Morfologa Bacteriana

Coco: esfrica; pueden agregarse en pares (diplococo), en cadena (estreptococo), en racimos (estafilococo), en ttrada o sarcina. Bacilo: en forma de bastoncillo; puede tender a ser esfrico (cocobacilo) o alargado (bacilo fusiforme). Espirilo: en forma helicoidal Vibrio Espiroqueta: en forma de tirabuzn

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Tincin de Gram
Primer colorante (cristal violeta): bsico, en contacto con las bacterias cargadas negativamente reacciona colorendolas. Solucin mordiente (Yodo de Gram): fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las bacterias. Agente decolorante (alcohol-acetona): disolvente orgnico que se utiliza como lavado para eliminar colorante no fijado. Colorante de contraste (safranina): colorante bsico de distinto color al primer colorante. Bacterias Gram (+) se tien de prpura por el cristal violeta y retienen la coloracin por su gruesa capa de peptidoglicanos. Bacterias Gram (-) perdern la coloracin inicial del cristal violeta por su delgada capa de peptidoglicanos y se teirn de rojo debido a la safranina.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Tincin de Anthony
Las cpsulas no se tien normalmente con colorantes bsicos como el cristal violeta o la safranina. Tincin negativa de cpsulas en que la leche litmus se tie con violeta cristal como contraste de un fondo morado con el halo transparente de la cpsula incolora.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Tincin de Meller
Las esporas permiten a las bacterias pasar a un estado latente en condiciones ambientales adversas. Su principal componente es Ca2+ fijado a cido dipicolnico. El calor despus de la tincin con carbol-fuscina con permite que rompa la estructura que protege la espora para que as pueda penetrar el colorante. Con el lavado de agua se retira todo tinte que se adhiri a la bacteria, para despus teirse con azul de metileno. Resalta de color rojo la espora y de color azul, la bacteria.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Mtodo de estras y vertido

El mtodo de estras es el ms utilizado para el aislamiento de colonias bacterianas. Mtodo rpido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inculo sobre un medio slido para obtener un nmero reducido de bacterias distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa de Petri que al incubar, cada una originar una colonia. El mtodo de vertido es el ms utilizado para el recuento bacteriano, es importante el conteo de colonias para conocer la velocidad con que se reproducen y calcular el nmero de bacterias por volumen de solucin (UFC: unidades formadoras de colonias).

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Antibiograma Mtodo de difusin en plato

La bacteria inoculada se enfrenta sobre la superficie del medio de agar a una solucin antibitica absorbida en discos de papel de filtro o en pastillas. El medio de cultivo ms frecuentemente empleado es el de Meller-Hinton. Su pH debe estar entre 7,2-7,4 y grosor entre 4-6 mm. El inculo bacteriano debe tener una turbidez similar al 0,5 de la escala de McFarland y la inoculacin se debe efectuar con hisopo de algodn estril. La lectura se realiza entre 18-24 h, adecuado nicamente para bacterias patgenas de rpido crecimiento.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Antibiograma Mtodo de dilucin en plato

Los mtodos de dilucin pueden realizarse en medio slido (en agar) o en medio lquido (en caldo). La adaptacin a microplatos de 96 pocillos utilizando volmenes de 50-200 uL permite testar un gran nmero de antibiticos de forma sencilla, rpida y econmica.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Antibiograma E-test
Tcnica que combina los mtodos de difusin en agar y dilucin para determinar la CIM. La sistemtica es similar al mtodo de difusin en agar pero en lugar de discos utiliza tiras de Etest. Estas tiras contienen un gradiente del antimicrobiano en la superficie inferior que difunde en el agar estableciendo un gradiente continuo del mismo a lo largo de la tira. Despus de la incubacin se forma una zona elptica de inhibicin del crecimiento y la CMI corresponde con el punto donde el rea de inhibicin del crecimiento intersecciona con la tira. CIM (concentracin inhibitoria mnima): menor concentracin de antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de una cepa bacteriana dada. CBM (concentracin bactericida mnima): menor concentracin de antimicrobiano capaz de destruir una cepa bacteriana dada.

OTRAS TCNICAS BACTERIOLGICAS

Esta ha sido una produccin ms del Club de Informtica Mdica y Telemedicina, trabajando en pro de la educacin mdica continua, caminando a mano de la tecnologa. Si quiere emitir sus comentarios o sugerencias puede escribirnos a: kativonhe@yahoo.com Agradeceramos mucho su cooperacin envindonos fotos adicionales u otra informacin que desea agregar. ltima actualizacin: febrero

2005

COCOS GRAM (+) PIGENOS DE IMPORTANCIA MDICA

Morfologa de cocos con tincin de Gram Prueba de catalasa Prueba de manitol sal Prueba de coagulasa Prueba de nitrato Prueba de hemlisis en agar sangre Alpha-hemolticos Antibiograma con optoquina Prueba de sales biliares Beta-hemolticos Antibiograma con bacitracina Prueba de CAMP Gamma-hemolticos Prueba de bilis esculina

Morfologa de cocos con tincin de Gram

Los cocos Gram positivos pueden ser: Staphylococcus o Streptococcus

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de manitol sal para Staphylococcus

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento e identificacin de Staphylococcus aureus. NaCl 7,5% le proporciona lo selectivo ya que slo estos microorganismos osmotolerantes u osmfilos pueden multiplicarse en l. Manitol es el nico azcar fermentado por las cepas patgenas de este gnero bacteriano. La produccin de cidos proveniente de la fermentacin del manitol es detectada por el viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. Staphylococcus epidermidis no fermenta el manitol, dar lugar a colonias pequeas rodeadas de un halo prpura.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de catalasa distinguir Staphylococcus de Streptococcus

Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 3% y se producen burbujas de oxgeno. Se emplea para diferenciar el gnero Staphylococcus (catalasa positivo) del gnero Streptococcus (catalasa negativo).

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de coagulasa para Staphylococcus

Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos). La tcnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada. Mecanismo de accin de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo anlogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibringeno formando un cogulo de fibrina en ausencia de Ca2+. La coagulasa ligada o factor de agregacin acta directamente sobre el fibringeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmticos.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de hemlisis en agar sangre

Detecta la presencia de hemolisina, enzima que permite la clasificacin de los Streptococcus en alfa (hemlisis parcial, incompleta que torna color verdoso), beta (hemlisis total) y gamma hemolticos (no existe hemlisis) . Muchas otras bacterias, aparte de los Streptococcus, pueden tener esta enzima como B. megaterium; se usa el cultivo para demostrar el grado de hemlisis (hemlisis beta) en la cual se puede observar claramente por detrs de la siembra.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Antibiograma con optoquina para Streptococcus alfa-hemolticos

Permite diferenciar Streptococcus pneumoniae que es sensible a optoquina (etilhidroxicuprena, Taxo P) de otras especies de Streptococcus alfa-hemolticos, en especial del grupo viridans que son resistentes.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Antibiograma con bacitracina para Streptococcus beta-hemolticos

Permite diferenciar estreptococos beta-hemolticos del grupo A (S. pyogenes), que son sensibles a bacitracina, del resto de estreptococos beta-hemolticos que son resistentes. Solo un porcentaje muy pequeo de Streptococcus de los grupos B, C y G son sensibles a la bacitracina (Taxo A).

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de CAMP para Streptococcus beta-hemolticos

Los estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen una protena difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la beta-hemlisis de Staphylococcus aureus. S. aureus (sembrado desde la parte superior hasta la parte inferior de la placa) produce esfingomielinasa C que se puede unir a las membranas de los eritrocitos. Cuando son expuestas al factor CAMP del grupo B, las clulas sufren hemlisis.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

Prueba de bilis esculina para Streptococcus gamma-hemolticos

Los enterococos crecen en presencia de NaCl 6,5%, toleran las sales biliares y pueden hidrolizar la esculina. Estas propiedades se pueden usar para distinguir los enterococos de otros cocos Gram (+) catalasa-negativos. En la prueba positiva, el tubo torna de color chocolate oscuro, caracterstico al desdoblar la bilis esculina. Enterococcus faecalis es la antigua categora taxonmica para Streptococcus faecalis.

OTRAS PRUEBAS PARA COCOS GRAM (+)

BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Cultivo de Bacillus en medio agar almidn Tincin de Gram y Meller a Bacillus Prueba SIM Prueba de glucosa y salicina Prueba de gelatinasa Prueba de leche litmus Prueba de amilasa

Cultivo de Bacillus en medio agar almidn

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Tincin de Gram y Meller a Bacillus

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Prueba SIM
En el medio de SIM se mide la motilidad de las bacterias, es positiva cuando se existe turbidez en el medio pero negativo, cuando se observa la penetracin del inculo.

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Prueba de glucosa y salicina

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Prueba de gelatinasa
Permite medir la presencia de gelatinasa. Si luego de cierto tiempo de refrigeracin, la gelatina sigue en estado lquido, es indicativo de que la prueba result positiva y por tanto la bacteria tiene gelatinasa al licuar el medio. En este caso, el B. subtilis no posee la enzima gelatinasa, y por ende, el medio se solidific en refrigeracin.

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Prueba de leche litmus

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Prueba de amilasa
Utilizando agar almidn, se siembra el B. megaterium en cuatro puntos equidistantes. Se deja incubar, y luego para definir si hubo o no consumo de almidn, y por ende presencia de amilasa en la bacteria, se aade yodo de Gram. La prueba positiva muestra un halo incoloro en donde hubo crecimiento.

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (+) AEROBIOS

Esta ha sido una produccin ms del Club de Informtica Mdica y Telemedicina, trabajando en pro de la educacin mdica continua, caminando a mano de la tecnologa. Si quiere emitir sus comentarios o sugerencias puede escribirnos a: kativonhe@yahoo.com Agradeceramos mucho su cooperacin envindonos fotos adicionales u otra informacin que desea agregar. ltima actualizacin: febrero 2005

MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

Neisseria gonorrhoeae Tincin de Gram Agar chocolate Thayer Martin Treponema pallidum Tincin argntica de Fontana Candida albicans Tincin de Gram en raspado vaginal

Neisseria gonorrhoeae con tincin de Gram

Es el agente etiolgico de la gonorrea, se trata de co negativos que se disponen en pares (diplococos) cu adyacentes estn aplanadas. No son mviles ni forma endosporas. Son oxidasa positivo y la mayora de e producen catalasa. N. gonorrhoeae es una bacteria exigente, necesita m cultivo complejos para crecer y se puede ver afect manera adversa por la desecacin y por los cidos gra temperatura ptima de crecimiento es de 35 a 37C a una atmsfera suplementada con CO2.

OTROS MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

Medio de agar chocolate Thayer Martin para Neisseria gonorrhoea

Medio enriquecido preparado con un medio base tal tripticasa (TSA) o agar infusin cerebro corazn ( suplementado con sangre animal desfibrinada y ca 80C durante 10 min. A veces el calentamiento exc destruye el factor V (NAD), por lo que se suele adicion factor. Es un medio adecuado para el cultivo de N. go varias especies de Haemophilus, entre otras bacterias

OTROS MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

Treponema pallidum con tincin argntica de Fontana

Es el agente etiolgico de la sfilis, se trata de una ba morfologa de espiroqueta delgada y en forma de e no puede crecer en cultivos acelulares. Las espiroquetas son demasiado delgadas como para microscopio ptico en las muestras teidas con Gram Giemsa. Sin embargo, las formas mviles se pueden v microscopio de campo oscuro o mediante la tincin co anticuerpos especficos antitreponema marcados con fluorescentes.

OTROS MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

Candida albicans con tincin de Gram en raspado vaginal

OTROS MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

Esta ha sido una produccin ms del Club de Informtica Mdica y Telemedicina, trabaja educacin mdica continua, caminando a mano de la tecnologa.

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BACILOS GRAM (-) FERMENTADORES NO FERMENTADORES

Tincin de Gram con Bacilos Gram (-) Medio de agar MacConkey Medio de agar SS (Salmonella, Shigella) Medio de agar EMB (eosin methylene blue) Medio con citrato de Simmons Prueba de urea Prueba SIM (sulfuro indol motilidad) Medio con TSI (triple sugar iron) Prueba de fermentacin de azcares Medio MRVP (rojo metilo Voges-Proskauer) Prueba de fenilalanina Prueba de oxidasa Sistema API para enterobacterias

Tincin de Gram con Bacilos Gram (-)

Las enterobacterias son bacilos cortos gram negativ esporulados, que pueden o no tener motilidad. Son an facultativos o anaerbicos.

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (-)

Medio de agar MacConkey

OTRAS PRUEBAS PARA BACILOS GRAM (-)

MICROBIOLOGA DEL AGUA Y DE LOS ALIMENTOS

Plato Petrifilm Aerobic count plate Coliform count plate Agua peptorada Homogenizador de muestra Stomacher Estudio de lquido Colilert

Petrifilm Aerobic count plate

MICROBIOLOGA DEL AGUA Y DE LOS ALIMENTOS

Petrifilm Coliform count plate

MICROBIOLOGA DEL AGUA Y DE LOS ALIMENTOS

Homogenizador de muestra Stomacher

MICROBIOLOGA DEL AGUA Y DE LOS ALIMENTOS

Estudio de lquido Colilert

En la extrema derecha se puede observar la coloraci fluorescente que responde a la presencia de E. coli en analizada.

MICROBIOLOGA DEL AGUA Y DE LOS ALIMENTOS

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