ÉCOLE POLYTECHNIQUE

DÉPARTEMENT DE GÉNIE CHIMIQUE

GÉNIE DU VIVANT- GCH 1520

EXAMEN FINAL

DATE : 23 avril 2010

HEURE : 9h30 à 12h00

Toute documentation permise

Calculatrice non programmable approuvée par l’AEP

TOTAL : 20 points

Notes:

N’oubliez pas d’inclure toute explication pertinente

Des points sont alloués aux unités des réponses

4 pts 1. Vous vous rendez sur un site d’une ancienne mine sur lequel plus aucune végétation ne
pousse à cause des conditions acides du sol. On vous dit que la présence d’une grande
quantité de bactéries sulfuro-oxydantes explique cette situation problématique d’un point
de vue environnemental. On vous demande de trouver une solution. Il vous faut donc
bien comprendre ce qui se passe.

(1 pt) a. Quel type de catabolisme utilisent ces microorganismes pour générer leur énergie?
Expliquez votre réponse.

(1 pt) b. Quel est l’accepteur d’électrons le plus probable. Expliquez votre réponse.

(1 pt) c. Comme aucune végétation ne pousse, il n’y a aucune présence de substrat organique
sur le site pour les microorganismes. Comment ces microorganismes font-ils pour
obtenir leur source de substrat organique (par exemple, le glucose) nécessaire à leur
croissance? Nommez la source de carbone et le processus par lequel les
microorganismes fabriqueront leur sucre.

(1 pt) d. Que pourriez-vous suggérer pour régler le problème d’acidité du sol? Expliquez votre
réponse.

2 pts 2. Nommez et expliquez deux caractéristiques que doit avoir une cellule hôte lors de la
technique de l’ADN recombinant

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3 pts 3. Chaîne de transport des électrons

Vous déterminez la différence d’énergie libre standard générée par la chaîne de transport des
électrons lors de la respiration aérobie d’une cellule eucaryote. Vous obtenez
ΔG°’= - 219kJ/mol. De plus, vous avez sous la main les potentiels de réduction standard
des principales demi-réactions impliquées (voir Tableau1).

Tableau 1: Potentiel de réduction standard associé aux principales demi-réactions impliquées

dans la respiration aérobie (1 atm, 25°C, pH 7)

Demi-réaction de réduction E’0

(V)
2H+ + 2e- → H2 -0,420
NAD + H+ + 2e- → NADH + H+ -0,320
+ -
FAD + 2H + 2e → FADH2 -0,180
Ubiquinone + 2H+ + 2e- → ubiquinone H2 0,100
1/2O2 + 2H+ + 2e- → H2O 0,815

(1 pt) a) Quelle est la constante d’équilibre de la réaction d’oxydo-réduction impliquée?

(0,5 pt) b) Aux conditions standards, cette réaction est-elle endergonique ou exergonique? Justifiez
votre réponse.

(1,5 pts) c) Dans le tableau des potentiels de réduction ci-haut (Tableau 1), quelles pourraient être les
demi-réactions de réduction impliquées si deux électrons sont échangés lors de la réaction
d’oxydo-réduction? Justifiez votre réponse par le calcul approprié.

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1 pt 4. Couple d’oxydo-réduction

Dans le couple d’oxydo-réduction formé par les deux demi-réactions de réduction suivantes:

Oxaloacetate2- + 2H+ +2e- → malate2- E’0 = -166mV

Pyruvate- + 2H+ + 2e- → lactate2- E’0 = -185mV

(0,25 pt) a. Quelle est la réaction de réduction dans ce couple?

(0,25 pt) b. Quelle est la demi-réaction qui perd ses électrons dans ce couple?

(0,25 pt) c. L’accepteur d’électron est-il le pyruvate- ou l’oxaloacetate2- ?

(0,25 pt) d. Quelle est l’équation globale du couple (dans le sens de la libération d’énergie)?

2.5 pts 5. Hydrolyse de l’ATP

pts
L’hydrolyse de l’ATP à 25°C, 1 atm et pH7 génère un ΔG°’= -7,3kcal/mol. Aux conditions
réelles intracellulaires (37°C), les concentrations initiales sont [ATP]=6,0X10-8M,
[ADP]=0,10M et [Pi]=0,20M. Dans ces conditions, l’hydrolyse de l’ATP est-elle
spontanée? Justifiez votre réponse.

1.5 pts 6. Régulation de l’ACTase

spts
L’ATP, une molécule modulatrice dont l’indice de Hill est supérieur à 1, régularise l’enzyme
aspartate carbamoyltransferase (ACTase).

(1 pt) a. La vitesse maximale et la concentration du substrat pour laquelle v = 0,5Vm de la réaction

de l’ACTase sont-elle augmentées en présence de l’ATP?

(0,5 pt) b. Quelle est la forme du graphique de vitesse en fonction de la concentration de substrat
pour l’ACTase? En quoi ce graphique diffère-t-il d’une enzyme qui n’est pas régularisée
par un modulateur?

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3 pts 7. Effet du cuivre sur la chitinase
pts
La vitesse de réaction de l’enzyme chitinase est affectée par la présence de métaux comme le
cuivre. Le graphique ci-dessous montre un exemple de données cinétiques de la chitinase
en présence et en absence de cuivre.

0,4
0,35
0,3
1/v (min*L/mol)

0,25
0,2
Sans Cu
0,15
Avec Cu
0,1
0,05
0
-5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4 5
1/[S] (L/mol)

Figure 1: Cinétique de la chitinase en présence et en absence de cuivre

(0,5 pt) a. De quel type d’inhibition s’agit-il? Justifiez votre réponse.

(1,5 pts) b. Quelles sont les valeurs de Km, Vm, Kmapp et Vmapp?

(1 pt) c. Pour un Ki= 0,05mol/L, quelle est la concentration du cuivre?

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3 pts 8. Production de E. coli génétiquement modifié
pts
Vous produisez la bactérie E coli contenant un plasmide recombinant d’intérêt en cuvée et
vous suivez la concentration cellulaire et la concentration de substrat dans le temps. Le
bioréacteur a une capacité de 5L. Vous obtenez les données suivantes (Tableau 2) :

Tableau 2: Suivi de la concentration cellulaire et du substrat suite à la culture en mode cuvée

Temps [X] [S]

h μg/L g/L
0 403 41,25
4 446 39,5
8 493 35
12 2981 30,25
16 22026 25,5
20 162755 18,75
24 1202604 14,75
28 1202604 11,75

(0,5 pt) a. Combien de temps dure la phase de latence?

(1 pt) b. Quel est le taux de croissance maximal de cette culture?

(0,5 pt) c. Quel est le rendement YX/S total de cette culture?

(1 pt) d. Vous décidez de cultiver cette souche bactérienne en mode chemostat dans un bioréacteur
de 100L. Quelle devra être le débit d’alimentation si vous voulez obtenir un taux de
croissance équivalent au taux de croissance maximal calculé en b?

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