Aplicación de Sustratos

Cromogénicos y
Fluorogenicos en el análisis
Microbiológico de Alimentos

1

La rá
rápida detecció
detección e identificació
identificación de los
microorganismos es muy importante en
diversos campos de aplicaciones e
investigació
investigación.

La incorporación de enzimas y substratos
en medios de cultivo selectivos puede
eliminar la necesidad de realizar
subcultivos y pruebas bioquímicas
adicionales para establecer la identidad
de ciertos microorganismos.
2
 Aplicación de sustratos
cromogénicos y fluorogénicos
1. Detección directa de microorganismos en los
medios de cultivo.

2. Métodos fluorométricos y fotométricos en

microbiología.

3. Perfiles enzimáticos como ayuda en la

clasificación taxonómica en microbiología,

4. Técnica de filtración Directa epifluorescente

(DEFT),

5. Citometría de flujo (FCM),

6. Inmunoensayo Fluorescentes (FIA),

7. Microscopía de Epifluorescencia.

8. Automatización. 3
 Sustratos Fluorogénicos

 Colorantes Fluorogé
Fluorogénicos
(8-
(8-anilino-
anilino-1-naphthalene-
naphthalene-sulphonic
acid,
acid, ANS)
 pH-
pH-indicadores fluorescentes (acridine,
acridine,
7-hydroxycoumarin)
 Indicadores Redox (azul de metileno,
verde de Janus, verde B, indigo
carmin)
 Sustratos enzimaticos
4

Los sustratos La mayoría de sustratos
enzimá
enzimáticos enzimáticos fluorogénicos son
fluorogé
fluorogénicos derivados de la Coumarina, tal
como:
generalmente  4-methylumbelliferone (4-MU)
consisten de un  7-amido-4-methylcoumarin (7-
substrato especí
específico AMC)
para una enzima  4-trifluoro
especí
específica tal como methylumbelliferone (4-TMU)
una azú
azúcar o un
aminoá
aminoácido y un
fluoró
fluorógeno,
geno, siendo
capaz de convertir
la luz UV a luz
visible .

5
Ventajas de los sustratos metilumbelliferyl
(MUG)
 Solubles en agua.

 Estables al calor
 Alta sensibilidad.
 No riesgosos para la salud.
 Precio rasonable .
 Amplio rango de substratos
 Métodos con aprobaciones (ISO, IDF, EPA)
6
Limitaciones de los sustratos Methylumbelliferyl

• Requieren luz UV
 pH dependientes
 Fuerte difusió
difusión

7
 Sustratos Cromogénicos

En general pueden distinguirse tres grupos de

compuestos cromogénicos con diferentes modos
de acción:

Sustrato coloreados propiamente dichos.

Captura simultánea de substratos

Acoplamiento de sustratos Post-incubación

8

o-, & p-nitrofenol,

p-nitroanilina (PNA),

5-bromo-4-chloro-3-indolyl (X),

5-bromo-6-chloro-3-indolyl (magenta),

6-chloro-3-indolyl (salmon), O2
Demanda de O2

9
10
MEDIOS QUE CONTIENEN SUSTRATOS
FLUOROGENICOS Y CROMOGENICOS
Alimentos

E. coli & coliformes

E. coli O157:H7

Enterobacteriaceae

Salmonella spp.

C. perfringens

L. monocytogenes

Enterococcos

11
Medios Cromogénicos de Merck

Rambach®
Rambach® Agar Standard ISO 6579
Method Salmonella
Chromocult®
Chromocult® TBX Agar Standard ISO 16649
Method E.coli
Chromocult®
Chromocult® Standard ISO 11290 and
Listeria Selectiv Agar Method FDA/BAM
L.Mono
Chromocult®
Chromocult® Standard ISO TS 22964
Enterobacter Sakazakii Agar Method E. Sakazakii
Chromocult®
Chromocult® Coliform Agar Approved EU Directiva on
Alternative Drinking Water
Method US-
US-EPA
AOAC pendiente

Chromocult®
Chromocult® Coliform Agar ES Approved AOAC pendiente
Alternative
Method
Chromocult®
Chromocult® Enterococci Agar Approved EU Directive on
12
Alternative Drinking Water
Method
 Coliformes

Enterobacteriaceae

Escherichia Klebsiella Enterobacter Citrobacter

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter amnigenus Citrobacter freundii

13
E.coli/Coliforms

CCA- ES Caldo LMX

Agar Chromocult Coliformes ES

14
 Normas : ensayos fluorogénicos

Para leches y productos lácteos, helados de crema, alimentos
para bebes y niños a base de leches se basan en DIN 10
183 parte 3
• " El método de La Fluorescencia-optica para la
determinación de E. coli es la determinación paralela de
bacterias coliformes”
• Fluorocult® Lauryl Sulphate broth (Cat. No.
1.12588)

Para el examen de carnes y productos carnicos DIN 10 110"

• La Fluorescencia-optical es el método de recuento de
colonias para la determinación de E. coli”
• Fluorocult® ECD agar (Cat. No. 1.04038)

15
 Producción de Gas y ácido a partir de
lactosa

Gas + Acid a partir de

Lactosa: 95 % of
Coliformes (37°C)

Escherichia coli

Gas + Acid a partir de

Klebsiella Lactosa: at 44°C SOLO

Enterobacter el 90 % of E.coli

Citrobacter
Tryptophanasa: 99 % of
E.coli son Indole
positivas
16
Producción de ácido a partir de
Lactosa

Escherichia coli
Yersinia

Klebsiella
Serratia

Enterobacter
Hafnia

Citrobacter
Pantoea

Kluyvera
17
 Métodos basados en
detecciones Enzimáticas
Escherichia coli
Pantoea

Klebsiella

Kluyvera
Cedecea

Enterobacter

Ewingella

Citrobacter
Moellerella

Yersinia
Leclercia

Serratia

Canella
Yokenella

Hafnia

18
Enterobacteriaceae y grupo 'coliformes'
(cepas lactosa-positivas)

Género Detectado por Origen
Enteropatogé
Enteropatogénica

'coliform test' fecal para el hombre

Citrobacter sia nob no

Edwardsiella no si algunase

Enterobacter si noa no

Erwinia noc nod no

Escherichia si si algunase

Hafnia noc noa no

Klebsiella si noa algunase

Proteus noa algunase

Salmonella no si si

Serratia no no

Shigella si si

Yersinia si algunase

A Excepto cepas lactosa-

lactosa-positivas lentas

b Algunas cepas de origen fecal pero que crecen en otros ambientes.
ambientes.

C Excepto cepas cosaionales.
cosaionales.

D Excepto cepas adaptadas a crecimiento rápido cerca a 37oC.

E Algunoso serotipos incluyen cepas enteropatogé

enteropatogénicas . ICMSF, 1978

19
 Agar Chromocult® Coliform ES
Agar cromogénico para la detección simultánea y recuento
Total de coliformes y E. coli en muestras de alimentos.

Coliforms

E.coli

Agar Chromocult® Coliform ES # 1.00850 20

 Chromocult® Coliform Agar ES
Chromocult®
Chromocult® Coliform agar ES Food Testing (se espera
AOAC pendiente
aprobación para 11.2009)
Chromocult® Coliform Agar ES 2009: AOAC™ en proceso
1.00850 método para la detección de
Chromogenic Agar para la coliformes y E. coli in
detección simultánea
Alimentos frescos
E coli y coliformes
E. coli en muestras de alimentos. pollo,y leche cruda)
ES = Enhanced selectivity

CCA ES contien inhibidores

adicionales
para suprimir a los no-Coliformes

21
 E. coli

ß-D-glucuronidasa
Presente en el 94-97% de cepas de E. coli

Sólo pocas cepas de Salmonella, Shigella
and Yersinia producen la enzima también.

Otras especies de Escherichia spp. no
producen esta enzima
22
 coli)) es
La actividad ß-D-glucuronidasa (E. coli
medida usando diferentes sustratos
cromogé
cromogénicos y fluorogé
fluorogénicos tales como

p-nitrophenol-
nitrophenol-ß-D-glucuronide (PNPG)

5-bromo-
bromo-4-chloro-
chloro-3-indolyl-
indolyl-ß-D-glucuronide (BCIG)

phenolphtalein-
phenolphtalein-mono-
mono-β-D-glucuronide

4-methylumbelliferyl-
methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide (MUG)

8-hydroxyquinoline-
hydroxyquinoline-ß-D-glucuronide (HQG)

6-Chloro-
Chloro-3-indoxyl-
indoxyl- ß-D-glucuronide (Salmon-
Salmon-glu),
glu),

5-bromo-
bromo-6-chloro-
chloro-3-indoxyl-
indoxyl- ß-D-glucuronide
(magenta-
(magenta-glu)
glu)

23
 Medios cromogé
cromogénicos
sólo para E.
E. coli

Agar TBX
TBX es una modificació
modificación de Agar Tryptone Bilis al
cual se le adicionado el substrato 5-bromo- bromo-4-
chloro-
chloro-3-indolyl-
indolyl-ß-D-glucuronido (X-
(X-GLUC or BCIG)
GUD liga el sustrato cromogé
cromogénico BCIG y libera
color originando colonias azul-
azul-verdosas fáilmente
distinguibles y fácil de leer de E.coli.
E.coli.

Medio Fluorocult

24
Agar Chromocult TBX E.Coli
acc. ISO 16649

25
Antecedentes

• La rápida detección e identificación de los

microorganismos es muy importante en
diversos campos de aplicaciones e
investigación.

La incorporación de enzimas y substratos en

medios de cultivo selectivos puede eliminar la
necesidad de realizar subcultivos y pruebas
bioquímicas adicionales para establecer la
identidad de ciertos microorganismos

26
 Normas

La Enumeración de Escherichia coli en alimentos y alimentos

para animales y aguas acorde a ISO 16649.

• ISO 16649 Parte 1: Técnica de recuento de colonias a 44

±1ºC usando membranas y 5-bromo- 4-chloro-3-indolyl-
ß-D-glucuronic acid (X-GLUC) (Técnica de Filtración de
Membrane).

• ISO 16649 Part 2: Tecnica de recuento de colonias en

placa a 44 ±1ºC usando 5-bromo-4-chloro-3-indolylß-D-
glucuronic acid (X-GLUC) (técnica de Recuento en Placa).
Este método puede se usado para alimentos frescos que
rara vez cotienen microorganismos estresados.
27
 Agar Chromocult® TBX E.Coli.

La peptonas, garantiza el crecimientode

Composición típica (g/l) las colonias. Las sales biliares y la
incubación a altas temperaturas 44°C
Peptonas 20.0 inhiben el crecmiento de bacterias
Gram-positivas y no afecta el
Sales biliares No.3 1.5 crecimiento de E.Coli.
Cromógeno X-GLUC 0.075 Un Choque termico a 30 o 37°C por 4
horas permite revivir las bacterias
Agar-Agar 15.0 subletalmente injuredas de E.coli.
El substrato cromogénicos diferencian y
detectan la bacteria E.coli.
La cepas de E coli Glucuronidase-
negativa i (3-4 %) da colonias incoloras
pH: 7.2 ± 0.2 at 25 °C. ej. E. coli 0157, o no pueden crecer a
elevadas temperaturas de 44 °C, ej. E.
Medio: 36.5 gr/ Lt. coli 0157:H7.
28
Agar Chromocult® TBX E.Coli.
Metódos de sustrato definido

Identificación Enzimática
E. coli (ß-D-glucoronidasa)

Sustrato
FLUOROGENO
FLUOROGENO oEnzima
o
Cromógeno Azul-verdoso
CROMOGENO
CROMOGENOSUSTRATO
ENZIMA
ENZIMA SUSTRATO
X- ß-D-Glucoronidasa
Gluc
5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucoronic Acid (X-GLUC)
29
Procedimiento Chromocult TBX E.coli
Recuento en placa .
1 ml Muestra + 15 ml
Pesar 36.6 gr/L de A
Cromocult TBX Cromocult TBX.
45-50°C - Placa
E.Coli subletalmente Alimentos frescos
injuriada. o materias primas
Incubar 37 0 30°C
Incubar 44°C
por 4 horas
por 18-24 horas
luego 44°C x 18-20 horas

1 Día

Cambio de Color

Negativo Positivo

Incoloras: Otras Azul-verdosas: E.Coli

30
Procedimiento Chromocult TBX E.coli
Filtración Membrana.
Filtrar Muestra por Pesar 36.6 gr/L de A
E.Coli subletalmente un flitro 0.45 Um Cromocult TBX.
injuriada.
Alimentos frescos
Pasar a Agar o materias primas
Glutamato (Caldo glutaminato DEV Incubar 44°C
+ 15Gr Aga-agar) - Incubar 30 o 37°C por 18-24 horas
x 4 horas luego 18-24 horas en Cromocult TBX
a 44°C en Cromocult
TBX
1 Día

Cambio de Color

Negativo Positivo

Incoloras: Otras Azul-verdosas: E.Coli

31
 Agar Chromocult® TBX E.Coli.
Metódos de sustrato definido

Cepas Inóculo Color Colonia Rate de

UFC/ml recuperación
Escherichia coli DSM 502 103-105 Azul Verdoso = 70 %

Citrobacter freundii ATCC = 105 = 0.01 %

8090
-
Enterococcus faecalis ATCC = 105 = 0.01 %
19433
-

Literature
•Draft International Standard ISO/DIS 16649-2: Microbiology of food and animal
feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of presumptive Escherichia
coli; Part 2: Colony-count technique at 44 °C using 5-bro mo-4-chloro-3-indolyl-ß-
D-glucoronic acid (1999).
32
 Agar Chromocult® TBX E.Coli.
Metódos de sustrato definido.

•Reacción sustrato
Enzima muy
Selectivo
Selectivo específica

•Detección E.coli
en 24 horas para
Rápido
Rápido bacterias
enjuriadas o no..

•Simple detección
por cambio de
Item Descripción Envase
Fácil
Fácil lectura
lectura color
1.16122.0500 Agar Chromocult® TBX 500 Gr
E.Coli
1.10687.0500 Caldo glutaminato DEV 500 Gr
•Reducción de
1.01614.1000 Agar-Agar 1 Kgr Económico
Económico tiempo y material.
33
 Agar Chromocult® TBX E.Coli.
Costo Prueba 2008-2009

RENDIMIENTO Y COSTO PRUEBA : EVALUACIÓN DE E.COLI en ALIMENTOS CON el MEDIO CROMOGÉNICO TBX

Costo por Costo x Placa

presentación en S/ (SOLES)
Código Descripción y Rendimiento por Producto sin IGV sin IGV
1161220 Agar ChromoCULT Coliformes x 500 gr (13.66
500 Lts) S/ 847.00 S/ 0.93
Rinde 13.66 Litros (36.6 gr de agar / Litro) :
Aprox. 910 placas con de 15 ml. de agar)
Rinde 910 placas : Si se trabaja por el Método
de Incorporación o Pour Plate con 03
diluciones el costo Prueba sería de S/ 0.93 x 3 =
S/ 2.79 soles
COSTO PRUEBA TOTAL EN SOLES INCLUIDO 03 diluciones (1/10, 1/100 y 1/1000) 2.80 Nuevos Soles

COSTO PRUEBA TOTAL EN SOLES INCLUIDO 02 diluciones (1/10, 1/100 ó 1/100 , 1/1000)
1.86 Nuevos Soles
34
E. coli/coliforms media

35
 E. coli O157:H7
Medio Composición Referencias

MacConkey-Sorbitol MacConkey’s with 1% March and Ratnam, 1986

Agar (MSA) or “SMAC” sorbitol replacing
lactose
MSA-MUG SMAC + MUG Szabo ,1986

BCIG MSA- (USDA) SMAC + BCIG Okrend et al., 1990

CR-SMAC SMAC + Cefixime + Chapman et al., 1991

Rhamnose
CT-SMAC (FDA) SMAC +Cefixime + Zadik et al., 1993
Tellurite
HQG-SMAC 8-hydroxyquinoline-ß- Reinders et al., 2000
D-glucuronide
36
 Fluorocult E.coli O157:H7 (Merck)

Comparative evaluation of different chromogenic/fluorogenic media for detecting Escherichia coli O157:H7 in food.
37
Int J Food Microbiol 2001 Dec 30;71(2-3):257-62.
 Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .

Composición típica (g/L) La interacción de triptosa, sorbitol

y bufer fosfatos garantiza el rápido
Triptosa 5.0
crecimientode las colonias, even
Sorbitol 1.0 for sublethally injured coliforms. El
Potasio dihidrogeno fosfato 2.0 Lauril sulfato inhibe el crecmiento
Di-potasio hidrogeno fosfato 2.7 de bacterias Gram-positivas y
Lauril sulfato Sodio 0.1 algunas Gram-negativas y no
afecta el crecimiento de bacterias
Triptofano 1.0
coliformes.
X-GAL 0.08
La combinación de de 2 sustratos
MUG 0.05
cromogenicos los cuales
IPTG 0.1. diferencian y detectan los
coliformes totales y E.coli. El IPTG
pH: 6.8 ± 0.2 at 25 °C. aumenta la actividad de la enzima
B-D-galactosidasa. 38
Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .

Identificación Enzimática
Coliformes Totales (ß-D-galactosidasa)

Sustrato
FLUOROGENO Enzima
oo
Cromógeno Verde
FLUOROGENO
CROMOGENO
ENZIMA
ENZIMA SUSTRATO
CROMOGENOSUSTRATO
Coliformes (Positivo ß-D-galactosidasa)
ß-D-
X-Gal Galactosidasa

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-galactopyranoside (X-GAL)
39
Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .

Identificación Enzimática
E. Coli (ß-D-glucoronidasa)

Substrato
FLUOROGENO Enzima
oo
FLUOROGENO
Fluorógeno : Fluorescencia
ENZIMA
ENZIMACROMOGENO
CROMOGENO SUSTRATO
SUSTRATO
ß-D-Glucoronidasa
MUGa UV: 365 nm

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-ß-D-glucopyranoside (MUG)
40
Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .
NMP
Pesar 17 gr/L de
Tubos multiples con 10 ml Fluorocult Fluorocult Caldo
caldo LMX a simple concentración LMX a simple
1, 0.1, 0.01 ml muestra 35°C concentración.
Alto Gram + : 30 mg
Novobiocina en 1
Litro de medio antes
de autoclavar)

1 Día
PH medio para ver
Fluorescencia: 9-10.

Sin Cambio color Cambio de Color

Negativo Prueba de
Positivo indol con
Kovac’s
Incoloras: Otras Gram
Verdes: Coliformes T
- Fluorescencia: E.Coli
41
 Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .
Cepas Cambio B-D- B-D- Indol
Color Gal Gluc
Escherichia coli ATCC 25922 + + + +
Citrobacter freundii ATCC 8090 + + - -
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 + + - -
Enterobacter cloacae ATCC 13047 + + - -
Citrobacter freundii ATCC 6750 + - - -
Shigella flexneri ATCC 12022 - - - -
Salmonella typhimurium ATCC 14028 - - - -

Literature
• HAHN, G., a. WITTROCK, E.: Comparison of chromogenic and fluorogenic substances for differentiation of Coliforms and Escherichia coli in soft
cheeses. - Acta Microbiologic Hungarica 38 (3-4); 265-271 (1991).

• MANAFI, M., a. KNEIFEL, W.: Ein kombiniertes Chromogen-Fluorogen-Medium zurm simultanen Nachweis der Coliformengruppe und von E. coli in
Wasser. - Zbl. Hygiene und Umweltmedizin 189; 225-234 (1989). MANAFI, M.: Schnellnachweis von Bakterien mittels fluorogener und
chromogener Substrate. - Forum Städte-Hygiene 41; 181-184 (1990).

• MANAFI, M.: Diagnostik von Mikroorganismen mittels fluorogener und chromogener Substrate. - Ernährung/Nutrition 15, Nr. 10 (1991) MANAFI,
M., a. KNEIFEL, W.: Fluorogenic and chromogenic substrates. - A promising tool in Microbiology. - Acta Microbiologica Hungarica 38 (3-4); 293-304
(1991).

• MANAFI, M., KNEIFEL, F., a. BASCON, S.: Fluorogenic and chromogenic substrates used in bacterial diagnosis. - Microbiol. Rev. 55; 335-34842
(1991).

• OSSMER, R.: Simultaneous Detection of Total Coliforms and E. coli-Fluorocult LMX-Broth. - 15th international Symposium/FOOD MICRO 1993.
 Fluorocult® Caldo LMX Coliformes
modificado por MANAFI and OSSMER .
•Reacción sustrato
Enzima muy
Selectivo
Selectivo específica
•Detección
simultanea de
Rápido
Rápido Coliformes y
E.coli en 24h.
•Simple detección
por cambio de
Item Descripción Envase Fácil
Fácil lectura
lectura color diferencia
1.110620.0500 Fluorocult Caldo LMX 500 Gr
Coliformes los Coliformes y
1.09293.0100 Reactivo de Kovac’s 100 ml E.Coli
•Requiere solo un
B491207 Novobiocina 1 gr, Económico
Económico medio.
10 gr •Reducción de
1.13203.0001 Lampara UV 365 nm 1 UN
tiempo y material -
No usa tubos 43
Durhan.
Los medios convencionales
convencionales para la
dtección de Salmonella han tenido pobre
dtecció
especificidad ocasionando una alta tasa
de falsos positivos (así
así como con
Citrobacter,, Proteus) .
Citrobacter

El trabajo adicional del examen

innecesario de la confirmació
confirmación de colonias
sospechosas es demasiado alto en el
trabajo de rutina.
rutina.

44
Salmonella

El uso de nuevos medios cromogénicos y

fluorogénicos facilitan una diagnóstico de
Salmonella mas fácil y más rápido.

RAMBACH

45
 Agar Rambach®
Métodos Tradicionales Desventaja:
para Salmonella se basan
en la reacción del H2S : Citrobacter y Proteus: parecidos
a Salmonella
Alto número de falsos - positivos

Agar Rambach se basa en Ventaja:

la formación de ácido a Otras enterobacterias y Gram-
partir de propilen glicol negativas crecen cómo bacterias
(+ pH indicator) incoloras

Identificación clara, Salmonella

red Proteus
fácil y confiable de
yellowish/
Salmonella en colourless
muestras de alimentos

Agar Rambach® Coliforms

Código 1.07500 blue-green
46
 AISLAMIENTO DE Salmonella en ALIMENTOS

Agar Rambach para Salmonella

Existen medios para DISTINTOS COLORES

Salmonella que producen
gran número de falsos
positivos, como
Citrobacter y Proteus.
CRECIMIENTO TIPICO :
COLONIAS NEGRAS .
FACILITAN LA LECTURA:
Salmonella son ROJAS
Citrobacter son AZULES
Proteus son BLANCAS
o son inhibidos

47
AISLAMIENTO DE Salmonella EN ALIMENTOS

BISMUTH
XLD HEKTOEN SULFITE RAMBACH

48
 Composición de los Medios de Cultivo
XLD BISMUTO SULFITO XLT 4 Hektoen Rambach

Bilis,Fucsina, Eosina Azul de

Inhibidor Desoxicolato Verde Brillante Tergitol 4 Novobiocina Metileno
Mezcla
Cromogénica,
Indicador Rojo Fenol Bismuto Sulfito Rojo Fenol Azul bromotimol Propilenglicol
Mezcla
Xilosa, Sacarosa, Xilosa, Sacarosa, Cromogénica,
Sustrato Lactosa Glucosa Lactosa Lactosa, Salicina Propilenglicol

Factores Peptona, Extrato Peptona, extracto Peptona,

Crecimiento Extracto Levadura, Carne levadura Extracto levad. Peptona

Sodio tiosulfato, Sodio tiosulfato, Sodio tiosulfato,

Otros Amonio Fe III Sulfato Ferroso Amonio Fe III Amonio Fe III
49
 DETECCION DE Salmonella

METODO CALDO SALMOSYST® /AGAR RAMBACH®

25 g/ml de muestra
en caldo SALMOSYST® por 6 h a 35 - 37°C

Día Adicionar 1 tableta

1 de SALMOSYST® Selectivo a 10 ml de caldo SALMOSYST®
y continue incubando por 18 h a 35 - 37°C

Agar RAMBACH®
Día por 24 h a 35 - 37°C
2

Día BIOQUIMICA / SEROLOGIA

3 PRUEBAS CONFIRMATIVAS

50

MERCK KGaA Darmstadt, Germany

En conclusió
conclusión, los métodos de detecció
deteccióne enzimá
enzimática
constituyen herramientas poderosas para la
detecció
detección de determinadas actividades enzimá
enzimáticas
de ciertos microorganismos.
microorganismos.
La incorporació
incorporación de sustratos cromogé
cromogénicos o
fluorogé
fluorogénicos a medios selectivos puede eliminar la
necesidad de subcultivos y pruebas biquí
biquímicas
adicionales para establecer la identidad de los
microorganismos en estudio Estos ensayos
enzimá
enzimáticos pueden conmstituir un metodo
alternativo para cuantificar miroorganismos en agua
y alimentos los cuales son sensibles y especificos.
especificos.
51
Gracias por su atención, alguna pregunta??

52