Enzime 2

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
Clasa 1
OXIDOREDUCTAZE EC: 1
http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e

1 1/56

OXIDOREDUCTAZE - Definiție și caracteristici generale

Catalizează procesele celulare de oxidoreducere, procese ce se desfăşoară
prin transport de hidrogen, electroni şi oxigen de la un substrat donor la
acceptor.
Cofactorii oxidoreductazelor se pot diferenţia în - transportori de hidrogen

- transportori de electroni
- transportori de oxigen.
• Dehidrogenaze - catalizează (de obicei reversibil) transferul de hidrogen de la un

substrat donor de hidrogen (notat DH2) la acceptorul de hidrogen (notat A)
D + AH
DH2 + A 2
Denumirea sistematică:
donor de echivalenţi reducători : acceptor de echivalenţi reducători oxidoreductaze .
2
http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e 2/56

Oxidaze sau oxigenaze = catalizează scoaterea hidrogenului de pe un substrat (DH2)

utilizând oxigenul ca acceptor.
Produşi de reacţie: apa (H2O) sau peroxidul de hidrogen (H2O2).
DH2 O2 DH2 O2
(Red)
Oxidaze Oxidaze
(Oxigenaze) (Oxigenaze)
D H2O D H2O2
(Ox)
Oxigenazele - două grupe:

A. Dioxigenaze – încorporează ambii atomi de oxigen în molecula substratului
(notat D):
D + O2 DO2
B. Monooxigenaze sau hidroxilaze – catalizează încorporarea unui singur atom

de oxigen în molecula de substrat (notat, în acest caz, DH), iar celălalt este redus la apă:
DH + O2 + AH2 D-OH + A + H2O
unde DH – substrat donor de hidrogen; AH2 – cosubstrat donor de hidrogen; D-OH este
substrat hidroxilat
3
3/56

Transportori de hidrogen
COENZIME NICOTINICE
(COENZIME PIRIDINICE)
4

COENZIME TRANSPORTOARE DE HIDROGEN
COENZIME NICOTINICE (COENZIME PIRIDINICE).
Structură chimică: cele două forme biologic active ale amidei nicotinice (vitamina B3):
Nicotinamid adenindinucleotid - NAD+ (în forma oxidată) Acestea sunt compuse din
două nucleotide legate între
Nicotinamid adenindinucleotid fosfat -NADP+ (forma oxidată). ele prin intermediul
grupărilor fosfat, printr-o
NH legătură fosfoanhidridică
O 2
C N
Nicotinamidã N
NH2
+
N N
N NADP+ posedă o
O O Adeninã
5' grupare fosforil
5'
2' 3' CH2 în plus, legată
CH2 O P O P O
1' OH OH OH
O de C2 al restului
4' OH
4' 1' de riboză legat
O 3' 2' de adenină
NAD+
esterificat cu
OH OH
H3PO4
NADP+
OPO3H2 5

Mecanism de acţiune
Nucleotidele NAD+ şi NADP+ funcţionează ca acceptori reversibili ai
echivalenţilor reducători: protoni şi electroni, şi deci ca transportori de
hidrogen.
Reacţia generală : NAD+ + 2H (2e- + 2H+) NADH + H+
NADP+ + 2H (2e- + 2H+) NADPH + H+
H O
H H O
C NH2 2[H] NH2
C
+ + H+
N N
2[H]
R R
NAD+ sau NADP+ NADH + H+ sau NADPH + H+

(forma oxidatã) (forma redusã)
6
H O O
H H
4
C NH2 C NH2
5 H H 4
3
+
6 + 2 + D H + 1 + H
N1 H N
R
Substrat oxidat (D)
R
Formula generalã a
Formula generalã a Substrat redus
coenzimelor nicotinice
coenzimelor nicotinice (DH2)
reduse (NADH+ sau NADPH+)
oxidate (NAD+ sau NADP+)
Unul din electroni este utilizat pentru neutralizarea sarcinii atomului de azot
cuaternar în poziţia 1 iar un electron şi un proton dau naştere atomului de
hidrogen care se fixează în poziţia 4, formâdu-se NADH şi NADPH.
Cel de-al doilea proton (H+) eliberat de substrat rămâne liber în mediul de reacţie.
7

Caracteristici funcționale
• NAD+ și NADP+ au funcție de coenzime, adică sunt slab legate de suportul
proteic apoenzimatic
• au potențial de oxidoreducere foarte scăzut:
E’o= - 0,32 V
+ +
•
reacțiile catalizate de enzimele NAD și NADP dependente sunt, în general

reversibile
• formele reduse NADH + H+ intervin în prima etapă în transportul de hidrogen

din cadrul lanțului respirator mitocondrial (reacționează direct cu substratul).
+ +
•
formele reduse NADH + H și NADPH + H reprezintă o rezervă de echivalenți

reducători necesari pentru diverse reacții de biosinteză
• formele reduse NADPH + H+ nu intervin în lanțul respirator mitocondrial.
• formele reduse NADPH + H+ intervin în reacțiile de hidroxilare microzomală.
8

Exemple de enzime NAD+ dependente
a l co o l d e h i d ro g e n a za O
CH3-CH2-OH + NAD+ H3C C + NADH + H+
H
Alcool etilic Acetaldehidã
Alcool dehidrogenaza – denumire convențională

Alcool : NAD + oxidoreductaza, EC: 1.1.1.1
9

Enzime NAD+ dependente
CH3
CH + NAD+
3 NADH +H
C O HO CH Lactat : NAD+
oxidoreductaza
COOH lactat-dehidrogenaza COOH (enzimă Zn2+ dependentă)
(EC:1.1.1.27)
Acid piruvic Acid L-lactic
NADH + H+
COOH NAD+
COOH
HO CH C O
Malat: NAD+ oxidoreductaza
malat-dehidrogenaza CH2
CH3 (EC:1.1.1.37)
COOH
COOH
Acid L-malic Acid oxalilacetic
10

α-Glicerofosfat : NAD+ oxidoreductaza, EC 1.1.1.95
CH2 OH CH2 OH
-glicerofosfat-DH

HC OH O C O O
CH2 O P OH CH2 O P OH
+
NAD
OH OH
Acid -glicerofosforic NADH + H + Dihidroxiacetonfosfat
11

COOH H2O NAD(P)H+H+ COOH

NAD(P)+
H2 N CH C O
glutamat-D H (EC: 1.4.1.3)
CH2 CH2 + NH3
CH2 CH2
COOH COOH
Acid L-glutamic Acid -cetoglutaric
Glutamat: NAD(P)+ oxidoreductaza
12

Enzime NADP+ dependente
H2 C O PO3H2 H2 C O PO3 H2
Glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza
(EC: 1.1.1.49)
O O
OH OH O D-glucozo-6-fosfat-
NADP+ oxidoreductaza
OH OH NADP+ OH
OH OH
NADPH + H+
-D-Glucozo-6-fosfat Acid 6-fosfo-gluconic
Gly Cys NADP+

Glu
NADPH+H+
S
2 Gly Cys Glu
S glu tation reductaza
(EC:1.6.4.2)
NADPH2 : glutation
Gly Cys SH oxidoreductaza
Glu Gly- glicinã (glicocol)
Glutation redus
Glutation oxidat Cys-SH- cisteinã
(G-SH)
(G-S-S-G) Glu- acid glutamic
13

CH3
O
HOOC CH2 C CH2 C ~ SCoA
OH -Hidroxi- -metilglutaril~SCoA
(HMG~SCoA)
2NADPH + 2H+
H M G~SCoA r eductaza (EC: 1.1.1.34)

HS-CoA
2NADP+
CH3
HOOC CH2 C CH2 CH2 OH
OH Acid mevalonic
Enzima care intervine în biosinteza colesterolului
14

H N H N
2 2
C NH2 C O
H N H N
CH2 NADP+ CH2

NADPH+H+
CH2 2 O2 CH2
+ +
CH2 CH2 NO 2H2O
ni tri c oxi d sin taza
(EC: 1.14.13.39) Monoxid
H2 N CH H2 N CH de azot
COOH
FACTOR DE
COOH
RELAXARE
L-Argininã L-Citrulinã ENDOTELIALĂ
terahidrobiopterinã (BH4)
Reacția este complexă și flavin mononucleotid (FMN)
are mai mulți cofactori: flavin adenindinucleotid (FAD)
calmodulinã (CaM) 15

Flavin-enzime.
Cofactori transportori de hidrogen
cu structură flavinică
FAD
FMN
16

Cofactori cu structură flavinică- transportori de hidrogen.

Flavin-enzime
Flavin mononucleotid – FMN

Flavin adenindinucleotid – FAD
•
Sunt grupări prostetice pentru un număr relativ mare de
flavoproteine şi flavin-enzime (strâns legate de partea proteică a
enzimei)
• Alte denumiri: fermentul galben al lui Warburg, ovoflavină,
lactoflavină
• sunt forme biologic active ale vitaminei B2 (riboflavina).
• FMN are structură mononucleotidică,
• FAD are o structură dinucleotidică.
17

Structura flavin mononucleotidului (FMN) = izoaloxazină-ribitil-fosfat
O
N Nucleul
H3C 5
10
4
6 3 NH izoaloxazinã
7 2
9
8
H3C N N O
1 6,7 dimetil, 9 ribitil
izoaloxazină = RIBOFLAVINĂ
1'CH2
(vitamina B2)
2'CH OH Ribitil
3'CH OH
4'CH OH
OH
5'CH2 O P OH
O
Riboflavină - fosfat
18

Structura flavin adenindinucleotidului (FAD)

O
N Nucleul
HC 5 4
3 6 10 3 NH izoaloxazinã
7 2
9
8
H3C N N O
1
CH2 Adeninã
CH OH NH2
N
CH OH N
N N
CH OH OH OH
CH2 O P O P O CH2
O
O O
OH OH
Izoaloxazină-ribitil- fosfat - fosfat - riboză - Adenină

19

H
O O
10
H3C N 2[H] H3C N
4 NH 10 NH
9 1
H3C N N O H3C N N O
1 2[H]
H
R R
H+ + e- H+ + e-
FAD sau FMN FADH sau FMNH
(forma oxidatã) 2 2
(forma redusã)
H
O
+
N
.
FMN şi FAD pot funcţiona H3C drept transportori
10 4 NHde hidrogen datorită
capacităţii lor de a lega reversibil hidrogenul la atomii N1 şi N10 din nucleul
H3Cizoaloxazinic.
N N O
În forma oxidată nucleul izoaloxazinic este plan iar în forma redusă are loc
R
o pliere a sa în jurul unei axe imaginare N1-N10.
FADH sau FMN
. .
(semichinonã)
20

Caracteristici structurale
• Legătura dintre ribitil şi dimetil-izoaloxazină nu este N-heterozidică
•
Legătura cu partea proteică a enzimelor este puternică (grupare prostetică)

• O grupare funcţională de alcool primar din ribitil este esterificată cu H 3PO4,
(FMN reprezintă de fapt esterul fosforic al vitaminei B2)
• sunt metal-flavoproteine, cu ioni metalici în structură :
– succinat-dehidrogenaza are fier neheminic,
– xantinoxidaza conţine fier şi molibden,
– butiril ~ SCoA dehidrogenaza are cupru
• Potenţialul de oxidoreducere a enzimelor flavinice are valoare negativă:
FAD - E ’= - 0,05V
–
o
FMN - Eo’= - 0,10V
–
• FAD şi FMN participă la lanţul respirator mitocondrial , preluând hidrogenii

de la coenzimele nicotinice pe care îi cedează coenzimelor Q (ubichinonelor)
21

Legătura cu partea proteică a enzimelor este puternică

(grupare prostetică)
22

Exemple de enzime dependende de FAD
Succinat
dehidrogenaza Succinat:FAD
COOH (SDH) HOOC H
C
oxidoreductaza
EC:1.3.99.1
CH2 + Enz + Enz FADH2 (4 atomi de Fe
FAD
CH2 C neheminic, 4 atomi
H COOH
COOH de S legați de
Acid succinic
Acid fumaric proteină)
O
CH3 CH2 CH2 C ~SCoA
butiril~SCoA
FAD
butiri l~SCoA - D H
(EC: 1.3.99.2) FADH2
O
H
CH3 C C
C ~SCoA
H
crotonil ~SCoA 23

Enzime dependende de FAD
FAD FADH2
O O
N Xanti n oxidaza N
HN HN
Molibden
N O N N
N
H O2 H Are FAD, molibden și Fe-S
H
Hipoxantina H2 O2 Xantina proteine în structură
FAD O2
Xanti n oxi daza
(EC: 1.1.3.22)
FADH2
H2O2
O
H
N
HN
O
O N N
H H
Acid uric
24

Oxidarea aminoacizilor : flavin-enzimele în reacţia catalizată de
L/D aminoacid oxidaze FMN/FAD dependente (EC 1.4.32)
R CH COOH + Enz FMN R C COOH + Enz FMNH2

NH2 NH
Aminoacid Iminoacid
R C COOH + HOH R C COOH + NH3
NH O
Iminoacid Cetoacid
Enz FMNH2 + O2 Enz FMN + H2O2
Catalaza
H2O2 H2O + 1/2 O2
Reactia globalã: R CH COOH+ 1/2 O2 R C COOH + NH3
NH2 O
Aminoacid Cetoacid
25

Localizarea flavoproteinelor cu FMN şi FAD în complexele enzimatice din lanţul

respirator mitocondrial cuplat cu fosforilarea oxidativă (sinteza ATP).
ATP ATP ATP
Complexul I Complexul V
NADH+H+
FMN
Fe-Sulf
CoQ
proteine 1 / O
NAD+ 2 2
Citocromi b c1 a-a3
Succinat Complexul III
FAD
CoQH2 H2O
Fe-Sulf Complexul IV
proteine
Fumarat
Complexul I I 26

UBICHINONELE (COENZIMELE Q)
COFACTORI ENZIMATICI
TRANSPORTORI DE HIDROGEN
27

27/56
5/24/2018
• Ubichinonele sau coenzimele Q = grup de compuşi liposolubili omologi,
Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
cu structură benzochinonică, specifici mitocondriei

Denumire:
• ubi = răspândire ubicuitară: la plante, la microorganisme, la animale
• chinone - au structură chinonică
• prezentă în toate celulele şi ţesuturile
Structură: nucleu de benzochinonă substituit cu: 2 gr. metoxi,
1 gr. metil și
1 lanț poliizoprenoidic
CH3
O
H3 C O 6 CH2 CH C CH2 H
1 2 n
5 4 3 n = 6 pentru ubichinonele de la levuri

H3 C O CH3
n = 8 sau 9 pentru ubichinonele de la microorganisme
O
n = 10 pentru ubichinonele de la animale si om
2-decaprenil--5,6-dimetoxi-3-metil-1,4-bezochinona 28

28/56
Particularități structurale ale moleculelor de

ubichinone
• denumirea de “coenzimă” este improprie deoarece ea nu intră în

componenţa unei enzime;
• lanţul poliizoprenic din structura coenzimei Q îi permite
10
integrarea în zonele bogate în lipide din celulă, în special în
structurile de membrană;
• sunt solubilizate în complexe fosfolipidice => rol de transportor de
hidrogen mobil, făcând naveta între transportorii fixaţi la nivel
mitocondrial.
29

29/56
5/24/2018
Mecanism de acțiune
• acceptă şi cedează reversibil 2 atomi de hidrogen:
O OH
CH3O R CH3O
+ 2H R
- 2H
CH O CH3 CH3
3
O CH3O
OH
Ubichinona (Q) Ubichinol (QH2)

(forma oxidatã) (forma redusã)
Potenţial de oxidoreducere Eo’= -0,01V

• => deci în celulă ele oxidează enzimele cu potențial redox mai scăzut , cum
sunt enzimele flavinice
• în lanţul respirator mitocondrial se plasează între sistemele enzimatice cu
potenţial redox negativ –flavinele, şi cele cu potenţial pozitiv -citocromii
30

30/56
5/24/2018
Mecanism de acțiune Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
CH3
O
CH3O CH2 CH C CH2 H
10
CH3O CH3
Reducerea ubichinonei la
O Ubichinona (Q)
ubichinol poate avea direct cu
+ e- - e- doi atomi de hidrogen, în trepte,
CH3 prin trei nivele de oxidare ce
-
O
CH3O CH2
includ şi un compus intermediar
CH2 CH C H
semichinonic, care este un
10
radical liber (Q •)
CH3O CH3
O Anion semichinonic (Q )
.-
+ 2H+ - 2H+
+ e- - e-
CH3
OH
CH3O CH2 CH C CH2 H
10
CH3O CH3 31
OH Ubichinol (QH2)

31/56
5/24/2018
Ubichinona- componentă a lanţului respirator mitocondrialEnz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
Co mplexul I
SH 2
NA D+ FMNH 2
1
CoQ /2 O2
Com plexul II Com plexul IV
NA DH FMN
S Fe2+ Fe3+ Fe2+
+H +
Cyto b Cyto c Cyto a+a3

Fumarat FADH2 Fe3+ Fe2+ Fe3+
CoQH 2
Succinat FAD H2 O
Com plexul II
32

Schema generală de biosinteză a coenzimei Q 10
2 Acetil-CoA
Fenilalanina
Acetoacetil-CoA
Tirozina
HMG-CoA
HMG-CoA reductaza
4-OH-Fenilpiruvat Mevalonat
Mevalonat - P
4-OH-Fenillactat
Mevalonat - PP
Izopentenil - PP
4-OH-Cinamat
trans- Geranil - PP Geranil-geranil -PP
Preniltransferaza
4-OH-Benzoat + Decaprenoil - PP Farnesil - PP
cis-Preniltransferaza
Scualen Poliprenil - PP
Decaprenil- (IZOPRENE)
4-OH-benzoat transferaza Colesterol
Decaprenoil-4-OH-benzoat
Lanţ lateral pentru Izoprenilarea
vitamina E, proteinelor
Coenzima Q10 vitamina A,
vitamina K. Dolicol- 33
pirofosfat


ALȚI COFACTORI TRANSPORTORI DE

HIDROGEN
ACIDUL LIPOIC
34

• Acidul lipoic (acid tioctic) – STRUCTURĂ CHIMICĂ
Acidul 6,8 – ditio-octanoic
H2
8
C 6
1
7
H2C CH (CH
5 2)4
COOH

S S
Acid -lipoic
O
H2 5 3
8
C 6
CH2 CH2 1
C
H2C CH OH
CH2 CH2
4 2
S S
Acid lipoic
35

Acidul lipoic - Particularități structurale
H2
• compus biologic activ,
8
C 1
vitamin-like, sintetizat în H2C
7
CH
6
(CH2)4 COOH
organismele vegetale şi 5

animale, inclusiv în S S
organismul uman Acid -lipoic - forma oxidată

-2H +2H
• potenţialul de H2
oxidoreducere Eo’ = -0,29 V 8
C 6
1
7
HC CH (CH2)4 COOH
2 5

• funcționează, reversibil, SH SH
ca acceptor-donor de
Acid -lipoic - forma redusă
hidrogen
(acid dihidro-lipoic)
36

Acidul lipoic - Particularități structurale și funcționale
• Îndeplineşte rolul de cofactor, după legarea sa de proteina

apoenzimatică; această legătură se stabileşte între gruparea
- COOH a acidului lipoic şi gruparea ε-amino a lizinei din
catena polipeptidică
Rest de lizină din proteina
enzimatică
O HN

C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH
H
C
S S O
Acid lipoic oxidat legat de partea proteica a enzimei (lipoil--aminolizina)
37

Rest de lizinã din proteina
enzimaticã
5/24/2018
ACIDUL LIPOIC - H2
H2 H2
O

HN

C C C N CH2 CH 2 CH2 CH2 CH

particularități
8 C 6
H2C CH C C 1 H
H2 H2 C
O
funcționale S S
Acid lipoic legat de proteina enzimaticã
(forma oxidatã)
O
R C
OH
Acid gras
• Prin ruperea punţii
O HN
disulfurice, acidul lipoic are H2
8 C 6 C N CH2 CH2 CH 2 CH2 CH

capacitatea de a transporta H2C CH H
C
şi o grupare acil. SH S
O
HSCoA
Acil
Acil~SCoA
O HN
H2
C C N CH2 CH 2 CH 2 CH2 CH
transportul concomitent
8 6
H2C CH H
C
de hidrogen şi de SH SH
O
grupări acil
Acid lipoic legat de proteina enzimaticã 38
(forma redusã)


5/24/2018
Acidul lipoic - cofactor pentru complexe enzimatice Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
dehidrogenazice
• Acidul α-lipoic, legat în forma de lipoamidă, funcţionează drept cofactor
(grupare prostetică) î n structura unor complexe enzimatice mitocondriale,
care catalizează reacții de decarboxilare oxidativă a cetoacizilor
potenţial de oxidoreducere Eo’ = -0,29 V, ceea ce îi dă posibilitatea de
a funcţiona împreună cu molecula de FAD
CH3
piruvat-dehidrogenaza O + CO2 + NADH + H+
C O H3C C ~SCoA
TPP, acid lipoic, HS-CoA,
COOH
FAD, NAD+
Acid piruvic Acetil coenzima A
COOH COOH
C O a-cetoglutarat-dehidrogenaza CH2
+ CO2 + NADH + H+
CH2 TPP, acid lipoic, HS-CoA, CH2
FAD, NAD+ O
CH2
C ~SCoA
COOH
Succinil-coenzima A
Acid -cetoglutaric 39

5/24/2018
ACIDUL LIPOIC Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
Utilizare terapeutică
Produse farmaceutice
 Este un antioxidant natural, cu reactivitate înaltă față de

radicalii liberi
 Este bine absorbit la nivel gastro-intestinal
 Este neuroprotector
 Interacționează sinergic cu alți antioxidanți și regenerează
vitaminele E și C
 Crește nivelul tisular al glutationului, unul dintre principalii
antioxidanși endogeni, al cărui nivel scade odată cu vârsta
 Util în: neuropatiile diabetice, ateroscleroză, boli
neurodegenerative, (Parkinson, Alzheimer), protector hepatic
40

Oxidoreductaze transportoare de
electroni
TRANSELECTRONAZE
41

5/24/2018
Oxidoreductaze cu fier heminic. Hem-enzime
Citocromii
• Keilin – 1925
• Fier-proteine cu localizare mitocondrială
• Participanți activi la lanțul respirator
• Unii sunt localizați în microzomi
• Se cunosc aproximativ 100 citocromi
• Gruparea prostetică: fier-porfirinică
• Au structură heminică
•
Realizează transferul reversibil al unui singur electron- prin intermediul
atomului de fier situat în centrul hemului Fe(II)  Fe(III).
42

5/24/2018
CITOCROMII – Structură chimică
Citocromii a
• Fier-proteine având o structura de tip
protoporfirinic (nucleu tetrapirolic) ce
are la bază pirolul
• Denumirea de porfirine (din

limba greacă) se datorează culorii
purpurii a acestor compuşi
• Porfirină + FIER = HEM
• HEMUL reprezintă subunitatea

prostetică a numeroase hemoproteine,
printre care şi citocromii
• Atomul de fier (Fe2+ sau Fe3) se leagă

pirol prin legături coordinative de cei patru
atomi de azot tetrapirolici.
43

Structuri tridimensionale ale citocromului c
• Citocromul c = heteroproteină
globulară prezentă în mitocondria
deun
•
la toate
singurorganismele eucariote.
lanţ polipeptidic format
din 104 de aminoacizi.
• 40% din structura polipeptidului
este constituit din lanţuri de tip
-helix, iar restul de tip , sau plieri
neregulate
44

5/24/2018
• Citocromiii a, b, şi c sunt prezenţi la nivelul membranei mitocondriale şi fac

parte din complexele lanţului respirator.
• Structurile heminice din citocromii a şi b nu sunt leagate covalent de partea
proteică.
• Potenţialele de oxidoreducere ale citocromilor sunt pozitive, ei fiind plasaţi în
lanţul respirator mitocondrial în ordinea crescătoare a potenţialelor lor redox.
• Transportul electronilor se face pe baza transformărilor redox reversibile ale
atomului de fier heminic:
Citocrom - Fe3+ + e- Citocrom - Fe2+
45

5/24/2018
Citocromii P450 şi b5 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
• Componente active ale lanţului transportor de electroni situat

la nivelul reticulului endoplasmic neted (microzomi).
• Citocromii P450 (EC: 1.14.14.1) = o familie multigenică de hemoproteine

cu proprietăţi diferite de cataliză, de specificitate pentru substrat, şi de
sensibilitate la tratamentul cu diferiţi inductori.
•
Complexul citocromului
cu un maxim culamonoxidul
de absorbţie 450 nm. de carbon (CO) este un pigment (P)
• Apoproteina are o masă moleculară cuprinsă între 45.000 şi 50.000 daltoni.
• Multiplicitatea şi eterogenitatea citocromilor P450 a necesitat elaborarea
unei nomenclaturi bazată pe procentul de omologie al secvenţelor
proteice, această nomenclatură fiind adusă la zi o dată la doi ani.
• În 2009: a 55-a aniversare a descoperirii citocromilor P450, fiind
identificate la om numeroase izoenzime ce prezintă un interes
farmacologic şi toxicologic.
• La om, cele mai implicate enzime în metabolismul medicamentelor sunt
izoformele: CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP1A2, CYP2C19. 46

5/24/2018
Citocromii P450 şi b5
• Citocromul P450 este o oxidază terminală într-un lanţ multienzimatic

cu funcţie mixtă în care mai intervin NADPH-citocrom P450 reductaza
şi NADH-citocrom b5 reductaza.
• Aceşti citocromi participă la
1) reacţiile de hidroxilare din biosinteza unor molecule endogene:
colesterol, hormoni steroizi, calciferoli, acizi graşi hidroxilaţi, acizi
biliari, aminoacizi aromatici
2) reacțiile de metabolizare a compuşilor xenobiotici: medicamente,
pesticide, aditivi alimentari
• Citocromul P450 are rol de monooxigenază cu funcţie mixtă:
Cit. P450
R-H + NADPH + H+ + O2 R-OH + NADP+ + H2O
Capacitatea P450 de a biotransforma numeroase molecule exogene diferite

permite organismelor vii de a se adapta la mediul înconjurător !!
47

Transelectronaze
Subclasa 1.11 (acceptor de H2O2)
CATALAZA
EC: 1.11.1.6
HEM-ENZIME
48

5/24/2018 • Catalaza (EC: 1.11.1.6) = hem-enzimă, cu masa moleculară de 250.000
Daltoni, constituită din 18 lanţuri polipeptidice notate cu A, B, C şi D.

• Fiecare catenă conţine 120 resturi de aminoacizi, în care predomină
acidul aspartic
• Catalaza are drept grupare prostatică patru molecule de hem, deci patru
atomi de fier
Catalaza produce reacţia de dismutare a peroxidului de hidrogen;

1 mol de catalază descompune 5 x 106 moli H2O2.
H2O2 + H2O2 2H2O + O2
49

Oxidoreductaze cupru-dependente
Transelectronaze cu cupru
(cupru-enzime)
50

Transelectronazele cu cupru sunt oxidaze care transferă electroni de pe
un metabolit pe oxigenul molecular (deci reacţionează direct cu O2)
•
Transportul electronilor se face pe baza transformărilor redox reversibile
ale atomului de cupru, mecanismul de acţiune fiind:
Cu2+ + e- Cu+
Exemple de transelectronaze cu cupru:

•uricaza
• fenol oxidazele
•
ascorbat oxidaza
• ceruloplasmina
• superoxid-dismutaza
51

5/24/2018
Uricaza (sau urat-oxidaza, EC: 1.7.3.3; urat:oxigen-oxidoreductaza) Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
• Enzima care transformă acidul uric în alantoină la toate mamiferele, cu excepţia
primatelor şi a omului.
• Uricaza recombinată (preparată prin inginerie genetică, ADN recombinat) a fost
studiată şi propusă de curând ca posibil medicament în hiperuricemie (gută).
O 1/2 O2 H2O
H O
N N
HN NH2
O O
URICAZA
O N N O N N
H H H
Acid uric Alantoina

CO2
NH2 COOH NH2 NH2

COOH
52

C C
H
C 2O C +
5/24/2018
Fenol-oxidazele
• Enzime care catalizează hidroxilarea monofenolilor la difenoli, şi apoi

a difenolilor la chinone.
•
Polimerizarea rapidă a acestor chinone conduce mai departe la formarea
pigmenţilor coloraţi (polifenoli), proces întâlnit sub numele uzual de
“brunificare” a fructelor şi legumelor (mere, pere, gutui, cartofi), în prezenţa
oxigenului.
• În funcţie de substratul catalizat fenol-oxidazele sunt clasificate în
tirozinaze
•
(sau monofenol
Fenilalanină oxidaze)
-4-hidroxilaza şi catecoleste
(EC: 1.14.16.1)
-oxidaze (sau difenol oxidaze).
o monooxigenază care
catalizează hidroxilarea fenilalaninei la tirozină.
COOH
COOH
H2 N CH
H2 N CH
CH2
CH2
fenil-alanin-4-hidroxilaza
+ NADP+ + H2 O
+ NADPH+H+ + O2
citocrom P450
L-Fenilalaninã acid ascorbic OH

L-Tirozinã
+
Cu 53


5/24/2018
Ascorbat oxidaza Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om
(sau ascorbaza, EC: 1.10.3.3; L-ascorbat : O2 oxidoreductaza)
•
participă la metabolismul oxidativ al acidului ascorbic, cu formarea celor
două forme vitaminice redox active: acid ascorbic şi acid dehidroascorbic.
O C O C
O O C O
HO C
a s c o r b a t o x i d a za O C
HO C
+ H2O
HC HC
+ 1 /2 O2
HO CH Cu+ HO CH
H2C OH H2C OH
Acid L-ascorbic Acid L-dehidroascorbic
54


Ceruloplasmina
Feroxidază (Fe2+:oxigen oxidoreductază, EC:1.16.3.1)
• este o metal-proteină multifuncţională

• transportor de cupru, agent anti-inflamator, antioxidant plasmatic
captator de radicali liberi
• 2-glicoproteină ce conţine 8 atomi de cupru în moleculă.
• sintetizată la nivel hepatic
•
acţionează ca oxidază
• rol în metabolismul fierului, împreună cu transferina (care îl transportă
numai sub formă ferică)
• catalizează oxidarea Fe3+ în Fe2+, favorizând captarea fierului de către
transferină şi utilizarea sa mai departe în biosinteza hemoglobinei.
Ceruloplasmina
4Fe2+ + 4H+ + O2 4Fe3+ + 2H2O
55


5/24/2018 Superoxid-dismutaza
(SOD, superoxid:superoxid oxidoreductază; EC: 1.15.1.1)
• metal-enzimă ce conţine Cu2+ şi Zn2+, Mn2+ sau Fe2+ (în cazul bacteriilor)
• descoperită în 1969 de către J. McCord şi I. Fridovich
• SOD catalizează reacţia de dismutare a radicalului superoxid:
.- .- + SOD
O +O + 2H H O +O
2 2 2 2 2
Aproximativ 98% din activitatea SOD la nivel sangvin se găseşte în hematii.

Activitatea enzimatică SOD este scăzută în inflamaţii, tumori, cataractă, precum şi în

Enzime 2

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Enzime 2

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

OXIDOREDUCTAZE - Definiție și caracteristici generale

Cofactorii oxidoreductazelor se pot diferenţia în - transportori de hidrogen

• Dehidrogenaze - catalizează (de obicei reversibil) transferul de hidrogen de la un

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

Oxidaze sau oxigenaze = catalizează scoaterea hidrogenului de pe un substrat (DH2)

Oxigenazele - două grupe:

B. Monooxigenaze sau hidroxilaze – catalizează încorporarea unui singur atom

DH + O2 + AH2 D-OH + A + H2O

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

COENZIME TRANSPORTOARE DE HIDROGEN

COENZIME NICOTINICE (COENZIME PIRIDINICE).

5/24/2018 Enz ime -3-Oxidore duc ta z e - slide pdf.c om

Reacţia generală : NAD+ + 2H (2e- + 2H+) NADH + H+

NADP+ + 2H (2e- + 2H+) NADPH + H+

NAD+ sau NADP+ NADH + H+ sau NADPH + H+

• NAD+ și NADP+ au funcție de coenzime, adică sunt slab legate de suportul

reacțiile catalizate de enzimele NAD și NADP dependente sunt, în general

• formele reduse NADH + H+ intervin în prima etapă în transportul de hidrogen

formele reduse NADH + H și NADPH + H reprezintă o rezervă de echivalenți

Exemple de enzime NAD+ dependente

Alcool dehidrogenaza – denumire convențională

Enzime NAD+ dependente

Enzime NAD+ dependente

α-Glicerofosfat : NAD+ oxidoreductaza, EC 1.1.1.95

Enzime NAD+ dependente

COOH H2O NAD(P)H+H+ COOH

Glutamat: NAD(P)+ oxidoreductaza

Enzime NADP+ dependente

Gly Cys NADP+

Enzime NADP+ dependente

H M G~SCoA r eductaza (EC: 1.1.1.34)

HOOC CH2 C CH2 CH2 OH

Enzima care intervine în biosinteza colesterolului

Enzime NADP+ dependente

CH2 NADP+ CH2

Cofactori cu structură flavinică- transportori de hidrogen.

Flavin mononucleotid – FMN

Structura flavin mononucleotidului (FMN) = izoaloxazină-ribitil-fosfat

Structura flavin adenindinucleotidului (FAD)

Izoaloxazină-ribitil- fosfat - fosfat - riboză - Adenină

Legătura cu partea proteică a enzimelor este puternică (grupare prostetică)

• FAD şi FMN participă la lanţul respirator mitocondrial , preluând hidrogenii

Legătura cu partea proteică a enzimelor este puternică

Enzime dependende de FAD

L/D aminoacid oxidaze FMN/FAD dependente (EC 1.4.32)

R CH COOH + Enz FMN R C COOH + Enz FMNH2

R C COOH + HOH R C COOH + NH3

Enz FMNH2 + O2 Enz FMN + H2O2

Reactia globalã: R CH COOH+ 1/2 O2 R C COOH + NH3

http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e 25/56

Localizarea flavoproteinelor cu FMN şi FAD în complexele enzimatice din lanţul

http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e 26/56

http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e

cu structură benzochinonică, specifici mitocondriei

Structură: nucleu de benzochinonă substituit cu: 2 gr. metoxi,

5 4 3 n = 6 pentru ubichinonele de la levuri

http://slide pdf.c om/re a de r/full/e nz ime -3-oxidore duc ta z e

Particularități structurale ale moleculelor de

• denumirea de “coenzimă” este improprie deoarece ea nu intră în