Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
OANA MUNTEANU
IOSIF I. NAGY
ADRIAN NEAGU
LUCRĂRI PRACTICE
DE
B I O F I Z I C Ă
EUROBIT – 2019
1
2
PREFAŢĂ
Autorii
3
4
Cuprins
5
6
PARTEA 1
STANDARDE ŞI METODE CURENTE DE LABORATOR
7
defecţiuni în construcţia sau funcţionarea aparatului, alegerea
necorespunzătoare a metodei de lucru şi necesită refacerea măsurătorilor.
∆ i = xi − x (i = 1, 2, ... , n) (2)
8
pătratelor erorilor, adică ( x1 − x ) 2 + ( x 2 − x ) 2 + ... + ( x n − x) 2 este minimă pentru
x=x
o Deviaţia standard sau eroarea medie pătratică este definită prin relaţia
n
∑ ∆2i
i =1
s= (6a)
n
şi poate fi exprimată în funcţie de abaterile centrale
n
∑ Ai2 ( x1 − x ) 2 + ( x2 − x ) 2 + ... + ( xn − x ) 2
i =1
s= = (6b)
n -1 n -1
Deviaţia standard caracterizează precizia unei măsurători.
o Eroarea standard a mediei (deviaţia standard a valorii medii) este dată de
1
Sm = ⋅s (7)
n
Obs. În cazul cercetărilor biologice când populaţia studiată se
caracterizează printr-un număr foarte mare de elemente, studiul se face pe
eşantioane cu număr mai mic de elemente.
9
care indică cea mai bună valoare şi eroarea acestei valori. Media aritmetică x
este dată de formula (4), iar deviaţia standard a sa, S m , se calculează pe baza
relaţiei (8). Pentru a înţelege noţiunile prezentate sumar şi metoda de prelucrare a
datelor, în cele ce urmează vom efectua aceste calcule cu date numerice obţinute
în laboratorul nostru:
Exemplu: În cursul efectuării unor măsurători spectrofotometrice în urma
a 5 determinări, (n = 5) valorile transmitanţei au fost următoarele:
Tabel 1
Determinarea Valoarea transmitanţei T
1 50,6
2 49,5
3 49,4
4 50,2
5 48,8
Etapele de calcul:
1. Se calculează valoarea medie T (media aritmetică a celor 5 valori ale
transmitanţei) cu formula (4);
2. Se calculează abaterile centrale Ai cu relaţia (5);
10
În încheiere se calculează deviaţia standard a mediei aritmetice:
5
∑ Ai2 2
i =1
Sm = = = 0,1 = 0,316
n (n − 1) 5 (5 − 1)
11
x1 + x 2 + ...+ x n
b) se calculează cu relaţia x = ;
n
c) reprezintă media aritmetică a setului de determinări experimentale pentru
mărimea studiată;
d) nu intervine în exprimarea rezultatului experimentului;
e) este media aritmetică a erorilor absolute.
4. În urma efectuării unui experiment au fost măsurate pentru o mărime
fizică următoarele valori:
x1 = 5,63; x2 = 5,72; x3 = 5,86;
Valoarea medie a celor trei măsurători este:
a) 5,74; b) 5,69; c) 5,78; d) 5,81; e) 5,76.
xi − x
a) ∆ i = xi − x ; b) ∆ i = ; c) ∆ i = xi − x ;
n(n − 1)
n
x ∑ xi − x
d) ∆ i = xi − ; e) ∆ i = i =1
.
2 n
a) x ∈ (x - ∆i ,x + ∆i ) ; b) x ∈ (x - s, x + s) ;
Ai ,x + Ai )
c) x ∈ (x - ; d) x ∈ (x - S m ,x + S m ) ;
2 2
e) x ∈ (x - 2 s, x + 2 s) .
13
1.2. REPREZENTAREA GRAFICĂ A DATELOR
EXPERIMENTALE
xo = r cosθ
yo = r sin θ
r = xo2 + yo2
14
b) După trasarea sistemului de coordonate, la capătul fiecărei axe se înscrie
simbolul mărimii reprezentate, urmat în mod obligatoriu, între paranteze, de
unitatea sa de măsură (excepţie făcând cazul când mărimea este adimensională).
c) Un alt aspect esenţial ce trebuie avut în vedere este alegerea scării
(unităţii) potrivite. De precizat faptul că acurateţea reprezentării grafice nu este
afectată dacă nu se alege aceeaşi scară pe ambele axe de coordonate. În alegerea
unităţii trebuie avut în vedere intervalul de variaţie a mărimilor fizice
reprezentate.
Exemplu: Să se reprezinte grafic variaţia temperaturii unui lichid încălzit
în funcţie de timp. Valorile experimentale sunt înscrise în Tabelul 1:
Tabel 1
T (min) 0 5 10 15 20
t (°C) 21 22 23 24 25
15
Scara pe axele de
coordonate trebuie aleasă cât mai
simplu posibil. Este foarte bine
dacă 1 cm de pe grafic corespunde
unei unităţi oarecare pentru
mărimea măsurată. Prin unitate
înţelegem 0,1; 1; 10; 100 etc. Este
destul de comod şi când 1 cm
corespunde la 2 sau 5 unităţi.
d) Valorile pe axele de
coordonate trebuie să fie cât mai
simple, de regulă cu cel mult două
cifre, preferabil multipli de 1, 2, 5
sau 10. În caz că valorile mărimilor
reprezentate sunt foarte mari (sau
Figura 1.2.3
foarte mici), la extremitatea axei se
înscrie puterea lui 10 folosită în scrierea valorii mărimii. De exemplu, valoarea
2000 va fi înlocuită cu 2 x 103 (pe axă fiind trecută valoarea 2, iar la extremitatea
ei 103), iar valoarea 0,0003 va fi înlocuită cu 3 x 10-4 (pe axă fiind trecută
valoarea 3, iar la extremitatea ei 10-4).
e) Fiecărei perechi de valori (x, y) (în cazul exemplului de mai sus (T, t)) îi
corespunde un punct al reprezentării, care se obţine prin trasarea de
perpendiculare imaginare pe cele două axe de coordonate. Graficul se
concretizează într-o curbă continuă cât mai apropiată de punctele astfel obţinute,
care să fie în concordanţă cu predicţiile teoretice aferente dependenţei studiate.
f) Reprezentarea grafică trebuie să indice erorile absolute, în caz că acestea
pot fi estimate.
16
Acest lucru este necesar în special
dacă erorile absolute sunt diferite pentru
diferite valori ale funcţiei y, adică atunci
când valorile funcţiei y au fost obţinute
prin măsurări de precizii diferite. Prin
fiecare punct experimental se duce un
segment de dreaptă vertical de lungime
egală cu eroarea absolută corespunzătoare
transpusă în unităţile corespunzătoare
scării alese pentru funcţia y (Figura
1.2.4).
Figura 1.2.4
Reprezentările grafice prezintă
avantajul că prin cunoaşterea câtorva perechi de valori (x, y) se pot determina şi
alte perechi de valori necunoscute, prin operaţii de interpolare, respectiv
extrapolare.
17
Teste de verificare a cunoştinţelor
1. Care dintre afirmaţiile de mai jos sunt adevărate ?
a) orice reprezentare grafică constă dintr-o succesiune de segmente care unesc
punctele experimentale adiacente;
b) reprezentarea bidimensională a valorilor experimentale se face într-un sistem
compus din 3 axe de coordonate reciproc perpendiculare, numit sistem de
coordonate cartezian;
c) în anumite situaţii se recomandă reprezentarea graficului pe hârtie
semilogaritmică;
d) în sistemul de coordonate rectangular, axa orizontală se numeşte axa
absciselor;
e) în sistemul de coordonate rectangular, cele două axe de coordonate sunt
perpendiculare între ele şi se intersectează într-un punct numit origine.
18
4. Analizaţi afirmaţiile de mai jos şi alegeţi răspunsurile corecte:
a) pe axele de coordonate se înscriu obligatoriu toate valorile mărimilor
reprezentate;
b) pe axe este necesară scrierea simbolului mărimii, precum şi a unităţii sale de
măsură (dacă este cazul);
c) este obligatoriu ca unitatea (scara) aleasă să coincidă pe cele 2 axe;
d) graficul se reprezintă sub forma unei curbe continue cât mai apropiate de
punctele experimentale;
e) axa orizontală se numeşte axa absciselor, pe ea fiind înscrise valorile variabilei
independente.
19
1.3. PREPARAREA ŞI PĂSTRAREA SOLUŢIILOR.
MODURI DE EXPRIMARE A CONCENTRAŢIEI UNEI
SOLUŢII
Un amestec omogen şi izotrop format din două sau mai multe substanţe
care nu reacţionează chimic formează o soluţie. Componentele unei soluţii sunt
mediul dispersant (numit solvent) şi cel puţin o fază dispersată (numită solut
sau solvit).
msolut
c% w / w = ⋅ 100 (% w / w) (1)
msolutie
Vsolut
c% v / v = ⋅100 (% v / v) (2)
Vsolutie
m (g) mol
c= sau M (3)
M ⋅ V ( L) L
20
În relaţia (3) M reprezintă masa molară a substanţei dizolvate (exprimată
în g/mol).
Figura 1.2.7
Fie două soluţii de concentraţii procentuale p1 şi p2 din amestecarea cărora
dorim să obţinem o soluţie de concentraţie p3. Regula dreptunghiului se aplică
astfel: în colţurile din stânga ale dreptunghiului se înscriu valorile numerice ale
concentraţiilor procentuale p1 şi p2 ale soluţiilor iniţiale, iar la intersecţia
diagonalelor se scrie valoarea numerică a concentraţiei procentuale p3 a soluţiei
ce urmează a fi obţinută. De-a lungul fiecărei diagonale se face diferenţa
concentraţiilor înscrise (din valoarea mai mare se scade cea mai mică), valorile
astfel obţinute trecându-se în colţurile din dreapta ale dreptunghiului, la capătul
diagonalei de-a lungul căreia s-a calculat diferenţa (vezi Figura 1.2.7)
În concluzie, pentru prepararea soluţiei de concentraţie p3 se amestecă
(p1 – p3) părţi din soluţia de concentraţie p2 şi (p2 – p3) părţi din soluţia de
concentraţie p1.
Exemplul 1: Să se precizeze în ce proporţie trebuiesc amestecate două
soluţii de NaCl de concentraţii procentuale 24% şi 8% pentru a obţine o soluţie
de concentraţie 15% .
Figura 1.2.8
21
Aplicând regula dreptunghiului (vezi Figura 1.2.8) rezultă că 7 părţi din
soluţia de concentraţie 24% trebuiesc amestecate cu 9 părţi din soluţia de
concentraţie 8% , rezultând astfel 16 părţi de soluţie de concentraţie 15% .
Exemplul 2: Să se prepare o soluţie de concentraţie 15% prin diluarea unei
soluţii stoc de concentraţie 24%.
Figura 1.2.9
Din regula dreptunghiului (vezi Figura 1.2.9) rezultă că 15 părţi de soluţie
stoc de concentraţie 24% se amestecă cu 9 părţi de apă distilată pentru a furniza
24 de părţi de soluţie de concentraţie 15%.
22
PARTEA 2
LUCRĂRI DE LABORATOR
Noţiuni teoretice
Lichidele reprezintă clasa de substanţe cu volum bine definit dar fără
formă proprie. Între moleculele oricărui lichid se exercită forţe de atracţie
(coeziune), ce au ca rezultat formarea unor structuri cristaline de mici
dimensiuni, care însă, spre deosebire de cazul solidelor, au un timp de viaţă
extrem de scurt, structurile desfăcându-se şi refăcându-se în permanenţă. Pentru
moleculele din straturile interne ale lichidului, aceste forţe de coeziune sunt
uniform distribuite în toate direcţiile, rezultanta lor fiind nulă (Figura 2.1.1).
Zicem că aceste molecule se găsesc în stare compensată. Moleculele din stratul
de la suprafaţa lichidului însă, au o altă stare, forţele de coeziune datorate
moleculelor vecine de lichid fiind mai mari decât forţele de adeziune exercitate
de către moleculele fazei gazoase. În acest caz forţele de atracţie nu se mai
exercită egal pe toate direcţiile, rezultanta lor fiind diferită de zero,
perpendiculară pe suprafaţa lichidului şi orientată spre interiorul acestuia (Figura
2.1.1). Despre moleculele de la suprafaţă se poate afirma că se află într-o stare
necompensată. Datorită acţiunii acestor forţe, suprafaţa lichidului se comportă ca
o membrană elastică întinsă. Stratul de lichid de la suprafaţă se numeşte strat
superficial sau interfaţă şi exercită asupra moleculelor din straturile interne o
presiune de aproximativ 104 atm, conferind lichidelor proprietatea de
incompresibilitate.
23
În fiecare punct al suprafeţei şi
tangent la ea, acţionează nişte forţe de
tensiune care caută să reducă suprafaţa,
aceasta curbându-se, la echilibru tinzând
să devină sferică. Astfel, picăturile de
mercur sau ploaie au formă sferică, sfera
fiind corpul geometric cu suprafaţă
minimă la un volum dat.
Aceste forţe sunt cunoscute sub
numele de forţe de tensiune superficială,
Figura 2.1.1 depinzând de lungimea l a conturului
suprafeţei şi de coeficientul σ de tensiune superficială ce este specific lichidului:
F = σ ⋅l
24
Importanţa în practica medicală
Lichidele biologice au în general un coeficient de tensiune superficială
mai mic decât al apei, datorită prezenţei diferitelor molecule biologice cu efect
tensioactiv.
Alveolele pulmonare sunt implicate în schimburile de gaze din procesul
respiraţiei. În vederea unui schimb eficient de gaze, este necesară o suprafaţă
mare a pereţilor alveolari, ce poate fi menţinută printr-o valoare scăzută a
tensiunii superficiale. În acest scop peretele alveolar este pavat pe interior cu un
lichid conţinând un compus lipoproteic tensioactiv - surfactantul pulmonar – cu
rol în reducerea tensiunii superficiale (de la 72 dyn/cm până la 2 dyn/cm).
Embolia gazoasă apare atunci când există condiţii medicale sau
traumatice ce favorizează pătrunderea unor gaze în mediul intravascular (aer,
dioxid de carbon, oxigen, azot), pătrundere care determină apariţia unor
interfeţe gaz – lichid. Dacă raza vasului capilar este egală cu raza de curbură a
bulei, aceasta va fi împinsă de presiunea sanguină şi nu va bloca fluxul sanguin;
dacă însă raza capilarului (de exemplu a unei arteriole) este mai mică decât raza
de curbură a bulei de gaz, aceasta nu mai avansează prin vas, blocând astfel
fluxul sanguin. Cantităţile mici de aer ce pătrund în sistemul vascular nu
obturează fluxul sanguin, fiind absorbite prin circulaţie.
Sărurile biliare (glicocolatul şi taurocolatul de sodiu) sunt substanţe
puternic tensioactive. Modificarea tensiunii superficiale de către acestea asigură
emulsionarea lipidelor în intestin. În acest fel suprafaţa totală a lipidelor expuse
acţiunii lipazei este mult crescută, asigurându-se o digestie optimă a acestora. În
cazuri patologice, sărurile biliare pot fi excretate în urină. O metodă rapidă de
punere în evidenţă a prezenţei sărurilor şi acizilor biliari în urină este proba Hay.
Determinarea se face presărând pe suprafaţa urinei dintr-un pahar Berzelius un
vârf de cuţit de floare de sulf. Dacă floarea de sulf se umezeşte şi se depune pe
fundul paharului, prezenţa unor constituenţi tensioactivi (săruri biliare) este
neîndoielnică. Rămânerea la suprafaţă a florii de sulf indică absenţa acestora.
Obs. Reacţia pozitivă poate fi dată şi de prezenţa unor alte substanţe
(medicamente). Urina normală are coeficientul de tensiune superficială 70
dyn/cm (apropiat de cel al apei). Prezenţa sărurilor biliare şi a acizilor
biliari scad acest coeficient până la 50 dyn/cm.
25
Principiul metodei de determinare a tensiunii superficiale
Determinarea coeficientului σ de
tensiune superficială se poate realiza cu
ajutorul unui dispozitiv numit
stalagmometru. O picătură de lichid de
masă m se va desprinde de gura
capilarului atunci când greutatea proprie
G = m ⋅ g este mai mare decât forţa de
tensiune superficială F (Figura 2.1.2). Din
punct de vedere matematic, condiţia de
desprindere a picăturii se scrie:
Figura 2.1.2 G = F sau m ⋅ g = σ ⋅ l
m ⋅ g = 2 ⋅π ⋅ R ⋅ σ (1)
unde R este raza capilarului, iar l = 2⋅π⋅R este lungimea conturului gurii
capilarului. Dacă notăm cu M masa lichidului şi cu n numărul picăturilor de masă
m, putem scrie M = m⋅n. Masa unei picături (m) se poate exprima în funcţie de
densitatea ρ şi volumul V al lichidului:
ρ ⋅V
M=ρ⋅V ⇒ m⋅ n = ρ ⋅ V deci m= (2)
n
Înlocuind pe m din relaţia (2) în relaţia (1), obţinem
ρ ⋅V
g = 2 ⋅π ⋅ R ⋅σ (pentru soluţie) (3)
n
ρ o ⋅V
g = 2 ⋅π ⋅ R ⋅σ o (pentru apă distilată) (4)
no
26
no ρ
σ = σ o. . (6)
n ρo
Modul de lucru
- cu ajutorul unui pahar Berzelius, se umple
cu apă distilată biureta (1), puţin peste
reperul 0 (Figura 2.1.3);
- se reglează încet robinetul (2) până la
obţinerea unei frecvenţe optime pentru
numărarea picăturilor;
- se determină numărul picăturilor pentru
apă distilată (no), pentru un volum de lichid
de 5 mL, iar valoarea se trece în Tabel;
- se repetă operaţia de încă două ori, valorile
se înscriu în Tabel şi se calculează media lor
aritmetică no ;
- se efectuează determinările şi pentru
soluţiile de cercetat, de densităţi cunoscute,
obţinându-se numerele de picături n1 şi n2,
Figura 2.1.3 respectiv mediile n1 şi n2 , valori care se
trec în Tabel;
- după fiecare soluţie utilizată se clăteşte biureta cu apă distilată;
- din Tabelele 1, respectiv 3 din Anexă se citesc valorile pentru ρo şi σo
corespunzătoare temperaturii din laborator;
- coeficientul de tensiune superficială se calculează cu relaţia (6) pentru fiecare
soluţie în parte;
- se completează Tabelul înlocuind valorile coeficienţilor de tensiune superficială
calculaţi pentru soluţii.
27
Teste de verificare a cunoştinţelor
1. Cum se defineşte stratul superficial ?
a) este zona de contact între două straturi de molecule din interiorul lichidului;
b) este zona de contact a două straturi de molecule aparţinând la două faze
diferite (de exemplu lichid - gaz), forţele rezultante fiind orientate întotdeauna
spre interiorul lichidului;
c) este zona în care forţele de tensiune superficială sunt orientate spre exteriorul
lichidului;
d) este zona de contact a două straturi de molecule aparţinând la două faze
diferite (de exemplu lichid - gaz), în care forţele superficiale sunt nule;
e) este stratul de lichid din vecinătatea pereţilor vasului.
2. Ce este forţa de tensiune superficială ?
a) este forţa care apare între două lichide miscibile şi favorizează mixarea lor;
b) este forţa din stratul superficial, care tinde să reducă suprafaţa acestuia;
c) reprezintă forţa cu care moleculele de lichid sunt atrase de pereţii vasului;
d) este mărimea fizică ce se defineşte prin relaţia: F = σ / l;
e) este forţa ce se exercită între moleculele din straturile interne ale lichidului.
28
6. Care este unitatea de măsură a coeficientului de tensiune
superficială în S.I. şi în C.G.S. ?
a) N/m2; dyn/cm2; b) N ⋅m; dyn⋅cm; c) J/m3; dyn/cm;
d) N/m; dyn/cm; e) N/cm; dyn/m.
7. Care este relaţia de calcul a coeficientului de tensiune superficială ?
n ρ0 no ρ o nρ
a) σ = σ o ; b) σ = σ o ; c) σ = σ o ;
no ρ nρ no ρ o
ρ
d) σ = σ o no ;
ρ
e) σ = no .
n ρo n ρo
29
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .........................................
……………………………………... Seria ............. Grupa ..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
30
Tabel
1.
2.
3.
Soluţia 2 Soluţia 3
Nr.
ρ2 σ2 ρ3 σ3
det. n2 n2 (dyn/cm) n3 n3 (g/cm ) 3
(dyn/cm)
(g/cm3)
1.
2.
3.
31
32
2.2. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE VÂSCOZITATE
A UNUI LICHID
Noţiuni teoretice
În timpul curgerii fluidelor (lichide şi gaze) reale, forţele intermoleculare
de atracţie care se opun deplasării relative a moleculelor vecine determină
apariţia unei forţe de frecare internă numită vâscozitate. Prin acţiunea acestei
forţe de frecare, stratul de fluid cu viteză de curgere mai mică (aflat în vecinătatea
pereţilor tubului) va frâna stratul de fluid ce are viteză de curgere mai mare (aflat
în zona centrală a tubului). Vâscozitatea este o mărime fizică ce caracterizează
lichidul în timpul curgerii, fără a depinde de debitul său. Fluidele ideale sunt, prin
definiţie, cele cu vâscozitate nulă.
Forţa de frecare internă (F) dintre două straturi alăturate ale lichidului aflat
în curgere laminară, este proporţională cu suprafaţa de contact (S) dintre straturi,
cu viteza relativă dintre acestea, respectiv cu un coeficient dependent de natura
lichidului, numit coeficient de vâscozitate absolută (η) (vezi Figura 2.2.1).
Expresia forţei de frecare este
dată de formula lui Newton:
∆v
F =η ⋅S ⋅ (1)
∆x
33
Coeficientul de vâscozitate al unui lichid depinde de natura sa şi de
temperatură, scăzând odată cu creşterea temperaturii.
Curgerea laminară a unui lichid este cel mai bine descrisă de ecuaţia lui
Poiseuille:
p ⋅ R4 ⋅ π
Q= (2)
8 ⋅η ⋅ l
po ⋅ R 4 ⋅ π
V= ⋅ to (4)
8 ⋅η o ⋅ l
Importanţa medicală
Descrierea aparatului
Coeficientul de vâscozitate relativă ηrel a
lichidelor se determină cu vâscozimetrul
Ubbelohde (Figura 2.2.2). Acest dispozitiv este
format dintr-un tub de sticlă în formă de U,
format din trei ramuri, două dintre acestea (1 şi
3) fiind prevăzute cu câte un rezervor situat la
nivele diferite. Ramura 3 prezintă un rezervor
situat la nivel inferior (4), prevăzut cu două
repere de umplere. Ramura 1 prezintă un tub
capilar (7) deasupra căruia se găseşte un alt
rezervor (8) prevăzut cu două repere: M1 –
superior şi M2 – inferior, ce delimitează un
volum bine definit.
Principiul metodei constă în determinarea
timpului de curgere, t, prin tubul capilar, a unui
volum dat de lichid (cuprins între reperele M1 şi
M2), respectiv a timpului de curgere, t0, a
aceluiaşi volum de apă distilată. În acest scop se
va utiliza cronometrul electronic al
Figura 2.2.2.
vâscozimetrului Engler, care permite exprimarea
Vâscozimetrul Ubbelohde
timpului în secunde.
36
Modul de lucru
În cadrul acestei lucrări se consideră că lichidul prezintă o curgere
laminară (fără vârtejuri).
1. Pregătirea cronometrului (Figura 2.2.3) pentru determinarea timpului de
curgere a volumului dat de lichid.
- iniţial, întrerupătorul de reţea (1) trebuie să fie orientat în jos, în poziţia
decuplat;
- se verifică dacă comutatorul (2) este pe poziţia "CRONOM" şi dacă
întrerupătorul (3) este pe poziţia decuplat (în jos);
- după introducerea în priză a fişei aparatului, cu ajutorul întrerupătorului de reţea
(1) se aduce cronometrul în stare de funcţionare, fapt indicat de aprinderea
becului de semnalizare (4);
- butoanele "START" (5) şi "STOP" (6) servesc la pornirea şi oprirea
cronometrului;
- cu ajutorul butonului "RESET" (7) se obţine aducerea la "000000" a indicaţiei
cronometrului;
39
5. Care e unitatea de măsură a coeficientului de vâscozitate în S.I. ?
a) N · s · m2 ; b) N · s-1 · m-2; c) N · s · m-2;
d) N · m2 · s-1; e) P (Poise).
6. Care este relaţia de calcul pentru coeficientul de vâscozitate relativă a
unui lichid faţă de apa distilată ?
unde: ηrel este coeficientul de vâscozitate relativă a lichidului faţă de apa
distilată; t0, t sunt timpii de curgere corespunzători apei distilate, respectiv
lichidului de cercetat; ρ0 , ρ reprezintă densitatea absolută a apei distilate,
respectiv a lichidului de cercetat;
ρ t ρt ρ t
a) η rel = o ; b) η rel = ; c) η rel = o o ;
ρ to ρ o to ρt
ρ to ρ ρ
0
d) η rel = ; e) η rel = t t .
ρo t 0
40
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .........................................
…………………………………… Seria ............. Grupa..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
41
Tabel
1.
2.
3.
Soluţia 2 Soluţia 3
Nr. t3
t2 t2 ρ2 η2 η2 rel η2 sp t3 ρ3 η3
det. η3 rel η3 sp
(s) (s) (g/cm3) (cP) (s) (s) (g/cm3) (cP)
1.
2.
3.
42
2.3. ANALIZA SOLUŢIILOR
PRIN SPECTROFOTOMETRIE
Noţiuni teoretice
Energiile electronului în atom sunt cuantificate, adică pot avea doar
anumite valori (E1....En) ce formează un şir discret, stările corespunzătoare
acestor valori numindu-se stări staţionare.
Figura 2.3.1. Tranziţii ale electronilor unui atom între nivele energetice
discrete însoţite de emisia respectiv absorbţia de radiaţii electromagnetice
unde h = 6,626 · 10-34 J·s este constanta lui Planck. Dacă atomii se asociază,
formând molecule sau cristale, mulţimea nivelelor energetice este îmbogăţită
datorită gradelor de libertate de vibraţie şi rotaţie, formându–se benzi
energetice. Tranziţiile dintre acestea dau naştere la spectre continue,
caracteristice structurii moleculare.
Prin înregistrarea diferitelor lungimi de undă absorbite (sau emise) de o
probă, se poate efectua analiza calitativă a acesteia: se pot identifica
componentele prin comparaţia spectrului înregistrat cu spectre ale unor
substanţe cunoscute. Aşa cum rezultă din relaţia (1), spectrul de absorbţie este
identic cu cel de emisie, generarea celor două diferă numai prin sensul
43
tranziţiilor (Figura 2.3.1). În afara analizei calitative, tehnicile spectroscopice
permit şi una cantitativă, furnizând concentraţiile substanţelor dintr-un amestec.
44
Absorbanţa este o mărime convenabilă din punct de vedere experimental
deoarece creşte direct proporţional cu concentraţia soluţiei. Această proprietate
este utilizată de spectrofotometrele moderne pentru a măsura concentraţia unei
substanţe, în urma etalonării cu o singură soluţie, care conţine acea substanţă în
concentraţie cunoscută.
În cazul în care în soluţia analizată există mai multe substanţe dizolvate,
cum este şi contextul soluţiilor biologice, trebuie remarcată o altă proprietate
esenţială a absorbanţei, cea de aditivitate: A = A1 + A2 + L + An .
Spectrul de absorbţie al unei substanţe reprezintă mulţimea valorilor
absorbanţei corespunzătoare diferitelor lungimi de undă λ din domeniului
spectral studiat (Figura 2.3.2).
I = I 0 ⋅ 10 −ε c x (6)
47
Figura 2.3.3. Spectre de absorbţie ale hemoglobinei oxigenate şi reduse
Cunoscând curbele de absorbţie specifice, aparatul poate furniza date
privind gradul de saturare a hemoglobinei cu oxigen. Unele aparate pot furniza
şi frecvenţa cardiacă (pulsul periferic) detectând variaţia absorbanţei cu
grosimea ţesutului (la fiecare pulsaţie volumul ţesutului creşte foarte puţin).
Metoda este utilizată în terapia intensivă şi anestezie pentru monitorizarea
pacienţilor.
48
Figura 2.3.4. Componentele spectrofotometrului Metertech SP-880
49
Modul de lucru cu spectrofotometrul Metertech SP-880
După operaţiile de punere în funcţiune şi calibrare a aparatului vom urma
paşii de lucru necesari obţinerii unui spectru de absorbţie, îl vom compara cu
spectre înregistrate în prealabil pentru anumite substanţe cunoscute şi vom
identifica componentele soluţiei de cercetat. Ca ultimă etapă va urma analiza
cantitativă a aceleiaşi soluţii, utilizând o soluţie etalon cu concentraţia
cunoscută.
1. Pornirea şi calibrarea spectrofotometrului
• Conectaţi aparatul la reţea prin intermediul unei prize cu pământare.
• Verificaţi să nu fi rămas o cuvă în compartimentul de măsurare şi închideţi
uşa acestuia. În caz contrar la pornire veţi obţine un mesaj de eroare
(„Error – 1”), fiind necesară oprirea aparatului şi corectarea stării de
lucruri înainte de repornire.
• Acţionaţi comutatorul principal situat pe panoul din spate al aparatului.
Spectrofotometrul va parcurge un protocol automat de pornire în cursul
căruia sunt testate sursele de lumină, oglinzile şi filtrele. La sfârşitul
protocolului de start afişajul LCD (10) indică lungimea de undă şi regimul
de măsurare absorbanţă (A): „WL: 500nm READ: 0.00x A”. Regimul
nominal de funcţionare se atinge după o încălzire de 30 minute.
• Selectaţi cu ajutorul tastei A/T/C (5) modul de măsurare absorbanţă (A).
• Apăsaţi tasta λ (1), introduceţi valoarea lungimii de undă la care doriţi să
efectuaţi calibrarea (de exemplu 400 nm) şi apăsaţi tasta ENTER (4).
Valoarea lungimii de undă poate fi corectată pe parcursul introducerii sale
cu ajutorul tastei ESC (2); la fiecare acţionare aceasta are ca efect
ştergerea ultimei cifre introduse.
• Deschideţi compartimentul de măsurare (11) şi introduceţi în locaş o cuvă
umplută cu solvent pur până la aproximativ 1 cm de marginea sa
superioară. Feţele transparente ale cuvei se plasează perpendicular pe
marcajul alb de pe suportul cuvelor (acesta indică direcţia de propagare a
luminii). Închideţi uşa compartimentului.
Obs. Cuva se prinde doar de partea superioară a feţelor mate !
• Apăsaţi tasta BLANK (3). Afişajul indică valoarea 0.000 A pentru
absorbanţă (respectiv 100 % pentru transmitanţă dacă se lucrează în
regimul T). Astfel aparatul este calibrat pentru măsurători ale absorbanţei
(respectiv transmitanţei).
• Cuva cu solvent se înlocuieşte cu cea umplută cu soluţie de cercetat şi se
citeşte absorbanţa (respectiv transmitanţa) pe afişaj.
50
2. Analiza calitativă
Vom înregistra spectrul de absorbţie în domeniul vizibil (λ∈[400nm,
700nm]) pentru o soluţie de compoziţie necunoscută. Spectrofotometrul se
presupune a fi etalonat pentru măsurători ale absorbanţei (mod A).
Utilizând tastele numerice introduceţi lungimea de undă de 400 nm şi
apăsaţi tasta ENTER.
Umpleţi o altă cuvă, până la 75 % din volumul său, cu soluţia de cercetat
de concentraţie 2%.
Deschideţi clapeta compartimentului de măsurare şi introduceţi cuva cu
soluţie.
Închideţi capacul compartimentului de măsurare şi citiţi valoarea
absorbanţei de pe afişaj. Notaţi-o în Tabelul 1.
Selectaţi 420 nm şi reluaţi calibrarea punctului de zero a absorbanţei
(introduceţi cuva umplută cu solvent pur şi acţionaţi tasta BLANK).
Introduceţi cuva cu soluţie, citiţi absorbanţa sa şi notaţi-o în Tabelul 1.
Continuaţi până la lungimea de undă de 700 nm, cu paşi de câte 20 nm.
Reprezentaţi grafic absorbanţa în funcţie de lungimea de undă a luminii
utilizând datele din Tabelul 1.
Comparaţi graficul cu spectrele de absorbţie ale unor compuşi cunoscuţi
şi identificaţi substanţele dizolvate în soluţia necunoscută.
Remarcăm că, în cazul mai multor substanţe dizolvate, analiza calitativă
mai sus prezentată este fezabilă numai în condiţiile în care maximele de
absorbţie ale substanţelor din soluţie nu sunt apropiate. În caz contrar, s-ar
putea întâmpla ca, din efectul conjugat al celor două componente, să obţinem
maxime care nu apar în nici unul din spectrele substanţelor dizolvate, făcând
imposibilă identificarea lor.
3. Analiza cantitativă
Spectrofotometrul digital Metertech SP-880, fiind gestionat de un
microprocesor, are facilitatea de a măsura concentraţiile unor substanţe
dizolvate. Rezultatele obţinute sunt precise numai dacă soluţia studiată
satisface legea Lambert – Beer. Este necesar ca aparatul să se calibreze, în
regim „Conc @ Stand” sau „Conc @ Factor” (care se alege cu tasta A/T/C).
Etapele de lucru necesare analizei cantitative în regimul „Conc @
Stand” sunt următoarele:
51
- Selectaţi acea lungime de undă la care absorbanţa substanţei de interes
este maximă (vezi spectrul de absorţie obţinut în etapa anterioară).
- Cu ajutorul tastei A/T/C selectaţi regimul de lucru „Conc @ Stand”
indicat pe afişaj, după care apăsaţi tasta ENTER.
- Specificaţi concentraţia soluţiei de referinţă (2%) urmată de tasta ENTER;
- Când afişajul indică ”C:xxxx, Stand BLANK” introduceţi în suport cuva
cu apă distilată şi apăsaţi tasta BLANK.
- Când afişajul indică „ABS: 0.000, Put Stand → ENTER” introduceţi în
suport cuva cu soluţia de referinţă (2%), închideţi capacul incintei şi
apăsaţi tasta ENTER.
- Pe afişaj apare „FTR: xxx.x, Sample BLANK”, specificând factorul de
proporţionalitate dintre absorbanţă şi concentraţie.
- Introduceţi din nou cuva cu apă distilată şi apăsaţi tasta BLANK. Afişajul
indică „WL: xxx nm, C: 0.000”.
- Introduceţi cuva cu soluţia stoc şi citiţi valoarea concentraţiei acesteia;
folosind soluţia stoc şi apă distilată, preparaţi diluţii de concentraţie 1%,
2,7%, 4,2% şi 5%.
- Măsuraţi cu ajutorul spectrofotometrului concentraţiile diluţiilor preparate
şi introduceţi datele în Tabelul 2.
Calculul ce stă la baza măsurării concentraţiei unei soluţii cu o singură
substanţă dizolvată se poate rezuma astfel: Aparatul memorează absorbanţa
soluţiei de concentraţie cunoscută, “trasează” o dreaptă între origine şi punctul
corespunzător acesteia, apoi, utilizând această dreaptă de etalonare, calculează
concentraţiile necunoscute (ale aceleiaşi substanţe dizolvate) în soluţii de
componenţă necunoscută. Metoda poate fi aplicată cu succes şi pentru soluţii cu
mai multe substanţe dizolvate cu condiţia ca acestea să nu posede maxime de
absorbţie apropiate şi să satisfacă legea Lambert – Beer.
Analiza cantitativă în cazul soluţiilor care nu satisfac legea Lambert-
Beer cere un număr mare de soluţii etalon, a căror absorbanţă va fi
determinată, trasându-se graficul absorbanţei în funcţie de concentraţie, iar
această curbă de etalonare este utilizată pentru determinarea concentraţiilor
necunoscute.
Taste și afișaj
• Ecranul (1) afișează valorile parametrilor selectați: absorbanță,
transmitanță, concentrație, lungime de undă, precum și mesaje ca “AUTO”,
“CAL”, “FAIL”, respectiv mesaje de eroare. Parametrul a cărui valoare este
afișată este identificat prin pictogramele aflate în partea dreaptă a ecranului. O
pictogramă suplimentară este cea a lămpii de deuteriu (D2).
• Tasta READOUT (2) permite selectarea modului de lucru dorit –
absorbanță (A), transmitanță (%T), concentrație (C), lungime de undă (nm).
• Tasta SET C/F (3) - este folosită când se dorește setarea valorii
concentrației. Pentru a introduce o valoare a concentrației folosiți tastele
PLUS/MINUS (4). Punctul zecimal este mutat folosind tasta DEC SHIFT (5).
Când toate cifrele sunt setate și punctul zecimal este plasat corect, apăsați tasta
SET încă o dată pentru a memora valoarea respectivă.
• Tastele PLUS/MINUS (4) - aceste taste, ce sunt marcate cu “+” și “-“
sunt folosite în următoarele cazuri:
a. O scurtă apăsare a oricărei taste, când nu vă aflați în modul de afișare a
lungimii de undă, va duce la afișarea setării curente a valorii lungimii de undă
timp de aprox. 4 secunde înainte de întoarcerea la citirea anterioară.
53
b. Când lungimea de undă este afișată, valoarea poate fi crescută sau
micșorată cu pași de 0,1 nm printr-o scurtă apăsare a tastei “+” sau ”-”.
c. O apăsare lungă a tastei “+” sau ”-” va duce la schimbarea lentă a
lungimii de undă cu 10 nm după care urmează o modificare rapidă în timpul
operării.
d. Aceste taste sunt folosite și pentru creșterea sau micșorarea cifrei
precedente punctului zecimal când setați o valoare a concentrației.
• Tasta ZERO (6):
a. O scurtă apăsare a acestei taste va duce la setarea automată a valorii zero a
absorbanței și a valorii de 100% a transmitanței.
b. O apăsare lungă duce la setarea automată a transmitanței 0% urmată de
setarea automată a absorbanței zero și transmitanţei 100%.
• Tasta PEAK SEEK (7) este folosită pentru a activa programul automat de
căutare și găsire a valorii corecte a lungimii de undă corespunzătoare unui vârf
de absorbanță sau unui vârf de transmitanță, precum și pentru dezactivarea
lămpii de deuteriu.
54
2. Analiza calitativă
• Când folosiți spectrofotometrul în domeniul vizibil (400 nm< λ <700 nm),
este posibil și recomandat să opriți lampa de deuteriu pentru prelungirea
duratei de viață a acesteia. Apăsați tasta PEAK SEEK de mai multe ori
până pe ecran apare mesajul “deut”, apoi apăsați tasta SET. Dacă atunci
când lampa de deuteriu este dezactivată se setează o lungime de undă cu
valoare mai mică de 400 nm, lampa pornește automat. În timpul încălzirii
acesteia, simbolul “D2” va lumina intermitent.
• Modul de lucru în absorbanță este automat ales după pornire, fapt
confirmat de iluminarea simbolului “A”. Dacă se cer măsurători de
transmitanță, alegeți acest mod de lucru cu ajutorul tastei READOUT.
• Conform Tabelului 1, alegeți lungimea de undă cerută pentru măsurare
(400 nm) cu ajutorul tastelor “+” sau ”-”.
• Introduceți o cuvă umplută cu solvent pur (apă distilată) până la
aproximativ 1 cm de marginea sa superioară în suportul special aflat în
compartimentul de măsurare, apoi închideți capacul acestui compartiment.
Atenție! Așezați cuva astfel încât fasciculul de lumină să
traverseze fețele transparente ale acesteia ! Cuva se prinde doar de
partea superioară a feţelor mate !
• Apăsați tasta ZERO pentru a aduce la zero valoarea afișată pe ecran a
absorbanței (respectiv 100 % pentru transmitanţă, dacă se lucrează în
regimul T). Astfel aparatul este calibrat pentru măsurători ale absorbanţei
(respectiv transmitanţei).
• Înlocuiți cuva cu apă distilată cu o altă cuvă umplută cu soluţie de cercetat
(Sol. 1 – CuSO4 2%) și închideți capacul compartimentului.
• Citiți valoarea absorbanței (respectiv a transmitanţei) afișată pe ecran.
Notaţi-o în Tabelul 1.
• Selectaţi valoarea de 420 nm a lungimii de undă, prin apăsarea tastei “+” şi
reluaţi calibrarea punctului de zero a absorbanţei (reintroduceţi cuva
umplută cu solvent pur şi acţionaţi din nou tasta ZERO).
Atenție! Ignoraţi afişajul intermitent „-999” dacă acesta apare şi
continuaţi calibrarea.
• În urma reintroducerii în suport a cuvei cu soluţia de măsurat, citiţi noua
valoare a absorbanţei şi notaţi-o în Tabelul 1.
• Continuaţi până la lungimea de undă de 700 nm, cu paşi de câte 20 nm.
55
• Reprezentaţi grafic absorbanţa în funcţie de lungimea de undă a luminii,
utilizând datele din Tabelul 1.
• Comparaţi graficul cu spectrele de absorbţie ale unor compuşi cunoscuţi şi
identificaţi substanţele dizolvate în soluţia necunoscută.
Remarcăm că, în cazul mai multor substanţe dizolvate, analiza calitativă mai
sus prezentată este fezabilă numai în condiţiile în care maximele de absorbţie
ale substanţelor din soluţie nu sunt apropiate. În caz contrar, s-ar putea întâmpla
ca, din efectul conjugat al celor două componente, să obţinem maxime care nu
apar în nici unul din spectrele substanţelor dizolvate, făcând imposibilă
identificarea lor.
3. Analiza cantitativă
• Cu ajutorul tastelor “+ / -“ selectaţi acea lungime de undă la care
absorbanţa substanţei de interes este maximă (vezi spectrul de absorbţie
obţinut în etapa anterioară).
• Alegeți modul de măsurare a concentrație cu ajutorul tastei READOUT.
• Introduceți o cuvă cu solvent pur și închideți capacul compartimentului.
• Apăsați tasta ZERO pentru ca pe ecran să se afișeze 0.000.
• Introduceți în suport cuva cu soluția standard – Soluția 1 (având o valoare
cunoscută a concentrației, în cazul nostru 2.000 %).
• Apăsați tasta SET C/F.
• Utilizați tastele “+ / -“ pentru a seta valoarea 2.000 % a concentrației
soluției standard. Aceste taste ajustează cifra anterioară punctului zecimal.
Punctul zecimal poate fi mutat cu ajutorul tastei DEC SHIFT. Când toate
cifrele sunt setate și punctul zecimal este plasat corect, apăsați tasta SET
încă o dată pentru a memora valoarea respectivă.
• Înlocuiți soluția standard cu soluția 2, de concentrație necunoscută.
Valoarea concentrației acesteia va fi afișată pe ecran.
• Pornind de la valoarea măsurată anterior pentru concentrația soluției 2,
preparaţi diluţii de concentraţie 1%, 2,7%, 4,2% şi 5%.
• Măsuraţi cu ajutorul spectrofotometrului concentraţiile diluţiilor preparate
şi introduceţi datele în Tabelul 2.
56
Teste de verificare a cunoştinţelor
1. Să se identifice relaţiile corecte pentru transmitanţă: (Notaţii: I 0 , ( I ) –
intensitatea fasciculului incident (emergent), x – grosimea stratului de
substanţă, k – coeficientul de absorbţie.)
I I
a) T = ; b) T = 0 ; c) T = exp(−kx) ;
I0 I
d) T = 10 kx ; e) T = I 0 exp( −kx) .
58
9. În medicina de laborator spectrofotometria:
a) este utilizată în combinaţie cu metode chimice de preparare care duc la
formarea unor soluţii colorate;
b) permite determinarea concentraţiilor pe baza măsurii în care lungimea de undă
a luminii creşte cu concentraţia compusului studiat;
c) se poate utiliza numai pentru dozarea compuşilor chimici care absorb în
domeniul spectral al radiaţiilor generate de spectrofotometru;
d) permite dozarea tuturor electroliţilor;
e) se poate folosi pentru a măsura intensitatea luminii emise de solut.
10. Pulsoximetria:
a) este o tehnică invazivă de diagnosticare a insuficienţei cardiace;
b) se bazează pe măsurarea autofluorescenţei ţesuturilor vii;
c) se poate utiliza pentru a determina ritmul cardiac datorită variaţiei periodice a
grosimii stratului de ţesut investigat;
d) este o metodă de determinare a concentraţiei de hemoglobină oxigenată şi
redusă prin măsurarea absorbanţei unei porţiuni de ţesut la două lungimi de undă;
e) permite măsurarea pulsului şi a ritmului respirator.
59
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Facultatea ........................................ Prenume....................................
……………………………………
Seria ............. Grupa ...................
…
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
60
Tabelul 1. Spectrul de absorbţie
λ (nm) A λ (nm) A λ (nm) A
400 500 600
420 520 620
440 540 640
460 560 660
480 580 680
- - 700
61
Grafic. Variaţia absorbanţei (A) cu lungimea de undă (λ)
62
2.4. DIFUZIA LIBERĂ PRIN MEMBRANE SELECTIV
PERMEABILE
Noţiuni teoretice
sau
dn1 1 PS
+ n1 = n0 (5a)
dt τ V2
n1 (t ) = n0 1 − e
τ
(6)
V1 + V2
de unde rezultă concentraţia molară de solut din acest compartiment,
−
t
c1 (t ) = c∞ 1 − e τ
(7)
64
n0
unde c∞ = este concentraţia molară care se va obţine după o perioadă de
V1 + V2
timp foarte lungă, când cei n0 moli de substanţă dizolvată vor fi distribuiţi
uniform în întregul volum V1 + V2 al celor două compartimente.
Conform celor discutate în cadrul lucrării „Determinarea concentraţiei
unor electroliţi pe baza măsurătorilor de conductanţă electrică”, conductanţa unei
soluţii de electrolit creşte liniar cu concentraţia sa:
G = GH 2 O + K ⋅ c (8)
K = (G0 − GH 2O ) / c0 (9)
65
1
P= . (12)
1 1
τ S +
V1 V2
90
80
70
60
∆ G (mS)
50
40
30
20
10
0
0 50 100 150 200 250 300
t (min)
Figura 2.4.1. Conductanţa soluţiei din recipientul umplut iniţial cu apă distilată
creşte direct proporţional cu concentraţia de electrolit. Curba teoretică care
trece printre punctele experimentale (cercuri) este graficul funcţiei (10a) pentru
τ = 68 minute. Dreapta este tangenta la curbă în origine şi se suprapune peste
aceasta dacă timpul scurs este foarte mic în comparaţie cu τ . Linia punctată
reprezintă valoarea de echilibru a conductanţei, ∆G1∞ .
Scopul lucrării
Lucrarea de faţă îşi propune studiul transportului de substanţă prin
difuzie liberă prin membrane selectiv permeabile şi determinarea
permeabilităţii membranei pentru un electrolit.
În cadrul lucrării se va urmări:
- calibrarea conductometrului;
- monitorizarea conductanţei soluţiei dintr-un compartiment care la
momentul iniţial conţine apă distilată, apoi este pus în contact, prin
intermediul unei membrane de dializă, cu o soluţie salină de volum dat
şi concentraţie cunoscută;
- aflarea permeabilităţii membranei pentru substanţa dizolvată;
Descrierea aparatului
Măsurătorile conductometrice vor fi efectuate cu un conductometru OK
112, care este descris împreună cu dispozitivele sale anexe în cadrul lucrării
„Determinarea concentraţiei unor electroliţi pe baza măsurătorilor de
conductanţă electrică”. Cititorul este îndrumat să consulte acel text.
Modul de lucru
1. Calibrarea aparatului
- se poziţionează electrodul (4) în
aer;
- se introduce fişa aparatului în priză,
starea de funcţionare fiind indicată
de aprinderea ledului verde „ON; se
aşteaptă cel puţin 1 minut pentru ca
aparatul să intre în regim de lucru;
- butonul RANGE se reglează pe
domeniul de sensibilitate minimă a
conductometrului (1000 mS);
- se ţine apăsat butonul de calibrare
situat pe panoul din spate al
aparatului (colţul din stânga sus) şi
cu ajutorul tamburului CAL se
Figura 2.4.2b. Fotografia aduce acul indicator în dreptul
compartimentelor separate de capătului scalei (marcat cu un reper
membrană roşu);
68
o se introduce magnetul alb în paharul 1;
o se introduce magnetul subţire cu înveliş de plastic (3) în paharul 2 şi se
păstrează acolo pe toată durata determinărilor;
o se măsoară un volum V2 = 120 mL de soluţie salină cu concentraţia c0 = 1 M
şi se toarnă în paharul exterior (2);
o se scufundă electrodul în soluţia salină 1M, se determină conductanţa G0 a
acesteia şi se trece în Tabelul 1;
o se scoate electrodul din soluţie şi se spală foarte bine prin scufundare
repetată în apă distilată (pentru a nu afecta precizia determinărilor
ulterioare);
o se scufundă cu atenţie electrodul în paharul 1 fără a se atinge de membrană
şi se determină conductanţa G H 2O a apei distilate şi se trece în Tabelul 1 şi
în prima rubrică a Tabelului 2 (corespunzătoare momentului t = 0 s);
o se calculează ∆G1∞ din relaţia (10b) şi se scrie în Tabelul 1;
o se introduce în priză fişa agitatorului magnetic (5) şi se porneşte agitatorul
acţionând butonul rotativ (6) de pe panoul său frontal;
o se reglează cronometrul la un timp total de 30 minute;
o simultan cu pornirea acestuia, se introduce paharul cu apă distilată în
paharul cu soluţie salină, agitându-se uşor pentru a elimina bulele de aer
captate sub membrana de dializă.
Atenţie: Dat fiind faptul că prima măsurătoare trebuie efectuată la 2
minute din momentul punerii soluţiilor în contact, e necesar ca eliminarea
aerului şi scufundarea electrodului să nu dureze mai mult de 1 minut.
o după 2 minute scurse de la începerea procesului de difuzie se citeşte
conductanţa soluţiei 1 şi se trece în Tabelul 2;
o se fac citiri din 2 în 2 minute până la 30 minute de la începerea
experimentului;
o se calculează diferenţele dintre valorile conductanţei şi conductanţa apei
distilate ∆G1 (t i ) = G1 (t i ) − GH O pentru toate punctele ( i = 1,2, K,15 );
2
69
se determină panta dreptei; în acest scop se aleg două puncte de pe dreaptă
(nu neapărat puncte experimentale) şi se calculează tangenta unghiului α
dintre dreaptă şi axa Ox: a = tg(α ) = (∆G2 − ∆G1 ) /(t 2 − t1 ) ;
deoarece reprezentarea s-a făcut în unităţi convenabile (conductanţa în mS
şi timpul în minute) este necesară transformarea unităţii de timp în
secunde: a = valoare numerică (mS/min) = valoare numerică/60 (mS/sec);
se calculează constanta de timp τ = ∆G1∞ / a , exprimată în secunde;
utilizând formula (12) se calculează permeabilitatea membranei pentru
substanţa dizolvată; aria membranei este S = 4,52 cm2 (fiind un disc cu
diametrul de 2,4 cm); rezultatul se trece în Tabelul 1.
70
dn d 2c
e) are formula = −D 2 .
dt dx
4. Permeabilitatea unei membrane pentru o substanţă dizolvată
a) este cu atât mai mică cu cât membrana este mai groasă;
b) este invers proporţională cu coeficientul de difuzie;
c) depinde numai de concentraţia substanţei;
d) are expresia P = D / dx unde D este coeficientul de difuzie si dx este
grosimea membranei;
e) este singura mărime care influenţează viteza difuziei prin membrană.
5. Care din următoarele metode permite determinarea permeabilităţii unei
membrane pentru o substanţă dizolvată?
a) monitorizarea concentraţiei a două soluţii în timpul transferului osmotic;
b) studiul presiunii osmotice a soluţiei atunci când aceasta este pusă în contact cu
apa distilată, fiind separată de apă prin intermediul membranei;
c) măsurarea grosimii membranei şi a coeficientului de difuzie a apei prin
membrană;
d) determinarea dependenţei de timp a concentraţiei unei soluţii atunci când
aceasta este separată prin membrană de un compartiment umplut cu apă distilată;
e) monitorizarea concentraţiei într-un recipient cu apă distilată pus în contact prin
membrană cu o soluţie de concentraţie cunoscută.
6. Difuzia prin membrane
a) se datorează fluctuaţiilor de concentraţie;
b) îşi are originea în mişcarea de agitaţie termică;
c) este cu atât mai rapidă cu cât diferenţa concentraţiilor mediilor separate de
membrană este mai mare;
d) este cu atât mai lentă cu cât membrana este mai groasă;
e) este cu atât mai rapidă cu cât membrana este mai permeabilă pentru apă.
7. Dializa extrarenală
a) este o procedură de tratament aplicată în cazul insuficienţei renale;
b) duce la purificarea sângelui datorită osmozei prin membrana semipermeabilă;
c) necesită o soluţie de dializă cu compoziţie salină similară plasmei;
d) se bazează pe difuzia ureei printr-o membrană selectiv permeabilă (care
permite numai trecerea moleculelor mici);
e) este o metodă de diagnostic a insuficienţei renale acute.
71
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .......................................
…………………………………….. Seria ............ Grupa ..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
72
Tabelul 1. Determinarea permeabilităţii membranei
Mărimea G H 2O G0 ∆G1∞ a τ P
(unitatea) (mS) (mS) (mS) (mS/s) (s) (cm/s)
Valoarea
0 0 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
73
Grafic. Variaţia în timp a conductanţei
74
2.5. MĂSURAREA pH - ULUI SOLUŢIILOR APOASE.
ESTIMAREA CAPACITĂŢII DE TAMPONARE A UNEI
SOLUŢII TAMPON
Noţiuni teoretice
Potrivit teoriei Brönsted – Lowry, acidul este o substanţă care cedează
protoni (la dizolvarea sa în soluţii apoase cedează protoni moleculelor de apă), în
timp ce baza este o substanţă care acceptă protoni (în soluţii apoase acceptă
protoni sau eliberează ioni hidroxil).
Protonul (nucleul atomului de hidrogen), având raza mult mai mică decât a
celorlalţi ioni (de ordinul 10-15 m) nu poate exista liber în soluţie. Legarea
acestuia de moleculele de apă învecinate este o consecinţă a interacţiunilor de tip
ion – dipol şi are ca rezultat formarea ionului hidroniu H3O+, pentru care vom
adopta notaţia prescurtată H+.
În mod uzual, caracterul acid sau bazic al unei soluţii este descris cantitativ
în termeni de concentraţie a ionilor de hidroniu prezenţi în soluţie. Cum, în
general, această concentraţie are valori foarte mici, se preferă stabilirea
caracterului soluţiei în termeni de pH. Se numeşte pH, logaritmul zecimal cu
semn schimbat (cologaritmul zecimal) al concentraţiei molare a ionilor
hidroniu:
pH = − lg [ H + ] (1)
75
Soluţiile tampon sunt formate dintr-un acid slab şi baza sa conjugată şi au
proprietatea de a se opune modificării pH-ului soluţiei la adăugarea, în cantităţi
limitate, de acid sau bază. pH-ul unui sistem tampon se calculează folosind
formula Henderson – Hasselbalch:
[ D]
pH = pK a + lg (4)
[ P]
unde pKa este o constantă caracteristică acidului slab (cologaritmul zecimal al
constantei de aciditate), iar [D] şi [P] sunt concentraţiile molare ale formei
deprotonate (baza conjugată a acidului slab), respectiv protonate (acidul slab).
Capacitatea de tamponare caracterizează eficacitatea sistemului tampon
de a rezista modificărilor de pH:
∆V
i= (5)
∆pH
76
Importanţa medicală
Lichidele biologice, cum ar fi sângele, conţin astfel de sisteme tampon
căci controlul pH - ului este vital pentru funcţionarea lor adecvată. Un rol foarte
important în menţinerea constantă a pH - ului sanguin, în intervalul 7,35 – 7,45
îl au sistemele tampon ale sângelui, dintre care pot fi amintite:
• H2CO3 şi HCO3-;
• H2PO4- şi HPO42-;
• hemoglobina acidă, hemoglobinat de potasiu.
Creşterea concentraţiei ionilor H + cu scăderea pH-ului sub valoarea 7,35
este cunoscută sub numele de acidoză, iar scăderea concentraţiei ionilor
menţionaţi anterior ce are ca rezultat creşterea pH-ului peste valoarea de 7,45 se
numeşte alcaloză. Ambele tulburări sunt incompatibile cu viaţa.
Enzimele, care joacă un rol important în majoritatea reacţiilor biochimice
care au loc în organism, activează fiecare la un anumit pH caracteristic.
Modificările de pH ce pot apare în diverse maladii duc la perturbarea funcţiilor
normale ale enzimelor respective şi implicit a proceselor metabolice la care
participă. De exemplu, pH-ul sângelui scade în diarei rebele, colite ulceroase,
acidoză diabetică, insuficienţă renală etc., şi creşte în stenoză pilorică, în
vărsături repetate, diverse afecţiuni nervoase etc.
Pot apare şi modificări fiziologice ale pH-ului lichidelor şi ţesuturilor
organismului. De exemplu, la altitudini mari, prin hiperventilaţie, se produce o
creştere a pH-ului sanguin (scade presiunea parţială a CO2 din sânge). În urma
unor activităţi fizice intense se produce o acumulare de acid lactic în ţesutul
muscular respectiv, care determină scăderea pH-ului (se produce crampa
musculară).
pH-metria esofagiană este un examen care contribuie la stabilirea
diagnosticului de reflux gastroesofagian (trecerea anormală de acid gastric în
esofag). Ea permite, de asemenea, controlul eficacităţii unui tratament
chirurgical sau medical al acestei boli.
Valoarea normală a pH – ul urinei variază în intervalul 4,5 – 8. O aciditate
foarte pronunţată a urinei apare în acidoză, diabet, diaree, deshidratare, în timp ce
o bazicitate pronunţată este caracteristică obstrucţiei tractului urinar, obstrucţiei
pilorice, respectiv insuficienţei renale cronice.
Unele substanţe conţinute de medicamentele administrate pot modifica
pH-ul urinei. De exemplu, citratul de potasiu, bicarbonatul de sodiu duc la o
creştere a valorii pH-ului (urină alcalină), în timp ce clorura de amoniu sau
unele diuretice provoacă scăderea valorii acestuia (urină acidă).
77
Descrierea aparatului
Panoul frontal al pH - metrului OP – 211 (Figura 2.5.1) cuprinde:
- comutatorul STDBY/MEAS (8) – prin apăsarea acestui buton aparatul este în
stare de aşteptare (STDBY), iar prin eliberare în stare de măsurare (MEAS);
- comutatorul ABS/REL (6) – prin apăsare (poziţia ABS) se măsoară potenţialul
real al celulei, iar prin eliberare (poziţia REL) se măsoară diferenţa dintre
potenţialul celulei şi un potenţial al unui electrod de referinţă extern;
78
Aparatul este conectat prin intermediul unui cablu ecranat (10) la un
electrod combinat (14) de tip OP - 0808P ce are în componenţa sa atât electrodul
de determinare (electrodul de sticlă) cât şi cel de referinţă (electrodul Ag/AgCl).
Electrodul combinat este umplut cu o soluţie de KCl de concentraţie 1 M.
Fixarea electrodului pe stativ se realizează prin intermediul unei cleme
(15) care permite (prin apăsare) ridicarea respectiv coborârea electrodului. Pentru
a preveni spargerea accidentală a electrodului combinat acesta se protejează cu
un manşon din material plastic şi există un sistem opritor (16) ce nu permite
alunecarea sa de-a lungul tijei stativului.
Omogenizarea soluţiei din vasul (13) este asigurată de agitatorul magnetic
(11) care antrenează bara magnetică (12). Este recomandabil ca bara magnetică
să se păstreze în vasul de determinare pe tot parcursul experimentului.
Modul de lucru
1. Pregătirea aparatului
- se verifică dacă electrodul combinat este conectat la mufa "S" localizată pe
panoul din spate al aparatului;
- se introduce fişa aparatului în priză, moment în care afişajul digital este activat
(aparatul nu este prevăzut cu întrerupător pentru cuplare/decuplare de la reţea);
- se verifică dacă comutatorul (8) se află pe poziţia STDBY;
- se verifică dacă comutatorul pH (7) este apăsat;
- se roteşte butonul TEMP (2) la valoarea corespunzătoare temperaturii soluţiei
de cercetat;
- se lasă aparatul timp de 10 minute pentru a intra în regim de lucru.
2. Calibrarea pH-metrului în domeniul acid
- în acest scop vor fi folosite două soluţii tampon cu valori cunoscute ale pH-ului:
soluţie tampon cu pH = 7,30 şi soluţie tampon cu pH = 2,10.
- se goleşte vasul cu apă distilată (13) în care se găseşte scufundat electrodul şi se
umple 2/3 din volum cu soluţia tampon de pH = 7,30;
- se scufundă electrodul în soluţie;
- având comutatorul (8) pe poziţia STDBY, se roteşte butonul SET STD.1 până la
apariţia pe afişaj a valorii corespunzătoare 7,30;
- se acţionează comutatorul (8) trecându-se pe poziţia MEAS;
- se aşteaptă un minut, după care prin rotirea butonului STD.1 (fără a mai acţiona
butonul SET STD1) se stabileşte pe afişaj valoarea 7,30.
79
Obs. În vederea unei bune calibrări este esenţială păstrarea constantă a
condiţiilor de calibrare şi măsurare (temperatură, omogenizarea soluţiei prin
agitare la turaţie constantă)
- se repune comutatorul (8) pe poziţia STDBY;
- se scoate electrodul din soluţie; aceasta se toarnă înapoi în vasul din care a
provenit;
- se clăteşte bine electrodul cu apă distilată (prin scufundare în paharul Berzelius
ce conţine apă distilată şi agitare magnetică timp de minim un minut pentru a
permite dizolvarea urmelor de soluţie tampon utilizată anterior);
- vasul se umple 2/3 din volum cu soluţie de pH = 2,1, iar electrodul se scufundă
în soluţie;
- se omogenizează soluţia cu agitatorul magnetic;
- se trece comutatorul (8) pe poziţia MEAS;
- se aşteaptă un minut după care prin rotirea butonului STD.2 se stabileşte pe
afişaj valoarea 2,10 (fără a acţiona butoanele SET STD 1 şi STD 1);
- se trece comutatorul (8) înapoi pe poziţia STDBY ;
- electrodul se scoate din soluţie, se clăteşte cu apă distilată după procedeul
descris anterior; soluţia tampon se toarnă în borcanul din care a provenit, iar
paharul Berzelius se spală cu apă distilată;
- în acest moment pH-metrul este calibrat pentru domeniul acid şi se poate trece
la efectuarea măsurătorilor în domeniul acid.
Atenţie! După efectuarea operaţiunii de calibrare nu se mai acţionează
butoanele de reglaj SET STD 1, STD 1 şi STD 2. Orice rotire accidentală a
unui buton de calibrare duce la necesitatea reluării operaţiei de calibrare.
3. Efectuarea determinărilor în domeniul acid
- se umple vasul (2/3 din volum) cu soluţie netamponată care în cazul nostru este
apă de robinet şi se scufundă electrodul în soluţie;
- se reporneşte agitarea magnetică şi se păstrează pe toată durata determinărilor;
- se trece comutatorul (8) pe poziţia MEAS iar după un minut se citeşte valoarea
pH-ului de pe afişaj şi se trece în Tabel în rubrica „Soluţie netamponată”, 0 mL
HCl;
- în vas se introduc, cu ajutorul pipetei, 0,2 mL HCl 0,1 M;
- se agită moderat soluţia până ce valoare indicată nu prezintă fluctuaţii (circa 1
minut), se citeşte pH-ul şi se trece valoarea sa în Tabel în rubrica corespunzătoare
volumului de HCl adăugat (0,2 mL);
80
- se repetă operaţia de mai sus de 4 ori adăugându-se de fiecare dată câte 0,2 mL
HCl 0,1 M în aceeaşi soluţie (până când aceasta va conţine în total 1 mL acid);
valorile astfel obţinute se trec în Tabel;
Obs. Nu este necesară scoaterea electrodului din vas la introducerea
cantităţilor de câte 0,2 mL acid.
- se aruncă soluţia de determinare din vas la chiuvetă şi se clăteşte electrodul
respectiv vasul de determinare cu apă distilată;
- având la bază acelaşi protocol de lucru se repetă determinările utilizând soluţie
tamponată, după care valorile măsurate pentru pH-ul acesteia se trec în Tabel în
rubricile corespunzătoare (coloana a 2-a a tabelului);
- după efectuarea determinărilor în domeniul acid se trece la recalibrarea pH –
metrului în domeniul bazic şi efectuarea determinărilor pH – ului.
4. Calibrarea pH-metrului în domeniul bazic
- în acest scop vor fi folosite două soluţii tampon: soluţie tampon cu pH =7,30
respectiv soluţie tampon cu pH = 9,10;
- calibrarea în domeniul bazic urmează aceleaşi etape ca şi în domeniul acid, cu
specificaţia că în locul soluţiei tampon cu pH = 2,10 se foloseşte cea cu pH =
9,10.
5. Efectuarea determinărilor în domeniul bazic
- după calibrarea pH-metrului în domeniul bazic, se repetă operaţiile de la
punctul 3 folosind soluţie netamponată respectiv soluţie tamponată în care se
adaugă, pe rând, câte 0,2 mL de NaOH 0,1 M de 5 ori; valorile astfel obţinute se
trec în ultimele două coloane ale Tabelului.
Prelucrarea rezultatelor
- pentru fiecare dintre cele 4 situaţii se calculează variaţia pH – ului folosind
relaţia:
∆ pH = pH final − pHinitial
unde: pHfinal este valoarea pH–ului corespunzătoare situaţiei când soluţia conţine
1 mL HCl respectiv NaOH, în timp ce pHinitial este pH-ul soluţiei înaintea
adăugării de acid sau bază.
- utilizând formula (5) se calculează capacitatea de tamponare;
- se reprezintă graficul pH = f(V) pentru cele 4 soluţii, trecându-se valorile pH-
ului pe axa ordonatelor, iar cele ale volumului de acid respectiv bază pe axa
absciselor. Pentru soluţia netamponată (cu adăugare de acid respectiv bază) se
81
construieşte graficul 1, iar pentru cea tamponată (atât pentru acid cât şi pentru
bază) se trasează graficul 2.
a) pH = [ H + ] ; b) pH = − lg [ H + ] ;
c) pH = − lg [OH − ] ; d) pH = 14 − pOH ;
e) pH = − pOH .
3. Ce se poate afirma despre o soluţie care conţine ioni hidroniu H+ în
concentraţie 10-1 M ?
a) are pH = 13;
b) este puternic acidă;
c) are pOH = 13;
d) pentru a i se putea preciza caracterul ar fi necesară cunoaşterea concentraţiei
ionilor hidroxil OH–;
e) are pH = 1.
4. Alegeţi afirmaţiile corecte corespunzătoare unei soluţii care conţine ioni
OH− în concentraţie 10-2 M:
a) are caracter neutru; b) are pOH = 2;
c) este puternic acidă; d) este puternic bazică;
e) are pH = 2.
5. Identificaţi afirmaţiile corecte pentru pOH – ul unei soluţii apoase:
a) se defineşte prin pOH = − lg [ H + ] ;
b) este corelată cu pH – ul prin relaţia pH + pOH = 14 ;
c) are valoarea cu atât mai mică cu cât soluţia e mai bazică;
d) pOH = 7 pentru o soluţie neutră;
e) se defineşte prin pOH = − lg [OH − ] .
82
6. pH – ul unei soluţii tampon (s-au folosit notaţiile Ka – constanta de
aciditate a acidului slab, [D] respectiv [P] – concentraţia molară a formei
deprotonate respectiv protonate a acidului slab) se calculează cu formula:
[ P] [ D]
a) pH = pK a + ln ; b) pH = − lg ;
[ D] [ P]
[ D] [ D]
c) pH = pK a + lg ; d) pH = pK a + ;
[ P] [ P]
e) pH = pK a + lg [ D ] .
8. Precizaţi care dintre afirmaţiile de mai jos sunt valabile pentru un sistem
tampon:
a) menţine constant pH – ul, indiferent de cantitatea de acid sau bază adăugată;
b) se compune dintr-un acid slab şi baza sa conjugată;
[ P]
c) pH = pK a + ln ;
[ D]
d) se opune modificărilor de pH, în pofida adăugării, în cantităţi limitate, a unui
acid sau bază tare;
[ D]
e) pH = pK a + lg .
[ P]
9. Fie două soluţii 1 şi 2 având valorile pH–ului cunoscute pH1 = 2,
respectiv pH2 = 8. Alegeţi afirmaţiile corecte:
a) soluţia 1 este puternic bazică şi are pOH1 = 12;
b) soluţia 2 este neutră şi conţine ioni H+ şi OH– în concentraţii egale;
c) soluţia 1 are pOH1 = 12 şi conţine ioni H+ în concentraţie mai mare decât OH–;
d) soluţia 2 este slab bazică;
e) soluţia 1 conţine ioni OH– în concentraţie mai mică decât soluţia 2.
83
10. Să se identifice afirmaţiile corecte referitoare la pH – ul sanguin:
a) are valoarea normală în intervalul 4,5 – 8;
b) scade sub 7,35 în acidoză;
c) este menţinut aproape constant de sistemele tampon specifice;
d) în condiţii normale este cuprins între 7,35 şi 7,45;
e) scade în cursul unor activităţi fizice intense.
84
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea ........................................
………………………………… Seria ............. Grupa ...................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
Volum (mL) HCl 0,1 M HCl 0,1 M NaOH 0,1 M NaOH 0,1 M
Soluţie Soluţie Soluţie Soluţie
netamponată tamponată netamponată tamponată
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
∆pH
∆V
i=
∆pH
86
Grafic 1. Variaţia pH – ului soluţiei netamponate cu volumul de acid respectiv
bază adăugată (V)
87
Grafic 2. Variaţia pH – ului soluţiei tamponate cu volumul de acid respectiv
bază adăugată (V)
88
2.6. DETERMINAREA CONCENTRAŢIEI UNEI SUBSTANŢE
OPTIC ACTIVE UTILIZÂND METODA POLARIMETRICĂ
Noţiuni teoretice
Ca orice undă electromagnetic
r ă, lumina constă în propagarea simultan
r ăa
unui câmp electric de intensitate E şi unui câmp magnetic de intensitate H . Cele
două câmpuri oscilează în fază, fiind perpendiculare între ele (unda este deci
transversală, vezi Figura 2.6.1), vectorii lor fiind orientaţi perpendicular pe
r
k
direcţia de propagare .
Figura 2.6.1
r
Planul definit de direcţia de oscilaţie a vectorului câmp electric E şi
direcţia de propagare a undei poartă numele de plan de oscilaţie (vibraţie).
S-a stabilit pe cale teoretică şi experimentală că acţiunile luminoaser (de
exemplu, impresionarea retinei) se datorează în exclusivitate vectorului E al
intensităţii câmpului electric.
Lumina este emisă sub forma unui ansamblu de unde electromagnetice
care rezultă în urma dezexcitării atomilor sursei. Datorită faptului că fiecare atom
al unei surser naturale emite unde electromagnetice cu orientări diferite ale
vectorilor E , aceşti vectori nu au o direcţie preferenţială de oscilaţie, putând avea
orice orientare. O asemenea undă luminoasă se numeşte lumină naturală rsau
lumină nepolarizată. În lumina naturală planul de oscilaţie al vectorului E al
intensităţii câmpului electric se deplasează cu viteza luminiir de-a lungul
direcţiei de propagare, fiind perpendicular pe aceasta. Vectorul E oscilează în
toate direcţiile, într-un plan perpendicular pe direcţia de propagare a undei
(Figura 2.6.2a).
89
Figura 2.6.2a Figura 2.6.2b Figura 2.6.2c
Dacă lumina nepolarizată trece printr-un filtru de polarizare (de exemplu o
lamă polaroid), intensitatea câmpului electric va avea o singură direcţie de
oscilaţie pentru toate undele care alcătuiesc fasciculul luminos, având de-a face
cu lumină total polarizată sau lumină liniar polarizată (Figura 2.6.2c).
Dacă vectorii câmp electric din diversele trenuri de undă oscilează după
mai multe orientări astfel încât anumite direcţii sunt reprezentate cu pondere
mai mare decât altele, vorbim de lumină parţial polarizată (Figura 2.6.2b).
Lumina naturală poate fi polarizată prin reflexie, respectiv refracţie
sau prin dublă refracţie.
În lucrare ne vom ocupa doar de polarizarea luminii prin dublă refracţie,
utilizând un cristal de spat de Islanda. Cristalul este tăiat după axa optică, iar
feţele astfel obţinute ale romboedului se lipesc cu balsam de Canada. Ansamblul
astfel obţinut poartă denumirea de prismă nicol.
Figura 2.6.3
Prin dublă refracţie apar două raze polarizate, având planele de vibraţie
perpendiculare (Figura 2.6.3):
- raza ordinară, care se supune legilor refracţiei;
- raza extraordinară, care nu se supune legilor refracţiei.
90
Balsamul de Canada are pentru raza extraordinară un indice de refracţie
foarte apropiat de cel al spatului de Islanda şi ca atare aceasta va trece practic
nedeviată prin nicol (Figura 2.6.3).
Raza ordinară, odată intrată în nicol, suferă o reflexie totală pe faţa AB
(pentru această rază balsamul de Canada are indicele de refracţie considerabil
mai mic faţă de spatul de Islanda) şi este eliminată.
Unele substanţe (în majoritate organice), datorită prezenţei unuia sau mai
multor atomi de C asimetrici, prezintă proprietatea de a roti planul de vibraţie a
luminii incidente. Astfel de substanţe se numesc substanţe optic active. Dacă
planul de polarizare este rotit spre dreapta, substanţa se numeşte dextrogiră (Ex.:
glucoza, lactoza, alanina, progesteron etc). În cazul în care planul de polarizare
este rotit spre stânga, substanţa se numeşte levogiră (Ex.: fructoza, serina,
colesterolul etc). Substanţele optic inactive nu rotesc planul de vibraţie a luminii
incidente.
Unghiul de rotaţie α a planului de vibraţie a luminii depinde de
temperatură, de lungimea de undă a luminii folosite şi creşte direct proporţional
cu concentraţia c a substanţei optic active, respectiv cu distanţa l parcursă de
lumină prin aceasta. Tradiţional, această relaţie de directă proporţionalitate se
scrie sub forma:
20 c ⋅l
α = [α ]D (1)
100
unde c este concentraţia soluţiei exprimată în grame/100 cm3, iar l este
20
lungimea tubului polarimetrului exprimat în decimetri. Mărimea [α ]D se
cunoaşte sub numele de unghi specific de rotaţie sau putere rotatorie specifică.
Notaţia sa indică temperatura la care se efectuează experimentele de
polarimetrie (20ºC) şi lungimea de undă a luminii utilizate (λ = 589,2 nm, a
luminii galbene corespunzătoare liniei spectrale D a sodiului).
Din ecuaţia (1) se poate exprima concentraţia soluţiei:
100 ⋅ α
c= (2)
l ⋅ [α ]20
D
91
În condiţiile utilizării polarimetrului circular Alpha Polaris, stratul de
soluţie are lungimea l = 2 dm.
Cu excepţia glicinei, aminoacizii sunt optic activi şi pot exista ca
enantiomeri. Un fapt experimental interesant este acela că, cu excepţia unor
bacterii, sistemele vii au în componenţă proteine alcătuite numai din aminoacizi
levogiri. Activitatea optică a proteinelor se datorează în principal cisteinei şi
aminoacizilor aromatici (fenilalanina, tirozina şi triptofan) din componenţa lor.
Determinarea experimentală a activităţii optice a unei substanţe se face
folosind un dispozitiv numit polarimetru.
Descrierea aparatului
Polarimetrul circular Alpha Polaris (Figurile 2.6.4 și 2.6.5) se compune din
următoarele elemente:
- polarizor (2), care este un nicol pe care cade lumina provenită de la o sursă de
lumină (1) monocromatică având lungimea de undă λ=589,3 nm (lampă de
sodiu); la ieşirea din polarizor lumina este plan polarizată;
- tub de sticlă (3) în care se introduce soluţia de cercetat, așezat în suportul (4);
- analizor (5), care este tot un nicol; în cazul în care planul de vibraţie a luminii
este paralel cu planul analizorului, lumina trece prin analizor, deci în ocular
luminozitatea este maximă; în cazul în care planul de vibraţie este perpendicular
pe planul analizorului, în ocular luminozitatea este minimă;
92
- vernier (8), constituit dintr-un inel circular mobil pe care sunt înscrise
unghiurile (0° -180°) şi o placă circulară legată solidar cu analizorul pe care
sunt gravate două seturi a câte 20 de diviziuni începând cu 0 şi terminând cu 10.
- ocular (6) prevăzut la capăt cu o lupă (7) pentru citirea exactă a valorilor
unghiurilor.
– tambur pentru reglaj fin (9).
Modul de lucru
- se introduce fişa polarimetrului în priză şi se aşteaptă 10 minute ca lampa de
sodiu să funcţioneze în regim optim;
- pentru a se obţine α0 se lucrează cu tubul gol;
- prin rotirea tamburului de reglaj, în ocular se va observa:
∗ o imagine divizată net în trei câmpuri (o bandă întunecată mărginită
de două câmpuri luminoase, vezi Figura 2.6.6a); rotind în continuare se
caută imaginea în care banda luminoasă este mărginită de două câmpuri
întunecate (vezi Figura 2.6.6b); între cele două imagini extreme se caută
obţinerea unui câmp cu luminozitate uniformă şi minimă (Figura 2.6.6c).
∗ o imagine divizată net în două câmpuri (un câmp întunecat și altul
luminos, vezi Figura 2.6.7a); rotind în continuare se caută imaginea în care
câmpul întunecat devine luminos, iar cel luminos devine întunecat (vezi
93
Figura 2.6.7b); între cele două imagini extreme se caută obţinerea unui
câmp cu luminozitate uniformă şi minimă (Figura 2.6.7c).
Obs. Cele două imagini extreme sunt foarte apropiate una de alta, prin
urmare plaja unghiulară în care trebuie rotit vernierul pentru găsirea
imaginii este foarte îngustă.
- se citeşte unghiul de rotire în modul descris mai jos:
În absenţa substanţei optic active, diviziunea 0 de pe scala gradată
exterioară (superioară) ar trebui să se suprapună peste diviziunea 0 de pe cea
interioară (inferioară). Datorită erorilor induse de aparat, această suprapunere nu
este perfectă, fiind necesară determinarea unghiului α0 corespunzător imaginii de
luminozitate uniformă şi minimă.
În urma introducerii soluţiei de cercetat în tub, datorită rotirii planului de
vibraţie se modifică luminozitatea câmpului vizual. Pentru a ajunge din nou la
luminozitatea minimă iniţială, se roteşte vernierul.
În toate situaţiile (tub gol sau tub umplut cu soluţie) unghiul obţinut se
citeşte în lupă în felul următor:
Figura 2.6.8
94
- se scoate tubul şi se umple cu soluţia de cercetat; se introduce tubul plin
cu soluţie în suportul său;
Atenţie! Evitaţi formarea unor bule de aer în tub în cursul umplerii sale!
Dacă acestea sunt totuşi prezente, deplasaţi-le în porţiunea îngroşată a
tubului.
- privind în ocular se observă că imaginea a devenit neuniform iluminată;
se roteşte vernierul în scopul obţinerii unui nou câmp de luminozitate
minimă şi uniformă (situat tot între cele două imagini extreme descrise mai
sus); se citeşte unghiul de rotire şi se notează cu α1; se repetă procedeul de
3 ori, trecându-se valorile în tabel;
- se calculează media aritmetică a determinărilor;
- pentru a elimina eroarea inițială, se calculează diferenţa: α1 = α1 − α o ;
- se repetă operaţiile de mai sus şi pentru celelalte soluţii de cercetat, iar
rezultatele obţinute se trec în tabel;
- cu ajutorul formulei (2) se calculează concentraţiile soluţiilor de cercetat.
96
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .........................................
……………………………………... Seria ............ Grupa ..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
97
Tabel
Nr.crt. α0 α1 α2
1.
2.
3.
Valoarea medie
Deviaţia standard
α i = α i − α o i = 1,2 –
c (g / 100 cm3) –
98
2.7. DETERMINAREA CONCENTRAŢIEI UNEI SOLUŢII
CU REFRACTOMETRUL ABBE
Noţiuni teoretice
Prin refracţie se înţelege schimbarea direcţiei de propagare a unei raze de
lumină la trecerea prin suprafaţa de separaţie a două medii transparente cu indici
de refracţie diferiţi. Cauza refracţiei este diferenţa dintre vitezele de propagare ale
luminii în cele două medii.
Indicele de refracţie (absolut) al unui mediu transparent este o mărime
fizică scalară, adimensională şi este definit ca raportul dintre viteza luminii în vid
(c) şi viteza luminii în mediul respectiv (v):
c
n= (1)
v
Indicele de refracţie al unei soluţii depinde de natura solventului şi a
substanţei dizolvate, de temperatură, de concentraţia solutului, de lungimea de
undă a luminii incidente.
n v
Raportul n21 = 2 = 1 poartă numele de indice de refracţie relativ al
n1 v2
mediului 2 faţă de mediul 1. În această relaţie v1 şi v2 reprezintă vitezele de
propagare a luminii în primul şi, respectiv, al doilea mediu, iar n1 şi n2 reprezintă
indicii de refracţie ai acestor medii.
100
Aplicaţii medicale
Descrierea aparatului
101
Figura 2.7.4. Părţile componente ale refractometrului Abbe
Modul de lucru
1. Verificarea etalonării aparatului
- corpul refractometrului se roteşte înainte până în poziţia extremă;
- cu ajutorul şurubului se deschide corpul prismelor, se aduce faţa lucioasă în
poziţie perfect orizontală şi se menţine în această poziţie prin ţinerea fixă a
tamburului (7);
- cele două feţe ale prismelor se degresează cu amestec alcool-eter;
- cu ajutorul unei pipete se pun câteva picături de apă distilată pe faţa lucioasă;
Obs. Se va evita punerea unei cantităţi mari de lichid pentru a preveni
formarea de bule în locaşul probei! Nu se atinge prisma cu pipeta!
- menţinând orizontalitatea prismei de măsurare se închide corpul prismelor şi se
readuce refractometrul în poziţia iniţială;
- privind prin luneta de citire (1) se roteşte tamburul (7) aducând scala gradată la
capătul ei inferior (valoarea 1,3 a indicelui de refracţie);
102
- cu ajutorul oglinzii se realizează o iluminare uniformă şi maximă a câmpului
observat în luneta de punere la punct (2);
- prin rotirea tamburului (7) se observă o întunecare a câmpului de jos în sus; se
continuă rotirea până când linia de demarcaţie lumină/întuneric ajunge la
intersecţia celor două fire perpendiculare (vezi Fig. 2.7.3);
- în această poziţie se citeşte în luneta (1) indicele de refracţie al apei distilate,
care la temperatura de 20°C are valoarea de 1,3330;
- se repetă citirea pentru apa distilată de încă 2 ori, iar valorile se trec în prima
linie a Tabelului (c = 0%), calculându-se media lor aritmetică n şi deviaţia
standard a valorii medii Sm.
2. Studiul variaţiei indicelui de refracţie cu concentraţia soluţiei
- după verificarea etalonării aparatului cu apă distilată, se degresează locaşul
probei cu amestec alcool - eter şi, cu ajutorul unei pipete, se pun pe suprafaţa
lucioasă a prismei 2 - 3 picături din soluţia 1;
- se citeşte indicele de refracţie, a cărui valoare se trece în Tabel în linia
corespunzătoare concentraţiei soluţiei;
- citirea se repetă încă de 2 ori pentru soluţia respectivă;
- se procedează similar pentru toate soluţiile, inclusiv pentru cea cu concentraţie
necunoscută (x%).
3. Construirea curbei de etalonare şi aflarea concentraţiilor necunoscute
- după citirea indicelui de refracţie corespunzător concentraţiilor cunoscute (c1,
c2, ..., c6), perechile de coordonate (c1, n1); ... ; (c6, n6) se înscriu pe un grafic în
care pe axa absciselor se pune concentraţia (c) iar pe axa ordonatelor indicele de
refracţie (n);
- din graficul astfel trasat, numit curbă de etalonare, se citeşte concentraţia
necunoscută x% prin aplicarea metodei interpolării.
105
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea ........................................
……………………………………… Seria ............ Grupa ...................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
106
Tabel
n
c Sm
(%)
n1 n2 n3 n
0
5
10
15
20
25
30
x
107
Grafic. Variaţia indicelui de refracţie al unei soluţii (n) cu concentraţia sa (c)
108
2.8. DETERMINAREA CONCENTRAŢIEI UNOR SOLUŢII DE
ELECTROLIŢI PE BAZA MĂSURĂTORILOR DE
CONDUCTANŢĂ ELECTRICĂ
Noţiuni teoretice
Deplasarea ordonată de purtători de sarcină electrică printr-un mediu
conductor de numeşte curent electric.
La metale, purtătorii de sarcină care se mişcă ordonat în câmpul electric
aplicat sunt electronii liberi rezultaţi prin desprinderea electronilor de valenţă de
pe straturile electronice periferice ale atomilor reţelei cristaline.
În cazul soluţiilor de electroliţi vorbim de o conducţie ionică, electroliţii
fiind acele substanţe care în urma dizolvării în solvent disociază în ioni pozitivi
(cationi), respectiv ioni negativi (anioni). Motivul acestei disocieri este valoarea
mare a permitivităţii electrice relative a apei (εr = 80) care duce la o diminuare
considerabilă a forţelor de atracţie electrostatică dintre ionii aflaţi în nodurile
reţelei cristaline a unui cristal ionic. Disocierea în ioni este apoi urmată de
fenomenul de hidratare a ionilor ce are drept cauză interacţiunile electrostatice
dintre ioni şi moleculele de apă cu caracter dipolar, numărul de molecule de apă
din imediata vecinătate a ionului numindu-se cifră de coordinaţie (Figura 2.8.1).
109
electrolitul este mai slab. Din această categorie fac parte acizii slabi şi bazele
slabe (vezi Cursul de Biofizică, Capitolul Echilibre acido – bazice).
Conductometria cuprinde metodele electrochimice de analiză a
conductibilităţii electrice a soluţiilor de electroliţi. Conductometrele servesc la
măsurarea conductanţei electrice.
În absenţa câmpului electric, ionii rezultaţi din disocierea electrolitului
dizolvat în soluţie vor avea o mişcare dezordonată, de agitaţie termică. Aplicarea
unei diferenţe de potenţial (tensiuni electrice) între doi electrozi imersaţi în
soluţie va avea ca efect deplasarea ordonată a ionilor, fiecare mişcându-se către
electrodul având sarcina de semn contrar ionului (anionii se deplasează către
anod, în timp ce cationii către catod, Figura 2.8.2 ).
110
Unitatea de măsură pentru conductanţă este inversă unităţii de măsură a
rezistenţei, 1/Ω sau Ω–1 şi se numeşte Siemens (S).
Rezistenţa electrică a unui conductor de lungime l şi secţiune S se poate
calcula după relaţia:
l
R = ρ⋅ (4)
S
unde prin ρ s-a notat rezistivitatea sau rezistenţa specifică a materialului din care
este confecţionat conductorul. În Sistemul Internaţional de unităţi S.I.,
< ρ > S .I . = 1 Ω ⋅ m , iar în sistemul tolerat C.G.S. < ρ > C .G.S . = 1 Ω ⋅ cm .
În cazul soluţiilor, se utilizează mărimea inversă rezistivităţii, numită
conductivitate σ sau conductanţă specifică:
1
σ= (5)
ρ
În S.I., unitatea de măsură pentru conductivitatea electrică este
Ω ⋅ m −1 = S ⋅ m −1 , iar în sistemul tolerat C.G.S. este 1 Ω −1 ⋅ cm −1 = S ⋅ cm −1 .
−1
Aplicaţii medicale
Conductanţa electrică este frecvent măsurată în laborator, în scopul de a
controla puritatea unor solvenţi, de a determina concentraţia electroliţilor prezenţi
în diferite lichide biologice sau de a titra substanţe ionice. Ca solvent
farmaceutic, apa distilată este considerată pură dacă în urma măsurătorilor
conductometrice se obţine pentru conductivitatea acesteia o valoare de 5,5
µS/cm.
Tomografia electrică de impedanţă (impedanţa reprezintă rezistenţa
electrică totală a unui ţesut străbătut de curent electric) este o metodă medicală de
investigare ce se bazează pe analiza conductivităţii electrice a ţesuturilor. Cu
câteva excepţii, ţesuturile au conductivitatea constantă în anumite limite. Astfel,
orice modificare a structurii normale se va reflecta în schimbarea valorii
conductivităţii electrice a ţesutului.
111
Scopul lucrării
Lucrarea prezentă propune măsurarea valorilor conductanţei unor soluţii
de electroliţi şi urmărirea modului în care aceasta variază cu concentraţia,
respectiv cu temperatura soluţiei.
În cadrul lucrării se va efectua:
- calibrarea conductometrului;
- măsurarea conductanţei apei distilate, a apei de robinet şi a unor soluţii
de KCl de concentraţii cunoscute, aflate la temperatura laboratorului;
- aflarea concentraţiei molare a unei soluţii utilizând soluţii standard;
- studiul variaţiei cu temperatura a conductanţei unei soluţii de
concentraţie cunoscută.
Descrierea aparatului
Măsurătorile experimentale vor fi realizate cu ajutorul conductometrului
OK 112 (Figura 2.8.3):
- conductometrul (1);
- electrodul de măsurare (2) împreună cu cablul de legătură (3);
- suportul electrodului (6), termometru (7), pahar Berzelius (4) ce va
conţine soluţia analizată (5).
112
Pe panoul frontal al conductometrului se găsesc:
- scalele gradate (11), utilizate la citirea valorii conductanţei soluţiei: scala
superioară fiind divizată între 0 şi 1 şi scala inferioară între 0 şi 3 (3,3);
- led-ul ON (8) a cărui aprindere semnalizează funcţionarea
conductometrului;
- butonul „CAL” (9) permite calibrarea aparatului;
- întrerupător de calibrare (12) aflat pe panoul din spate al aparatului
(colţul stâng superior);
- butonul „RANGE” (10) permite alegerea domeniului de măsură a
conductanţei în intervalul 0,01 µS – 1 S; poate fi poziţionat pe 13 domenii de
măsură diferite: 300, 100, 30, 10, 3 şi 1 (în domeniul µS), respectiv 1000, 300,
100, 30, 10, 3 şi 1 (în domeniul mS).
Atenţie : La măsurarea conductanţei unei soluţii necunoscute, iniţial se
va poziţiona butonul „RANGE” pe domeniul 1000 mS. Se va creşte treptat
sensibilitatea aparatului prin rotirea butonului “RANGE” în sens antiorar
(contrar acelor de ceasornic) până ce acul indicator al conductometrului
deviază în zona centrală a scalelor gradate. Depăşirea în mod repetat a
capătului scalei de către acul indicator poate duce la decalibrarea şi
defectarea instrumentului de măsură.
Dacă butonul “RANGE” indică un domeniu de măsură ce începe cu cifra
1 (1,10,100,1000, atât în domeniul mS cât şi în µS), valorile conductanţei
se vor citi pe scala superioară, aplicând factorii de multiplicare necesari.
Dacă butonul “RANGE” indică un domeniu de măsură ce începe cu cifra
3 (3,30,300, atât în domeniul mS cât şi în µS), valorile conductanţei se
vor citi pe scala inferioară, aplicând factorii de multiplicare
corespunzători. Factorii de multiplicare se obţin raportând valoarea
indicată de butonul range la valoarea înscrisă la capătul scalei pe care se
face citirea respectivă.
Modul de lucru
1. Calibrarea aparatului
- se poziţionează electrodul în aer pe tot parcursul calibrării, scoţându-l din
paharul Berzelius cu apă distilată;
- în urma introducerii fişei în priză, starea de funcţionare a conductometrului
este indicată de aprinderea led-ului „ON” (conductometrul nu este prevăzut
cu buton de pornire/oprire);
- se lasă aparatul timp de 1 minut pentru a intra în regim de lucru;
113
- iniţial, se va poziţiona butonul „RANGE” pe domeniul 1000 mS;
- se apasă întrerupătorul (12) situat pe panoul din spate al aparatului (colţul
din stânga sus), acul indicator deplasându-se spre dreapta până la reperul
roşu al scalei superioare;
- dacă acul indicator nu se suprapune perfect cu reperul roşu, ţinând apăsat
întrerupătorul (12), se va roti butonul “CAL” (9) până ce acul indicator va
ajunge în dreptul capătului scalei superioare (unde este marcat reperul roşu);
Atenţie: Realizarea incorectă a calibrării duce la apariţia erorilor
sistematice de măsurare ce vor afecta toate determinările ulterioare.
2. Studiul variaţiei conductanţei cu concentraţia soluţiei
- electrodul se spală foarte bine cu apă distilată, utilizând agitatorul magnetic
(electrodul se consideră curat dacă conductanţa apei distilate utilizate la
spălat are valori sub 50 µS, în caz contrar apa se aruncă iar procesul de
spălare trebuie reluat);
- se măsoară conductanţa pentru apă distilată, respectiv apă de la robinet, iar
valorile obţinute se trec în Tabelul 1;
- după regula de citire descrisă anterior, se măsoară conductanţa pentru
soluţiile de KCl având concentraţii cuprinse între 0,1 M şi 0,5 M;
- se efectuează câte 3 determinări pentru fiecare soluţie (notându-se cu G1, G2,
G3), valorile trecându-se în Tabelul 1; se calculează valoarea medie G a
conductanţei pentru fiecare soluţie;
- se efectuează 3 determinări şi pentru conductanţa soluţiei de concentraţie
necunoscută;
- pe baza valorilor experimentale, se construieşte graficul variaţiei valorii
medii a conductanţei, G , cu concentraţia molară a soluţiei;
- prin metoda interpolării, se va determina din grafic valoarea necunoscută a
concentraţiei molare a soluţiei de cercetat.
3. Studiul variaţiei cu temperatura a conductanţei unei soluţii
- utilizând soluţia standard de concentraţie 0,5 M, se va măsura valoarea
conductanţei acesteia corespunzător unui interval de temperaturi cuprinse
între temperatura laboratorului şi 37°C;
- creşterea temperaturii soluţiei se va realiza cu ajutorul încălzitorului cu
agitator magnetic (Figura 2.8.4);
- după introducerea în priză a fişei încălzitorului, se poziţionează întrerupătorul
acestuia (1) pe poziţia “1” (ON);
- pentru a evita încălzirea neomogenă şi foarte rapidă a soluţiei de cercetat,
paharul Berzelius conţinând soluţia standard de concentraţie 0,5 M se
114
introduce în cristalizorul situat pe plită, apoi se scufundă atât electrodul de
determinare, cât şi sonda termometrului electronic (6) în soluţia din pahar;
- butonul (3) cu ajutorul căruia se modifică viteza de agitare se va roti până la
obţinerea unei turaţii medii, LED-ul (4) indicând funcţionarea agitatorului
magnetic;
- se citeşte valoarea conductanţei soluţiei, corespunzătoare temperaturii iniţiale
a soluţiei (indicată de afişajul digital (7) al termometrului ce se află
scufundat în Berzelius), şi se trece în Tabelul 2;
- se roteşte butonul (2) de reglaj al temperaturii până în dreptul valorii de 50°C,
LED-ul (5) indicând începerea încălzirii;
- se fac citiri ale conductanţei la fiecare creştere a temperaturii cu 1°C, până la
valoarea de 37°C, datele trecându-se în Tabelul 2;
- încălzitorul, respectiv agitatorul magnetic se decuplează rotind butonul (2),
respectiv (3) în sens antiorar până la stingerea LED-urilor (4) şi (5);
- întrerupătorul (1) se aduce în poziţia “0” (OFF);
116
b) moleculele electrolitului se scindează în ioni, care la rândul lor nu sunt afectaţi
de câmpul electric generat între cei doi electrozi;
c) ionii pozitivi (anionii) rezultaţi din disocierea electrolitului vor migra către
electrodul pozitiv;
d) în contact cu solventul, electrolitul se va desface în ioni, particulele cu sarcină
negativă migrând în câmpul electric către electrodul pozitiv;
e) purtătorii de sarcină rezultaţi din disocierea electrolitului vor fi antrenaţi de
câmpul electric, fiecare migrând către electrodul de semn contrar sarcinii sale
electrice.
5. Care este unitatea de măsură a conductanţei ?
a) ohm; b) ohm⋅cm; c) Siemens;
d) 1/Siemens; e) volt.
6. Care este unitatea de măsură a rezistivităţii (ρ) în C.G.S. ?
a) ohm⋅m; b) Siemens⋅m; c) ohm⋅cm;
d) 1/ohm; e) 1/Siemens.
7. Selectaţi varianta corectă referitor la rezistenţa electrică a unui
conductor:
a) dependenţa rezistenţei electrice de materialul conductor este asigurată de o
constantă de material numită rezistivitate;
b) depinde invers proporţional de aria secţiunii transversale a conductorului;
c) variază direct proporţional cu conductanţa electrică;
d) depinde de natura materialului din care este confecţionat conductorul printr-o
constantă de material numită constanta celulei;
e) scade cu creşterea lungimii conductorului.
8. Alegeţi răspunsul corect referitor la conductivitate:
a) se defineşte ca inversul conductanţei electrice;
b) este o mărime fizică fără unitate de măsură;
c) se mai numeşte şi conductanţă specifică;
d) se defineşte ca inversul rezistivităţii;
e) se măsoară în S.I. în Ω-1⋅m-1.
117
9. Metoda conductometrică poate fi utilizată în medicină pentru:
a) determinarea spectrului de absorbţie a medicamentelor;
b) controlul purităţii apei distilate utilizate ca solvent medicamentos;
c) determinarea temperaturii centrale;
d) tomografia electrică de impedanţă;
e) măsurarea concentraţiilor de substanţe ce nu disociază ionic.
118
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .......................................
…………………………………….. Seria ................ Grupa ..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
apă
distilată
apă de
robinet
1 0,1
2 0,2
3 0,3
4 0,4
5 0,5
6 X
Tabelul 2
Temperatura Conductanţa Temperatura Conductanţa
soluţiei 0,5 M soluţiei 0,5 M soluţiei 0,5 M soluţiei 0,5 M
(°C) (mS) (°C) (mS)
20 29
21 30
22 31
23 32
24 33
25 34
26 35
27 36
28 37
120
Graficul 1
Variaţia conductanţei cu concentraţia soluţiei
121
Graficul 2
Variaţia conductanţei cu temperatura soluţiei
122
2.9. OCHIUL CA INSTRUMENT OPTIC
Noţiuni teoretice
Ochiul uman este un organ de simţ capabil să recepţioneze unde
electromagnetice cu lungimea de undă în vid cuprinsă între 400 nm şi 700 nm.
Mulţimea lungimilor de undă pentru care ochiul este sensibil este determinată de
pigmenţii fotosensibili din celulele fotoreceptoare care se găsesc în retină. Retina
tapetează suprafaţa interioară posterioară a globului ocular şi este alcătuită din
mai multe straturi de celule. Cei care doresc să aprofundeze mecanismele
biofizice ale fotorecepţiei sunt invitaţi să consulte cursul de biofizică sau orice
tratat care prezintă fiziologia analizorului vizual. Pentru a înţelege această lucrare
practică este suficient să privim retina drept un sistem biologic care joacă un rol
similar filmului fotografic sau al senzorului CCD din aparatele de fotografiat.
Privit ca un instrument optic, globul ocular refractă lumina de aşa manieră
încât într-o anumită regiune a retinei să se formeze imaginea clară a obiectelor de
la care provine lumina ce pătrunde în ochi.
În vid, lumina se propagă cu viteza c = 3×108 m/s; într-un mediu
transparent, viteza de propagare a luminii este mai mică. În sticlă, de exemplu,
viteza de propagare a luminii este v = 2×108 m/s. Raportul acestor viteze, n = c v ,
se numeşte indicele de refracţie (absolut) al mediului ( n = 3 2 = 1,5 pentru sticlă).
Atunci când un fascicul de lumină întâlneşte un dioptru (o suprafaţă de
separaţie a două medii transparente, cu indici de refracţie diferiţi), o parte din
fascicul se reflectă (revine în primul mediu, caracterizat prin indicele de refracţie
n1), iar restul se refractă (pătrunde în celălalt mediu, caracterizat prin indicele de
refracţie n2, schimbându-şi, de regulă, direcţia de propagare). Notăm prin i ,
respectiv r , unghiul dintre raza incidentă, respectiv refractată şi normala dusă la
suprafaţa de separaţie în punctul de incidenţă. Refracţia luminii satisface două
legi: (1) Raza incidentă, raza emergentă şi normala la dioptru dusă în punctul de
incidenţă se găsesc în acelaşi plan. (2) Unghiul de incidenţă i şi unghiul de
refracţie r satisfac relaţia n1 sin i = n2 sin r . Astfel, dacă raza nu cade
perpendicular pe dioptru ( i ≠ 0 ) ea îşi va schimba direcţia de propagare. Atunci
când raza pătrunde într-un mediu mai dens optic ( n2 > n1 ), ea se va apropia de
normala dusă în punctul de incidenţă ( r < i ).
După cum se observă în Figura 2.9.1, pentru a ajunge la retină, lumina are
de traversat patru dioptri: suprafaţa anterioară a corneei, suprafaţa posterioară a
corneei, suprafaţa anterioară a cristalinului şi suprafaţa posterioară a cristalinului.
Fiecare dintre aceşti dioptri contribuie la modificarea direcţiei de propagare a
luminii. Ochiul normal (emetrop) este astfel construit încât lumina care provine
123
de la obiecte îndepărtate (mai precis, aflate la o distanţă de peste 6 metri de ochi)
este focalizată pe retină: razele de lumină care provin dintr-un punct al obiectului
se întâlnesc într-un punct al retinei, formând astfel imaginea acelui punct al
obiectului.
Descrierea aparaturii
Trusa de optică geometrică destinată vizualizării parcursului razelor de
lumină este prezentată în Figura 2.9.2.
a. b.
Figura 2.9.2. Trusă de optică geometrică pentru vizualizarea mersului razelor
de lumină prin prisme, lentile şi oglinzi
a. sursă; b. elemente optice
Modelul funcţional al ochiului uman (Figura 2.9.3) include
următoarele componente:
Modul de lucru
1. Studiul parcursului unui fascicul de lumină prin elemente optice
reflectante şi refractante.
• Porniţi alimentarea sursei de lumină şi montaţi obturatorul cu patru fante în
capătul apropiat de lentila colimatoare.
• Verificaţi dacă fasciculul emergent este alcătuit din raze paralele. În caz
contrar, solicitaţi ajutorul cadrului didactic.
• Plasaţi elementele optice din Figura 2.9.2b în calea luminii şi schiţaţi
parcursul razelor emergente corespunzătoare fiecărui element.
2. Identificarea elementelor refractive ale ochiului uman.
Demontaţi modelul anatomic al ochiului (Figura 2.9.5).
Completaţi Tabelul 1 cu denumirea elementelor optice refractive ale
ochiului în ordinea în care acestea sunt traversate de lumină.
126
Figura 2.9.5. Model anatomic al ochiului uman
127
o Studiaţi formarea de imagine în ochiul normal (emetrop) astfel (Figura
2.9.6):
o glisaţi un stativ în poziţia 7 cm şi fixaţi în acesta emisfera anterioară
a globului ocular;
o aşezaţi lentila S1 (6) în suportul care se găseşte în emisfera
anterioară (1); această lentilă reprezintă un model al cristalinului
acomodat pentru formarea imaginii pe retină;
o descrieţi imaginea formată pe ecranul de sticlă mată de pe emisfera
posterioară (2);
o modificaţi aria diafragmei (care modelează pupila) şi descrieţi într-o
frază efectul său asupra imaginii;
o Studiaţi acomodarea ochiului pentru formarea imaginii clare a obiectelor
apropiate / îndepărtate:
o în suportul ataşat emisferei anterioare (1), înlocuiţi lentila S1 (6) cu
lentila S2 (7);
o comparaţi imaginea obiectului luminos cu cea obţinută anterior, cu
ajutorul lentilei S1;
o îndepărtaţi obiectul luminos şi stativul său, după care orientaţi
bancul optic spre obiecte îndepărtate (cum ar fi copacii care se văd
prin ferestrele laboratorului);
o descrieţi imaginea observată pe ecran;
o comparaţi curburile lentilelor S1 şi S2; lentila S1 reprezintă
cristalinul acomodat pentru vederea unui obiect apropiat, iar S2
reprezintă cristalinul atunci când musculatura ciliară este relaxată
(caz în care pe retina unui ochi normal se formează imaginea clară a
obiectelor îndepărtate).
o trageţi o concluzie privind modificările pe care le suferă cristalinul
în cursul adaptării la observarea obiectelor din ce în ce mai
apropiate;
o Studiaţi formarea de imagine în ochiul miop (prezentând miopie axială) şi
aflaţi cum se poate corecta:
o asezaţi stativul emisferei anterioare (1) în poziţia 9 cm; astfel, axa
antero-posterioară a modelului de ochi devine mai lungă cu 2 cm
decât în configuraţia care reprezintă un ochi emetrop;
o descrieţi imaginea formată pe ecran;
o plasaţi stativul dintre sursa de lumină şi emisfera anterioară a
globului ocular în poziţia 16 cm şi inseraţi suportul (3) în acest
stativ;
o care dintre lentilele B1 şi B2 este potrivită pentru a corecta formarea
de imagine în modelul de ochi miop?
128
Figura 2.9.7. Configuraţia modelului funcţional al ochiului uman care
reprezintă formarea de imagine într-un ochi miop
129
o glisaţi sursa de lumină în poziţia 34 cm şi comparaţi imaginea
formată pe ecran cu cea observată anterior în poziţia 43 cm;
o puneţi stativul dintre sursa de lumină şi emisfera anterioară a
globului ocular în poziţia 17 cm şi montaţi lentila B2 în suportul său;
ce modificări a suferit imaginea de pe ecran?
o trageţi o concluzie privind modalitatea de corectare a formării de
imagine în cazul presbiopiei.
6. Ochiul miop:
a) se caracterizează printr-o valoare scăzută a elasticităţii cristalinului;
b) formează imaginea obiectelor îndepărtate într-un plan situat în faţa retinei;
c) formează imaginea obiectelor îndepărtate într-un plan situat în spatele retinei;
d) poate avea axa antero-posterioară mai mare decât un ochi emetrop;
e) formează imaginea obiectelor îndepărtate pe suprafaţa retinei.
7. Ochiul hipermetrop:
a) formează imaginea obiectelor îndepărtate într-un plan situat în faţa retinei;
b) formează imaginea obiectelor îndepărtate într-un plan situat în spatele retinei;
c) poate avea axa antero-posterioară mai mare decât un ochi emetrop;
d) poate avea axa antero-posterioară mai mică decât un ochi emetrop;
e) se caracterizează printr-o valoare crescută a elasticităţii cristalinului;
9. Punctum proximum:
a) este punctul cel mai apropiat de ochi care poate fi văzut clar fără acomodare;
b) este punctul cel mai îndepărtat de ochi care poate fi văzut clar fără acomodare;
c) este punctul cel mai apropiat de ochi care poate fi văzut clar în condiţii de
acomodare maximă;
d) este punctul cel mai îndepărtat de ochi care poate fi văzut clar în condiţii de
acomodare maximă;
e) este punctul de pe faţa posterioară a cristalinului care se găseşte cel mai
aproape de retină.
131
10. Punctum remotum:
a) este punctul cel mai apropiat de ochi care poate fi văzut clar fără acomodare;
b) este punctul cel mai îndepărtat de ochi care poate fi văzut clar fără acomodare;
c) este punctul cel mai apropiat de ochi care poate fi văzut clar în condiţii de
acomodare maximă;
d) este punctul cel mai îndepărtat de ochi care poate fi văzut clar în condiţii de
acomodare maximă;
e) este punctul de pe faţa anterioară a cristalinului care se găseşte cel mai departe
de retină.
132
Disciplina de BIOFIZICĂ Nume ........................................
Prenume....................................
Facultatea .......................................
Seria ............ Grupa ..................
Lucrarea Nr.......
Noţiuni teoretice
133
Completaţi Figura de mai jos cu parcursul razelor emergente :
134
Concluzii:
2. Formarea de imagine în ochiul miop se poate corecta prin inserarea unei lentile
convergente / divergente în faţa ochiului. Această lentilă transformă un fascicul
incident de raze paralele într-unul convergent / divergent; acesta din urmă cade
pe suprafaţa ochiului, fiind focalizat pe retină.
135
136
ANEXA
t ρ0 t ρ0 t ρ0
(°C) (g/cm3) (°C) (g/cm3) (°C) (g/cm3)
0 0,99987 12 0,99952 24 0,99732
1 0,99993 13 0,99940 25 0,99707
2 0,99997 14 0,99927 26 0,99681
3 0,99999 15 0,99913 27 0,99654
4 1,00000 16 0,99897 28 0,99626
5 0,99999 17 0,99880 29 0,99597
6 0,99997 18 0,99862 30 0,99567
7 0,99993 19 0,99843 31 0,99537
8 0,99988 20 0,99823 32 0,99505
9 0,99981 21 0,99802 33 0,99472
10 0,99973 22 0,99780 34 0,99440
11 0,99963 23 0,99757 35 0,99406
Mediu ρ (g/cm3)
Os 1,7 – 2,0
Ţesut adipos 0,92 – 0,94
Hematie 1,10
Plasmă 1,03
Sânge 1,06
Ţesut muscular 1,06
Urină 1,003 – 1,035
137
Tabelul 3. Tensiunea superficială a apei σo (dyn/cm) la diferite temperaturi t(°C)
t σ0 t σ0
(°C) (dyn/cm) (°C) (dyn/cm)
5 74,860 25 71,810
10 74,113 30 71,035
15 73,350 35 70,230
16 73,196 40 69,416
17 73,043 45 68,592
18 72,889 50 67,699
19 72,736 55 66,894
20 72,583 60 66,040
21 72,428 65 65,167
22 72,273 70 64,274
23 72,119 75 63,393
24 71,964 80 62,500
t ηo t ηo t ηo
(°C) (cP) (°C) (cP) (°C) (cP)
0 1,7921 21 0,9810 70 0,4061
5 1,5188 22 0,9579 80 0,3565
10 1,3077 23 0,9358 90 0,3165
15 1,1404 24 0,9142 100 0,2838
16 1,1111 25 0,8937
17 1,0828 30 0,8007
18 1,0559 40 0,6560
19 1,0299 50 0,5494
20 1,0040 60 0,4688
139
140
BIBLIOGRAFIE
[1] Rottemberg Floare, Nagy I.I., Mihalaş G.I. Lucrări practice de biofizică,
Lito I.M.T., Timişoara, 1975.
[2] Neagu M., Munteanu O., Nagy I.I., Neagu A. Lucrări practice de biofizică,
Editura Eurobit, Timişoara, 2018.
[3] Alteraş I. et al. Metodele laboratorului clinic, Editura Medicală, Bucureşti,
1964.
[4] Mihalaş G.I. et al. Curs de biofizică, Editura Eurobit, Timişoara, 2008.
[5] Kovács Eugenia et al. Biofizică şi biotehnologie celulară. Metode de
cercetare. Manual de lucrări practice., Editura Universitară “Carol Davila”,
Bucureşti, 2002.
[6] Popescu A. Fundamentele biofizicii medicale, Editura ALL, 1994.
[7] Mihăilescu D., Flonta Maria-Luiza, Movileanu L. Probleme de biofizică,
Editura Universităţii din Bucureşti, 1997.
[8] Ruch T.C., Fulton J.F. Fiziologie medicală şi biofizică, Editura Medicală,
Bucureşti, 1963.
[9] Atkins P.W. Physical Chemistry, Fifth Edition, Oxford University Press,
Oxford, 1994.
[10] Bergethon P.R., Simons E.R. Biophysical Chemistry. Molecules to
membranes. Springer-Verlag, New York, 1990.
[11] Sybesma C. Biophysics. An Introduction., Kluwer Academic Publishers,
Dordrecht, 1995.
[12] Jackson M.B. Molecular and Cellular Biophysics, Cambridge University
Press, Cambridge, 2006.
[13] Dodenciu D. Biofizica. Lucrări practice de Medicină Dentară, Ediţia 6-a,
Editura Eurobit, Timişoara, 2011.
[14] Monciu Crina – Maria. et al. Analiza chimică în controlul medicamentului,
Editura Medicală, Bucureşti, 2005.
141
142