Boli cromozomiale

Seminar #1
Cariotipul uman

2
 Cariotip

Normal Normal cu Aneuploid Poliploid Cu aberaţii

polimorfisme cromosomiale

46,XX 46,XX,9qh+ 47,XX,+21 69,XXX 46,XX,1q-

46,XY 46,XY,16qh- 45,XY,-12 69,XXY 46,XY,16p+
46,XX,14s++ 48,XXXY 46,X,r(X)
45,X 46,XY,del(5p)
46,XX,t(12,22)
 Anomalii
cromozomale

Numerice Structurale

Poliploidii Aneuploidii Neechilibrate Echilibrate

Deleţii – del Inversii – inv

Monosomii – 45,X
Tetraploidii – 4n Duplicaţii – dup Translocaţii – t
Trisomii – 47,XXY
Triploidii – 3n Izocromozom– i, iso Translocaţii
47,XX,+21
Cromozomi inelari - r robertsoniene - rob

ANOMALII DE DOZAJ GENIC (+/- MATERIAL GENETIC)

15:53 Chromosomal disorders 5
15:53 Chromosomal disorders 6
 46,XX, rob(14/14)
45,XY, rob(21/21)

15:53 Chromosomal disorders 7

 Chromosomal abnormalities

45,XX,-1
(-1 chr) 45,XX Monosomy Lethal 45,XY,-2 ...
45,XY 45,XX,-22
1-22 chromosomes
autosome Down sdr. 47,XX,+21
(+1 chr) 47,XX Trisomy Patau sdr. 47,XY,+13
47,XY Edwards sdr. 47,XX,+18
Warkany sdr. 47,XX,+8/46,XX
Monosomy X Turner sdr.
(-1 chr) 45,X
(+1 chr) 47,XXX Trisomy X Normal Phenotype
X
(-1 chr) 45,Y Lethal
Gonosomes (+1 chr) 47,XXY Disomy X for male Klinefelter sdr.

(-1 chr) 45,X Monosomy X Turner sdr.

Y
(+1 chr) 47,XYY Disomy Y Normal Phenotype
15:53 Chromosomal disorders 8
 Semne Frecvenţă (%)
Hipotonie musculară 100
Reflex Moro redus 85
Profil facial plat 90
Fante palpebrale oblice în sus şi în 80
afară
Urechi mici, rotunde, jos situate 60
Exces de piele pe ceafă 80
Pliu simian 45
Hiperlaxitate articulară 80
Pelvis displazic 70
Clinodactilie 60
Prezenţa a 6 din cele 10 semne pledează pentru
diagnosticul de sindrom Down

Down sdr. Incidence:

It affects about
1 in every 800 babies
15:53 Chromosomal disorders 9
 Analiza citogenetică a sdr. Down
1. Trisomia 21 omogenă, liberă (92-95%); A. 47,XX,+21
2. Trisomia 21 în mosaic (2-3%);
B. 46,XY,rob(21;14)
3. Translocație robertsoniană;
4. Isocromosom (21q). C. 46,XX / 47,XX,+21
D. 46,XX,rob(21;21)
• rob(21q;Dq) are inherited in 50%, usually from E. 46,XY, i (21q)
mother;
• rob(21q;Gq) usually are de novo. F. 47,XY,+21
G. 46,XY,rob(21/13)
!!! In these cases a karyotype of both parents is H. 46,XY / 47,XY,+21
required

15:53 Chromosomal disorders 10

 Citogenetic
Trisomia 18 este confirmată pre și postnatal prin analiza cromozomilor A. 47,XX,+18
sau analiza celulelor amniotice, vilozităților corionice sau limfocitelor.
În aproximativ 80% din cazuri, există o trisomie liberă 18, iar cromozomul B. 46,XY,18p+
suplimentar 18 este de obicei transmis de mamă (în mai mult de 90% din
cazuri). C. 46,XX / 47,XX,+18
Spre deosebire de sindromul Down, cauza mai frecventă este o nondisjuncție
în cea de-a doua diviziune meiotică. Ocazional, există mozaicismul liniilor D. 46,XX,18q+
celulare trisomice și normale (disomice) pentru cromozomul 18.
E. 46,XY, i (18q)?
Există, de asemenea, trisomiile parțiale 18. Dacă trisomia apare pe brațul
scurt al cromozomului 18, se prezintă un fenotip ușor și nespecific, adesea F. 47,XY,+18
fără handicap intelectual. O trisomie a brațului lung al cromozomului 18
poate fi însă indistinguibilă clinic de o trisomie completă 18. G. 46,XY / 47,XY,+18

15:53 Chromosomal disorders 11

 Mental and physic 47,XX (XY), +18
♀>> ♂
retardation

Short neck
Abnormal ears

Transverse crease
Flexion abnormalities

Heart abnormalities

Abnormal kidneys
Intestine abnormalities

Muscular hypertony Multiple abnormalities of

genitals

The incidence of the syndrome

is estimated as one in 8,000 live births.

15:53 Chromosomal disorders 12

 Mental and physic
retardation 47,XX (XY), +13
♀>♂
Microcephaly Prognosis
Microophthalmy
Skull deffects
Deafness • More than 80% of children
Cleft leap
Transverse crease, single
with trisomy 13 die within the
flexion crease first month, while 5% to 10%
Polydactily live to their first birthday.
Heart disorders
• Children with trisomy 13 are
frequently blind and deaf, and
Polycystic kidney many have intractable
epilepsy. Difficulty swallowing
makes feeding often
Double uterus
Double ureters
problematic and may require
G-tube placement.

Abnormal nuclear Patau syndrome affects approximately

segmentation in leucocytes one in 20,000 live births.
15:53 Chromosomal disorders 13
15:53 Chromosomal disorders 14
15:53 Chromosomal disorders 15
15:53 Chromosomal disorders 16
 46,XY, 15q- 46,XX, 15q-

Prader-Willy syndrome Angelman syndrome

46,XY DUM(15) 46,XX DUP(15)

15:53 Chromosomal disorders 17
 SINDROAMELE CU MICRODELEŢII ŞI
MICRODUPLICAŢII CROMOZOMIALE
Sindromul Anomalia crs Manifestări clinice majore

Cri-du-chat 5p- Sindrom plurimalformativ congenital:

microcefalie, deficienţă mintală,
hipertelorizm, epicant, fante palpebtale de
tip antimongolian, ţipăt specific datorat
malformaţiilor laringelui, malformaţii
viscerale şi scheletice.
Wolf 4p- Sindrom plurimalformativ congenital:
Hirschhorn microcefalie, hipotrofie staturo-ponderală,
dismorfie facială caracteristică, malformaţii
cardiace grave, retard mintal sever.
Prader – del (15)(q11-q13) Hipotonie neonatală, dismorfie craniofacială
Willi crs patern caracteristică, obezitate, hipogonadism,
retard mintal moderat, tulburări de
comportament.
SINDROAMELE CU MICRODELEŢII ŞI
MICRODUPLICAŢII CROMOZOMIALE
Sindromul Anomalia Manifestări clinice majore
cromozomică

Angelman del (15)(q11-q13), Microcefalie, retard mintal sever, tulburări

crs matern de mers şi echilibru, absenţa vorbirii,
tulburări de comportament

Williams Del (7) (q11.23) Dismorfie facială caracteristică, stenoză

aortică, laxitate articulară, hipostatură,
retard mintal, dereglări psihice

Velo Del 22(q11.2) sau Dispicătură palatină, malformaţii cardiace,

cardio- Del 10(p13) dismorfie facială caracteristică,
facial hipoplazia paratiroidei şi timusului.
DiGeorge
Boli monogenice
Seminar #2
 Tipul de transmitere...?
AD XD
1. 2.

XAXn or XAXA
AA, An - bolnav XnXn
nn - sanatos
XAY
3:53 PM Monogenic diseases XnY 21
 IMPORTANT !!!
Tipul de transmitere...? D R

XR AR A a

n N
3. 4.

XaXa
XNXN sau XNXa
aa - bolnav
XaY
NN sau Na - sanatos
XNY 22
3:53 PM Monogenic diseases
 Care este riscul de tranmitere in familia
probandului...?
AD XD
1. 2.
nn An
XAXn XnY

XnXn XAY

A n XA Y
n An nn Xn XAXn XnY

n An nn Risk: 50% Xn XAXn XnY

Risk: 100% pentru fete
3:53 PM Monogenic diseases 23
0% pentru baieti
 Care este riscul de tranmitere in familia
probandului...?
XR AR

3. 4.
Na Na

XNXa XNY

XN Y
N a
XN XNXN XNY
N NN Na
Xa XNXa XaY
Risk: 50% pentru baieti a Na aa Risk: 25% bolnavi
0% pentru fete
3:53 PM Monogenic diseases 24
 Tipul mutației…
În fig. A este reprezentat arborele
genealogic al unei familii cu 2 persoane
cu acondroplazie. După rezultatele
electroforezei produşilor PCR stabiliţi (5
p):
•genotipul tuturor membrilor familiei ?
date – -
•care-i rezultatul testului prenatal (III-2) insertie
A
n
+
deletie

3:53 PM Monogenic diseases 25

 Gene mutation !!!

Mutation Description Type of mutation

4129A>G
Substitution, point mutation
539delG
Deletion, frame shift
1277-1278insTATC
insertion, frame shift
(GGA)46
Dynamic mutation
Insertion of GCA between 485 and 486 nucleotides
485-486insGCA insertion, inframe
Deletion of T at position 405
405delT Deletion, frame shift
Substitution of the 97th codon encoding serine on STOP codon
Ser 97 X Substitution, point mutation
18-19insTG
insertion, frame shift
F508
Deletion, inframe
(CAG)240
Dynamic mutation
E214V
Substitution, point mutation
3107delAAA
Deletion, frame shift
IVS4+1G>T
Substitution, point mutation
 Fenomene genetice
• Un bărbat în vârstă de 40 de ani, cu neurofibromatoză (NF1), are un
neurofibrom plexiform al piciorului care a provocat desfigurare
semnificativă și sute de neurofibrome cutanate. Sora lui în vârstă de 43 de
ani are pete cafe-au-lait și noduli ai irisului Lisch, dar nu are neurofibrom.
Fiul său în vârstă de 19 ani are pete cafe-au-lait, o duzină de neurofibrome
cutanate și scolioză (curbura coloanei vertebrale).
A. Penetrare incompletă
B. Anticipatie
C. Heterogenitate de locus
D. heterogenitate alelică
E. Expresivitate variabilă

3:53 PM Monogenic diseases 27

3:53 PM Monogenic diseases 28
3:53 PM Monogenic diseases 29
3:53 PM Monogenic diseases 30
3:53 PM Monogenic diseases 31
3:53 PM Monogenic diseases 32
3:53 PM Monogenic diseases 33
 Polycystic kidney disease (ADPKD)

3:53 PM Monogenic diseases 34

3:53 PM Monogenic diseases 35
Consultul și sfatul genetic
Seminar #3
Colorarea cromozomilor
Omogenă Diferenţiată, în benzi

G Q R C T

Benzile G+ = Q+ = R –
Benzile G- = Q- = R +
 Cromosomul 4 Stabilirea crs. X şi 18 Stabilirea crs. X, Y şi 18

Stabilirea crs. 18 şi 21 Stabilirea crs. 18 şi 21

Utilizarea tehnicii FISH în analiza cromosomială 38
 46,XX 46,XY

Crs Y
Crs X – activ Crs X – neactiv Crs X – activ Braţ p - activ
eucromatinizat heterocromatinizat eucromatinizat Braţ q - inactiv

Corpuscul Barr
Corpuscul F
 = 1μm
 = 0,25 μm
Când putem presupune o anomalie crs de NR
sau de structură ?
• Anomalii de dezvoltare mutiple – sindrom
plurimalformativ
• Anomalii de sexualizare
• Anomalii de reproducere
• Nou născut mort plurimalformat
• Avorturi spontane repetate
• Sterilitate primară
 Analiza genelor

ADN ARN Proteine

Secvenţiere Northern-blot Western-blot

PCR RT–PCR Secvenţiere

Southern-blot Hibridare in situ Analiza funcţiei

Hibridare in situ Analiza

histochimică
Extragerea ADN Pregătirea Amplificarea
componentelor pentru
ADN-ţintă
PCR

Electroforeza Colorarea şi Interpretarea

produşilor PCR vizualizarea produşilor rezultatelor
PCR
Utilizarea tehnicii Southern-blot
• Identificarea inserţiilor / deleţiilor mari
• Identificarea mutaţiilor punctiforme ce
afectează SR
• Dactiloscopia genomică RFLPs
 Tehnica Southern-blot

Extragerea ADN Restriţia ADN Electroforeza ADN

Denaturarea şi Hibridare cu sonda Autoradiografia

transferul ADN
pe membrane Vizualizarea şi
interpretarea
rezultatelor
 RFLPs şi analiza genotipului

Alela Normală cu 3 SR Alela mutantă cu 2 SR, mutaţie în SR2

C (mm)

B (Nm)

A (NN)

Electroforeza FR a 3 persoane A,B şi C

Verificați cunoștințele

Nr Testati Genotipul Phenotipul

1 Mama
N
2 Tata

3 Fiica

4 Fiul

5 Fiul

6 Fiica

7 Fatul

Care este rezultatul testului prenatal?_____________

 Diagnosticul Prenatal
• În Republica Moldova DP se realizează la nivel populaţional prin
intermediul metodelor de DP invazive (biotehnologii de diagnostic
citogenetic şi molecular-genetic) şi neinvazive (testele screening –
ului biochimic şi ecografic).

Dintre metodele de diagnostic prenatal neinvaziv al bolilor genetice,

inclusiv al malformaţiilor congenitale, menţionăm
screening-ul biochimic (triplu test), care presupune examinarea
nivelului alfa-fetoproteinei, gonadotropinei corionice şi estriolului
neconjugat, cel mai frecvent în săptămâna a 15 – 16 de sarcină.
 Triplu test şi dozarea alfa-fetoproteinei
• Triplu test constă în determinarea:
 alfa-fetoproteinei (AFP),
gonadotropinei corionice umane (hCG- fracţiunea beta),
estriolului neconjugat (E3),
între săptămâna 15-17 de sarcină, preferabil în săptămâna 15-16.

AFP E3 hCG
Sdr. Down ↓ ↓ ↑
Sdr. Turner ↓ ↓ ↑
Trisomia 18 ↓ ↓ ↓

• Nivelul ↓ AFP în serul matern se corelează cu prezenţa unei boli cromozomiale la făt.
Triplu test
• Dozarea inhibinei A:
Recent adăugată=> cvadruplu test
Valorile ↑ în cazul unui triplu test pozitiv permit
identificarea a 79% din feţii cu trisomie 21
• Triplu test pozitiv:
Valoare orientativă
• Diagnosticul de certitudine:
Ex. citogenetică a celulelor fetale !!!!!
Nivelul cvadruplului test
in diferite aneuploidii

Condiţia AFP uE3 hGC DIA

Defectul Crescut Normal Normal -
tubului neural

Trisomia 21 Scazut Scazut Crescut Crescut

Trisomia 18 Scazut Scazut Scazut -
Trisomia 13 Normal Scazut Normal -
45,X Crescut Scazut Crescut -
3n Crescut Scazut Foarte crescut Foarte crescut
 Ecografia fetală de rutină
• Ecografia fetală:
• metodă neinvazivă,
• screening-ul ecografic 11-13s+6z.
săptămâni gestaţie
• Apoi: la 20-21 de s. g.
o echipament performant,
o multă experienţă.
 Trăsături fetale asociate cu risc crescut de anomalii
cromozomiale
• îngroşarea pliului nucal este
sugestivă pentru:
• sdr. Down (se evidenţiază în
trimestrul I de sarcină)

• excesul de piele pe ceafă apare

în:
• sdr. Down
• sdr. Turner

• întârzierea precoce a creşterii

este semnalată în:
• trisomii,
• triploidii,
Trăsături fetale asociate cu risc crescut de anomalii
cromozomiale
• placenta mare apare în:
• triploidii
• poate fi prezentă şi în talasemii sau în hidrops fetal

• despicăturile labio-palatine sunt observate la:

• fetuşii cu trisomii sau triploidii,
• în trisomia 13 se însoţesc de hipoplazie facială

degete permanent flectate apar în:

• trisomia 18
• artrogripoze
Trăsături fetale asociate cu risc crescut de
anomalii cromozomiale
• hidropsul fetal sau higroma chistică apare în:
• sdr. Turner
• trisomii autozomale,

• omfalocel:
• trisomia 13
• trisomia 18

• atrezia duodenală apare în:

• sdr. Down

• călcâiul proeminent (în piolet) este sugetiv pentru:

• trisomia 18
Indicaţiile majore ale DP
• determinarea sexului fetal în cazul unui istoric familial pentru o
boală legată de X dar care nu beneficiază de un test specific,

• rudele de gradul I ale pacienţilor cu:

• defecte de tub neural,
• malformaţie unică (în special de cord)
• sindrom plurimalformativ,

• agresiuni teratogene în cursul sarcinii,

• avorturi spontane recurente şi/sau nou-născuţi morţi,

• alţi factori de risc:

• consangvinitatea,
• DZ I matern prost echilibrat,
• epilepsie la mamă tratată cu anticonvulsionante cu acţiune anti-folică.
Tehnici de diagnostic prenatal
• prin metode neinvazive (ecografia de nivel II) :
 identificate malformaţiile şi anomaliile structurale caracteristice unor
boli genetice

• metode invazive (biopsia de vilozităţi corionice, amniocenteza

sau cordocenteza) se folosesc în bolile al căror diagnostic
necesită analize:
 citogenetice (bolile cromozomiale),
 biochimice (bolile metabolice)
 moleculare
Amniocenteza
• Implică aspirarea a 10-20
ml de lichid amniotic prin
puncţie transabdominală,
ghidată ecografic,

• Efectuată între săptămînile

16-18 de sarcină,

• Amniocenteza precoce, la
12-14 săptămîni de sarcină.
 Biopsia vilozităţilor coriale
• Se obţin fragmente de vilozităţi
coriale:
recoltare sub ghidaj ecografic pe cale :
o transcervicală (cu ajutorul unui cateter
flexibil)
o transabdominală
 Biopsia vilozităţilor coriale
• Analiza citogentică:
se poate realiza direct
permite diagnostic provizoriu în 24-36 de ore sau după o
cultură prealabilă.
• Avantajul:
efectuarea ei în trimestrul I, săptămânile 9 -12 de gestaţie
• Complicaţii:
sângerări (40%)
avort (1-2%)
malformaţii ale membrelor (anomalii transverse) şi feţei mai
ales în cazul practicării biopsiei înainte de 10 săptămâni.
Cordonocenteza

Se efectuează de obicei la
saptamana 18-21 de gestație
Indicații:
• boli cromozomiale,
hemoglobinopatii, hemofilie
• rubeola, virus citomegalic
• incompatibilitate de grup
sangvin
• deficite imunologice
Riscul -5-15%. Se folosește
rar.
Cordocenteza

• prelevarea a 2-3 ml de
sânge fetal,

• prin puncţie ghidată

ecografic, la rădăcina
cordonului ombilical