritos, también existen reportados algunos medios
decultivo y métodos para el crecimiento de Azospirillum en cultivo puro y en asociación
conplantas, así como para su conservación.

Aplicación
La forma más simple de emplear la bacteria es, tal cual sale del fermentador, pero implica
Ungarn obstáculo que es la remoción de grandes volúmenes de líquido con peligro de
contaminación en el transporte y almacenamiento. Por otro lado y lo más importante, es
que el microorganismo llega al suelo desprovisto de protección, expuesto a los rigores del
medio: calor, humedad, microflora, entre otros lo que disminuye considerablemente sus
posibilidades desupervivencia. La aplicación del inoculante en forma líquida puede ser,
sin embargo, deseablecuando no es posible tratar la semilla botánica y es necesario aplicar
el biofertilizantedirectamente al suelo.
Métodos de propagación y/o crecimiento de la bacteria

La mayoría de las bacterias producidas en la industria agroalimentaria y en la

farmacéutica seobtienen por fermentación sumergida en biorreactores de diversas escalas
con la aereaciónagitaciónadecuada a los requerimientos del microorganismo cultivado y
con los accesorios y automatización necesaria que garanticen las condiciones de
fermentación (pH, temperatura,etc.).

Debido a sus requerimientos nutricionales las bacterias del género Azospirillum pueden
producirse económicamente por el método de fermentación en templas o discontinuo
(batch).
Para la producción por el método de fermentación batch que es el más convencional, el
primerpaso es la optimización del medio y condiciones de cultivo. Esto es también
extensivo a la fermentación incrementada (fed-batch) y continúa. Sorpresivamente, pocos
estudios se han dedicado a la fisiología de Azospirillum propagado en fermentadores para
la producción de biomasa.

Para la producción de biomasa, el crecimiento no debe estar limitado por nitrógeno, lo que
Implica una adición de sales de nitrógeno al medio de cultivo. También se requiere un
control estricto de la esterilidad puesto que el pH y la temperatura óptimos de
Azospirillum permiten el desarrollo de todo tipo de contaminantes potenciales. Los
parámetros claves que deben controlarse son:

o La composición del medio de cultivo

o La temperatura
o El suministro de oxígeno
o El contenido intracelular de polibetahidroxibutirato (PBH) (material de reserva)
o El estado fisiológico de la bacteria al detener la fermentación.

El desarrollo de estrategias de fermentación optimizadas conllevará a un mejoramiento de

la producción de biomasa. El método de fermentación incrementado (fed-batch) en el que
los nutrientes se añaden en el medio durante el transcurso de la fermentación puede
ayudar alcanzar el estado fisiológico deseado en el medio, incrementándose también la
productividad de biomasa.