Testul pentru determinarea anticorpilor antistreptolizina O Reacia ASLO

Informaii generale
Antigenul este reprezentat de un imunogen cu proprieti biologice (toxin, enzim, virus). Ac specifici determin (in vivo sau in vitro) blocarea acestor proprieti. Reacia de neutralizare depinde de aviditatea Ac, adic de viteza cu care Ac se poate combina cu Ag i de gradul de stabilitate a legturii ag-Ac. Neutralizarea efectelor biologice ale Ag se constat numai n cazul n care situsul (toxic sau enzimatic) responsabil de activitatea biologic a Ag este identic cu situsul Ag. n laborator, acest tip de reacie se utilizeaz pentru determinarea Ac antistreptolizin O prin reacia ASLO (etapa final de vizualizare este hemoliza) i pentru identificarea unor virusuri.Testul ASLO este o reacie de neutralizare (inhibare a hemolizei). Se bazeaz pe proprietatea streptolizinei de a produce liza hematiilor de diverse specii. Streptolizina este o hemolizina produs de streptococii de grup A. Majoritatea streptococilor de grup A i civa streptococi de grup C i G produc aceast hemolizin. SLO lizeaz hematiile i are efect citotoxic pentru alte celule cum ar fi neutrofilele, trombocitele i esutul cardiac. Este inactivat de ctre oxigen. Este puternic antigenic determinnd formarea de anticorpi ASLO care ating titruri mari nc de la nceputul complicaiilor. Complexele imune pot precipita n esuturi sau se depun n membrana glomerular din rinichi unde, mpreun cu complementul, produc leziuni . La pacienii infectai, streptolizina O acioneaz ca un antigen fa de care organismul dezvolt un rspuns umoral specific (antistreptolizina O=ASLO). Nivelurile anticorpilor devin detectabile in 1-2 sptmni de la infecia streptococica i ating un maximum dup 3-6 sptmni; dac nivelurile ridicate persist dup 6 sptmni sau chiar se nregistreaza o cretere a acestora se va suspecta o reinfecie. ASLO este un test calitativ i cantitativ pentru explorarea strii de imunitate antitoxic fa de toxinele streptococului. Testul este bazat pe reacia de aglutinare permind stabilirea diagnosticului anginei streptococice sau de infecii streptococice, ca i a celui de reumatism articular acut (RAA).Meninerea titrului ASLO crescut chiar i la cteva luni dup puseul reumatismal permite stabilirea diagnosticului retrospectiv al bolii.

Principiul metodei Reactivul folosit este o suspensie de particule latex de polistiren ncrcate cu streptolizina O stabilizat. Reactivul a fost astfel preparat nct, n prezena unui titru ASLO normal de 200 UI/ml sau mai crescut, s dea o aglutinare vizibil a particulelor latex, fr diluarea serului. Reactivii folosii sunt :un flacon cu reactiv latex de 5 ml , un flacon cu control pozitiv de 1 ml , un flacon cu control negativ de 1 ml i o plcu pe care se efectueaz reacia.
Materialul biologic Pacientul trebuie sa faca acest test jeun , fiind recoltat sange venos ntr-un vacutainer fr anticoagulant cu/fr gel separator. Serul de cercetat trebuie s fie clar i proaspt. Plasma, serul lipemic ori contaminat poate determina erori n obinerea rezultatelor. Dac testul nu poate fi efectuat imediat, atunci serul se pstreaz la 2-8 C,maximum 72 ore. Pentru o perioad mai ndelungat serul trebuie s fie pstrat congelat.

Observaii
Reactivii conin azid de sodiu ce se poate combina cu Cu i Pb, putnd asfel deveni explozibili. Controlul pozitiv i negativ a fost preparat din ser uman care a fost testat folosind metoda liceniat FDA i s-a demonstrat c nu reacioneaz cu anticorpii pentru AgHBs i HCV. Toate probele umane pot fi considerate potenial infectate. Reactivii i controalele sunt stabile pn la data expirrii, dac sunt pstrate la temperatura de 2-8C. Reactivii nu se pstreaz la congelator.

I. Testul ASLO calitativ

Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei naintea folosirii cu 30 min. Se pun 2 picturi (50 l) de control (+) n unul din cercurile plcuei de testare. Se pun 2 picturi (50 l) de control (-) n al doilea cerc. Cu o pipet se pun cte o pictur de ser (45 l) din fiecare prob n cercurile urmtoare. Se agit uor suspensia de reactiv latex i se pune n fiecare cerc folosit cte o pictur de reactiv. Pentru omogenizare se folosete un beior pentru fiecare test n parte. Se rotete plcua 2 min i se citete aglutinarea imediat lng o surs de lumin.

II. Testul ASLO cantitativ

Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei, nainte de folosire cu 30 min. Se dilueaz probele 1/2; 1/4; 1/8 1/16 n soluie salin izotonic. Se pot face diluii i mai mari dac este necesar. Se pune 1 pictur (45 l) din fiecare diluie n succesiunea de cercuri ale plcuei de testare. Se agit reactivul latex i se adaug o pictur de reactiv n fiecare cerc de testare. Se omogenizeaz cele dou picturi folosind un beior pentru fiecare prob. Se rotete uor placa 2 min. i se citete rezultatul imediat n dreptul unei surse de lumin.

Interpretarea testului
Reacia ASLO negativ: obinerea unei suspensii lptoase, fr aglutinare, ca cea observat la controlul negativa. Reacia ASLO pozitiv: obinerea unei aglutinri observat n cercul probei asemntoare cu cea observat la controlul pozitiv. Reacia ASLO indic starea de imunitate antitoxic fa de streptococ. Valori normale: ntre 0-200 UI/mL Valori crescute: I. > 200 UI/mL . La pacienii care au avut n ultimele trei luni o angin streptococic sau alte infecii streptococice II. > 300 UI/mL .n infecii streptococice: glomerulonefrit acut streptococic, scarlatin, purpur reumatoid III. 600-2500 UI/mL. n reumatismul articular acut, reacia ASLO ajut n stabilirea diagnosticului retrospectiv al bolii, deoarece titrul anticorpilor antistreptolizin O se menine crescut timp de cteva luni dup puseul reumatismal acut. Titrul ASLO crete odat cu evoluia puseului reumatismal. Reacia ASLO este pozitiv n stenoz mitral, amigdalit acut streptococic, endocardita streptococic lent, ns titrul ASLO poate fi crescut i la unii purttori sntoi de streptococ betahemolitic grup A.

Surse de eroare
-Beta-lipoproteinele din serul pacienilor cu boli hepatice neutralizeaz proprietile hemolitice ale streptolizinei O, determinnd obinerea de rezultate fals crescute. - In cazul specimenelor de ser contaminate cu Bacillus cereus sau Pseudomonas, betalipoproteinele existente n produii de cretere bacterieni neutralizeaz proprietile hemolitice ale streptolizinei O, determinnd obinerea de rezultate fals crescute. - In cazuri foarte rare, prezena gamapatiei monoclonale, n special IgM (macroglobulinemia Waldenstrm) poate determina rezultate eronate. -Numai 25 % dintre pacienii cu streptococie cutanat au titrul ASLO crescut. La aceti pacieni se recomand determinarea anticorpilor anti-DNAaza B. - Tratamentul antimicrobian suprim rspunsul umoral fa de streptolizina O, de aceea testul nu este indicat la pacienii care au primit recent antibiotice.