LUCRARE DE LABORATOR BIOPOLIMERI SI BIOCOMPOZITE

MATASEA NATURALA. PURIFICARE SI OBTINERE DE SOLUTII.

1. Scopul lucrarii
Purificarea matasii naturale Bombyx Mori, uscarea fibrelor obtinute, dizolvarea
fibrelor in bromura de litiu si obtinerea de solutie de matase.

2. Date de literatura

Compozitie chimica
Matasea naturala este una dintre cele mai vechi fibre naturale cunoscute, folosite in
domenii diferite. Versatilitatea acesteia a transformat-o intr-un candidat excelent pentru
domeniul medical, prezentand un interes deosebit pentru cercetatori, intr-o continua
ascensiune. Coconii obtinuti din viermii de matase contin doua proteine structurale care se
diferentiaza intre ele prin structura chimica, proprietati si provenienta: fibroina si sericina.
Fibroina este formata din doau lanturi cu mase moleculare diferite, unul „heavy” cu o masa
moleculara de cca 325.000 si unul „light” cu o masa moleculara de cca 25.000. Sericina are o
masa moleculara cuprinsa intre 20.000-35.000 si are rolul de a cimenta si unifica lanturile de
fibroina din cocon.
Fibroina reprezinta aproximativ 72-81 % (procenta de masa) din coconul de matase,
sericina 19-28 % in functie de origine si conditiile de cultivare (conditii de hranire a
viermilor). Matasea mai contine si alti component minori precum grasimi , pigmenti,
component minerali sau carbohidrati asa cum se observa in tabelul 1.
Tabel 1. Compozitia coconilor de matase din Bombyx mori
COMPONENT % (PROCENTE MASICE)
FIBROINA 70-80
SERICINA 20-30
GRASIMI SI CEARA 0.4-0.8
CARBOHIDRATI 1.2-1.6
ELEMENTE ANORGANICE 0.7
PIGMENTI 0.2
TOTAL 100

Fibroina este cea mai simpla proteina structurala in ceea ce priveste compozitia si
secventa de aminoacizi. Este o proteina in principal constituita din glicina, alanina si serina in
proportie de 3:2:1. Acesti aminoacizi reprezinta aproximativ 60 % din regiunile cristaline ale
fibroinei si au urmatoarea secventa: Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser

1
 Alti aminoacizi ce contin grupari voluminoase precum arginina, treonina sau tirosina
nu se pot gasi in zonele cristaline, ci numai in cela amorfe ale lantului proteic si au
urmatoarea secventa:
Thr-Gly-Ser-Ser-Gly-Phe-Gly-Pro-Tyr-Val-Ala-Asp-Gly-Gly-Tyr-Ser-Arg-
Arg-Glu-Gly-Tyr-Glu-Tyr-Ala-Trp-Ser-Ser-Lys-Ser-Asp-Phe-Glu-Thr
Fibroina este o proteina insolubila in apa ce contine un numar mare de legaturi de
hidrogen. Orientarea si compozitia moleculara fac ca aceasta sa aiba o structura semi-
cristalina ce contine doua tipuri de structuri cristaline: structuri β antiparalele si spatiori
(structuri β dezordonate).
Morfologia mătăsii poate fi exprimată prin patru tipuri de structuri:
a) primară: structura chimica a aminoacizilor
Este data de tipul de aminoazici si de ordinea repetarii lor. Prin intermediul legături
amidice (CONH), cunoscute ca legături polipetidice, aminoacizi sunt legați de lanțul
polipetidic secvențial.
b) secundară: structura lanțului polipeptidic
Mătasea este formată din aminoacizi simpli, majoritatea au grupări tip hidrocarbură
laterale; astfel se formează legături de hidrogen între lanțurile de polipeptide ce duce la β-
structura în foaie pliată
c) țertiară: structura 3D a lanțurilor polipeptidice
Această structură tridimensională a fiecărei polipeptide este determinată de secvența
de aminoacizi si de tipurile de interactiuni dintre lanturile de aminoacizi.
d) cuternară: structura complexă a proteinei
Mătasea este reprezentată de agregate de lanțuri polipeptidice cu forma unor structuri
β-pliate, poziționate paralel cu axa fibrei

2
 Tabel 2. Compozitia fibroinei din Bombyx mori in aminoacizi (reziduu/1000 g proteina
fibroasa
AMINOACID CANTITATE
Glicina 446.0
Alanina 294.0
Valina 22.0
Leucina 5.3
Isoleucina 6.6
Serina 121.0
Treonina 9.1
Acid aspartic 13.0
Acid glutamic 10.2
Lisina 3.2
Arginina 4.7
Histidina 1.4
Tirosina 51.7
Fenilalanina 6.3
Prolina 3.6
Triptofan 1.1
Metionina 1.0
Cisteina 2.0

Utilizari ale matasei naturale

Fibrele de matase pot fi utilizate in multe domenii precum textile, in scop medical sau
industrial. Matasea prezinta stabilitate foarta buna in multe medii de reactive, in comparatie
cu proteinele globulare, datorita legaturilor extinse de hidrogen, naturii hidrofobe a
proteinelor si cristalinitatii semnificative.
Fibrele de matase sunt lungi, subtiri, usoare si catifelate. Printre proprietatile lor se
numara: termotoleranta, umectabilitatea, afinitatea pentru uscare, bun izolator si luciul
puternic.
Matasea are următoarele proprietăți ce evidențiază o bună biocompatibilitate:
- rezistența mecanică ridicată, auto-asamblarea, flexibilitate progresivă
- biocompatibilitate, nu dau reacții inflamatorii, nu sunt citotoxice
- prelucrarea lor sub diferite forme cu porozitate controlată
- permeabilitate la oxigen și apă
Datorita acestor caracteristici, fibrele de matase se pot utiliza pentru producerea
textilelor, parasutelor, vaselor de sange artificiale, suturilor chirurgicale precum si in multe
alte domenii.

3
 Studii recente asupra fibroinei au demonstrat ca aceasta este una dintre cele mai
promitatoare substante pentru biotehnologii si materiale biomedicale datorita proprietatilor
unice precum: biocompartibilitate buna, permeabilitate buna a oxigenului si vaporilor de apa,
biodegradabilitate, reactii inflamatorii minime, rezistenta microbiana sau compatibilitate cu
sangele. Multe dintre aceste caracteristici ale fibroinei au fost atribuite zonelor amorfe si nu
zonelor cristaline. Fibroina regenerata a fost folosita ca sutura, aditiv pentru mancare sau
cosmetice. Noi domenii de utilizare sunt eliberarea controlata a medicamentelor, lentile de
contact cu permeabilitate pentru oxigen, protectia ranilor, substrat pentru cultura de celule,
imobilizarea enzimelor sau obtinerea de vase de sange artificiale.
Materialele pe baza de fibroina utilizate pentru vindecarea ranilor au avantajul ca
grabesc procesul de vindecare si pot fi usor indepartate fara a rani tesutul nou format. Fibroina
poate fi folosita pentru fabricarea membranelor de separare a mixturilor de apa si alcool. Ea a
fost de asemenea folosita pentru vindecarea arsurilor, pentru formarea tesutului osteogenic
sau pentru refacera articulatiilor genunchiului. Suportul celular matriceal trebuie să permită
atașarea celulară, răspândirea, creșterea și diferențierea celulelor, biointegrarea ansamblului,
rezultând un țesut viabil și biologic functional.
Fibroina din matase are avantajul ca poate fi prelucrata in filme, geluri, pudre sau
spume cu o rezistenta foarte buna. Fibroina pudra a fost folosita pentru obtinerea materialelor
nanocompozite hidroxiaptita-fibroina in scopul de a produce os artificial si radacini dentare.

Aplicatii ale sericinei

In industria textila, sericina este indepartata prin procesul de degumare pe parcursul
procesarii matasii. Sericina a fost considerat un reziduu. In momentul de fata, aceasta proteina
prezinta proprietati biologie utile.
Fiind o proteina hidrofila, sericina se poate gasi in diverse produse cosmetice, de
exemplu: creme, unguente, loțiuni sau geluri, pentru piele, par sau unghii. Detine proprietatea
de hidratare a pielii și de asemenea, are un efect antirid. Produsele ce contin 0,02-20% sunt
folosite pentru intretinerea si menținerea unghiei. Sampoanele, balsamurile de par si produsele
de curatare corporala ce au un conținut de 0,01-2% sericina absorb umiditatea din aer si
previn deteriorarea firului de par.

4
5
3. Partea experimentala
Purificarea matasii naturale din Bombyx mori
Coconii de matase de Bombyx mori se spala cu o solutie de Na2CO3 si NaHCO3 la
fierbere timp de 30 min. Se adauga si dodecilsulfat de sodiu. Operatia se repeta de cel putin 3
ori pentru indeprtarea sericinei. La final se spala bine cu apa distilata pentru indepartarea
completa a sericinei, a dodecil sulfatului de sodiu si se lasa la uscat 24 h in etuva la 60 °C.
In urma acestui proces de degomare rezulta fibra purificata de fibroina care va fi
supusa testelor ulterioare.

Obtinerea solutiilor de fibroina

Datorita gradului mare de cristalinitate si a legaturilor de hidrogen, fibroina este
insolubila in majoritatea solventilor cunoscuti. Fibroina se dizolvă totusi in solutii de bromura
de litiu concentrate (9,5M, 10,5M sau 11M) sau in amestec CaCl2/CH3CH2-OH/H2O.
Fibroina este dizolvata in solutie amestec LiBr sau CaCl2/CH3CH2-OH/H2O (raport
molar-1:2:8) la temperatura de 60°C timp de 2-4h (solutie fibroina 3%). Solutia rezultată este
dializata timp de 4-5 zile pentru inlaturarea ionilor din solutia rezultata si apoi este pastrata in
frigider pentru utilizari ulterioare.

4. Concluzii
Fiecare student va prezenta un referat in care se vor prezenta aspectele teoretice si
practice ale lucrarii de fata. Se vor discuta aspecte legate de purificarea matasii, dizolvarii
fibroinei.

5. Intrebari
- Sa se argumenteze de ce aminoacizii ce contin grupari voluminoase precum
arginina, treonina sau tirosina nu se pot gasi in zonele cristaline, ci numai in cela amorfe ale
lantului proteic.
- Cum credeti ca influenteaza gradul ridicat de cristalinitate proprietatile mecanice?