Informe de resultados del examen prctico de Microbiologa Pruebas con la cepa del alumno (Klebsiella penumoniae)

Aislamiento de cultivo, agotamiento por estra

Medios y reactivos: Agar nutritivo en placa de 90 mm Mtodo: Se toma la placa con agar nutritivo y con un rotulador, sobre la base de la placa, se divide en cuartos que se numeran del 1 al 4. Se toma la cepa y se siembra en la placa (en este caso Klebsiella pneumoniae) con un asa curva haciendo una estra en el primer cuarto, luego se esteriliza el asa, y despus de enfriarla, se pasa por el final de la estra del primer cuarto y se hace una nueva estra en el 2, y as sucesivamente hasta llegar al 4. Luego se incuba durante 24h a 37 C. Incidencias: Hubo un error en la siembra y se hizo una estra por toda la placa. Adems, el agar nutritivo se proporcion en tubos, por lo que se fundi en bao mara y se paso a la placa de 90mm

Pruebas bioqumicas: KIA

Medios y reactivos: Tubo de agar hierro de Kligler en slant Objetivo: Observacin de la capacidad de fermentacin de glucosa y lactosa, adems de la produccin de H2S. Mtodo: Hacer una siembra tanto en superficie como por picadura con un asa recta, dejndolo incubar despus 24h a 37 C Resultados e interpretacin: La zona del pico adquiri una coloracin anaranjada amarillenta mientras que la base permaneci roja. El cambio de color del medio se debe a la capacidad de la bacteria de fermentar tanto lactosa como glucosa, lo que produce una variacin de pH que es lo que motiva el cambio de color. La ausencia de burbujas y de ennegrecimiento determinan que no produce gases ni H2S. Incidencias: La picadura no fue lo suficientemente profunda, por lo que en la base no se produjeron cambios.

Pruebas bioqumicas: Catalasa

Objetivo: Determinar si la bacteria de la cepa posee la enzima catalasa. Mtodo: Tomar con un asa curva una pequea muestra de la cepa y depositarla sobre un portaobjetos de vidrio, despus, depositar 2 3 gotas de H2O2 al 10% sobre la misma y observar, si produce burbujas o no. Resultados e interpretacin: Hubo burbujeo al realizar el ensayo por lo que la cepa posee la enzima catalasa.

Pruebas bioqumicas: Oxidasa

Medios y reactivos: Reactivo de Kovacs Objetivo: Determinar si la cepa bacteriana posee la encima oxidasa. Mtodo: Coger el reactivo de Kovacs (solucin acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina) y depositar 1 2 gotas en un papel de filtro, sobre el que se depositar una pequea muestra de la cepa bacteriana tomada con un asa curva si la prueba es positiva torna a un color azulado, en caso contrario, no se produce cambio. Resultados e interpretacin: El reactivo no cambio de color, por lo que la prueba es negativa.

Pruebas bioqumicas: Fermentacin de lactosa y produccin de gas en medio lquido

Medios y reactivos: Tubo de caldo lactosado con campana de Durham con rojo de fenol como aditivo. Objetivo: Determinar si la cepa es capaz de fermentar la lactosa y adems, produce gas al hacerlo. Mtodo: Tomar una muestra de la cepa con asa curva y depositarla en el tubo, despus incubar a 37 C durante 24h. Incidencias: Hubo un error en la eleccin del aditivo, utilizando rojo de metilo en lugar de rojo de fenol, por lo que no se aprecia si la bacteria utiliza la lactosa o no. Resultados e interpretacin: Por el error mencionado el tubo mantiene el color rojo del aditivo, adems, no se observan burbujas en la campana de Dirham, por lo el resultado es negativo en produccin de gas

Prueba de movilidad en la cepa de K. pneumoniae por la tcnica de la gota suspendida

Objetivo: Determinar si la cepa posee movilidad y si es de tipo browniano o vital (o ambas) Mtodo: Se toma un cubreobjetos al que se le untan los bordes de un lado con una pequea cantidad de vaselina y se coloca con el lado untado hacia arriba sobre la mesa del laboratorio. Despus se deposita una muestra de la cepa con un asa curva en el centro del cubreobjetos y se le aade una pequea gota de 2%d de carboxil-metilcelulosa disuelta en sacarosa 0,2 molar que se extiende con ayuda del asa. Despus se coloca con cuidado un portaobjetos con uno de los lados excavado sobre el cubreobjetos (lgicamente el lado excavado hacia abajo) con cuidado de que la gota no se adhiera al

portaobjetos y se voltea. Despus se observa al microscopio empezando por el objetivo de 4x. Resultados e interpretacin: Fundamentalmente se detecto un movimiento vibratorio (browniano) en la cepa, pero despus de un rato de observacin, una bacteria cruzo la pantalla del objetivo, demostrando as movimiento vital.

Anlisis de aguas
Anlisis de aguas: Recuento de esporas de clostridios sulfitoreductores. (Muestra A)
Medios y reactivos: Agas SPS en tubos de 50 ml Objetivo: Hacer un recuento de esporas de clostridios sulfito-reductores en la muestra de agua proporcionada. Mtodo: 20 ml del medio se depositan en un tubo de 50 ml. En el momento de realizar el ensayo el medio se debe fundir en bao mara. Para destruir las formas vegetativas, la muestra de agua se debe calentar hasta 80 C durante 5 minutos, bajando la temperatura aproximadamente a 60 C despus. Posteriormente sembrar el tubo con 20 ml del agua a 60 C y homogeneizar, para despus enfriar rpidamente bajo el grifo. Cuando el medio consolide, incubar a 37 C durante 48 horas, haciendo un recuento preliminar a las 24h. Resultados e interpretacin: Las colonias de clostridios aparecen de color negro por la formacin de sulfuro de hierro. La lectura preliminar a las 24h no dio resultados, ya que haba completa ausencia de colonias con coloracin negra. La lectura a las 48h dio un resultado positivo, pero incontable debido a la abrumadora cantidad de colonias negras presente.

Anlisis de aguas: Investigacin de la presencia de bacterias del gnero Salmonella. (Muestra A)

Medios y reactivos: Caldo EE en tubo. Objetivo: Determinar si existe presencia de bacterias del gnero Salmonella en la muestra proporcionada. Mtodo: Tomar con una micropipeta un mililitro del agua de muestra y vaciar en el tubo con el medio. Dejar incubar durante 24h a temperatura ambiente. Resultados e interpretacin: Las bacterias del gnero Salmonella pertenecen a las Enterobacteriaceas, por lo que el caldo EE es un medio adecuado para su desarrollo. La presencia de turbidez en el medio, delata su presencia. Incidencias: Inicialmente se iba a utilizar agar verde brillante como medio para este ensayo, pero al no disponer de l, se dispuso utilizar caldo EE como una alternativa viable.

Parmetros a aplicar: Resultado Esporas de clostridios Sulfito-reductores: Salmonella: Lmites legales

Incontables Positivo

0 UFC/100 ml Negativo

Los valores paramtricos han sido tomados del Anexo I del Real Decreto 140/2003 sobre los criterios sanitarios de calidad de aguas de consumo humano, de los que se saca que el agua sometida al anlisis no es potable.

Anlisis de aguas: Recuento de coniformes fecales en una muestra de agua embotellada. (Muestra B)
Medios y reactivos: Placa de FC agar con cido roslico al 1%. Objetivo: Determinar la presencia de coniformes fecales en una muestra de agua embotellada y, de existir, hacer un recuento de las colonias desarrolladas. Mtodo: Se utiliz el llamado mtodo de filtracin de membrana. Consiste en utilizar un equipo de filtracin al vaco y, en lugar de utilizar un filtro convencional, utilizar un filtro de nitrato de celulosa. Para ello, primero se debe montar el equipo, en este caso se dispona de una rampa de filtracin. Se coloca la parte inferior del equipo en una de las trompas, luego se deposita con sumo cuidado el filtro y, sobre el, la parte superior del equipo, afianzndolo con una pinza, posteriormente se pone en marcha la rampa y se deposita una cantidad no inferior a 30 ml del agua de muestra, Despus, se desmonta el equipo retirando el filtro de nuevo con sumo cuidado sobre la placa con el medio procurando que se adhiera bien. Luego se deja incubar a 44C durante 24h. Resultados e interpretacin: Las colonias de coniformes fecales tornan a un color azul claro al desarrollarse en este medio debido al cambio de pH. En este caso hubo una total ausencia de coliformes fecales. Parmetros a aplicar: Resultado Coniformes fecales: 0 UFC/100ml Lmites legales 0 UFC/100ml

Los valores paramtricos han sido tomados del Anexo I del Real Decreto 140/2003 sobre los criterios sanitarios de calidad de aguas de consumo humano, de los que se saca que, para este parmetro, el agua sometida al anlisis es apta para el consumo humano.

Anlisis de superficies: Determinar la presencia de mohos y levaduras en una muestra tomada en el suelo del aula.
Medios y reactivos: CGA en placa y solucin de Ringer. Objetivo: Observar si existe presencia de colonias de mohos o levaduras en una muestra tomada con un hisopo en una superficie de 10x10 cm. Mtodo: Con una plantilla metlica cuadrada con un rea interior de 10x10 cm, se delimita la zona de muestraje, que se toma con un hisopo humedecido en Ringer, cubriendo la zona entera pasando el hisopo por el suelo una vez en cada direccin (4 en total). Despus depositar el hisopo en el tubo con la solucin Ringer durante 10-15 minutos. Mientras tanto, el CGA, que estaba en tubo, se fundi en bao mara y se pas a placa de 90mm. Una vez solidific el CGA y pas el tiempo necesario el hisopo dentro del Ringer, se hizo una siembra en csped sobre el CGA con un asa de Digralsky, para luego dejar incubando durante 72h a temperatura ambiente. Resultados e interpretacin: No hubo crecimiento de ningn microorganismo en el medio CGA, por lo que no hay presencia de hongos y levaduras. Incidencias: El medio se proporcion en tubo, por lo que se fundi en bao mara y luego se pas a placa de 90 mm.