Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
LP 9 Diagnosticul de Laborator Al Hepatitelor Virale Diagnosticul de Laborator in Infectia Hiv Sida
LP 9 Diagnosticul de Laborator Al Hepatitelor Virale Diagnosticul de Laborator in Infectia Hiv Sida
Obiective:
1. Cunoasterea principalelor virusuri cu tropism hepatic şi prezentarea metodelor specifice şi
nespecifice de diagnostic.
2. Cunoasterea diagnosticului specific al hepatitelor cu transmitere predominant enterală: VHA,
VHE (metode directe, indirecte, semnificaţia markerilor virali).
3. Cunoasterea diagnosticului specific al hepatitelor virale cu transmitere predominant
parenterală: VHB, VHD, VHC (metode directe, indirecte, semnificaţia markerilor virali, algoritm
de diagnostic).
4. Diagnosticul de laborator în infecția HIV/SIDA.
Diagnosticul de laborator – teste nespecifice (ALAT, ASAT, bilirubină, fosfatază alcalină, etc..)
– teste specifice
directe – detectare antigene/genom/ evidenţiere virioni (ME)/izolare
indirecte – detectare Ac IgM/IgG
infecţie acută/recentă + +
Direct
- evidenţiere antigenelor VHB în ser prin ELISA: Ag HBs, Ag HBe
- evidenţiere ADN/VHB prin PCR, cu teste suplimentare
* genotipare - prin Real Time PCR (s-au descris 8 genotipuri; A-H, importante pentru
diagnostic, deoarece există diferenţe evolutive şi de răspuns la tratament); în România
predomină genotipul D;
* secvenţiere pentru detectarea mutaţiilor, care explică fenotipuri evolutive diferite,
comparativ cu tulpinile sălbatice;
- evidenţiere Ag HBc şi AgHBs în hepatocite, prin teste de imunohistochimie
Indirect = evidenţiere Ac anti-HBs, anti-HBe, anti-HBc – prin ELISA
2
Tabel: interpretarea markerilor serici în HVB
+ + Purtător inactiv
(>6 (>6 luni) (+ transaminaze normale, viremie
luni) scăzută sau absentă)
+ + + Hepatopatie cronică
(>6 (>6 (>6 luni) (+ creşterea ALAT > 2,5 ori)
luni) luni)
+ + + Trecere prin boala cu imunizare
+ Status post-vaccinare
! doar la pacienţii Ag HBs (+): „purtători sănătoşi” (noul termen, purtător inactiv), infecţii acute
sau cronice determinate de VHB
3
Coinfecţia = infectarea simultană cu VHB+VHD Suprainfecţia = suprapunerea VHD pe un teren
→ evoluţie severă în faza acută AgHBs (+)
→ de regulă nu se cronicizează → evoluţie fulminantă frecventă
→ forme cronice foarte frecvente (75%)
4
Diagnostic direct: pe lângă prezenţa AgHBs
- detectare antigenului delta (ELISA; prezenţă f scurtă, 1-2 săptămâni)
- detectare ARN genomic (RT-PCR)
Diagnostic serologic = detectare, prin ELISA, a Ac anti-VHD/IgM, IgG sau totali
Direct
evidenţiere ARN/VHC prin tehnici de biologie moleculară (RT-PCR)
- teste calitative → confirmă boala în cazul rezultatelor serologice echivoce
→ evidenţiază infecţia cu VHC precoce, la 1-2 săptămâni de la contactul infectant
→ certifică debarasarea de virus (sunt mai sensibile decât testele cantitative)
- teste cantitative → măsoară încărcătura virală
→ monitorizarea terapiei
Teste de genotipare (s-au descris 6 genotipuri; 1-6, cu mai multe subtipuri: 1a, 1b, 2a, 2b, etc.)
importante pentru diagnostic, deoarece există diferenţe evolutive şi de răspuns la tratament; în
România predomină genotipul 1b (de regulă, neresponsiv la tratament).
Algoritm de diagnostic
ELISA
Ser reactiv
Teste de confirmare
5
RIBA
indeterminat
negativ (o singură categorie de Ac) pozitiv
Se vor face precizări legate de structura HIV, etapele replicarii virale si evolutia naturala a bolii.
6
1. Diagnosticul direct – detectia virusului in diferite prelevate, permite diagnosticul inainte
de seroconversie (in primele 2-4 saptamani dupa expunere).
Colectarea şi transportul probelor
-sânge (atât pentru diagnosticul direct cât şi pentru cel indirect)
-LCR, salivă, lacrimi, urină, secreţii vaginale, produse de biopsie (intestin)
Probele se stochează la -20-70º C.
7
Avantaje- teste cu sensibilitate foarte buna (pot da si rezultate fals pozitive) si cu specificitate
buna
Rezultate fals (+) –contaminarea preparatului obţinut pe culturi cu material faţă de care apar Ac
non HIV); posibilitate practic inexistenta (nu se mai obtin antigenele prin cultivarea HIV pe
culturi de limfocite – se obtin prin recombinare)
Rezultate fals (-) – când testul se efectuează înaintea seroconversiei
- la pacienţii imunosupresaţi
- tardiv, în stadiul SIDA de boala
b)Teste de confirmare
-Western Blot –evidenţiază categoria de Ac anti HIV prezenţi
Interpretare : criteriile de pozitivitate sunt stabilite de standardele nationale/internationale
Pozitiv- prezenţa a cel puţin 2 din cele 3 benzi majore: env (gp 160/120, gp 41), +/- gag
(p24) +/- pol (p 55)
Negativ : absenţa benzilor
Indeterminat : benzi prezente, dar nu se întruneşte criteriul de pozitivitate.
- Imunofluorescenta
Algoritm de diagnostic :
reactiv
Ser reactiv
8
Excludere de la donare