c





 











V  c




 



 c

 






 


 





c









 


 






c
 
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para
bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias gramnegativas.
Básicamente consta de 23 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados y
una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de
permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20
microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una
prueba bioquímica distinta, Los microtubos se inoculan con una suspensión de
microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras se
incuban a 37° C por 24 horas y por efecto del metabolismo bacteriano se van a
producir cambios de colores espontáneos o bien al añadir reactivos.
La prueba número 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.


 





£ Fácil de manejar
£ Incluyen base de datos para su interpretación
£ Reduce costos
£ Fácil de interpretar
£ Mayor confiabilidad
£ Mayor seguridad en el resultado de las pruebas
£ Ocupa menos espacios en su almacenamiento
£ Mayor reproducibilidad
£ Mayor precisión

Las pruebas de que consta la galería de los microsistemas API son las siguientes:
VV
ð




£ Conocer la utilidad de los microsistemas
£ Comprender el fundamento de cada una de las pruebas del sistema API
£ Aprender a manejar e interpretar el sistema API

è 


 


 !"#

£ Solución salina fisiológica

£ Mechero
£ Sistemas API
£ Reactivos para microsistemas API
£ Cepas bacterianas (Ytaphylococcus sp, Ytreptococcus sp, Neisseria sp,
Listeria sp)
£ Asas
£ Pipetas Pasteur estéril
£ Tubos estériles
£ Parafina
£ Tabla de identificación de microsistemas

‰ c


 







 A partir de una colonia bien aislada del microorganismos hacer una
suspensión en 5 ml de solución salina (1% de NaCl) o 5 ml de agua
estéril
ð Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula (cada
pocillo tiene un tubo y una cúpula, parte aerobia) de todos los pocillos
è Llenar la cúpula de los pocillos CIT, VP, GEL con la suspensión de
bacterias
‰ Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos ADH,LDC,ODC,URE, HS
para obtener anaerobiosis
$ Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente
poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una
atmósfera húmeda durante la incubación.
% Incubar a 37°C por 24 horas


 1. Se humidifica el sistema mediante
adición de agua destilada en los
pocillos de la base de plástico
transparente.

V V

3. Con ayuda de una pipeta Pasteur estéril (y

2. Se toma con el asa de siembras una V chupetín) se rellenan los pocillos del sistema
colonia de la cepa a analizar y se de identificación según las indicaciones.
V
resuspende en 5ml de suero fisiológico
estéril. Se homogeniza la suspensión.
V 
& Tras la incubación se anotan los resultados que no requieren ser
revelados
' Determinadas pruebas requieren de la aplicación de algunos reactivos
para obtener su resultado
( Realizar la lectura de los test y anotar cada numero de acuerdo a: 
 )* ++!,-.-/!0# 1!23 3#!!23

 Beta-galactosidasa sin color amarillo

 Arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
 Lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja

 Ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja


 Utilización del citrato verde azul oscuro o turquesa

sin precipitado
ð Producción de H 2 S precipitado negro
negro
c Ureasa amarillo rojo o naranja
 Triptófano desaminasa amarillo marrón-rojo

 Producción de indol amarillo color rosa o anillo rosa-rojo

Producción de acetoína
  sin color rosa-rojo
(Voges-Proskauer)

 Gelatinasa sin difusión difusión de pigmento

Fermentación/oxidación de
c azul o verde amarillo
glucosa
Fermentación/oxidación de
  azul o verde amarillo
manitol
Fermentación/oxidación de


 azul o verde amarillo
inositol
Fermentación/oxidación de

 azul o verde amarillo
sorbitol
Fermentación/oxidación de
 azul o verde amarillo
ramnosa
Fermentación/oxidación de
 azul o verde amarillo
sacarosa
Fermentación/oxidación de
 azul o verde amarillo
melobiosa
Fermentación/oxidación de
 azul o verde amarillo
amigdalina
Fermentación/oxidación de
 azul o verde amarillo
arabinosa

4 Citocromo oxidasa 
V  V
V

£ Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7

cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total se tiene 7
grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de
oxidasa)
£ Si la reacción es negativa se pone 0
£ Si la reacción es positiva se pone: 1si es el primer pocillo de un triplete, 2 si
es el segundo, 4 si es el tercero
£ Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes
se obtiene un código de 7 cifras.
£ Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se
trata, para realizar esta operación hay programas informáticos.

$ 





c 





1. Realizar coloración de Gram y descripción macroscópicas de las

colonias entregadas
2. A partir de los resultados obtenidos en el sistema API, identificar el
microorganismo en estudio.

5





 Reporte los resultados obtenidos durante la práctica de microsistemas

API
ð Por medio de los perfiles numéricos obtenidos informar genero y
especie del microorganismo en estudio