Sunteți pe pagina 1din 81

1.

Morfologia crs umani


2. Cariotipul normal
a) Clasificarea crs
b) Polimorfisme crs
3. Nomenclatura crs
a) Formula cariotipului
b) Evaluarea variațiilor
4. Cariotiparea
a) Metode
b) Etape
c) Indicații
d) Limite
5. Particularitățile crs X și Y
a) Regiunile PAR1,2,
specifice X, Y
b) Lyonizarea
c) Testul Barr și F
46,XX ; 47,XXX 45,XX,-13 ; 47,XX,+18 ; 69,XYY; 46,XX,1ph+; 92,XXYY;
46,XX,del(13p); 49,XXXXY; 46,XX,5p- ; 46,XY,i(21q) ; 46,X,i(Yp) ; 46,XY ; 69,XXX ;
45,X ; 46,X,r(X) ; 45,XX,rob21/22 ; 46,XY,rob13/14 ; ; 48,XXYY; 47,XYY ; 46,XX,4p+ ;
46,XY,inv(7) ; 46,XY,i(18q) ; 45,X / 46,XX ; 46,XY/47,XY,+21 ; 46,XX/ 47,XY,+8;
47,XXY/46,XY; 46,XX,rob(14/14); 46, XY,r(17); 46,XX/47,XXX ; 46,XY,22p-;
46,XY,t(14;16); 45,Y; 47,XX,+13; 46,XY, dup(21q); 45,XY,-22 ; 47,XX,+8; 46,XY,21p+;
46,XX,i(18q); 46,XX,1qh+
Fenotip normal
Fenotip patologic
Letale
Euploidii

Aneuplidii
Trisomii
Monosomii

Poliploidii

Anomalii crs echilibrate


Anomalii crs neechilibrate

Situs FRA
Polimorfisme crs
Cromozomii umani
• reprezintă substratul morfologic al E şi V;
• nivelul supramolecular de organizare a materialului genetic
(ADN + proteine histone + proteine nonhistone + ARN)

• reprezintă structuri dinamice ca formă, aspect, grad de


compactizare, activitate genetică:
• crs mono – sau bicromatidian;
• cromatină sau cromozom;
• activ pentru transcripţie sau inactiv.

3
• crs se autoreproduc prin replicarea ADN ce îi constituie numai
în perioada S a interfazei.

• crs reprezintă grupuri de înlănţuire a genelor:


- fiecare crs conţine un număr anumit de gene;
- fiecare genă are o poziţie fixă pe cromozom – locus;
- genele unui cromozom formează grupuri lincage, ce de
regulă, se transmit în bloc, înlănţuit

4
• setul diploid de crs a unui individ formează cariotipul:
23 perechi: 22 perechi autozomi +
1 pereche gonozomi (XX sau XY).
Cromozomii pereche = cromozomi omologi

Studiul cromozomilor se poate realiza în:


• Metafază prin colorare omogenă sau în benzi
• Prometafază prin colorare în benzi
• Interfază prin hibridare cu sonde moleculare
marcare fluorescent
6
• Cromozomii au o structură neomogenă:
- Secvenţe codificatoare şi necodificatoare;
- Segmente de eucromatină şi heterocromatină,
- secvenţe unice şi repetitive;
- Secvenţe bogate în GC şi AT;
- Secvenţe transcrise şi netranscrise;
- segmente bogate în proteine acide şi bazice.
!!! Acestea explică originea benzilor cromozomiale

• Anomaliile de număr sau de structură a crs se manifestă prin


anomalii multiple de dezvoltare – sindroame crs
plurimalformative
8
Structura cromozomului metafazic.
Repere cromozomiale

Forma cromozomului metafazic depinde de


POZIŢIA CENTROMERULUI 9
lungimea relativă şi

repere de identificare a
absolută a crs

cariotipului poziţia centromerului =


constricţia primară - c

prezenţa constricţiilor
secundare – h

prezenţa sateliţilor - s
p x100
Ic  p  q

11
Cariotip normal
46,XY 46,XX
A

G
Cariotipul uman

14
CLASIFICAREA CROMOZOMILOR
După lungime: După formă: După tip:
-Mari -Metacentrici -Autozomi
-Medii -Submetacentrici -Gonozomi
-Mici -Acrocentrici

După prezenţa altor Grupe:


repere:
A 1-3 E 16-18
-Cu h pe braţul p
B 4,5 F 19,20
-Cu h pe braţul q
C X, 6-12 G 21, 22, Y
-Cu sateliţi
D 13-15
15
45,X
47,XXY
47,XX,+21
47,XX,+18
47,XX,+13
46,XX,5p-
69,XXX
47,XXY 47,XYY 47,XXX
S.Klinefelter Dezvoltare Dezvoltare
normală normală
Disomie uniparentală
Sindrom Angelman – 46,XY,DUP(15)
Sindrom Prader-Willi - 46,XY,DUM(15)
Cariotipul uman
Concluzii
şi formula
• 46,XX cromozomială
• 46,XY
• 46,XX,DUP15 sau 46,XY,DUP15
• 46,XX,DUM15 sau 46,XY,DUM15
• 47,XX,+21 sau 47,XY,+21
• 47,XX,+13 sau 47,XY,+13
• 47,XX,+18 sau 47,XY,+18
• 45,X
• 47,XXY
• 46,XX,5p- sau 46,XY,5p-
Cariotip cu anomalii de numar

Poliploidii Aneuploidii

69,XXX Trisomii Monosomii


69,XXY
Autosomale Gonosomale Autosomale Gonosomal
92,XXYY
47,XX,+? 47,XXX 45,XX,-? 45,X
47,XY,+? 47,XYY 45,XY,-? 45,Y
47,XXY
Cariotipul uman şi formula
cromozomială
46,XX,16qh+ 46,XX,15qh+

46,XX,16ph+ 46,XX,15ph+

46,XX,13ps+ 46,XX,21ps+

46,XY,13ph- 46,XY,22ph-

46,XY,16p+ 46,XY,14p+

46,XY,16q- 46,X,Yq-

27
47,XY,+21
47,XXY

46,XY,5p-

47,XY,+18

47,XY,+13
47,XY,+21/46,XY

47,XXY/46,XY
47,XY,+18/46,XY
47,XY,+13/46,XY
47,XY,+8/46,XY
Cînd putem presupune o anomalie crs de NR
sau de structură ?

• Anomalii de dezvoltare mutiple – sindrom plurimalformativ


• Anomalii de sexualizare
• Anomalii de reproducere
– Nou născut mort plurimalformat
– Avorturi spontane repetate
– Sterilitate primară
ETAPELE‫‏‬CARIOTIPĂRII

1. Colectarea sîngelui pentru a obţine celule nucleate


(!!! leucocitele sîngelui periferic au nuclee în interfază)‫‏‬
2. Obţinerea culturii de celule în diferite perioade ale mitozei

37º C Cel în
diferite
Cel faze ale
sâgelui Peste 72 ore mitozei
+ mediu 72 ore
de
creştere
3.Pregătirea cromozomilor pentru microscopie
Citostatic -
colhicină
Sol hipotonică

Celule în
diferite
faze ale
mitozei
Stoparea Sedimentarea Dispersarea
metafazei celulelor cromozomilor
4. Colorarea şi microscopia preparatului cromozomic

Colorare

Lamă cu cel fixate Lamă cu plăci metafazice


5. Analiza cariotipului

Decuparea Realizarea
Fotografierea
cromozomilor cariogramei =
plăcii metafazice cariotipului
Tehnici de citogenetică – de analiză a
cariotipului:
Pentru identificarea anomaliilor de număr – analiza
cromozomilor metafazici cu colorate omogenă.

Pentru identificarea anomaliilor de număr şi de structură –


analiza cromozomilor metafazici cu colorare diferenţiată Q, G,
R; analiza cromozomilor prometafazici cu colorare diferenţiată
Q, G, R.

Pentru identificarea polimorfismului cromozomial – analiza


cromozomilor metafazici cu colorare diferenţiată C, T.

37
Studiul cariotipului uman

Analiza crs Analiza crs Analiza crs


metafazici prometafazici interfazici

Colorare Colorare colorare în Testul Metode


uniformă în benzi benzi cromatinei molecular
G,Q,R,C,T G, R sexuale citogenetice
X şi Y FISH, mFISH
SKY
CGH

*** NR benzi pentru setul haploid: 300-400 m / 550 pm / 850p


Colorarea cromozomilor
Omogenă Diferenţiată, în benzi

G Q R C T

Benzile G+ = Q+ = R –
Benzile G- = Q- = R +
Nomenclatura benzilor

Cromozomul
braţe
regiuni
benzi
subbenzi

4p22.2
5q13.4
9p21.3
1p35

1p22

1q23

1q41

46,XY,del(1)(p11-p34)‫‏‬
46,XY,del(1)(p11-p34)‫‏‬
46,Y,del(X)(q12.1-q24.3)‫‏‬
Cariotip

Normal Normal cu Aneuploid Poliploid Cu aberaţii


polimorfisme cromosomiale

46,XX 46,XX,9qh+ 47,XX,+21 69,XXX 46,XX,1q-


46,XY 46,XY,16qh- 45,XY,-12 69,XXY 46,XY,16p+
46,XX,14s++ 48,XXXY 46,X,r(X)
45,X 46,XY,del(5p)
46,XX,t(12,22)
Utilizarea tehnicii
FISH în analiza
Cromosomul 4 Stabilirea crs. X şi 18 Stabilirea crs. X, Y şi 18

cromosomială
Stabilirea crs. 18 şi 21 Stabilirea crs. 18 şi 21
45
46,XX 47,XX,+21

47,XX,+21 47,XX,+21
SKY
Cariotip normal 46,XX Fenotip
46,XY normal

Polimorfisme Crs D şi G – variaţii ph sau s: Fenotip


Crs 1,9,16,Y – variaţii qh normal

Anomalii de număr Trisomii – 47,XXY; 47,+21; 47,+13; Fenotip


47,+18; 47,+8 patologic
Monosomii – 45,X
Anomalii de structură inv Fenotip
echilibrate t normal
rob

Anomalii de structură del Fenotip


neechilibrate dup patologic
r
i
CARIOTIP

Normal Cu polimorfisme Cu aberaţii crs Cu aberaţii crs Aneuploid Poliploid


echilibrate neechilibrate 47,XX,+? 69,XXX
46,XX 46,XX,…
46,XX,… 46,XX,… 45,XY,-? 92,XXXX
46,XY 46,XY,….
46,XY,…. 46,XY,….
h+
t del
h-
inv dup
s+
45,XX,rob(D/G) r
s-
45,XY,rob(D/G) i(?p)
i(?q)
46, ,rob(D/G)
Deleţie (del)

Terminală Interstişială
Inversie (inv)

Paracentrică Pericentrică
Translocaţii (t)

Reciprocă Cu inserţie Robertsoniană


(rob)
Alte aberaţii cromozomale

Crossing-over inegal – Cromozom inelar Izocromozom


duplicaţie (dup) (r) (i, iso)
??? polimorfisme
• p şi q – conţin segmente cromozomiale
codificatoare şi necodificatoare
• p+ sau p- - anomalii
• q+ sau q- - anomalii
• c mai mare sau mai mic – polimorfism
• t mai mare sau mai mic – polimorfism
• h+ sau h- - polimorfism
• s+ sau s- - polimorfism
SRY
AZF

Cromozomul X - 2186 gene: Cromozomul 580gene:


•gene somatice • gene masculinizante – SRY=Tdf
•gene feminizante • gene de fertilizare – AZF1 si 2
•gene masculinizante • pseudogene
• !!!‫‏‬Braţul‫‏‬q‫‏‬conţine‫‏‬heterocromatină
constitutivă
!!! Important
• Cromozomul X – este indespensabil celulei somatice ♀ şi ♂:
• În cel 46,XX – este activ numai un X
• În cel 46,XY – este activ şi X şi Y
• În cel 47,XXX - este activ numai un X
• În cel 47, XXY- este activ numai un X şi un Y
• În cel 48, XXXY- este activ numai un X şi un Y
• Cromozomul Y – este obligator pentru ♂

Dimorfismul sexual - echilibrat


!!! Caractere sexuale primare - diferite
!!! Caractere sexuale secundare - diferite
!!! Caractere somatice - asemănătoare
46,XX 46,XY

Crs Y – Y
Crs
Crs X – activ Crs X – neactiv Crs X – activ braţ‫‏‬q‫‏‬neactiv
Braţ‫‏‬p‫‏‬- activ
eucromatinizat heterocromatinizat heterocromatinizat
eucromatinizat Braţ‫‏‬q‫‏‬- inactiv

Corpuscul Barr
Corpuscul F
 = 1μm
 = 0,25 μm
Testul cromatinei sexule
Testul cromatinei sexule X
 testul Barr
 vizualizarea crs X inactiv, heterocomatinizat
 pe nucleele interfazice ale celulelor somatice
 Nr cBarr + 1 = Nr crs X

Testul cromatinei sexule


 testul F
 vizualizarea a 2/3 din braţul qY
 pe nucleele interfazice ale celulelor somatice sau ale
spermatozoizilor
 Nr cF = Nr crs Y
48,XXXY 45,X 50,XXXXYY 49,XXXXX
Test Barr

XXX X XXXX XXXXX

Test F

Y YY
45,X 47,XXY
Regiunile crs X şi Y
I – regiunea pseudoautosomală (PA) cu
gene comune (SHOX) şi pe crs X şi pe
crs Y:
- Xpter si Xqter
- Ypter si Yqter
II – regiunea crs X cu gene specifice
numai X
III – regiunea crs Y cu gene
masculinizante
IV – regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvenţe
necodificatoare – heterocromatină
constitutivă
Pseudoautosomal region 1:
Approved
Approved Name Previous Symbols Synonyms Chromosome
Symbol
AKAP17A A kinase (PRKA) anchor protein 17A CXYorf3, SFRS17A XE7, XE7Y, DXYS155E, Xp22.33 and Yp11.32
MGC39904, 721P, CCDC133
ASMT acetylserotonin O-methyltransferase HIOMT, ASMTY, HIOMTY Xp22.3 and Yp11.3

ASMTL acetylserotonin O-methyltransferase-like Xp22.3 and Yp11.3

ASMTL-AS1 ASMTL antisense RNA 1 CXYorf2, NCRNA00105, FLJ13330 Xp22.33 and Yp11.32
ASMTLAS, ASMTL-AS
CD99 CD99 molecule MIC2 Xp22.32 and Yp11.3
CD99P1 CD99 molecule pseudogene 1 MIC2R, NCRNA00103, Xp22.33 and Yp11.31
CXYorf12, CD99L1
CRLF2 cytokine receptor-like factor 2 CRL2, TSLPR Xp22.3 and Yp11.3
CSF2RA colony stimulating factor 2 receptor, alpha, low- CSF2R CD116 Xp22.32 and Yp11.3
affinity (granulocyte-macrophage)
DHRSX dehydrogenase/reductase (SDR family) DHRS5X, DHRSXY, Xp22.33 and Yp11
X-linked DHRSY, DHRS5Y,
SDR46C1
DHRSX-IT1 DHRSX intronic transcript 1 (non-protein coding) DHRSXIT1 DHRSX-IT Xp22.33 and Yp11

FABP5P13 fatty acid binding protein 5 pseudogene 13 FABP5L13 Xp22.33 and Yp11.32
GTPBP6 GTP binding protein 6 (putative) PGPL, FLJ20977 Xp22.33 and Yp11.32
IL3RA interleukin 3 receptor, alpha (low affinity) CD123 Xp22.3 and Yp13.3
LINC00102 long intergenic non-protein coding RNA 102 NCRNA00102 OTTHUMT00000055623 Xp22.33 and Yp11.31
LINC00106 long intergenic non-protein coding RNA 106 CXYorf8, NCRNA00106 OTTHUMG00000021061 Xp22.33 and Yp11.32
LINC00685 long intergenic non-protein coding RNA 685 CXYorf10, NCRNA00107, OTTHUMT00000055574 Xp22.33 and Yp11.32
PPP2R3B-AS1
P2RY8 purinergic receptor P2Y, G-protein coupled, 8 P2Y8 Xp22.33 and Yp11.3

PLCXD1 phosphatidylinositol-specific phospholipase C, X FLJ11323 Xp22.33 and Yp11.32


domain containing 1
PPP2R3B protein phosphatase 2, regulatory subunit B'', PPP2R3L PPP2R3LY, PR48 Xp22.3 and Yp11.3
beta
SHOX short stature homeobox PHOG, GCFX, SS, Xp22.33 and Yp11.32
SHOXY
SLC25A6 solute carrier family 25 (mitochondrial carrier; ANT3 ANT3Y, MGC17525 Xp22.32 and Yp11.3
Pseudoautosomal region 2:

Approved
Approved Name Previous Symbols Synonyms Chromosome
Symbol
AMDP1 adenosylmethionine decarboxylase AMD2, AMD AMDPX, AMDPY Xq28 and Yq12
pseudogene 1
DDX11L16 DEAD/H (Asp-Glu-Ala-Asp/His) box Xq28 and Yq12
helicase 11 like 16
DPH3P2 diphthamide biosynthesis 3 Xq28 and Yq12
pseudogene 2
IL9R interleukin 9 receptor CD129 Xq28 and Yq12
SPRY3 sprouty homolog 3 (Drosophila) HSPRY3 Xq28 and Yq12
TCEB1P24 transcription elongation factor B TCEB1P25 Xq28 and Yq12
(SIII), polypeptide 1 pseudogene 24

TRPC6P transient receptor potential cation TRPC6L Xq28 and Yq12


channel, subfamily C, member 6
pseudogene

VAMP7 vesicle-associated membrane SYBL1 VAMP-7, TI-VAMP Xq28 and Yq12


protein 7
WASH6P WAS protein family homolog 6 FAM39A, CXYorf1 Xq28 and Yq12
pseudogene
WASIR1 WASH and IL9R antisense RNA 1 NCRNA00286B Xq28 and Yq12
46,XX 46,XY


Concluzii:
• La persoanele 46,XX:
– Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
– Sunt active genele unui crs X + genele PA a celui de-
a doilea crs X
• La persoanele 46,XY:
– Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
– Sunt active genele unui crs X + genele PA crs Y +
genele spec. crs Y (Yp şi 1/3Yq pericentromeric)
• Rol: controlul dozelor genelor somatice la ♀
şi ♂ + controlul diferenţierii sexuale
!!! Dimorfism sexual echilibrat
45,X 47,XXY
Ipoteza Mary Lyon

După a 16 zi

!!! Celule 46,XX - după a 16 zi de dezvoltare au numai un crs X activ


În 50% de cel – este activ crs matern şi în 50% - crs X patern
46,XX
45,X activi +Xpatern inactiv
45,X activi + Xmatern inactiv
Mecanisme moleculare implicate în
lyonizare (inactivarea crs X)
• X q13 - centru de inactivare a crs X (XIC) - gena XIST
• Gena XIST:
– promotor cu trei regiuni:
• regiunea activatoare;
• regiunea de stabilizare a ARN – XIST la nivelul crs inactiv;
• regiunea inhibitoare asupra regiunii activatoare.
– regiunea codificatoare - codifică ARN care rămâne asociată cu
crs inactivat genetic
– capătul 3' al genei - reglează numărarea crs şi determină care X
(♀sau♂) rămâne activ.
!!! Gena XIST este o genă atipică –
a pierdut potenţialul de codificare proteică
Funcţia genei XIST (X inactivation specific transcript)
• La nivel molecular – codifică sinteza ARNm-XIST;
• La nivel celular – inactivarea unui crs X
– ARNm – XIST rămâne ataşat la crs inactiv 
– Dezacetilarea H1 
– Heterocromatinizarea crs X
• La nivel de organism – controlul dozelor genelor X-
lincate materne şi paterne  controlul dezvoltării
organismului feminin
Amprentarea genomică
(sau imprinting-ul parental)
• Mecanism de reglare a activitaţii transcripţionale şi
expresiei fenotipice a unei gene din perechea de alele ♀
sau ♂
– reprezintă represarea permanentă, dependentă de originea
parentală:
– a unei gene ♀ sau ♂
– a unui cromozom ♀ sau ♂
– modificări epigenetice în cursul gametogenezei şi/sau
embriogenezei precoce
• Ex:
• genele X-lincate la ♀;
• diferite gene autosomale (s. Angelman, s. Prader-Willy)
Testul Barr

testul‫‏‬Barr‫‏‬este‫‏‬util‫‏‬în‫‏‬identificarea‫‏‬nr‫‏‬de‫‏‬crs‫‏‬X‫‏‬în‫‏‬celulele‫‏‬
somatice: NR crsX = nr corpusculilor Barr + 1 (un crs X activ).
46,XX – 1 corpuscul Barr
46,XY –
47,XXX –
47,XXY -
45,X –
48,XXXX –
46,X,Xp-
46,X,i(Xp)
46,X,i(Xq)
Testul F

testul F este util în identificarea crs Y (determinarea prenatală a


sexului):
NR crsY = NR corpusculilor F
46,XX –
46,XY –
47,XYY –
47,XXY -
48,XXYY –
46,X,i(Yp) –
46,X,i(Yq) –
• 47,XX,+12
• 45,XY,-3
• 45,XX,-21
• 69,XXX
• 69,XXY
• 48,XXXX
• 48,XXXY
• 46,XY,5p-
• 46,XX,4p-
• 46,XY,14p-
• 46,XX,1qh+
• 46,XY,9qh-
• 46,XX,16ph+
• 46,XY,16qh-
• 46,XX,13p-
• 46,XY,13q-
• 46,XX,i(21p)
• 46,XY, i(21q)
• 46,XY,i(18p)
• 47,XX,i(18q)
• 47,XX(XY),+5 • 47,XX(XY),+15 • 46,XY
• 45,XX(XY),-5 • 45,XX(XY),-15 • 46,XX
• 46,XX(XY),5p- • 46,XX(XY),15p- • 45,X
• 46,XX(XY),5p+ • 46,XX(XY),15p+ • 45,Y
• 46,XX(XY),5q- • 46,XX(XY),15q- • 46,X,Yp-
• 46,XX(XY),5q+ • 46,XX(XY),15q+ • 46,X,Yp+
• 46,XX(XY),5ph+ • 46,XX(XY),15ph+ • 46,X,Yq-
• 46,X,Yq+
• 46,X,Xp-
• 46,X,Xp+
METODE CITOGENETICE
indicatii vs limite
• Analiza crs metafazici, colorare omogena
– Indicatii:
• Identificarea anomaliilor crs de Nr
• Stabilirea sexului genetic si aneuploiidiile X, Y
– Limite:
• Identificarea anomaliilor crs de structura
• Analiza crs prometafazici, colorare in benzi G, Q, R
– Indicatii:
• Identificarea anomaliilor crs de Nr
• Identificarea anomaliilor crs de structura
• Stabilirea sexului genetic si aneuploiidiile X, Y
– Limite:
• Identificarea microdeletiilor, microduplicatiilor si rearanjamentelor
intercromosomiale
METODE CITOGENETICE
indicatii vs limite
• Analiza crs metafazici, colorare in benzi C,T
– Indicatii:
• Identificarea anomaliilor crs de Nr
• Identificarea polimorfismului crs (± c, t)
• Stabilirea originei mat / pat a crs supranumerari / absenti
– Limite:
• Identificarea anomaliilor crs de structura
!!! Analiza crs interfazici prin tehnici molecular citogenetice
• FISH (cu sonde complimentare secv.nucl.spec.unui crs)
– Indicatii:
• Identificarea anomaliilor crs de Nr
• Identificarea an.crs.structura: microdeletii, microduplicatii
• Identificarea unor del/dup genice
– Limite:
• Identificarea t, inv
• Identificarea mutatiilor genice punctifirme

S-ar putea să vă placă și