CUPRINS

CUPRINS...................................................................................................1 1.Introducere..............................................................................................2 2. Prezentarea clasei de enzime din care face parte A.D.H.......................5 3. Descrierea alcooldehidrogenazei...........................................................6 4. Folosirea alcooldehidrogenazei pentru obinerea de arome...................8 4.1. Obinerea de acizi nucleici din drojdii............................................9 4.2. Formarea de compui de arom de-a lungul depozitrii ndelungate la rece n prazul curat i proporionat cu ajutorul alcooldehidrogenazelor..........................................................................9 5. Aplicaii ale alcooldehidrogenazelor....................................................10 5.1. Aplicaii n metabolizri ale alcooldehidrogenazei.......................12 6. Implicarea alcooldehidrogenazei n reaciile de reducere....................13 6.1. Reactia de oxidare a etanolului....................................................14 CONCLUZII............................................................................................15 BIBLIOGRAFIE......................................................................................16

1.

Introducere1

Enzimele sunt catalizatori de natur proteic care faciliteaz transformarea chimic a diferitelor substane. Substana asupra creia acioneaz enzima poart numele de substrat. Compusul sau compuii chimici care rezult n urma aciunii enzimei poart numele de produs (produi) de reacie. Datorit naturii lor proteice, enzimele posed toate proprietile fizico-chimice, specifice acestor macromolecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare termic, reacii chimice etc). Masele moleculare ale enzimelor variaz n limite foarte largi. Cea mai mic enzim, ribonucleaza, are o mas molecular de 13 700. Limita superioar este mai greu de definit, edificiile moleculare mari fiind de fapt asociaii a mai multor subuniti proteice. Solubilitatea enzimelor este asemntoare cu a globulinelor. Ca toate proteinele, enzimele sunt antigeni specifici, provocnd, atunci cnd sunt introduse n sngele unui animal, formarea de anticorpi. Enzimele sunt catalizatori biochimici, specifici vietii, care asigura desfasurarea proceselor metabolice (catabolism si anabolism). Sunt solubile, macromoleculare, de natura organica, termolabile, produse de organismul viu si sunt dependente de anumite conditii de mediu: pH, temperatura, prezenta unor activatori etc. Enzimele pot fi activatoare sau inhibitoare pentru un anumit proces metabolic, dupa cum pot fi si degradatoare ale unor substante (enzime amilolitice, glicolitice, proteolitice etc.), fie in mediul extracelular (exoenzime) cum sunt cele utilizate in industria fermentativa (pepsina, tripsina etc.). nc nainte de izolarea enzimelor n stare pur era cunoscut natura lor proteic. Se tie de mult c enzimele nu sunt dializabile, i deci sunt substane macromoleculare, i c ele sunt inactivate prin nclzire n aceleai condiii n care sunt denaturate proteinele. Acei reactivi care denatureaz sau precipit proteinele inactiveaz fr excepie enzimele. Uneori, denaturarea nsoit de inactivarea enzimelor este reversibil. Prin hidroliza enzimelor se formeaz aminoacizi care se obin i din proteine. S-au msurat greutile moleculare ale multor enzime i s-a determinat succesiunea complet a aminoacizilor din ribonucleaz i din alte enzime. Metodele pentru obinerea enzimelor pure i msurarea greutilor lor moleculare sunt identice acelora folosite la purificarea proteinelor. De fapt, toate enzimele cristalizate obinute pn astzi s-au dovedit a fi fie proteine simple, fie proteide cu o grup prostetic definit. Enzimele pot fi alctuite fie numai din lanuri polipeptidice de aminoacizi i din punct de vedere chimic sunt proteine simple (holoproteine), fie din dou componente (una de natur proteic i alta de natur neproteic - grupare prostetic) i atunci sunt heteroproteide. n structura celor mai multe enzime, pe lng componenta proteic, denumit apoenzim, care este termolabil, cu o mas molecular mare i posed toate proprietile fizico-chimice specifice proteinelor, se ntlnete i o component de natur organic, termostabil, cu o mas molecular mic, denumit cofactor enzimatic.

Dumitru, I., F., Iordchescu, D. - Introducere n enzimologie (Ed. Medical, Bucureti, 1981, pag. 25)

n funcie de tria legturii dintre cele dou componente, cofactorii enzimatici, la rndul lor, pot fi grupai n: grupri prostetice, substane organice fixate pe moleculele ace luiai tip de apoenzim i care nu pot fi separate de acestea; gruprile prostetice sunt legate stabil de apoenzim, formnd cu anumite regiuni ale polipeptidei, situsul activ al enzimei; coenzime, substane organice ce pot trece de la o apoenzim la alta, de care se pot separa relativ uor prin dializ; coenzimele nu repre zint un component stabil al situsului enzimatic. Ele particip la reacii de transfer, fcnd legtura activitilor diferite a dou enzime i formnd un sistem: o enzim transfer o anumit grupare de la un substrat la coenzim, cealalt o transfer de la coenzim la cel de-al doilea substrat. n procesul enzimatic, apoenzim fixeaz substratul condiionnd natura reaciei, iar coenzima desvrete reacia chimic. Spre exemplu, decarboxilazele i transaminazele aminoacizilor au aceeai coenzima i acelai substrat dar activitile lor enzimatice sunt diferite, datorit diferenelor dintre apoenzime. Sunt cazuri cnd coenzima este strns legat de apoenzim de care nu se poate desface dect prin denaturarea acesteia din urm. In alte cazuri, coenzima se desface uor de apoenzim (de exemplu prin dializ), avnd drept consecin inactivarea enzimelor din unele preparate biologice dializate. activatori, substane nespecifice (ioni metalici, ageni reductori tori etc.) care mediaz trecerea enzimei dintr-o stare inactiv (zimogen) ntr-o stare catalitic activ. Nu totdeauna este posibil o strict delimitare ntre coenzime i grupri prostetice, pe de o parte, i ntre cofactori i substrat, pe de alta. Dac exist exemple tipice de coenzime (NAD+, NADP+), sau de grupri prostetice (piridoxal-5'fosfat), n cazul unor flavinenzime, cofactorul poate fi puternic legat de apoenzim, asemenea unei grupri prostetice sau legat, labil, asemenea unei coenzime. n cadrul interaciei dintre enzima (E) i substrat (S), n structura macromolecular a enzimei se disting nite grupri de fixare, care leag substratul, participnd ntr-un fel sau altul la actul catalitic. n imediata vecintate, pot exista gruprile auxiliare, care dei nu realizeaz un contact direct cu substratul pot influena mecanismul de reacie prin diferite interacii electronice. Mai exist aa numitele grupri conformaionale, situate la distan de centrul catalitic activ, dar care au un rol important n meninerea conformaiei native a enzimei, deci i n meninerea structurii deosebit de reactive i instabile a centrului catalitic activ. Geometria centrului activ trebuie s fie complementar cu cea a substratului natural a crui transformare o catalizeaz, s-i permit ptrunderea" n cavitate i stabilirea legturilor n vederea formrii complexului enzim- substrat. (Figura 1).

Figura 1 Formarea Complexului enzim-substrat Astzi, se cunosc cinci tipuri de legturi care apar n formarea complexului Michaelis deci n legarea substratului la centrul activ al enzimei. Legtura coordinativ, realizat prin punerea n comun a electronilor neparticipani ai unui donor (azot, oxigen) posed caracterul i energia legturilor covalente i apare numai n cazul catalizei enzimatice n care sunt implicate metalele (metaloenzime sau enzime activate de metale n care efectorul particip la formarea complexului enzim-substrat). Legtura de hidrogen se realizeaz prin atragerea electrostatic a hidrogenului de ctre electronii neparticipani ai fluorului, oxigenului sau azotului i apare att ntre gruprile amidice ale catenei polipeptidice, contribuind la formarea helixului, ct i ntre gruprile polare ale resturilor de aminoacizi hidrofili. Deoarece majoritatea gruprilor polare ionizeaz la pH fiziologic (Lys, Arg, Asp, Glu), acestea pot dezvolta fore de atracie electrostatic fa de substratele ionizate. Interaciile hidrofobe sau forele Van der Waals sunt realizate de catenele laterale alifatice sau aromatice ale resturilor de aminoacizi i apar n special la substratele de natur lipidic sau steroidic. Ultimele fore de legare ntre centrul activ i substrat i au originea n faptul c atunci cnd o molecul este bogat n electroni i are n imediata apropiere o alt molecul srac n electroni are loc un transfer de sarcin, cnd se formeaz un ansamblu polarizat i o for de legtur care unete cele dou molecule. De obicei electronii din dublele legturi sau din inelele aromatice sunt transferai unor acceptori de electroni. n enzime, gruprile capabile de a stabili acest tip de legturi sUnt gruprile carbonil ale amidelor, resturile aromatice Phe, Tyr i Trp. De asemenea, n reaciile redox n care sunt implicate NAD i FMN apar compleci prin transfer de sarcin.

2. Prezentarea clasei de enzime din care face parte alcooldehidrogenaza Oxidoreductazele pot interveni pozitiv n: procese metabolice anaerobe sau aerobe ca, de exemplu, glicoliza i diferite fermentaii, ciclul acizilor tricarboxilici, catena de respiraie celular etc, procese care se desfoar n diferite materii prime alimentare (intervin oxidoreductazele proprii esuturilor respective); procese fermentative de obinere a unor produse alimentare, care se realizeaz cu ajutorul unor microorganisme; procesul de albire (decolorare) a finurilor de gru; protejarea fa de deteriorarea mbrunrii de tip Maillard; distrugerea apei oxigenate reziduale din produsele alimentare, n care s-a folosit n scopuri de conservare. Oxidoreductazele pot interveni negativ n: mbrunarea neenzimatic; degradarea acidului ascorbic; deteriorarea oxidativ a unor produse alimentare. Clasa oxidoreductazelor n care intr i dehidrogenazele, cuprinde enzimele ce catalizeaz reaciile redox. In vivo, ele sunt implicate n multe ci metabolice i n transformrile energetice din celul. Dar, pentru manifestarea activitii catalitice este necesar prezena coenzimelor. Unele coenzime cum sunt flavin adenindinucleotid (FAD) i flavin adenin mononucleotid (FMN), sunt legate de enzim. Spre deosebire de acestea, nicotin-adenindinucleotidul (NAD) i nicotinamid dinucleotid fosfatul (NADP), exist n cea mai mare parte a cazurilor, ca o component solubil a enzimei. Majoritatea dehidrogenazelor utilizate n biotransformri sunt NAD(P)H dependente.

Figura 2 - Reacia de reducere catalizat de dehidrogenazele NAD(P)H dependente. n Figura 2 este prezentat schema de reacie tipic pentru obinerea alcoolilor chirali. n timpul reducerii compuilor carbonilici, cofactorul pierde un ion hidrur alturi de alcoolul corespunztor obinndu-se deci i NAD(P)+. De aceea n cazul reducerilor enzimatice fie se adaug cofactor n raport stoechiometric cu substratul, fie acesta este regenerat in situ. Cum preul de cost al NAD(P)H este mare, n practic se prefer cea de a doua metod. n prezent sunt disponibile peste 650 de enzime din aceast clas, astfel nct aproape fiecare aldehid sau ceton poate fi redus enzimatic sau microbiologic.

3. Descrierea alcooldehidrogenazei

Descrierea compusului: S alcool: NADP oxidoreductaz Denumirea sistematica a oxidoreductazelor se alcatuieste prin includerea denumirii donorului si acceptorului de hidrogen urmata de termenul oxidoreductaza (donor:acceptor-oxidoreducatza). Atunci cand acceptorul de hidrogen este oxigenul se foloseste termenul de oxidaza. De exemplu:denumirea sistematica a alcooldehidrogenaza este: ALCOOL:NAD+ - OXIDOREDUCTAZA (E.C 1.1.1.1). Reacii: aceton + NADPH = 2 propanol + NADP Specificitatea substratului: aceast enzim are un substrat foarte bine dezvoltat care conine alcooli lineari i alcooli primari, liniari i ciclul alcoolilor secundari, liniari i ciclul cetonelor i acetaldehidele. Valoarea KM: 0.5 NADH PH ul optim: 8.5 la oxidare Masa molecular: 37 kDa Activitate: 150 U/ml la 45 C cu un substrat de aceton Formulare: n glicerol Stabilitate: la 20 C Comentarii: este o enzim foarte termostabil. Are o mare stabilitate i la temperatura de 86 grade Celsius timp de 70 minute, dar este repede denaturat la fierbere. Definiia unitii: o unitate reduce 1,0 micro moli de aceton la 2-propanol / minut la 45C n prezena NADPH.

Stabilitatea enzimei T1-ADH dup 48 de ore de incubaie. O soluie de enzim de puritate 0.1 M TEA-Buffer a fost incubat la temperaturi diferite, i activitatea ei a rmas ca i n condiiile iniiale. Alcooldehidrogenaza este un grup al enzimelor dehidrogenaze care se gsesc n multe organisme i i faciliteaz conversia dintre alcooli i aldehide sau cetone. n organismul uman i n cel al animalelor, ele au rolul de a rupe legturile dintre alcooli

care pot s fie de altfel toxici; n drojdii i n alte multe bacterii ele catalizeaz reaciile opuse ca parte a fermentaiilor. Numrul E.C. al enzimei este: 1.1.1.1; iar numrul CAS este 9031-72-5. n drojdii i bacterii: n acestea alcooldeidrogenaza are un rol important n fermentaie rezultnd piruvat prin glicoliz i este convertit n acetaldehid i dioxid de carbon, i acetaldehida este redus la etanol de alcooldehidrogenaz. Alcoolodehidrogenaza n drojdii au o importan mult mai mare dect n organismul uman. Conine zinc n partea catalitic. 2 Alcooldehidrogenaza poate fi extras din ficat de cal i din drojdia de panificaie. Poate funciona n dou sensuri: reducerea cetonelor n aldehide, a aldehidelor n alcoolii sau oxidarea alcoolilor n aldehidele corespondente. ntervine n procesul de fabricare a oetului de vin de ctre bacteriile acetice, care transform alcoolul etilic n aldehid acetic i apoi acid acetic i la obinerea compusilor de arom (acetaldehide) n cazul unor produse lactate acide. Alcooldehidrogenaza CH3 CH2OH CH3 CH=O + Enzim H2 + Substrat redus + NAD Substrat oxidat + NADH + H+
H C = C NH2 N+ R O N R 2H(2e + 2H )
+

C NH2
O

Forma oxidat Forma redus n piridinucleotidele NAD i NADP transferul unui atom de hidrogen se face la nivelul nucleului pirimidinic n poziia para, iar un alt atom de hidrogen trece n soluie sub form ionic. Coenzimele pot fi uor reduse i din nou oxidate, fie pe cale enzimatic cu participarea unor dehidrogonaze specifice, fie pe cale chimic sub influena unor ageni oxidani sau reductori. Forma redus a coezimelor este relativ stabil n soluii alcaline, ns foarte labil n soluii acide, n timp ce forma oxidat este labil n soluii alcaline i stabil n soluii acide.

4. Folosirea alcooldehidrogenazei pentru obinerea de arome

2

Banu, C. - Biotehnologii in industria alimentara (Editura Tehnica, Bucuresti, 1987, pag 52)

Alcooldehidrogenaza este o enzim care funcioneaz cu un cofactor i poate fi extras din ficat de cal i din drojdia de panificaie (industrial). Alcooldehidrogenaza poate funciona n dou sensuri : reducerea cetonelor n aldehide, a aldehidelor n alcooli; oxidarea alcoolilor n aldehidele corespondente.

Folosirea alcooldehidrogenazelor la nivel industrial este costisitoare i dificil din punct de vedere economic i dificil din punct de vedere al regenerrii cofactorilor implicai n activitatea enzimei. Practic, alcooldehidrogenaza s-a folosit pentru transformarea alcoolului etilic n acetaldehid, care este o substan de arom important n cazul unor produse lactate acide (iaurt). Ca surs de enzim s-a folosit drojdia de panificaie proaspt, care s-a adugat n mediul reacional. Temperatura de incubare este de 200 C. Producia de acetaldehid din alcool etilic este un proces complex, implicnd etapele artate n Figura 3. Se observ c n mediu este necesar prezena NAD+, care n timpul reaciei reduce la NADH care, la rndul su, este regenerat prin oxidarea FMN de ctre lumin. FMNH2 redus este apoi oxidat n FMN de ctre O2 molecular. Peroxidul de hidrogen produs va fi, la rndul su, descompus de cataliz n H2O + O2. Nivelul de conversie al alcoolului n acetaldehid este de 10 20 %. n cazul reactorului discontinuu, concentraia de 2,5 g aldehid acetic / l fiind atins dup 9 ore. Asemntor poate fi realizat i conversia transcinamaldehidei n transcinamil alcool de ctre alcooldehidrogenaza din drojdia de panificaie. CH2CHO NADH FMN H2O2

ADH

Lumina

O2

Cataliza

CH3CH2OH

NAD+

FMNH2

O2

H2O

Figura 3 - Oxidarea enzimatic a alcoolului n acetaldehid Ribonucleotidele purinice care au o grupare OH la C6 al heterociclului purinic i o grupare fosfat la C5 din riboz manifest proprietatea de a funciona ca poteniatori de arom. n categoria acestor ribonucleotide intr acidul inozinic (IMP), guanilic (GMP) i xantinic (XMP), n special IMP i CMP sub forma srurilor disodice.Producerea industrial de IMP i GMP sub forma srurilor disodice implic dou operaii : obinerea de acizi nucleici din drojdii; hidroliza enzimatic a acizilor nucleici.

4.1.Obinerea de acizi nucleici din drojdii.3 Drojdiile conin 7 15 % acizi nucleici, majoritatea fiind acizi ribonucleici (ARN) i numai a 50-a parte din acetia sunt acizi dezoxiribonucleici (AND). Pentru obinerea acizilor nucleici se poate aplica urmtoarea tehnic: celulele de drojdie sunt suspendate ntr-o soluie de Na-dodecilsulfat 2 % + alcool etilic 4,5 % + tampon NaH2PO4 (0,0125 M) n raport 1/3 (g/vol). Suspensia se trateaz la 83 870 C, sub agitare timp de cteva minute, dup care se rcete la 4 0 C i se centrifugheaz. Supernatantul se precipit cu 2 volume alcool etilic la rece, se centrifugheaz i precipitatul se spal cu alcool etilic 70 %. Precipitatul splat se suspend n alcool etilic 80 %, iar dup separarea centrifugal se dizolv n ap. Se adaug NaCl pentru a se ajunge la 1 M n soluie i se las la rece. Gelul format se separ prin centrifugare, se precipit cu alcool etilic i, dup separare, precipitatul se dizolv n ap. Hidroliza enzimatic a acizilor nucleici se face cu RNA-aza izolat din Penicillium sp. la 50 550 C (se folosete o soluie care conine 4 % RNA). Prin hidroliz se obin 5 AMP; 5 GMP; 5 UMP. n continuare se face hidroliza cu 5 AMP dezaminaz produs de Aspergillius sp. care transform 5 AMP n 5 IMP. Nucleotidele astfel obinute pot fi separate prin cromatografie pe schimbtori de ioni tip Dowex (200 400 mesh), randamentul fiind 16 % pentru 5 IMP i 5 GMP fa de RNA folosit. 4.2. Formarea de compui de arom de-a lungul depozitrii ndelungate la rece n prazul curat i proporionat cu ajutorul alcooldehidrogenazelor. Compuii de arom i activitatea catalitic a alcooldehidrogenazelor a fost studiat n bucii de praz curat i proporionat de dimensiunile 4 15 mm, acestea fiind mpachetate n atmosfer modificat de aer pentru 4 i 15 mm, i azot pentru 15 mm, fiind depozitate de 7 ori timp de 12 luni. Aceti compui de arom s-au format datorit timpului ndelungat de pstrare, datorita ambalajelor i modului n care a fost ambalat adic n atmosfer controlat (concentrare la rece bucii de 4 mm = 17.8 mg/L, 4-mm 12M = 3.48 mg/L, bucii de 15-mm = 2.48 mg/L, 15-mm 12M = 0.418 mg/L i 15-mm N 12M = 1.81 mg/L). Cele mai bune rezultate au fost obtiunte la buciile de 4 mm dup 12 luni de refrigerare (o concentraie de alcooldehidrogenaze de 9.28 mg/L) comparate cu buciile de 15 mm tot timp de 12 luni (6.49 mg/L).

www.unibuc.ro/eBooks/biologie/drojdii/12.html

5. Aplicaii ale alcooldehidrogenazelor4 5.1. n evoluia alcoolilor de sintez:

5.2. O alt aplicaie foarte important este n refrigerarea cpsunilor pentru a le pstra aroma. Aici alcooldehidrogenaza care acioneaz la pH de 6.0 datorit activitii enzimatice ale enzimei a determinat scderea compoziiei de metale i a EDTA ului. 5.3. Reducerea etanolului la acetaldehid cu ajutorul alcool dehidrogenazei, conform reaciei:

5.4. Aplicaie n metabolismul celular al etanolului:

http://www.worthington-biochem.com/ADH/default.html http://www.pdb.org/pdb/101/motm.do?momID=13 http://www.organic-chemistry.org/chemicals/reductions/alcoholdehydrogenase-adh.shtm http://en.wikipedia.org/wiki/Alcohol_dehydrogenase

10

5.5. Aplicaie n expertiza solului: Expertizele biologice asupra solului s-au realizat pentru determinarea respiratiei solului, puterii amonificatoare, activitatii catalazice, activitatea dehidrogenazica actuala, activitatea dehidrogenazica potentiala. n luna martie probele de sol s-au prelevat din zonele aval Iaz Meda si amonte - aval Iaz Bozinta. Respiratia solului se exprima prin mg de CO2 produs in 7 zile si determinat prin titrare cu HCl. Valorile au fost in general apropiate, cea mai scazuta valoare de 26,4 mg CO2 a fost inregistrata in punctul aval Iaz Meda (0-20cm) , iar cea mai ridicata de 48,4 mg CO2 in punctul aval Iaz Bozinta (0-20 cm). Activitatea bacteriilor capabile sa mineralizeze compusii organici cu azot a avut valori cuprinse intre 2,72% mg NH3/100g in punctul aval Iaz Bozinta (20-40 cm) si 6,81 mg NH3/100g sol in punctul amonte Iaz Bozinta (0-20 cm). Determinarea cantitativa a apei oxigenate, nedescompusa prin titrare cu KMnO4 exprima activitatea catalazica. Valorile determinate sint cuprinse intre 119 mg H2O2/100g sol in punctul Amonte Iaz Bozinta (20-40 cm) si 654,5 mg H2O2/100g sol in punctul Aval Iaz Meda (0-20 cm). Activitatea dehidrogenazica s-a urmarit prin incubarea solului in prezenta unui acceptor de hidrogen, TTC. In cursul incubarii TTC,care este un compus incolor, se reduce, sub actiunea hidrogenului transferat de dehidrogenaze, la un compus rosu (formazan). Formazanul se extrage cu etanol si se determina fotocolorimetric. Cu cit este mai mare concentratia formazanului, cu atit este mai intensa activitatea dehidrogenazica. Pentru a obtine valoarea activitatii dehidrogenazice potentiale, solul se composteaza cu glucoza. Valorile obtinute pentru activitatea dehidrogenazica actuala au fost intre 1,56 mgF/100g sol in punctul amonte Iaz Bozinta - Aurul (0-20 cm) si 15,08 mg F/100 g sol in punctul aval Iaz Bozinta - Aurul (20-40 cm). Valorile obtinute pentru activitatea dehidrogenazica potentiala au fost intre 12,7 mg F/100g sol in punctul aval Iaz Meda (20-40 cm) si 68,66 mg F/100 g sol in punctul aval Iaz Bozinta - Aurul (0-20 cm). 5.1 Aplicaii n metabolizri a alcooldehidrogenazei

11

12

6. Implicarea alcooldehidrogenazei n reaciile de reducere5 Clasa oxidoreductazelor n care intr i dehidrogenazele, cuprinde enzimele ce catalizeaz reaciile redox. In vivo, ele sunt implicate n multe ci metabolice i n transformrile energetice din celul. Dar, pentru manifestarea activitii catalitice este necesar prezena coenzimelor. Unele coenzime cum sunt flavin adenindinucleotid (FAD) i flavin adenin mononucleotid (FMN), sunt legate de enzim. Spre deosebire de acestea, nicotin-adenindinucleotidul (NAD) i nicotinamid dinucleotid fosfatul (NADP), exist n cea mai mare parte a cazurilor, ca o component solubil a enzimei. Majoritatea dehidrogenazelor utilizate n biotransformri sunt NAD(P)H dependente.

Figura 4. Reacia de reducere catalizat de dehidrogenazele NAD(P)H dependente. n Figura 4 este prezentat schema de reacie tipic pentru obinerea alcoolilor chirali. n timpul reducerii compuilor carbonilici, cofactorul pierde un ion hidrur alturi de alcoolul corespunztor obinndu-se deci i NAD(P)+. De aceea n cazul reducerilor enzimatice fie se adaug cofactor n raport stoechiometric cu substratul, fie acesta este regenerat in situ. 6.1. Reactia de oxidare a etanolului Alcooldehidrogenaza catalizeaza reactia reversibila de oxidare a etanolului:

NAD+ CH3 CH2OH etanol A.D.H

NADH+H CH3 C O H Acetaldehida

Alcooldehidrogenaza joaca un rol important in procesele de fermentatie alcoolica. In practica medicala aceasta enzima se utilizeaza la dozarea extrem de exacta a alcoolului etilic in sange si urina.

Enzimologie generala (Editura Tehnopress, Iasi, 2007, pag 25)

13

Figura 5 - Oxidarea etanolului cu alcool dehidrogenaza6

http://www.tamu.edu/faculty/bmiles/lectures/Biological%20Redox%20Reactions.pdf

14

CONCLUZII:

Clasa oxidoreductazelor n care intr i dehidrogenazele, cuprinde enzimele ce catalizeaz reaciile redox. Oxidoreductazele pot interveni pozitiv n procese metabolice anaerobe sau aerobe ca, de exemplu, glicoliza i diferite fermentaii, ciclul acizilor tricarboxilici, catena de respiraie celular etc., procese care se desfoar n diferite materii prime alimentare. Majoritatea dehidrogenazelor utilizate n biotransformri sunt NAD(P)H dependente. n prezent sunt disponibile peste 650 de enzime din clasa oxidoreductazelor. Alcooldehidrogenaza constituie un grup al enzimelor dehidrogenaze care se gsesc n multe organisme i faciliteaz conversia dintre alcooli, aldehide sau cetone n dou sensuri: reducerea cetonelor n aldehide, a aldehidelor n alcoolii sau oxidarea alcoolilor n aldehidele corespondente. Alcooldehidrogenaza este o enzim foarte termostabil. Are o mare stabilitate i la temperatura de 86 grade Celsius timp de 70 minute, dar este repede denaturat la fierbere. Alcooldehidrogenaza poate fi extras din ficat de cal i din drojdia de panificaie. Alcooldehidrogenaza intervine n procesul de fabricare a oetului de vin de ctre bacteriile acetice, care transform alcoolul etilic n aldehid acetic i apoi acid acetic i la obinerea compusilor de arom (acetaldehide) n cazul unor produse lactate acide. Folosirea alcooldehidrogenazelor la nivel industrial este costisitoare i dificil din punct de vedere economic i dificil din punct de vedere al regenerrii cofactorilor implicai n activitatea enzimei. In practica medicala alcooldehidrogenaza se utilizeaza la dozarea extrem de exacta a alcoolului etilic in sange si urina.

15

BIBLIOGRAFIE

1. Banu, C. - Biotehnologii in industria alimentara (Editura Tehnica,

Bucuresti, 1987, pag 52)

2. Dumitru, I., F., Iordachescu, D. - Introducere in enzimologie (Ed. Medicala, Bucuresti, 1981, pag. 25) 3. Enzimologie generala (Editura Tehnopress, Iasi, 2007, pag 25)

4. www.unibuc.ro/eBooks/biologie/drojdii/12.html 5. http://www.worthington-biochem.com/ADH/default.html 6. http://www.pdb.org/pdb/101/motm.do?momID=13 7. http://www.tamu.edu/faculty/bmiles/lectures/Biological%20Redox %20Reactions.pdf

8. http://www.organic-

chemistry.org/chemicals/reductions/alcoholdehydrogenase-adh.shtm 9. http://en.wikipedia.org/wiki/Alcohol_dehydrogenase

16