CIENCIAS BIOLÓGICAS, QUINTO AÑO. NOCTURNO. DOCENTE: Mª GRISEL RODRÍGUEZ.

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PRÁCTICO Nº 3:
OBSERVACION DE BACTERIAS DEL YOGURT

CONSIDERACIONES PREVIAS

El interés de esta práctica radica en que las células procariotas son las células más extendidas y
abundantes de la biosfera y se encuentran en nuestro medio en grandes cantidades activas o en forma de
esporas. Su actividad tiene gran interés para la vida del hombre tanto por su participación en múltiples
procesos fisiológicos y patológicos, como por su intervención en muchos fenómenos de naturaleza
industrial.

Figura 1: Tipos de células bacterianas. (A) Bacilos, de morfología alargada; (B) Cocos, cuya forma es esférica; (C) Espirilos, que como su
nombre indica recuerdan a un sacacorchos y (D), ejemplos de bacterias muy pequeñas con morfología cocacea y espirilar. (De Alberts et
al., Introducción a la Biología Celular, Editorial Médica Panamericana, 2006.)

Figura 2: Tipos de cocos. (A) Mediante división en

un solo plano: a) Diplococos y estreptococos; (B)
División en dos planos: tétradas; (C) División en
tres planos: a) Sarcinas y b) Estafilococos.

Las bacterias, son células procariotas, pertenecientes al reino mónera que se caracterizan por su
pequeño tamaño y por incluirse en una de estas tres formas básicas: bacilos cocos y espirilos (figura 1).
Con frecuencia las bacterias se encuentran agrupadas en acumulos o en cadenas (Figura 2)
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OBJETIVOS GENERALES DEL PRÁCTICO:

1. Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
3. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
4. Adquirir habilidad de trabajo manual en la preparación de muestras microscópicas.

FUNDAMENTO:
Las fermentaciones son procesos de respiración anaerobia realizados por ciertas bacterias y levadura.
El yogur es un producto producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la
fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4 % de una asociación de dos cepas bacterianas. El Streptococcus
thermophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En
esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Además, el tamaño del lactobacilo (unas 30 micras de longitud) facilita la observación aunque no se tenga
mucha práctica con el enfoque del microscopio.

MATERIAL E INSTRUMENTAL:
Material de trabajo
 Microscopio.
 Mechero Bunsen o de alcohol.
 Asa de siembra (microbiológica) o aguja enmangada.
 Pinzas.
 Pipeta Pasteur.
 Portaobjetos.
 Cubreobjetos.
 Colorantes para tinción: Azul de metileno al 1%.
 Agua destilada.
 Papel de filtro.

Material de estudio
 Muestras bacterianas de origen natural: yogur, sarro dental, etc.

PROCEDIMIENTO:
1) Extensión del material:
a) Limpiar bien un portaobjeto.
b) Con la ayuda de una pipeta Pasteur coloca una gota de agua destilada sobre el portaobjeto limpio.
c) Esteriliza el asa microbiológica a la llama del mechero calentándola hasta que se ponga al rojo vivo.
d) Con el asa esterilizada (u otro objeto: palillo de dientes, pinza, etc.) y tras haberla
dejado enfriar unos segundos, toma una pequeña cantidad de yogurt y colócala
sobre la gota de agua destilada, a continuación extiende suavemente la gota con el
material sobre toda la superficie del portaobjeto.

2) Fijación del material:

e) Sujeta el portaobjeto por uno de sus extremos y realizando una ligera
oscilación, pásalo suavemente sobre la llama del mechero, por la cara
opuesta a la de la extensión, hasta que se seque el material,
procurando que el calor no sea excesivo. Con este proceder las
bacterias mueren, se altera la permeabilidad de sus membranas y el
colorante pasa mucho mejor a su interior. También se las puede dejar
secar al aire, bien dejándolas sobre la mesa durante algunos minutos.

3) Tinción de las bacterias:

f) Añadir a la preparación una gota de azul de metileno, esperando cinco minutos a que el colorante tiña las
bacterias.

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g) Colocar el cubreobjetos, cubrirlo con un pedazo de papel de filtro y apretar suavemente, cuidando de no
romperlo y de no teñirte las maños.
h) Observar al microscopio, enfocando progresivamente con los objetivos de mayor aumento.
Si terminas esta primera parte y te da tiempo (o si te repartes el trabajo en tu equipo), repite el
procedimiento pero pasando el asa de siembra esterilizada por la base de tus dientes para recoger muestras del
sarro dental. Aunque no veas nada a simple vista, las bacterias están ahí.

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:
1. Dibuja lo observado con cada objetivo. Calcula el aumento en cada caso.
2. ¿A qué tipos morfológicos pertenecen las bacterias que observas en la preparación del
yogurt?
3. ¿Las bacterias del yogurt son autótrofas o heterótrofas? ¿Por qué?
4. ¿Podrías deducir cómo es su respiración? ¿De qué manera?
5. ¿De qué se alimentan las bacterias del yogur? ¿Y las del sarro dental?
6. ¿Las bacterias de yogurt son simbióticas, parásitas o saprofíticas? ¿Por qué?
7. Si la leche utilizada no estuviera pasteurizada o esterilizada, ¿el producto obtenido
hubiera sido distinto?
8. ¿Qué fin tiene la fijación de muestras al realizar un frotis bacteriano? Señala las ventajas
y desventajas de la tinción simple respecto del examen en fresco.