Lucrare laborator biofizica

Student: Vicol Andrei- Vlad

Grupa: Fizica medicala, Anul 2

Scopul lucrarii:
Elemente de spectrofotometrie. Analiza experimentala folosind spectrosopia UV/VIS
pentru BSA (bovine serum albumin), HS (human serum) si realizarea spectrului de absorbtie al
pigmentilor din cloroplaste.

Rezumatul lucrarii:
Majoritatea moleculelor de interes biologic absorb radiaţiile electromagnetice din
domeniul UV al spectrului electromagnetic. Spectrele de absorbţie, în domeniul UV, pot fi
folosite pentru determinarea rapidă a concentraţiei şi purităţii acizilor nucleici şi proteinelor
dintr-o soluţie.
Cand lumina interacționează cu materia, poate fi absorbită și, prin urmare, promovează
electronii din starea lor fundamentală în stări excitate, care depind de energia luminii și de
materialul absorbant.

Spectroscopia UV/VIS este o ramură a spectroscopiei care se ocupă cu măsurarea

cantitativă a proprietăților de reflexie sau de transmisie ale unui material (substanță) în funcție de
lungimea de undă si poate determina caracteristica cantitativă și calitativă a substanțelor.

Principiul de functionare al metodei:

Proba este iluminată cu raze electromagnetice de diferite lungimi de undă în vizibil (VIS,
adică diferitele culori) și gamele adiacente, adică ultraviolet (UV). Lumina transmisă este
înregistrată în funcție de lungimea de undă de către un detector adecvat, furnizând spectrul UV /
VIS al probei. Ca urmare, deoarece fiecare substanță absoarbe lumina într-un mod diferit, se
poate identifica substanța.

Transmitanta T (%) reprezinta raportul dintre intensitatea initiala a

fascicului I0 si intensitatea fascicului dupa ce acesta trece prin substanta I.
 Absorbanța A (adimensionala) este definită ca logaritmul
negativ al transmisiei. Absorbția de energie din gama UV/VIS
provoacă tranziții ale electronilor din stări inferioare către stări
superioare neocupate

Legea Lambert- Beer

A – absorbanta
ε – coeficientul de extinctie reprezinta o constanta specifica esantionului care descrie valoarea
absorbita de proba la o lunfime de unda data (L/ (cm*mol) sau Ml (cm*g))
c – concentratia probei (mol/L sau g/ml)
d – lungimea traseului recipientului transparent

Descrierea aparatului experimental:

In scopul realizarii proiectului in cauza se vor volosi un Spectrofotometru UV/VIS si cuve
transparente pentru proba
Spectrofotometrul este un instrument care serveşte la obţinerea spectrelor de emisie sau de
absorbţie ale substanţelor în funcție de lungimea de undă. Spectrofotometrul UV/VIS utilizează
lungimi de undă cuprinse între:
- 185– 400 nm (UV) 
- 400 – 750 nm (VIS)
Spectofotometrul UV/VIS cuprinde:
- o sursă de lumină, 
- un suport de probă (cuvă), 
- un dispozitiv dispersiv pentru a separa
diferitele lungimi de undă a luminii (de
exemplu un monocromator),

- un detector adecvat
(fotomultiplicatoare, emulsii
fotografice, termocuple, celule
fotoconductive, celule pneumatice si celule fotoelectrice în funcie de domeniul spectrului).
 Recipientele transparente pentru proba sunt
confectionate din materiale transparente în domeniul lungimii
de unda utilizate:
 - ultraviolet - cuve din cuar (200 nm – 400 nm)
 - vizibil –cuve din sticla moale sau Pyrex (300 nm – 2,5μm)

Modalitate de lucru:
1. Solventul este adăugat într-unul dintre recipientele transparente dupa care il vom introduce in
spectrofotometrul UV/VIS.
2. Un fascicul de lumină emis de sursa de lumină trece prin cuveta cu solventul.
3. Intensitatea luminii transmise la diferite lungimi de undă este apoi măsurată și înregistrata.
(pentru a ajusta instrumentul să citească 100% transmitanţa pentru absorbanta 0)

4. O probă este dizolvată în solvent și adăugată în cuvă dupa care o vom introduce in
spectrofotometrul UV/VIS.
5. Un fascicul de lumină emis de sursa de lumină trece prin cuvetă cu proba. Când trece prin
cuvetă, lumina este parțial absorbită de moleculele probei din soluție.
6. Se afiseaza in program modificarea intensității luminii la diferite lungimi de undă este
calculată prin raportarea intensității transmise a probei la valorile corespunzătoare etalonului.