Domênio H.G.P.Barbieri Lúcia Helena M. Bruneri Primavera Borelli
1.PRINCÍPIO
É a determinação da concentração do pigmento hemoglobínico no
sangue total. O resultado é expresso em g% de sangue. Em cumprimento a um antigo hábito, a hemoglobina do sangue pode também ser expressa em “ % do normal”, dado este arbitrário, visto que o valor “ normal” , da hemoglobina não deve ser considerado fixo, pois depende de uma série de variáveis, como idade e sexo. Não obstante, considera-se, em termos médios, como “ normal”, 16 g% para o homem e 15% para a mulher. Existem vários métodos de dosagem, devendo-se proferir os colorimétricos. Nos diferentes métodos de dosagem, a hemoglobina é transformada em um composto estável (oxihemoglobina, cianometahemoglobina, hematina ácida, etc). Os aparelhos, fotocolorimétrico e espectrofotômetro, devem estar calibrados.
2. CURVA DE CALIBRAÇÃO
Para se determinar a concentração de hemoglobina utilizam-se
padrões comerciais de boa qualidade ou prepara-se uma solução padrão de hemoglobina, na qual a hemoglobina tenha sido determinada através de um método rigoroso (por ex.: pela determinação do ferro hemoglobínico). A partir destes padrões, a curva de calibração ou fator de calibração são estabelecidos pelas técnicas usuais de colorimetria.
3. MÉTODO DA OXIHEMOGLOBINA
As hemácias hemolisadas com água destilada, liberam
oxihemoglobina; a amônia acrescentada lisa os estromas resultantes. Este método não dosa compostos anormais que possam estar presentes como a metahemoglobina e a sulfahemoglobina.
a) 0,020 ml de sangue (oxalatado ou capilar) são colocados em 5 ml
de água destilada, lavando-se a pipeta na mesma. Adicionam-se 2 gotas de amônia a 50%. Homogeneizar.
b) Ler no fotocolorimétrico (filtro verde) ou espectrofotômetro (540
nm) contra um branco de água destilada contendo 2 gotas de amônia a 50%. c) Cálculo: absorbância x fator de calibração = concentração de hemoglobina no sangue (g de Hb/100 ml de sangue).
4. MÉTODO DA CIANOMETAHEMOGLOBINA
Neste método os compostos de hemoglobina, com exceção da
sulfahemoglobina, são rapidamente convertidos a ciametahemoglobina sob a ação do cianeto de potássio e do ferricianeto de potássio.
a) 0,020 ml de sangue são colocados em 5 ml de solução de Drabkin
(modificada)* Homogeneizar. Leitura após 3 minutos.
b) Leitura de fotocolorimétro (filtro verde) ou espectrofotômetro (540
nm) contra solução de Drabkin, modificada.
c) Cálculo: absorbância x fator de calibração = g% Hb no sangue
total.
5. CÁLCULO DA HEMOGLOBINA EM “ % DO NORMAL “
Determinada a Hb g%, estabelece-se por uma regra de três,
considerando-se como 100% de Hb: 16 g para o homem e 15 g para a mulher.
Ex: paciente do sexo masculino: apresentou 8g% de hemoglobina,
portanto:
100% = 16 g x = 50% do normal
x% = 8 g
(* ) Solução de Drabkin, modificada:
Ferricianeto de potássio ......................................... 200 mg Cianeto de potássio ......................................... 50 mg Fosfato diácido de potássio..................................... 140 mg Sterox ......................................... 0,5 ml Água destilada q.s.p. ........................................ 1000 ml