Sunteți pe pagina 1din 2

20.

Diagnosticul de laborator in infectiile cu Mycobacterium tuberculosis


Tuberculoza pulmonara este cea mai frecventa forma clinica de tuberculoza si este
produsa de M. tuberculosis si mai rar de M. bovis si de M. africanum
Tuberculoza de tip Pulmonar
Suspiciunea de TBC: - clinica si radiologica este confirmata cu certitudine prin
examenul bacteriologic.
Perelevate:
� Sputa; Recoltarea ei se face in niste baloane speciale, iar la copii sau
persoane care nu pot expectora, se poate examina lichidul de spalatura gastrica.
Etape de prelucrare:
1. Decontaminarea sputei (inlaturarea florei de asociatie):
- Se realizeaza folosind o solutie de NaOH 4%
- Se omogenizeaza sputa si NaOH prin agitare, iar apoi se mentine timp de
30min. la 37�C.
2. Neutralizarea sputei:
- Prin aducerea sputei la un pH de aprox. 7-7,2 in prezenta albastrului
bromtimol si cu ajutorul unei solutii de fosfatat acid de potasiu 15% sau unei
solutii de HCl 6%
3. Concentrarea sputei:
- Centrifugarea timp de 30min. la 3000 de rot/min
4. Executarea de frotiuri din sedimentul obtinut si colorarea acestora prin
tehnica Ziehl-Nielson.
Etape in coloratia Ziehl-Nielson:
� Fixarea frotiurilor;
� Se acopera lama cu fuxina fenicata, iar apoi se face incalzirea repetata de
3x cu ajutorul unui tampon imbibat in alcool sau alcool-acetona pana la emiterea de
vapori; aceasta etapa dureaza aprox. 10 min.
� Se va spala cu apa de la robinet lama
� Decolorarea se face cu acid alcool (97ml alcool si 3ml HCl) aceasta dureaza
aprox. 5min.
� Se face colorarea cu albastru de metilen, 1 minut;
� Spalare cu apa;
� Uscarea si examinarea lui la microscop cu imersie la care se evidentiaza
bacili rosii cu fond albastru.
Examen microscopic:
� Evidentiaza bacili subtiri, de lungime variabila, cu extremitati rotunjite si
cu aspect granular;
� Sunt asezati izolat dar pot fi asezati si in grupri de cate 2-3 bacili sau
forma unor litere, sau in paralel sau sub forma unor corzi;
� Fiind bacili acid-alcoolorezistenti, la M.O. se va exprima in numar de
BAAR/frotiu, se numara pe 300 de campuri;
� Prezenta de BAAR (Bacil-Acid-Alcoolo-Rezistent) are valoare diagnostica chiar
in numar mic dar nu permite stabilirea speciei de Mycobacterium;
� Absenta de BAAR pe frotiu nu exclude diagnosticul de tuberculoza, deoarece
sub o anumita concentratie (40000 bacili/ml sputa), sansa de evidentiere pe frotiu
este aproape nula, de aceea este indicata repetarea recoltarii sputei de 3x.
Insamantarea sedimentului:
� Se face in 3 eprubete cu mediu special pentru Mycobacterium tuberculosis �
LOWENSTEIN (contine saruri minerale, ou, amidon si un colorant-verde malachit);
� In aceste 3 eprubete se va adauga pe fundul lor o cantitate mica de
supernatant pentru a se evita uscarea mediului in momentul introducerii la
termostat;
� Dopul de vata al eprubetelor se va arde si se va impinge in interior deasupra
acestuia punandu-se un capison de cauciuc pentru a se asigura microaerofilia
favorizanta caresterii BAAR;
� Culturile se pastreaza si se urmaresc timp de 60 de zile;
� Bacilii TBC vor cultiva dupa aproximativ 16-17 zile de incubare la 37�C, si
vor aparea nijte culturi de tip R, conopidiforme de culoare alb galbui si usor
detasabile de mediu;
� Spre deosebire de M. TBC, bacilii M.Bovis cultiva mai lent (4-8 saptamani),
iar coloniile aparute vor fi de tip S, mici de culoare alba si foarte aderente de
suprafata mediului.
Caractere biochimice:
� Principalul caracter biochimic care diferentiaza M. TBC de celelalte este
producerea de NIACINA (testul niacinei este pozitiv pentru M.TBC);
� Producerea de catalaza;
� Reducerea nitratilor la nitriti;
� Sensibilitatea la Hidrazida acidului Tiofen Carboxilic

Tuberculoza de tip Renal


Prelevate:
� Urina (3 probe in 3 zile diferite), care se vor mentine la frigider; Etapele
prelucrarii urinei:
1. Concentrarea urinei prin centrifugare;
2. Decontaminarea urinei;
3. Neutralizarea:
4. Concentrarea.
Sedimentul obtinut va fi examinat la microscopul optic dupa ce s-au efectuat
frotiuri colorate Ziehl-Nielson; Prezenta BAAR pe frotiurile Z-N nu prezinta
valoare de diagnostic, chiar daca sunt decelati in gramezi, din cauza posibilitatii
de contaminare a urinei cu micobacterii nepatogene (M. Smegmus). In aceasta
situatie se vor folosi 2-3 cobai care vor fi inoculati pe fata interioara a
coapsei, subcutanat. Dupa 2-3 saptamani la acesti cobai va aparea la locul
inocularii un nodul ce va fistuliza, iar cobaii dupa 6-8 saptamani vor murii. La
necropsie se vor analiza leziunile ganglionare si viscerale (Rinichi, Splina,
Ficat), din aceste leziuni efectuandu-se frotiuri Z-N.
Tuberculoza de tip Meningeal
Prelevate: LCR suspecte (ce prezinta un numar mic de elemente predominant limfocite
mici, dar cu o cantitate mare de proteine apreciata prin reactia PNDY);
� Se vor pastra la frigider timp de 24h, dupa care se vor pastra o ora la
temperatura camerei, pentru a aparea asa numitul VAL.
� Pe mediile lichide, M.TBC creste sub forma unei pelicule la suprafata care in
timp, datorita greutatii ei va cadea la fundul eprubetei, iar din fragmentele
ramase la suprafata se va forma o noua pelicula nimita si VAL
� Din acest val se vor face frotiuri;
� Din acelasi val se vor insamanta si 3 eprubete cu mediu Lowenstein si se vor
analiza caracterele de cultura dupa aproximativ 60 zile
Sensibilitate la antibiotice:
M. TBC este sensibil la:
� Hidrozida;
� Streptomicina;
� Rifampicina;
� Pirazin-amida;
� Etan-butol.
Tratamentul bolilor de TBC se va efectua aproximativ 12-24 luni, folosindu-se o
combinatie de 4 din aceste antibiotice.

S-ar putea să vă placă și