Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
1. Introduo ao Sistema Imunitrio
Resumo da aula terica: 12 de Fevereiro de 2008 A importncia do sistema imunitrio clara. Em pacientes com um sindroma chamado Severe Combined Immunodeficiency Disease SCID acontece que, devido a uma ausncia de linfcitos T e B, esta criana (normalmente ocorre em crianas), no est protegida contra infeces, e precisa de estar envolvida nestas estruturas. So muitas vezes designados meninos ou crianas da bolha: tm de estar guardados numa bolha, em meio estril, protegidos do meio externo. So estruturas que possuem luvas e passagens para fornecer tudo, e tudo o que entra tem de ser esterilizado porque a ausncia de um sistema imunitrio eficiente, faz com que esta criana no consiga resistir a qualquer tipo de infeco, que seria travada por um sistema imunitrio eficaz sem problema.

Portanto, a inutilidade do sistema imunitrio est fora de questo. Na realidade, um dos grandes avanos da imunologia foi tratar esta situao. possvel tratar esta criana desde que se encontre uma medula ssea compatvel. Ela recebe uma medula ssea de uma pessoa normal, um dador, por exemplo, um familiar, que tenha mais compatibilidade em termos de transplante de tecidos. E, recebendo medula ssea, por exemplo, de um irmo, que tem uma medula ssea normal, essa medula ssea coloniza o sistema imunitrio desta criana e ela passa a ter um sistema imunitrio saudvel do irmo. Isto muito fcil de fazer na situao muito rara de a pessoa ter um gmeo, porque os gmeos so uma situao privilegiada de haplocompatibilidade, ou de histocompatibilidade neste caso. Quem no tem gmeos, que a maior parte de ns, ser mais complicado, mas para isso faz-se genotipagem ao nvel familiar para saber qual ser o parente mais prximo de ns nesse aspecto.

A imunologia como uma cincia

A imunologia o estudo do sistema imunitrio. Hoje em dia, depara-se com alguns problemas ainda por resolver: Vacinas contra infeces crnicas Diagnstico e tratamento de doenas autoimunes Preveno e tratamento de alergia Imunoterapia eficaz contra o cancro Tolerncia a transplantes (clulas estaminais)

So estas as grandes reas em que a investigao tem de progredir para que consigamos melhores respostas, nomeadamente ao nvel da clnica.

Clulas Hematopoiticas

Do origem s clulas do nosso sangue, mas nem todas elas pertencem ao sistema imunitrio: eritrcitos e megacaricitos no tm funo imunitria. As restantes vo reagir a agentes infecciosos.

Linfcitos e especificidade
Dentro das clulas do sistema imunitrio, os linfcitos adquirem uma importncia especial graas sua especificidade: possuem receptores com uma conformao especfica que reconhece apenas uma molcula especfico para essa molcula, no reconhece outras. Um linfcito T especfico para um pptido de salmonela no consegue reconhecer mais nada a no ser o pptido de salmonela. O que especial acerca dos linfcitos so os seus receptores. Os receptores dos linfcitos T e dos linfcitos B designam-se molculas de regio varivel (variable region molecules VRM). Esta uma designao global para BCR receptor de clulas B e TCR receptor de clulas T.

O que que torna estas molculas, que so protenas, especiais? a poro representada a vermelho:

Estas molculas tm, como diz o seu nome, regies variveis. Todas as protenas que um neurnio expressa so iguais entre todos os neurnios num indivduo. Um neurnio pode expressar diferentes protenas, mas a partir do momento em que expressa um tipo de protena, esta vai ser igual de todos os outros que a expressam. Isto porque as protenas so produzidas a partir da transcrio e traduo do DNA dogma central da biologia. Ainda assim, o mRNA resultante de um gene pode sofrer splicing alternativo e dar origem a diferentes protenas. Mas, de qualquer forma, o gene est como uma sequncia de DNA sagrada, impossvel de modificar. Se tal acontecer, podem ocorrer mutaes causadoras de cancro, etc. As clulas tm por essa razo inmeros mecanismos de proteco do DNA. Assim, uma protena normal no tem regies variveis, j que so obtidas a partir de uma sequncia de DNA fixa, que no sofre modificaes em condies normais. Todas as suas regies so constantes em termos de sequncia de aminocidos, porque, se assim no fosse, j no seria a mesma protena nem teria a mesma funo. Esta situao no se aplica de todo s VRMs. Estas protenas tm a poro azul, que uma protena montona, com sequncia de uma metionina inicial, etc, mas em relao s pores vermelhas, cada VRM diferente. Ns conseguimos produzir anticorpos diferentes porque cada anticorpo vai ser diferente na zona vermelha. Eles vo ter as regies azuis sempre iguais - regies constantes - que so as regies que o fazem ser um anticorpo, so a base estrutural. Mas as pores vermelhas, as regies variveis, so os locais de ligao ao antignio, so os locais de reconhecimento daquilo para o qual estas molculas vo ser especficas. No caso deste anticorpo, ele vai possuir duas regies vermelhas que vo permitir a ligao a duas molculas de antignio tem ento dois locais de ligao. Portanto, uma molcula de VRM especial porque consegue ter regies variveis a sua especificidade para diferentes antignios deve-se s diferentes sequncias da regio varivel, o que se traduz em diferente afinidade, conformao, ligao. A nica forma de termos anticorpos contra todas as protenas diferentes que todos os anticorpos tenham, em geral, sequncias diferentes.

Surgimento das VRMs

O surgimento das VRMs na linha evolutiva tido como o Big Bang evolutivo do sistema imunitrio, h cerca de 400 milhes de anos atrs, exactamente na transio entre vertebrados sem mandbula e os peixes cartilaginosos como o tubaro, que so vertebrados com mandbula.

Linfcitos T e B
H dois grandes tipos de linfcitos, os B e os T. A grande diferena entre estes dois tipos de clulas est no facto de os linfcitos B estarem direccionados para a produo de anticorpos e os linfcitos T para o reconhecimento de clulas e as molculas que elas expressam. Os primeiros, os linfcitos B, esto na base da imunidade humoral, mediada pelos humores, os fluidos em circulao. Os segundos, os linfcitos T, esto na base da imunidade clula, contra clulas - o tipo celular que reconhece uma clula cancergena, uma clula infectada por um vrus, e a tenta destruir; o linfcito B a clula que vai secretar protenas que vo ficar em circulao os anticorpos que se vo ligar a outras protenas, tambm elas em circulao. Os linfcitos B tm uma interaco protena-protena enquanto os linfcitos T interagem clula a clula.

Com estes dois tipos de clulas, o sistema imunitrio, neste caso, linfocitrio, vai conseguir ver tanto as molculas que estejam fora das clulas, como os anticorpos, que andam caa, como as molculas que esto dentro das clulas, neste caso os linfcitos T que andam caa. Como que isto se processa?

Por um lado, os anticorpos que esto em circulao vo reconhecer a parte de fora das molculas em circulao (as protenas tm uma estrutura tridimensional em que existem domnios que no esto expostos e outros que esto superfcie da molcula estes sero reconhecidos pelos anticorpos) Por outro lado, os linfcitos T vo reconhecer sequncias no interior das protenas, que por sua vez esto no interior das clulas. Os linfcitos T reconhecem o que est dentro das clulas graas a um sistema das clulas que fragmenta as protenas, o proteossoma organelo celular que consiste num complexo, com vrias subunidades que cliva as protenas intracelulares, as da prpria clula e as estranhas, em pequenos pptidos que vo ser apresentados superfcie. Essas protenas podem ser protenas virais que ao serem fragmentadas e apresentadas aos linfcitos T vo sinalizar a infeco. Existe portanto um complexo que, ao apresentar os fragmentos peptdicos, vai permitir aos linfcitos T ver o que est no interior das clulas: o que apresentado superfcie das clulas a marca do que est dentro destas. Note-se que uma clula T apresenta sua superfcie tudo o que est dentro dela prpria mas tambm tudo o que nela entrou, vindo de fora, estranho. assim que ela distingue a clula infectada da normal.

Paradoxo de Landsteiner
Landsteiner foi um qumico do incio do sculo XX que ps o problema: a que que o sistema imunitrio capaz de reagir? Realizando experincias com coelhos, verificou que o organismo era capaz de produzir anticorpos contra todos os microrganismos que os infectavam O organismo capaz de produzir anticorpos contra qualquer molcula, at mesmo contra as suas prprias molculas. No entanto, as clulas auto-imunes so seleccionadas e suprimidas sob pena de, se tal no acontecer, se verificarem doenas auto-imunes. Landsteiner verificou ainda que os coelhos eram capazes de produzir anticorpos mesmo contra molculas artificiais, que o prprio criou em laboratrio e que no existiam na natureza.

Paradoxo de Landsteiner como que um organismo finito, limitado, consegue reconhecer qualquer molcula? Ao contrrio dos outros sistemas biolgicos, o domnio, a competncia molecular do sistema imunitrio universal/completo/open-ended. Em termos de potencial de produo de anticorpos, no h nenhum limite. H sempre uma resposta imunitria. Muitos de ns no conseguem fazer respostas imunitrias eficazes, tanto que sofremos doenas infecciosas. Contudo, isto no significa que no esteja a haver uma resposta imunitria esta ocorre sempre, mesmo que no seja completamente eficaz e hajam sintomas da infeco.

Vantagem evolutiva do Paradoxo de Landsteiner

Existe uma grande diferena nas possibilidades de variao gentica entre micrbios e vertebrados. Se a variabilidade fosse apenas introduzida pela reproduo, as bactrias, ao dividirem-se em ciclos de 20 minutos, teriam a capacidade de introduzir muito mais variabilidade do que o ser humano que se reproduz aproximadamente de 20 em 20 anos. Se a resposta imunitria fosse produzida perante o tempo 0, isto , propositadamente para o patognio no momento da infeco, esta no seria eficaz isto impossvel. Mesmo que o organismo j tenha sofrido uma infeco por um micrbio, o seu tempo de reproduo to reduzido que possivelmente j ter ocorrido uma mutao que torna ineficaz a resposta imune que j tinha sido produzida, como o caso das vacinas que deixam de funcionar. A nica forma de equilibrar esta luta prever, ou seja, ns conseguimos esculpir todas as possibilidades. No no momento da infeco que se produzem anticorpos e clulas especficos para o patognio estas j existem e esto prontas a actuar. Portanto, a estratgia tem de ser a transferncia para o tempo somtico e individual: dentro do tempo somtico de cada um de ns, precisamos de ter a capacidade de gerar variao e seleco, conseguirmos variar a sequncia dos nossos anticorpos e seleccionar as que forem mais teis para aquele momento. necessrio haver a maior diversidade possvel para que se possa seleccionar, como explica o Darwinismo, para se tornar o organismo mais apto para resistir infeco.

O grande trunfo da natureza que a diversidade no finalista essa a soluo para o desconhecido. Se no sabemos o que nos vai infectar amanh, no podemos determinar hoje o que nos ser mais til amanh. Portanto, no podemos ter nos nossos genes sequncias prprias para anticorpos contra antignios especficos. O sistema tem de ter uma diversidade no finalista, que no dirigida a nenhuma infeco, a nenhum antignio, a nenhum micrbio, mas sim, a tudo. H uma diversidade aleatria os processos moleculares pelos quais se consegue a especificidade, dada pela grande variedade de anticorpos, so aleatrios. Fazem-se as combinaes possveis e cada combinao ser especfica para uma coisa diferente.

Como que possvel obter diversidade a partir de um genoma finito?

No genoma humano existem cerca de 25.000 genes sequncias de DNA com promotores, enhancers, etc, que conseguem se transcritas e traduzidas para originar protenas. No entanto, para responder diversidade de antignios existentes na natureza, temos a capacidade de produzir mais de 1012 molculas de genes variveis, de anticorpos ou TCRs. Como ento possvel termos esta diversidade em apenas dois tipos de protenas quando o nmero de genes no ultrapassa 105? Nem o processo de splicing conseguiria assegurar tal nmero de protenas diferentes a partir apenas de 25.000 genes, dado que o gene mais spliced descrito origina, no mximo, aproximadamente 100 isoformas

Inconvenientes da variabilidade
Sendo a variabilidade aleatria, possvel produzir anticorpos e linfcitos contra agentes infecciosos, mas tambm contra clulas e protenas do prprio organismo. Isto pode dar origem a doenas autoimunes. necessrio distinguir o que pertence ao organismo do que estranho. Se h uma to grande diversidade, um to grande nmero de clulas diferentes e necessrias a uma resposta eficaz, onde que estas se vo encontrar armazenadas? Num estado basal no infectado, os linfcitos sobrevivem a um nvel mnimo, numa frequncia baixa. Mas, se reconhecerem um antignio, vo proliferar, multiplicar-se e diferenciar-se. Por exemplo, um linfcito B, aps diferenciao capaz de produzir cerca de 10.000 molculas por segundo, passando a designar-se plasmcito.

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Imunologia
2. Gerao da diversidade nos linfcitos T e B
Resumo da aula terica: 14 de Fevereiro de 2008

Como que possvel obter uma diversidade em termos de protenas que excede em muitas ordens de grandeza o nmero de genes do genoma humano?

Trata-se de um processo que est na base da produo de molculas que, alm de terem uma sequncia constante de aminocidos, tem zonas variveis, isto , um anticorpo A e um anticorpo B tm regies constantes, que so iguais, e regies variveis, diferentes entre si, o que permite que reajam contra antignios diferentes.

As molculas formadas por este processo so os receptores dos linfcitos, das clulas B e das clulas T o processo conservado em duas linhagens e, na ausncia deste processo no existe nem uma nem outra. Seres humanos com mutaes nos componentes essenciais para catalisar este processo, no tm linfcitos.

A primeira coisa a ter em ateno que estas protenas so sempre heterodmeros duas cadeias diferentes que tm de heterodimerizar. No caso do TCR, h duas hipteses: ou . No h outro tipo de combinaes. Com base no genoma, h produo de 4 cadeias, mas cada uma delas s tem capacidade de heterodimerizar com outra, associando-se por ligaes dissulfito para formar as combinaes ou . Os homodmeros no so funcionais, no so estveis e no chegam superfcie da clula. Do mesmo modo, o BCR tambm constitudo por duas cadeias diferentes: cadeias pesadas e cadeias leves.

TCR T cell receptor

Podem ser ou . No caso da linhagem , que a dominante, tanto nos humanos como em modelos animais, o TCR tem uma cadeia e outra , estabilizadas por uma ponte dissulfito. Existe um local de ligao ao antignio, mais distal em relao membrana onde o receptor se encontra, mais exposto poro vermelha, que a varivel, capaz de reconhecer um antignio especfico. Tem tambm uma parte constante, com uma sequncia normal de aminocidos, sem caractersticas especiais.

BCR B cell receptor

Quando secretado, designa-se anticorpo. Tem duas cadeias, a pesada, com 4 domnios globulares, e a leve, com apenas 2. H um eixo de simetria e a estrutura duplicada. Na realidade esto presentes 4 cadeias, mas elas so exactamente iguais duas a duas, continuando a designar-se heterodmero. Quando ocorre transcrio e traduo, as cadeias esto prontas para serem emparelhadas: duas protenas iguais de cadeia pesada homodimerizam e depois as duas cadeias leves dimerizam na parte mais exterior da molcula. O anticorpo muitas vezes representado com uma forma de Y pois a forma tridimensional que a molcula tem, de facto.

Uma distino entre o receptor das clulas T e B, que neste caso h 2 locais de ligao ao antignio cada brao do Y permite ligar-se ao antignio. De resto o mesmo tipo de molcula, com uma poro normal, constante, e outra mais especial, a varivel.

O que acontece com a zona varivel que, se analisando a sua sequncia de aminocidos, existem pontos de grande variabilidade que so exactamente os locais de ligao ao antignio. Toda a restante estrutura o que d forma molcula e no to necessrio introduzir variabilidade nessas regies. Estas zonas especiais de ligao chamam-se CDRs complementary determining regions.

Gerao da diversidade nos linfcitos T e B

Se o nmero de genes menor que 105, como que possvel obter 10 12 VRMs para reconhecer toda a diversidade de molculas antignicas se o splicing insuficiente? O problema que se debatia era: o nosso genoma, que finito, no tem a capacidade de conter uma quantidade suficiente de DNA correspondente a mais de 1012 genesso necessrias zonas intergnicas, de regulao, etc. Em vez de ter cada anticorpo diferente estar codificado no genoma como um gene singular, e nesse caso, o genoma teria de ter 1012 genes, existem pedaos de DNA, segmento gnicos num locus gentico. Em ltima anlise, h fragmentos contidos num gene que do origem a uma protena, um anticorpo, mas no organizados num gene normal com enhancer, promotores, etc. O exemplo a cadeia pesada do anticorpo, ou do BCR. Em vez de se ter todos os genes para todos os anticorpos diferentes, tem-se pedaos de informao, que no so lidos como tal porque no tm estrutura de gene - no h um promotor que indique onde se deve iniciar a leitura, etc, isto , no tem uma estrutura que permita a transcrio pela RNA polimerase e originar um mRNA que esteja capaz de exercer a sua funo. Alm disso, esta informao est espalhada por mais de 100 kbp - um gene, mesmo com grandes segmentos intrnicos nunca chega tal espaamento entre exes. Portanto, no genoma da linha germinativa, espermatozides e vulos, no h genes funcionais para BCR nem TCR no herdamos dos nossos pais e mes a sequncia dos nossos anticorpos. Ns temos a mesmo sequncia de genes normais,

fundamentais, mas no a dos BCRs e TCRs porque no temos a capacidade de herdar da nossa me ou pai sequncias codificantes de 1012 anticorpos diferentes. O que herdado o mecanismo que vai permitir formar as tais 1012 molculas diferentes, porque este um mecanismo enzimtico, cujas enzimas esto codificadas em genes normais, esses sim, iguais aos dos nossos pais. O que especial nos linfcitos no so os genes que do origem aos receptores mas o mecanismos que permite construir esses mesmos genes. O vulo e o espermatozide tm genes para os BCR e TCR partidos aos pedaos que no originam nenhuma protena funcional, at porque as nicas clulas que expressam BCR so as clulas B e as que expressam TCR so as T, porque so as nicas a possuir estes genes funcionais, que tm o mecanismo necessrio para os tornar funcionais.

A questo que se pe : como combinar estes segmentos gnicos?

O gene funcional ser, por exemplo, para um anticorpo, um segmento cor-derosa, combinado com um o azul do meio, e com o amarelo. Quando estes 3 pedaos se juntarem, ento a especificidade vai ser para um antignio de salmonela, por exemplo. Se em vez do cor-de-rosa, for o preto a juntar-se aos mesmos 2, como a sequncia de aminocidos diferente, o anticorpo vai interagir com um outro antignio, e assim por diante. Portanto, estas diferentes sequncias de DNA vo combinar-se e dar origem um gene o gene a unio dos pedaos certos, com uma estrutura de gene tpica, que pode ser transcrito e traduzido numa certa sequncia peptdica com especificidade par um antignio. Esta a zona varivel.

Sabendo que existem zonas variveis e zonas constantes, fizeram-se experincias usando 2 sondas de DNA para fazer um Southern blot: Digesto do DNA com enzimas de restrio Electroforese com migrao dependente de tamanho e carga Hibridao com sonda Uma sonda hibridava na zona constante e outra na zona varivel. Sendo que as sequncias constante e varivel eram as mesmas na clula B e na germinativa, colocava-se a questo de como que estas se juntavam, se justapunham.

 No DNA da germline, ou de outras que derivam directamente dela, a sonda para a regio constante, igual em todos os anticorpos, hibridava com uma zona do gel e a sonda para a regio varivel, a especfica para cada tipo de anticorpo estava noutra zona do gel. Isto significa que cada sonda hbrida com diferentes fragmentos de DNA as regies varivel e constante esto separadas por vrios bp. No DNA retirado de um linfcito B (um dos tipos de clula especial em que ocorre este processo), as sondas passavam a hibridar com um mesmo fragmento. As zonas constante e varivel esto ento num mesmo fragmento, estando justapostas no genoma. Em clulas B e T, as zonas que se sabiam estar muito distantes uma da outra, esto agora no mesmo fragmento. O que aconteceu entre a clula normal e o linfcito B que a estrutura do DNA modificou-se de modo a que dois fragmentos distintos, da zona constante e a varivel, se encontrem agora justapostas. A nica forma de elas estarem no mesmo fragmento ter que o DNA tenha sido alterado. As clulas B e as T tm a uma capacidade que outras clulas no tm: conseguem juntar duas regies de DNA RECOMBINAO SOMTICA/REARRANJO VDJ. Noutras quaisquer clulas, o DNA sempre igual, estvel, h mecanismos de proteco do DNA para que este seja imutvel. As clulas B e T tm a necessidade de modificar o seu DNA, para passar a expressar o seu receptor especfico e assim se diferenciarem. O nico modo de o fazerem alterar o seu DNA com corte e costura para que fragmentos que esto distncia fiquem justapostos formando-se assim um gene funcional codificante do receptor. O que acontece que vo ser juntos segmentos gnicos distribudos ao longo do genoma. Os pedaos esto organizados ao longo de 3 grandes zonas: V de varivel, a zona mais varivel do gene D de diversidade, uma diversidade adicional J de juno, so os segmentos que juntam aquele bloco com a zona constante Os fragmentos so juntos por uma ordem: primeiro juntam-se D e J e s depois vem D. H ento, basicamente, 3 blocos que um gene funcional tem de conter tem de haver um representante de cada um dos blocos. S assim se obtm uma protena com uma forma que lhe permita

ser um anticorpo. Na ausncia de algum destes componentes, j no se obtm um anticorpo, a molcula colapsa e no exerce a sua funo. Para ter uma sequncia final, necessrio ter os elementos que constituem um gene. Os locus so altamente instveis enquanto se faz o rearranjo mas, terminado este processo, o locus fecha. Este ento um processo irreversvel que marca a aquisio de especificidade pela clula, para um antignio, e esta est pronta para ser uma clula B ou uma clula T. Todos os mecanismos que protegem o DNA da clula vo tambm actuar sobre este gene uma vez formado e funcional.

RAG Recombination activated gene

A recombinao somtica necessita que hajam cortes no DNA, sendo estas reaces catalisadas por enzimas. As clulas humanas no possuem enzimas de restrio estas apenas existem nas bactrias como um modo de defesa contra os patognios, mas possuem uma endonuclease capaz de cortar DNA para este processo em particular. Essa endonuclease a RAG recombination activated gene. Na realidade, existem duas enzimas RAG 1 e RAG 2, que funcionam como um complexo, que catalisa a recombinao somtica. Ratinhos gerados sem RAG no conseguem formar clulas B nem T. Da mesma forma, humanos com mutaes em RAG so desprovidos de clulas B e T. A nica forma de garantir que este processo seja especfico dos linfcitos fazer com que esta enzima seja expressa apenas nas clulas B e T: as RAG so, portanto, especficas dos linfcitos T e B, ou dos seus precursores na medula ssea apenas. Nas outras clulas, o locus da RAG est completamente fechado sobre si prprio, sem qualquer acessibilidade, no expresso de todo.

A expresso da RAG modulada muito precisamente, at mesmo nas clulas B e T, onde s est activo durante a formao dos receptores. Se continuasse activa, haveria retrocesso da recombinao e danos no DNA. Uma vez o receptor formado, a RAG desaparece: o receptor formado, quando chega superfcie, envia um sinal para o ncleo para indicar que est funcional e esta deixa de ser expressa assim que os linfcitos esto formados. Tem uma vida curta mas essencial para a formao de linfcitos funcionais, com especificidade. Antes da aco da RAG, no existem genes funcionais, isto porque no h uma estrutura organizada com promotor, enhancer, sequncia sinal que indique o destino da protena, etc. Estes elementos esto separados por sequncias de muitos bp. Tem de haver uma estrutura que permita que todos os cofactores necessrios transcrio eficaz sejam recrutados e se localizem de forma a realizar a sua aco, e esta estrutura conseguida com a recombinao somtica. Mesmo se houver uma transcrio basal dos segmentos no reorganizados, o transcrito no tem significado, no pode ser traduzido numa protena funcional. A protena final, funcional, s se obtm com este rearranjo que torna segmentos gnicos no funcionais num gene funcional. Cada clula B e T utiliza este processo para criar um receptor que a caracteriza pela especificidade para um qualquer antignio da diversidade que exista na natureza. Pode-se dizer que cada linfcito tem um genoma modificado o que mudou foi o seu locus gentico para o receptor, graas aco da RAG que o tornou um gene funcional.

Quais as implicaes deste processo?

um processo necessrio para gerar clulas B e T. A RAG, como qualquer enzima, reconhece sequncias especficas, apenas cliva o genoma nos locais do V, D e J, onde a sua actividade til para seleccionar os segmentos teis para formar o anticorpo, por exemplo. Tem de haver uma proteco do genoma em geral e uma susceptibilidade apenas dos genes em que a RAG tem de actuar: BCR se a clula for uma clula B em potncia ou TCR se a clula for uma clula T em potncia. Portanto, o que acontece que, nesses locus genticos, nos receptores das clulas B e T, os fragmentos vo ser sinalizados com sequncias especficas que indicam os locais de aco da RAG. Estas sequncias especficas para a RAG designam-se RSS recombinational signal sequences. Nada deixado ao acaso neste processo: A recombinao apenas ocorrer nos genes em que suposto ocorrer.

Sndrome de Omenn
Quando os genes RAG esto ausentes ou mutados, surge a Sndroma de Omenn. Esta sindroma caracterizada pela ausncia de RAG funcional: as enzimas no esto funcionais e por isso no catalisam a recombinao somtica e originam linfcitos.

Caso Clnico: A criana foi internada porque ao 1 ms de idade, exibindo sintomas de inflamao e de infeco: tinha pus muito abundante nos olhos, nos ouvidos, que foi analisado e que mostrou haver uma infeco por Candida albicans e Staphylococcus aureus, infeces essas que no sero muito graves se o sistema imunitrio estiver eficaz, mas, naquele caso, estavam a causar complicaes muito graves como dificuldade em respirar, etc. A criana era filha de primos direitos, e isto importante dado que a doena recessiva, s se manifesta em homozigotia - a probabilidade de a doena se manifestar aumenta quando os projenitores tm laos familiares. Fizeram-se anlises sanguneas e estas mostraram que, dos seus glbulos brancos, apenas 6% eram linfcitos, tratando-se linfcitos T, em oposio aos normais 50%. Os nveis de anticorpos, principalmente os IgG, essenciais a uma boa resposta imunitria, estavam muitssimo baixos. Visto que os linfcitos B estavam praticamente ausentes, os anticorpos em circulao teriam sido herdados da me. Portanto, a criana no teria imunidade celular e humoral eficaz. Estando ambas as linhagens B e T afectadas, pode suspeitar-se que a deficincia seja num processo comum a ambas as linhagens, como o da recombinao somtica. Fez-se ento um ensaio enzimtico para a RAG (in vitro, adiciona-se DNA com RSS enzima RAG retirada de clulas da criana e regista-se a actividade enzimtica) que indicou que a actividade desta enzima era apenas de 20%. A sequenciao do gene RAG revelou uma mutao missense na sequncia da RAG 1, que provocava a destabilizao do complexo e diminuio da funo. Esta doena rapidamente fatal, pois a criana fica incapaz de resistir a infeces mais graves. O nico tratamento disponvel o transplante de medula ssea, desde que se encontre um dador compatvel. Um transplante de medula ssea permite transferir clulas estaminais hematopoiticas que vo repovoar a medula ssea. As clulas estaminais transferidas do dador tero a enzima RAG funcional, podendo assim originar-se linfcitos B e T normais.

Outros mecanismos de gerao de diversidade

Com a recombinao somtica, formam-se muitas combinaes diferentes que conferem a diversidade resposta imunitria, mas os fragmentos gnicos nos locus dos receptores das clulas B e T so apenas suficientes para assegurar 106 molculas diferentes. O mecanismo que permite amplificar esta diversidade reside na insero aleatria de nucletidos nos locais de juno dos segmentos gnicos recombinados somaticamente, nos locais

de ligao ao antignio. Assim, a afinidade do anticorpo para um antignio vai ser diferente. Novamente, para que este processo seja especfico das clulas B e T, apenas estas clulas vo expressar a enzima TdT terminal deoxynucleotide transferase cuja funo inserir nucletidos aleatoriamente entre os fragmentos recombinados no rearranjo VDJ.

A gerao de diversidade destas molculas resulta da recombinao dos fragmentos que esto espalhados nos locus genticos (que permitem 106 combinaes diferentes) e ainda da multiplicidade de fragmentos que so adicionados aleatoriamente pela TdT entre os segmentos gnicos, conseguindo-se assim obter uma diversidade de 1012 diferentes combinaes, prontas a reconhecer os muitos antignios.

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Imunologia
3. Imunidade Inata
Resumo da aula terica: 19 de Fevereiro de 2008 O sistema imune dos vertebrados conta com dois tipos de imunidade: Inata e adaptativa.

Imunidade inata
Sistema que ajuda a combater a infeco nas fases iniciais, pouco especfico, antes da actuao mais eficaz e especfica da imunidade adaptativa. As superfcies epiteliais externas do corpo constituem uma barreira fsica eficaz contra a maior parte dos organismos. Mas elas esto tambm colonizadas por microorganismos no patognicos, residentes, que competem com os invasores por nutrientes e espao. Para alm disso, quase todos os agentes infecciosos que penetram esta barreira e iniciam uma infeco so eliminados rapidamente pelos mecanismos de resposta imunitria inata.

As barreiras fsicas e os mecanismos de imunidade inata podem ser consideradas defesas estveis, completamente determinadas pelos genes herdados dos nossos pais e prontas a actuar em qualquer momento.

Imunidade inata vs Imunidade aquirida

Quando h quebra das barreiras da primeira linha de defesa, a primeira a actuar a imunidade inata:

importante salienta a interrelao entre imunidade inata e adquirida, sendo que a primeira influencia profundamente a eficcia da segunda.

Aco da imunidade inata

Inclui: Barreiras entrada de micrbios Destruio de micrbios pelo complemento Destruio de micrbios por clulas fagocticas Inflamao como forma de recrutar mais defesas e impedir a disseminao Activao da imunidade adquirida (adaptive immunity)

Barreiras anatmicas Pele Mucosas Constituem superfcies epiteliais com camadas de clulas unidas por junes oclusivas, aderentes, etc.

Barreiras fisiolgicas movimento dos clios no sistema respiratrio fluxos de lquido (tosse, espirros) muco, secrees Lisozima (lgrimas, saliva) temperatura do corpo enzimas digestivas e baixo pH (sistema digestivo) defensinas (, produzidas pelos netrfilos e criptidinas clulas de Paneth no intestino e , secretadas pelos epitlios epidrmido respiratrio e gastrointestinal), que matam bactrias, fungos e vrus com envelopes por perturbao das suas membranas. No perturbam as clulas humanas pois so sintetizadas como parte de polipptidos maiores e inactivos que ficam activas em meios hipotnicos, como a saliva, o suor, etc. catelicidinas (pptidos que bloqueiam a replicao bacteriana) interferes sistema complemento (conjunto de protenas e proenzimas circulantes) Barreiras microbiolgicas flora microbiana e fngica comensal Quando as primeiras barreiras, no especficas e permanentes (no induzidas), so quebradas, a aco da imunidade inata passa pela activao do complemento e pela ingesto de partculas extracelulares, ambos mecanismos induzidos pelo antignio.

Sistema de complemento Descoberto por Jules Bordet, e assim designado por complementar a aco dos anticorpos. Trata-se de um conjunto de protenas sensveis temperatura, plasmticas ou membranares produzidas sob a forma inactiva zimognios - e activadas aps clivagem.

Esto presentes no soro de animais imunizados e no imunizados. Inclui mais de 30 glicoprotenas: Aproximadamente 20 protenas solveis Enzimas proteolticas Receptores membranares Protenas reguladoras

Nomenclatura

Funo do sistema de complemento

A activao do sistema de complemento pode dar-se por vrias vias, se bem que todas elas levam formao de C3b: Via clssica Via da lectina Via alternativa

Destas, a via clssica tem uma menor importncia na resposta imunitria inata pois tem uma aco tardia, visto que est dependente da formao do complexo antignio-anticorpo e, portanto, de uma resposta adaptativa, especfica.

A activao do sistema de complemento por esta via no se d constantemente com os anticorpos em circulao pois, alm de existirem protenas reguladoras em circulao, C1 s activado por ligao a dois anticorpos colocados num mesmo plano, como acontece quando estes esto ligados ao antignio.

Em relao via alternativa, esta sempre a ser activada, mas no h destruio das clulas graas a protenas reguladoras, com funo inibidora, que impedem a formao do complexo C3 que amplifica a activao do sistema de complemento.

O sistema de complemento est sujeito a mecanismos de regulao de modo a haver proteco do prprio organismo.

Um importante obstculo aos xenotransplantes so diferenas nessas protenas.

H doenas causadas por deficincia de algumas dessas protenas: Edema angioneurtico hereditrio (deficincia de C1inh) Deficincia de factor I

Destruio de micrbios por clulas fagocticas A fagocitose (cell eating) permite a ingesto de partculas com mais de 0,5 m, por exemplo, vrus, bactrias um Mecanismo especfico, iniciado por receptores que fecham sequencialmente a membrana celular em torno da partcula, induzindo a polimerizao de actina e formao de pseudpodes.

As clulas fagocticas incluem: Moncitos

Macrfagos - Derivados dos moncitos Clulas fagocticas mononucleares Residentes: o Macrofagos o Clulas de Kupffer,

Neutrfilos Clulas fagocticas polimorfonucleares (PMN) Em circulao Grnulos citoplasmticos abundantes As mais importantes na destruio das bactrias

Mecanismos microbianos de invaso: Resistncia destruio aps ingesto Evaso do fagossoma (ex. Listeria monocytogenes) Modificao do fagossoma impedindo a sua fuso com outras vesculas, retardando assim a sua maturao (ex. estirpes resistentes de Mycobacterium tuberculosis) Existe assim a possibilidade de falha do mecanismo de fagocitose e infeco. No entanto, a imunidade adaptativa pode conter a infeco.

Mecanismos que facilitam a fagocitose: Opsoninas - Protenas produzidas pelo hospedeiros que se ligam e revestem a superfcie do agente invasor atravs de um receptor especfico

Integrinas - Protenas membranares que favorecem a interaco entre clulas ou com a matriz extracelular Ex.: LFA-1 (lymphocyte functionassociated antigen), VLA-4 (very late activation antigen-4)

Reconhecimento As clulas fagocticas possuem PRRs que reconhecem PAMPs superfcie dos patognios:

PAMP Pathogen associated molecular patterns

PRR Pattern recognition receptors

1. Pouca variabilidade (ao contrrio dos receptores da imunidade adquirida) 2. Capazes de reconhecer molculas comuns a vrios microorganismos diferentes 3. Localizao a) receptores de superfcie - clulas fagocticas (macrofagos, neutrfilos, clulas dendriticas,) Macrophage mannose receptors (MMR) Bact. , fungos => fagocitose Macrophage scavenger receptor (MSR) (dsRNA, LPS,) Toll like receptors (TLR) Receptor para o LPS (CD14) CR1 ligao ao C3b do complemento (opsonizao) Receptores Fc microorganismos opsonizados com Ac ( activao prvia da imunidade adquirida) b) secretados (fgado) opsonizao activao das vias do complemento c) expressos no citosol ou compartimentos intracelulares infeces intracelulares

Molculas da parede celular das bactrias: - LPS - Lipoproteinas bacterianas - cido Lipoteicico - cido Teicoico - Peptidoglicano

RNA e DNA virais DNA e protenas bacterianos Lipoprotenas microbianas

Existe uma grande variabilidade de protenas nas bactrias. Se os receptores nos fagcitos fossem especficos para protenas, o seu grau de variabilidade teria de ser equivalente ao da variabilidade adaptativa, ou seja, dos linfcitos. J as lipoprotenas so mais conservadas na evoluo. Assim, os

fagcitos no necessitam de receptores com to grande variabilidade, havendo tambm menor probabilidade de ocorrer uma mutao nas PAMP que faa com que o macrfago deixe de as reconhecer.

muito importante

Os receptores TLR (toll-like receptors) podem ser extracelulares, expressos principalmente nos fagcitos, ou intracelulares.

Activao Fagocitose Libertao de citocinas (efeito anti-microbiano e pr-inflamatrio)

TNF- e shock Acontece quando existe TNF-a sistmico Situao muito grave caracterizada por: Vasodilatao e aumento do fluxo sanguneo generalizado. Aumento da permeabilidade vascular (reduo do volume de sangue) Coagulao intravascular disseminada (insuficincia de vrios rgos)

Resposta imflamatria
Caracterizada por: Rubor Tumor (edema) Calor Dor

Mecanismos que induzem o recrutamento de leuccitos Factores quimiotcticos - produzidos pelas clulas lesadas e leuccitos que afluem regio inflamada - geram um gradiente de concentrao que induz a quimiotaxia das clulas fagocitrias (macrfagos e neutrfilos) ex.: fragmento C5a factor activador das plaquetas (PAF) quimiocinas (IL-8, factor activador dos macrofagos (MAF), MCP-1, MIP-1a, MIP-1b, RANTES, etc.)

Resposta do sistema imunitrio a vrus

Os vrus so intracelulares, logo, so necessrios mecanismos diferentes: Factores solveis interfero Clulas clulas NK (natural killer)

*O dSRNA RNA de cadeira dupla pode surgir nas clulas quando est a ocorrer replicao viral. Clulas NK Numa situao normal, h constantemente uma sinalizao positiva e negativa que se anula nas clulas NK graas a ligandos expressos nas clulas do organismo. Em caso de infeco viral, as clulas reduzem a expresso de MHC I responsvel pelo sinal negativo nas clulas NK, sendo assim alvo destas clulas morte da clula infectada. Existem vrus, como o citalomegalovrus, cujo genoma codifica uma protena semelhante a MHC I, que expressam superfcie da clula quando a infectam, de modo a inibir a aco das clulas NK. Interfero Produzidos por clulas infectadas por vrus (ex. dsRNA) Funes: Resistncia replicao viral Aumento de MHC classe I e apresentao de antignio em todas as clulas Activao de clulas NK para destrurem clulas sem MHC-I Existe: Interfero produzido pelo sistema imunitrio Interfero produzido pelos restantes tecidos

Ligao entre a imunidade inata e a adaptativa

feita pelas clulas dendrticas.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
5. Diferenciao Clulas B
Resumo da aula terica: 26 de Fevereiro de 2008

Diferenciao Clulas B
Desenvolvimento linfcitos B, baseia-se nos processos de diferenciao celular que partilham um esquema base, ou seja, tem de haver alteraes de expresso genica de uma cel, o seu perfil expresso gentica muda, havendo protenas que vo comear a ser expressas enquanto que outras deixam de o ser. Estas alteraes moleculares repercutem-se num novo fenotipo. No sistema imunitrio conseguimos seguir os estdios de maturao porque existem marcadores de superfcie identificados das cel B e T, e havendo anticorpos especficos para cada marcador, para marcar cada estdio de diferenciao.

Processos genricos de diferenciao

Os nveis de regulao de diferenciao so vrios: se h uma clula que vai diferenciar-se, ela recebe informao do exterior atravs de receptores (receptores que s so funcionais caso haja uma transduo de sinal) e por cascatas de sinalizao de cinases, permite que a nvel nuclear exista uma repercusso nos factores de transcrio activando ou reprimindo a transcrio. Alterando os mRNA e as protenas que constituem a cel.

Clulas B
Derivam cel hematopoieticas estaminais, que se diferenciam na medula ssea atravs de uma serie de processos. As cel B fazem anticorpos.

Desenvolvimento cel B
Para ser cl b tem de expressar uma molcula que o marcador de cel B. Uma cel B s o porque expressa um receptor cel B (Bcr), qualquer cel que n tenha o receptor superfcie de cl B, nunca pode ser uma cel B, mas poder ser o seu progenitor se seguir uma diferenciao para cel B, de modo a futuramente expressar o receptor. O receptor especfico desta linhagem de cel imunitrias, n havendo mais nenhuma cel no organismo com capacidade para o expressar.

Configurao Bcr
um receptor de superfcie, com duas cadeias: Duas cadeias pesadas Duas cadeias leves

As cadeias leves e as pesadas so exactamente iguais entre si, o que caracteriza o facto do receptor ter apenas uma especificidade. Ou seja, vai reconhecer em termos preferenciais um antigenio, tendo dois locais de ligao ao antigenio. Ento o mesmo receptor reconhece o mesmo antigenio pelos dois braos que o constituem, propriedade que dada, pelo facto das duas cadeias pesadas e leves serem iguais entre si e especificas para o mesmo antigenio. Considera-se o Bcr um heterodimero, contudo tecnicamente ele um dimero, pois constitudo por 4 cadeias, iguais duas a duas, ou seja constitudo apenas por dois tipos de cadeias diferentes. O receptor deixa de o ser, quando as cel B forem activadas, transformando-se em plasmocitos (cel produtora de anticorpos). Imunoglobulina - termo geral que engloba tanto o receptor B como o anticorpo, no entanto mais associada ao termo anticorpo.

Fase inicial da vida da cel B

Cl B produzida na medula ssea, mas tem de deix-la para exercer a sua funo por todo o organismo (em especial migra para os rgos linfoides secundrios como o bao ou ndulos linfticos). Nesta fase mais posterior pode entrar em circulao onde pode ser activada, tornando-se num plasmcito, produtor de anticorpos.

Desenvolvimento cl B na medula ssea

Divide-se o processo em fases distintas: que baseando-se nos estdios de rearranjos do Bcr. O objectivo de uma cel precursora de cel B ter o receptor BCR. Para ter o Bcr a cel vai ter de rearranjar os locus genicos (um locus para cada cadeia) que codificam esse receptor. H um locus para a cadeia pesada e outro para a cadeia leve. S com as duas cadeias rearranjadas, transcritas e traduzidas que obtm-se um Bcr. Os locus rearranjados da cadeia pesada e da cadeia leve esto em cromossomas diferentes que codificam protenas diferentes que numa fase posterior vo ter de emparelhar, heterodimerizar, e formar o receptor. Mas, ambos os locus tm de sofrer rearranjos para formar genes funcionais, dando origem s protenas do BCR. Os genes nas cel somticas esto partidos em pedaos que esto interdispersos em quilopares de bases, por isso no possvel formar RNAm e protenas funcionais sem haver primeiro o rearranjo. Os rearranjos vo juntar os pedaos de genes que no fazem sentido despedaados, para formar um gene funcional da cadeia pesada ou leve. As divises das fases relacionam-se com rearranjos VDJ: Cadeia pesada (os segmentos so V, D e J) Cadeia leve mais pequena (s tem segmentos V e J).

Os rearranjos de ambas as cadeias so assncronos. No inicio d-se o rearranjo da cadeia pesada, posteriormente que a cadeia leve rearranjada.

Problema da cl em diferenciao
Inicialmente no tem rearranjos nenhuns porque uma cel estaminal (n esta comprometida com a linhagem B, logo no est a rearranjar os locus da cel B) Quando comea a rearranjar o locus da cadeia pesada a cel passa a estar comprometida com a linhagem cel B. Aquela cel j est determinada a ser uma cel B e n pode voltar atrs, pois os locus so muito especficos, e altamente controlados, para que mais nenhuma linhagem possa rearranjlos. Comeou o rearranjo da cadeia B, temos uma cel B em potncia que designada de pr-B, um prottipo de cel B, a fase mais primitiva. A cl passa de pr-B a pr-B quando j completou o rearranjo do DNA e j tem a protena corresponde quele rearranjo funcional.

que

Diferenas pr-B e pr-B

Pr-B - comeou o rearranjo do DNA, mas ainda no tem nenhuma protena derivada dos rearranjos, porque os rearranjos no esto completos, e por isso no h um gene funcional. Pr-B - j terminou o rearranjo da cadeia pesada, j havendo o gene, o RNAm e a protena.

Primeiro vai haver um receptor que deriva dos rearranjos no locus da cadeia pesada. Mas ainda no uma cel B, porque falta a cadeia leve, que ainda no rearranjou. Para haver Bcr tem de haver rearranjo cadeia leve e pesada, formando assim uma cel B.

Importncia cadeia leve para a cel B

Os receptores ainda no esto funcionais, pois s o so com a cadeia leve.

Configurao dos receptores s com a cadeia pesada

Deixa de haver um receptor em Y, deixa de haver os 2 braos caractersticos do Bcr, temos um homodmero com duas cadeias paralelas. Mas, esta molcula no funcional, e nem sequer excretada para a superfcie. Homodimeros de cadeia pesada no so estveis. Como estabilizar um receptor que ainda lhe falta a cadeia leve? Produz-se um receptor intermdio: pr-Bcr, que semelhante ao Bcr, havendo uma substituio das cadeias leves, por duas protenas VpreB e 5, que ocupam o lugar da cadeia leve, enquanto ela no est presente. Vo estabilizar o receptor e

permitir que ele v para a superfcie. O pr-Bcr precisa destas protenas que so muito diferentes relativamente cadeia leve: Origem- para termos uma cadeia leve precisamos dos rearranjos, enquanto que as protenas que substituem a cadeia leve no derivam de rearranjos, derivam de genes estruturados que s precisam de ser transcritos e traduzidos. (as nicas protenas que derivam de rearranjos so protenas do BCR e TCR)

As protenas VpreB e 5 localizadas no cromossoma 22 nos humanos e no cromossoma 16 nos ratinhos, tm a caracterstica de emparelhar com a cadeia pesada, estabilizando-a para formar um complexo prematuro (pr-Bcr) com o precursor do Bcr. Tudo isto ocorre na medula ssea. Em circulao nada emparelha com a cadeia pesada, porque s saem da medula ssea para a circulao, as cel que tm Bcr funcional, com cadeia pesada e leve. Ou seja, o pr-Bcr um mecanismo que permite cel passar a fase em que j tem cadeia pesada e ainda no tem a leve.

Importncia de haver uma fase onde s existe a cadeia pesada e a leve ainda no rearranjou
Forma de poupar energia. Sabendo que necessrio rearranjos, se a cadeia pesada rearranjada intil, ou se o rearranjo foi mal feito, no vale a pena continuar o processo, porque j existe uma protena abortiva. Mesmo que exista uma cadeia leve perfeita o receptor no vai conseguir emparelhar com nada. Este um checkpoint, que minimiza o gasto de energia para a cel B (sabendo que produzimos milhes por dia). Cerca de 70% falham o rearranjo, e por isso nem sequer chegam a terminar o desenvolvimento Bcr, e sofrem apoptose. S 30% cel B so teis. Este um mecanismo complexo, mas o nico mecanismo que nos permite lidar com o problema da diversidade dos antignios. S possvel ter receptores to diversificados, com os genes todos partidos aos pedaos, e sendo rearranjados aleatoriamente; assim, conseguimos ter anticorpos contra tudo. Quando os rearranjos com as RAG correm mal, temos de eliminar as cel que no so teis. H um espao limitado na nossa circulao que pode ser preenchido com cel B. O objectivo que todas as cel B em circulao possam interagir com antignios. A melhor forma de controlar a formao de Bcr funcionais, saber se a cel tem cadeia pesada til, caso contrrio morre. o pr-Bcr que permite a passagem de cel pr-B para cel B. A cadeia leve vai permitir a cel, a formar o Bcr e sair da medula ssea para a periferia.

Fentipo durante o desenvolvimento da cl B

Enquanto a cel B esta a passar por todos estes estdios, o seu fentipo celular extremamente dinmico. As protenas que a cel expressa superfcie e intracelularmente vo variando. Expresso de um dado receptor, tem a ver com a funcionalidade da cel na fase em que se encontra. Exemplo: Receptor da IL-7 - importante tanto para o desenvolvimento cel B como T, expresso nas fases mais prematuras de diferenciao. As cel pr e pr-B so altamente dependentes da expresso de IL-7. Caso no haja expresso de IL-7 na medula ssea, as cel atrofiam e no se desenvolvem. Depois de terem passado o checkpoint, a dependncia de IL-7 desaparece deixando de estar superfcie, porque existe um novo receptor que tem o papel de motor da diferenciao que lhe toma o lugar, que o pr-Bcr. C-kit - um receptor de cel estaminais, as cel que esto mais prximas das cel estaminais, as cel-me da cel B, ainda esto dependentes deste factor solvel, que o factor de cel estaminais. Quando as cel comeam a maturar deixam de ser dependentes do C-kit, e o receptor desaparece. E outros receptores passam a ser expressos. Ilustrando o quo dinmico o processo de diferenciao de cel B.

Resumindo
Para termos uma cel pr-B precisamos de ter uma cel que j esteja a expressar RAG, sem RAG no h rearranjos nem do BCR, nem do TCR. O facto da cel pr-B ter RAG, faz com que comece a fazer os rearranjos VDJ da cadeia pesada. Se os rearranjos forem mal sucedidos a cel morre. Se forem feitos com sucesso a cel progride, passa a ter duas cadeias pesadas, emparelhadas com as duas protenas no rearranjadas acessrias, formando o pr-Bcr. 1 checkpoint, s as cel com o pr-Bcr que podero progredir e proliferar para a fase seguinte, onde vai ocorrer o rearranjo da cadeia leve. A cadeia leve vai tomar o lugar das protenas acessrias, que estavam no pr-Bcr e formando o receptor final que d origem cel B madura. Se o rearranjo da cadeia leve for abortivo aquela cel tambm morre. Porque o pr-Bcr, no consegue dar total funcionalidade cel B, no permite que a cel saia da medula ssea. Este um novo checkpoint, onde se verifica na medula ssea, qual a cel que consegue colocar sua superfcie um Bcr funcional. S as cel que recebem sinais especficos atravs do receptor Bcr maduro, que conseguem sair da medula ssea e so funcionais na periferia.

Quando todo este processo tem deficincias surgem doenas

Agammaglobulinmia- ausncia de anticorpos na circulao, faz com que o doente no esteja protegido contra principalmente os organismos extracelulares, que desencadeiam uma resposta humoral forte com anticorpos especficos. Nesta doena vai ocorrer uma mutao num dos genes, bloqueando o sinal gerado no checkpoint onde temos pr-Bcr, o pr-Bcr no consegue sinalizar para dentro da cel, porque a tirosina cinase da cel B(BTK) no esta funcional. A BTK fundamental na transduo de sinal por cascatas de fosforilao da cel B. E mesmo que o receptor esteja presente no vai sinalizar, havendo um bloqueio no processo de diferenciao da cel B, no havendo desenvolvimento de cel B maduras, logo no h cel em circulao que produzem anticorpos. O indicador fisiolgico desta patologia, a ausncia de anticorpos de todas as classes no sangue. Todas as cel B esto bloqueadas em pr-B. Agammaglobulinmia uma doena ligada ao cromossoma X, porque o gene BTK se encontra cromossoma X, logo as mulheres so portadoras e os homens doentes. As mulheres raramente so doentes, porque para isso o pai tinha de ser doente, e se o pai no tem anticorpos no tem uma vida muito longa, e desaconselhada a procriao. Tratamento: transplante de medula ssea (como no sindroma de omen onde no temos RAG), temos uma medula com BTK, possibilitando as cl pr-B completarem o seu desenvolvimento. O transplante muito complexo pela histocompatibilidade. Imunossupresso e cl T reguladoras tm de ser controladas para haver maior tolerncia transplantao.

Na periferia
Fora da medula ssea, vo haver mutaes no DNA que vo alterar o genoma. Isto acontece quando as cel esto prontas para serem activadas, ou seja, prontas a interagir com o seu antignio, e receber sinais especficos para proliferar, fazendo anticorpo para que o patogenio da qual aquele antigenio especfico seja eliminado. Existem dois processos para alterao DNA periferia: Hipermutao somtica Mudana de classe

Dois processos que ocorrem em cel B funcionais que j saram da medula ssea, vo para a periferia e vo mudar o tipo de receptor que tm na sua superfcie. Os receptores de clulas B no so formados na medula de uma forma estanque, s terminado o processo depois de sarem da medula ssea. Isto s acontece em cel B, no caso das cel T estes processos que ocorrem periferia no vo existir. A cel T sai do timo j com o seu receptor final e no pode alterar mais o seu receptor. A cel T quando deixa o timo j sabe o que vai reconhecer e com que afinidade vai reconhecer. A cel B sai da medula com um receptor funcional, mas pode mud-los, normalmente no muda no sentido de ir reconhecer algo totalmente diferente, mas muda a interaco especfica que tem com aquele antignio. Tem a capacidade nica de tornar-se uma cel B melhor, produzindo um anticorpo com maior afinidade para determinado antignio.

Resumindo
A cel T sai do timo j com o receptor com determinada afinidade para o antignio especfico, e j no pode ser moldada. Enquanto que, a cel B vai ter a capacidade de mudar o seu receptor, a sequencia do seu receptor.

Hipermutao somtica - processo de mudana de afinidade do receptor das cel B para o antigenio. Est intimamente relacionada com a maturao da afinidade - quer dizer que a afinidade anticorpoantigenio vai poder mudar, tornar-se melhor, reagir com mais afinidade com o antignio, para que haja um reconhecimento melhor, mais eficaz. Isto devido ao processo de hipermutao somtica. A hipermutao somtica, consiste em mutaes de nucletidos isolados, na sequncia do receptor das cel B, estas mutaes acumulam-se todas na regio varivel do anticorpo, a regio do anticorpo que interage com o antignio (braos do Y), porque a parte constante serve para a funo efectora das clulas. A parte varivel que faz com que os anticorpos sejam todos diferentes e por isso reconheam antignios diferentes. No processo de hipermutao somtica h uma acumulao de mutaes na regio varivel. As mutaes acumulam-se ao longo da sequncia, mas h zonas particulares onde no h mutaes. Essas zonas com uma faixa azul, cdr1, cdr2, cdr3, so as zonas dentro da regio varivel as mais expostas, onde h o contacto directo entre o antigenio e o anticorpo. na zona mais exposta onde se acumulam as mutaes.

As zonas que esto menos expostas tm mutaes mais pontuais, no se acumulam tanto. Processo selecciona molculas que acumulam mutaes nas zonas crticas para a interaco com o antignio.

Como que as mutaes surgem?

O processo da hipermutao somtica no pode ocorrer completamente ao acaso. Vo haver processos celulares que vo promover este processo, h uma enzima AID que vai ser responsvel em particular, por fazer as mutaes e acumul-las. Este processo vai poder ser rentabilizado, pois temos uma enzima que vai promover reaces de formao de mutao, ou seja, de mudana de sequncia, mudando a sequncia do anticorpo. Este processo dinmico. Cel B que saiu da medula ssea com um receptor superfcie, vo ocorrer mutaes ao nvel do DNA. Assim a AID, vai ao nvel do DNA promover reaces de mutao, mudando as bases dos nucletidos, fazendo com que a sequncia mude. Um nucletido diferente, pode levar na maior parte das vezes a uma alterao do aa (no uma mutao silenciosa), tendo uma repercusso na sequncia da protena, estabelecendo-se uma nova sequncia para aquela molcula de anticorpo. Isto acontece na periferia, nomeadamente nos ndulos linfticos ou no bao, onde as cel B se encontram e acumulam, estando espera de serem activadas pelo seu respectivo antignio. H cel B que saram da medula ssea com determinado receptor e que no mudaram o seu receptor, mas h outras que mutaram o receptor, tendo alterado a sua sequncia. O que acontece : ou a mutao levou a que se obtivesse uma sequncia melhor para reconhecer o antignio, ou a sequncia desfavoreceu a interaco com o antignio. Se desfavoreceu a ligao receptor-antignio, a cel B que foi mutada interage pior com o antignio que a cel B que j l se encontrava que veio da medula ssea e permaneceu intacta. O que faz com que essa cel B que sofreu a mutao tenha uma desvantagem competitiva, e a cel B s vai proliferar se interagir com o antignio de forma eficaz e se receber o sinal de activao. Qualquer cel B que tenha uma afinidade pior para o anitgnio, responde menos ao antignio e por isso fica menos activa. Caso contrrio, se as mutaes que o receptor sofreu nas regies variveis, fazem com que se estabeleam pontes de hidrognio com o antignio de uma forma mais eficaz, o receptor de cel B d uma sinal mais forte cel. Ela replica-se mais, tendo assim uma vantagem competitiva. Em termos dinmicos o que vai acontecer que as cel B que se vo acumular e produzir anticorpos so aquelas que vo ter os receptores que so mais afins para o antignio. As cel B seleccionadas, por maior interaco com o antignio, tornam-se a populao dominante dentro daquele rgo linfoide. Este processo d-nos ento a possibilidade de produzir anticorpos mais fortes, mais afins possveis para o antignio em circulao. Estamos condenados a respeitar a aleatoriedade de processos que ocorrem na medula ssea, mas podemos ainda mudar e optimizar este processo na periferia, no local onde vamos receber os antigenios.

Queremos anticorpos contra todos antignios, mas se a dada altura houver em circulao um vrus, o que queremos muitos anticorpos para aquele determinado antignio. Da a importncia deste processo, porque ele dependente do antignio. O processo s ocorre quando este receptor mutado interagir com o antignio.

Resumindo
A cel B sai da medula ssea com um dado receptor de cel B, chegou ao ndulo linftico ou ao bao. Quando l chegar um dado antignio especfico para aquela cel interage com ela. A cel recebe um sinal. Esse sinal, aumenta os nveis da enzima AID que permite mudar o receptor que deu origem ao sinal. Assim, a interaco com o antignio vai permitir transmitir um sinal que leva expresso da enzima AID, que vai at ao DNA e muda a sequncia que d origem regio varivel do receptor cel B. Mediante as mutaes, os que interagem melhor com o antignio sobrevivem, os piores morrem. O que permite que se produzam anticorpos cada vez mais especficos, cada vez mais afins. O processo de mutao de afinidade, significa que o que se est a mudar a afinidade, e no a especificidade. Sendo as cel mais especificas para determinado antignio as que recebem mais sinal.

Mudana de Classe
A funo efectora dos anticorpos, dada pela poro constante do Bcr. No tem a ver com a regio varivel. Durante a diferenciao das cel vai haver um processo, que vai permitir a ocorrncia da mudana de classe. Ou seja, que os anticorpos mudem. Na medula ssea os anticorpos so produzidos nas duas classes IgD e IgM. Vai haver possibilidade de mudar o esqueleto da molcula de anticorpo, para formar anticorpos de outras classes Igg, IgA e IgE. IgE - alergias IgA - mucosas (intestino por exemplo) IgG - infeces Este processo permite-nos mudar a classe do anticorpo, passar de um IgD ou IgM para outro Ig.

Quanto s cel de memria, vamos ter cel que mudaram o seu Bcr, e cel que no mudaram o seu Bcr. Se aquelas que mudaram o Bcr so mais afins, ento teremos cel de memria mutadas mais afins e cel de memria sem mutao menos afins. O importante a sua capacidade de reagir muito depressa. Vamos ter cel de memria com diversos tipos de receptores. Fazemos cel de memria de todas as cel eficazes a lidar com determinado antignio. A cel B nunca sai da medula ssea sem os rearranjos VDJ feitos. S sai da medula ssea quando tiver o seu receptor formado. Este processo de hipermutao somtico vai ocorrer a nvel de DNA, com a diferena que este DNA j tinha sido rearranjado nos arranjos VDJ. A nica diferena que quando a cel B quando vai para a periferia contactar com o antignio pode mudar a afinidade do receptor. Mas estas mutaes so pontuais e j n tm a participao das RAGs, porque os rearranjos j acabaram. A cel B s activa a sua formao de anticorpos quando h antignio no organismo. Tornando-se um plasmocito (cel b a produzir anticorpos). A maioria das cel B est inactivada.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
6. Desenvolvimento Clulas T e NK
Resumo da aula terica: 28 de Fevereiro de 2008

Diferenciao de clulas T no timo

Ao contrrio das cel B, as cel T no se diferenciam na medula ssea ma s no timo. Da que os precursores hematopoieticos estaminais e a sua descendncia cheguem at ao timo e a se diferenciem em cel T funcionais, que podem migrar para a periferia e exercer as suas funes.

Funes de cel T
Matam alvos (cel infectadas ou transformadas)- cel citotxicas. Um marcador til para as identificar a molcula CD8 Ajudam outras cl do sistema imunitrio como macrfagos ou cel B. Cd4 um co-receptor, que caracteriza as cel de ajuda. A ajuda da cel T B vai ser essencial para que a cel B deixe de ter simplesmente o seu receptor superfcie, mas passe a secret-lo tornando-se num plasmocito, produtor de anticorpos. Existem duas grandes categorias de cel helper: cel TH1 e TH2. Existem outras como Th17, cel T reguladoras muito mais complexas.

Em geral podemos ver as cel T como cel que podem matar uma cel infectada, ou transformada ou como secretoras de citocinas (elementos solveis que se servem de factores de ajuda ou de crescimento ou de activao de outras cel do sistema imunitrio).

Diferenciao das linhagens de cel T e suas funes

O que caracteriza uma cel T o seu receptor. O receptor o resultado dos rearranjos altamente complexos VDJ (recombinao somtica), que no caso cel T ocorre nos locus genticos para o receptor das cel T. Fala-se em locus gentico porque temos pedaos de genes espaados de muitos quilopares de bases, que tm de ser rearranjados para formar um gene funcional dando origem a uma protena - cadeia ; e noutro cromossoma no locus gentico da cadeia , dando origem respectiva cadeia. Sendo heterodimero que vai constituir o receptor da maioria das cel T. Na realidade, h 2 populaes cel T, as com o receptor , e as . E ambas fazem o mecanismo rearranjos dos segmentos genticos para produzir o gene funcional, que vai dar no fim uma protena funcional como Tcr . Apesar destes receptores estarem superfcie e serem eles que vo interagir com os antigenios, eles s transmitem sinais para dentro da clula se estiverem acoplados s protenas: Cd3 que so um elemento de transduo de sinal do complexo Tcr. Designamos este de complexo Tcr, que constitudo pelo Tcr (prprio o receptor), e pelas subunidades Cd3 que so de diversos tipos ,, este grande complexo que sinaliza intracelularmente. Esta sinalizao depende de zonas das molculas Cd3, que so designados de ITAM- imunoreceptor tyrosine-base activation motif. Relaciona-se com as tirosinas contidas nesta sequncia de aa, tirosinas que so altamente fosforilaveis, sendo que o mecanismo de transduo de sinal dentro das cel so cascatas de fosforilao. O que vai acontecer transferncia de grupos de fosfato, entre as vrias protenas que vo estar por baixo do Tcr. A informao s vai chegar ao ncleo porque as Cd3 tm tirosinas fosforilaveis e porque existem uma serie de protenas que so reponsaveis pela transduo de sinal. Tanto o receptor , como usam as molculas Cd3 para fazer transduo de sinal, o que faz com que o Cd3 seja um marcador nico das cel T. Todas as cel T so Cd3 positivas. Outros marcadores ou so partilhados com outras linhagens celulares, ou so diferentes entre os dois tipos de cel T.

Desenvolvimento do complexo Tcr

O desenvolvimento do complexo Tcr tem de ocorrer no timo, para que a partir de cel hematopoieticas estaminais, e precursores linfoides comum, estas cel se desenvolvam para depois migrar do timo para os rgos linfoides secundarios e exercer a sua funo.

O timo um rgo sobreposto ao corao. O objectivo no desenvolvimento do timo adquirir receptores de cel T que vo dar cel T capacidade de reconhecer antigenios. Sem receptor de cel T a cel no sequer uma cel T, nem sequer era capaz de interagir com o antigenio. O timo o local preferencial de diferenciao destas cel porque oferece um conjunto de sinais que outros rgos no oferecem. O timo tem uma arquitectura particular onde existem cel epiteliais diferentes no crtex e na medula. O timo composto por cel do esqueleto, e cel de origem hematopoietica como macrfagos ou cel dendriticas, que vo dar sinais especficos s cel T. Os timocitos e linfocitos em geral so extremamente redondos e regulares na sua forma. O timo uma estrutura altamente complexa em que cada timocito est a receber sinais do epitelio e de outras cel de origem hematopoietica.

A importncia do timo: Sindrome diGeorge

Em pacientes com mutao no cromossoma 22 no tm timo - sndrome de diGeorge. Neste sndrome no h desenvolvimento do timo, havendo ausncia de cel T. Ratinhos nude so utilizados para demonstrar a importncia do timo. Chamam-se nude porque no tm plo, pois tm uma mutao num gene foxn1, que um factor de transcrio essencial para que as cel epiteliais se diferenciem terminalmente. Sem este factor de transcrio no h epitelio diferenciado. A pele no atinge a diferenciao ao ponto de produzir plos, que so dependentes das cel epiteliais que os suportam. Por outro lado, o timo que precisa do epitelio, tambm vai ser um timo amorfo, e subdesenvolvido. Praticamente no possvel detectar timo nestes ratinhos, o que faz com que os ratinhos no tenham cel T.
Caso clnico Santa Maria: 3 meses de idade, criana com alopecia total (ausncia de plo), e uma adenite provocada pela vacinao pela BCG. Aos 5 meses tinha falhas respiratrias graves. Havia uma disseminao de bactrias da vacina BCG. E por radiografia percebeu-se que o timo no estava presente (em crianas ele grande; com a idade precisamos menos do timo porque temos mais cel T em circulao). No havia cel T em circulao numa concentrao normal. Diagnosticada SCID, onde cel do sistema imunitrio esto deficientes (normalmente, tem a ver com mutaes em genes essenciais ao sistema imunitrio que podem afectar cel B ou T). No caso havia deficincias cel T, reforado sobretudo pela alopecia. A partir da foi estudado em detalhe o gene foxn1. Foi feito o genotipo pai e da me e ambos eram heterozigoticos para o gene foxn1, e a criana tinha herdado o gene recessivo, sendo homozigotica, manifestando SCID. Havia um TGA nesta sequncia, que um codo stop, e a criana no tinha a protena codificada pelo gene foxn1. Fez-se um transplante de timo, e no de medula porque a medula estava saudvel, o timo que no estava desenvolvido. preciso um dador, depois mergulha-se o timo numa substancia que mata as cel hematopoieticas do dador, porque o dador muito raramente ser compatvel com o receptor (tiramos cel T que esto no timo que ao chegarem ao nosso corpo o vo rejeitar, ficando s o epitelio). Mesmo que se transplante um timo de adulto j parcialmente atrofiado, ele continua a conseguir produzir bastantes cel T.

Onde colocar o timo? Na coxa, entre os msculos, que so muito irrigados. No fim verificou-se que as cel T Cd4 (helper) estavam a recuperar. As Cd8 so mais lentas na recuperao.

A partir daqui possvel ver o quo importante o timo para o desenvolvimento cel T.

O que acontece no timo?

As cel B dividiam-se em diversas fases de diferenciao: pr-B, pr-B e B maduras. O mesmo se passa com as cel T: pr-T, pr-T e T maduras. Ambas as linhagens derivam dos progenitores pr-b, pr-t, de uma populao que se designa duplamente negativos, porque no expressam, so negativos para Cd4 e Cd8 (molculas acessrias muito importantes para activao cel T). As cel T de ajuda so Cd4+, as citotoxicas Cd8+, e os progenitores so negativos para ambas as molculas. A partir de cel duplamente negativas para se desenvolverem em cel de ajuda ou citotoxicas, passam por um estdio onde se encontram cerca de 80% dos timocitos, estdio de duplamente positivos Cd4+ e Cd8+. E so destas cel me que se geram ou cel de ajuda ou cel citotoxicas. A deciso celular em tornar-se uma cel citotoxica, ou uma cel de ajuda ocorre em cel que so fenotipicamente definidas positivamente pelos dois marcadores Cd4 e Cd8. Enquanto que a deciso para seguir a linhagem , esta ocorre nos precursores mais imaturos, nos duplamente negativos, que tm de decidir se vo para a linhagem ou .

O que que acontece com uma cel pr e pr-T?

Por citometria de fluxo, temos marcadores superfcie das cel, que podemos reconhecer com anticorpos marcados fluorescentemente, e identificamos assim as vrias populaes. No timo do ratinho, existem cel Cd4 e Cd8 negativas, que chegam da medula ssea ao timo. Passam para a fase em que expressam Cd4 e Cd8 duplamente positivas (cerca de 80%). So essas cel que decidem em tornar-se citotoxicas (Cd8+ e Cd4-), ou de ajuda(Cd4+ e Cd8-). Todas elas so identificadas por anticorpos fluorescentes. Tal como nas cel B, tambm nas cel T h expresso de protenas superfcie da cel que vo variar mediante o estdio de diferenciao. Permitindo definir os estdios de duplamente negativos, duplamente positivos. C-kit - um factor que promove o crescimento de cel estaminais. No inicio da diferenciao no timo este receptor muito importante, as cel esto mais prximas das cel estaminais, e so dependentes deste factor para o seu crescimento. Depois este factor desaparece do timo porque outros receptores que se tornam mais importantes para dirigir a sua diferenciao (como a il-7). il-7- o receptor da il-7 muito impotante, porque na ausncia da il-7 as cel T no recebem sinais fundamentais de sobrevivncia, necessrios para elas progredirem at gerarem a cel maduras. Em ratinhos nockout para a il-7 ou para o seu receptor, cel T morrem durante a diferenciao. Na linhagem passam para 10% do que o normal, pois as cel duplamente positivas esto diminudas, o que faz com que o timo tenha uma dimenso menor (a populao mais abundante de timocitos fica diminuda). No caso das a reduo de cel mais dramtica,a reduo para zero, no h cel em ratinhos que no expressam il-7. Da que a il-7 indispensvel para haver cel da linhagem . (il-7 um factor de transcrio tambm importante para as cel B)

 no estdio duplamente negativo, que se as cel no receberem sinais do receptor il-7, ficam fragilizadas e acabam em grande parte por morrer. As cel no se produzem, porque os rearranjos VDJ, s ocorrem se houver sinais da il-7. Enquanto que na linhagem , os rearranjos no so dependentes da il-7, mas a sua sobrevivncia dependente deste factor de crescimento, havendo uma reduo cel T .
A mutao humana, origina uma SCID, ligada ao cromossoma X. Dos genes que codificam o receptor da il-7 (o receptor tem 3 cadeias), o que codifica a cadeia particularmente importante porque partilhada com outros receptores de il, se esse gene para a cadeia estiver mutado, o receptor il-7 no funcional e existe uma ausncia de cel T. Contudo, as cel B encontram-se em nveis razoavelmente nor mais, porque as cel B so menos dependentes da il-7 do que as cel T. Normalmente, esta SCID manifesta-se em crianas particularmente susceptveis a infeces, ao fazer anlises ao sangue, verifica-se uma grande diminuio cel T, mas as cel B esto dentro de valores normais, pode-se concluir que algo est a falhar na gerao das cel T. Pensa-se numa possvel mutao no receptor il-7 fundamental para que as cel T se diferenciem. Um teste possvel, analisar se as cel B presentes tm o receptor da il-7, com um anticorpo monoclonal que reconhece a cadeia da il-7. Caso as cel B no tenham o receptor, elas conseguem formar-se porque tm informao de outros receptores, mas significa que o receptor tambm no est nas cel T e por isso as cel T no esto a conseguir diferenciar-se. Tratamento: neste caso o problema dever ser resolvido com transplante de medula ssea, porque o problema tem a ver com a linhagem hematopoietica. Tem a ver com as cel do indivduo que no conseguem expressar o receptor. Se tivermos um dador de medula ssea com o receptor il-7 intacto, basta transferir-se a medula ssea para a criana e j se consegue gerar cel T com receptor intacto.

A seguir ao receptor il-7, qual o receptor mais importante na fase subsequente do desenvolvimento das cel T?
um pr-receptor de cel T, tal como nas cel B.

(nas cl B os rearranjos da cadeia pesada acabam antes da cadeia leve e preciso o pr-receptor, para que as cel no fiquem estancadas s com cadeia pesada e sem a leve. Ento temos um receptor substituto onde a cadeia pesada arranja umas protenas normais dentro da clula, capazes de emparelhar com a cadeia pesada e fazer um primeiro receptor que d sinais cel para ela avanar).

Nas cel T temos uma cadeia e uma , a cadeia vai estar presente muito cedo, mas a cadeia s vai surgir no fim do desenvolvimento, nas cel Cd4+ ou Cd8+. Como os homodimeros no so estveis, e os monmeros so ainda menos estveis, a cadeia tem de emparelhar com alguma protena. No entanto, a nica cadeia com a qual a cadeia tem afinidade a cadeia , que s produzida uns dias mais tarde. Ento substituise a cadeia por uma protena normal, que no deriva de gene rearranjados. A protena chama-se pr-Tcr e forma o receptor pr-Tcr. Pt o produto de um gene normal da cel.
(ns no herdamos os genes dos receptores linfocitos, herdamos o mecanismos para produzir os nossos prprios genes, por herdarmos o gene que codifica a protena RAG)

O pr-Tcr, faz o papel do Tcr em fases mais prematuras. Ou seja, em ratinhos que no tm pr-Tcr, as cel comeam a diferenciarse, recebem os sinais da il-7, mas chegam a esta fas e onde precisam de ter um pr receptor e se no tiverem morrem (grande parte das cel B e T morre), no timo 90% cel T morrem, porque no passam os checkpoints, sendo a presena do pr-Tcr o 1 checkpoint. Quando a cel no tem pr-Tcr morre. Se tiver pr-Tcr, passa para populao cel duplamente positivas, sofrendo uma expanso.

Resumindo
O que preciso ter uma RAG, que faa os rearranjos, que os rearranjos sejam produtivos, e os checkpoints analisam se a cl rearranjou bem as cadeias dos receptores para poder seguir a diferenciao. Porque caso contrrio pra a sua diferenciao, porque a cel no vivel, e assim no perdemos energia a construir uma cel no vivel. (as cadeias normalmente no so bem rearranjadas quando a sua estrutura tridimensional e as interaces entre aa da mesma protena no correcta.) Se houver cadeia bem rearranjada, a cel espera pelo rearranjo cadeia para produzir uma cel T. Fases na diferenciao cel T: Inicial- em que no h nenhum receptor de cel T, que est muito dependente de outros receptores como o receptor notch ou il-7 Depois- as cel recebem um pr-receptor superfcie que vai ter um papel fundamental ate o receptor maduro surgir.

As cel s saiem do timo se tiverem o receptor maduro, todas as cl anteriores cel T madura so cel exclusivas do timo. O timo o responsvel pela diferenciao completa das cel T. S saiem do timo cel que tenham Tcr. Pr-Tcr s pode ser encontrado no timo , pr-Tcr um complexo de transio. Tcr, podemos encontrar em muitos lados, rgos linfoides secundrios, ou locais infeco.

Aps haver um Tcr maduro, o Tcr interage com o ligando MHC-complexo maior de histocompatibilidade. Os problemas de transplantao, deriva do facto de sermos polimorficos para o MHC, que so diferentes entre cada indivduo. O que est por detrs da rejeio o facto das cel MHC serem o ligando das cel T. Assim, as cel T vo patrulhar o organismo atravs das molculas MHC. Caso a cel no haja MHC a cel no consegue identificar nada. Todas as cel do nosso organismo excepto os glbulos vermelhos tm MH C- I, que a molcula que informa as cel T que o organismo est normal. s vezes os MHC deixam de estar superfcie em casos de infeces e cancros, sendo uma escapatria ao controlo das cel T.

Sem MHC o receptor Tcr no serve de nada. o MHC que apresenta o pequeno pptido especfico de determinado antigenio. Da que as cel T so diferentes das cel B, na medida em que no vem uma protena completa, como a cel B v (anticorpo reconhece uma protena completa). A cel T responsvel pela imunidade celular, o que ela reconhece so clulas, portanto tem a capacidade de interagir com celulas, no com protenas como acontece com cel B (imunidade humoral) . Se cel T reconhecessem protenas andavam em soluo, e esse o papel dos anticorpos. A funo cel T chegar cel e saber se ela esta infectada ou no, se tiver tem de ser destruda. Esta deciso s possvel porque Tcr interage com as molculas MHC-I (s a classe I que expressa pelo nosso organismo, excepto pelos eritrcitos).

Fase final diferenciao cel T

Depende da interaco que o receptor cel T tem com o MHC. O MHC vai ser fornecido pelas cel que esto no timo: cel epiteliais, cel dendriticas, que vo puder apresentar MHC e pequenos pptidos s cel T que esto em diferenciao.

Destino das cl T que j tm Tcr, aps interaco com o MHC

As cel T que saiem do timo, tm de conseguir interagir com o MHC, para que consigam fazer o reconhecimento. Uma cel que passe os 1s checkpoints, tenha o Tcr e no consiga interagir com o MHC no serve para nada, por isso vai ser morta, no vai ser seleccionada, vai ser ignorada, negligenciada. No vai receber que o sinal MHC d para a cel progredir. Caso contrrio, recebe o sinal MHC e seleccionada positivamente. Caso a interaco seja extremamente intensa e a cel receba imenso sinal intracelular, a cel morre por apoptose, rejeitada, morta - designando-se o processo de seleco negativa. Na seleco negativa, o que acontece que se no momento que ela esta a ver uma molcula do prprio organismo, reage de forma to forte, essa clula tem uma grande potencialidade de ser autoimune. Os Tcr s reconhecem pptidos ligado ao MHC, que uma outra forma de garantir que as cel T no andam a reagir contra pptido do prprio. O que o MHC mostra so pptidos de todas as protenas que esto dentro da cel, mostrando se tem dentro de si pptidos normais ou infectados.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
8. Clulas dendrticas e PRRs
Resumo da aula terica: 6 de Maro de 2008

Temas a abordar:
Clulas dendrticas e imunidade Tipos de clulas dendrticas Pattern recognition receptors PRRs O paradigma das clulas dendrticas e as suas misconcepes Interferncia da funo das clulas dendrticas - utilidades e inconvenientes

Clulas dendrticas e imunidade

Porque que as clulas dendrticas so to importantes? As clulas dendrticas pertencem ao SI inato. So da mesma famlia que os moncitos e macrfagos. Este tipo de clulas tem 2 caractersticas: permitem uma resposta muito rpida aos patognios, isto porque no especfica, e em comparao aos macrfagos, tm a capacidade de migrar entre diferentes compartimentos corporais. As clulas dendrticas encontram-se nos tecidos, onde ocorre o reconhecimento dos patognios. Para alm do reconhecimento do patognio, elas adquirem a capacidade de migrar para os gnglios linfticos. nos gnglios linfticos que a activao dos linfcitos B e T ocorre. Sem a activao, nunca conseguiremos combater a infeco porque os linfcitos B e T que iro proporcionar uma resposta especfica e duradoura contra o patognio. Portanto, isto o que torna estas clulas to nicas sem elas, no seria possvel activar os linfcitos B e T e no se conseguiria ter uma resposta especfica para o patognio.

Histria das clulas dendrticas Em 1873, em laboratrios alemes, Paul Langerhans descreve um tipo muito peculiar de clula com uma morfologia estrelada. Estas clulas foram pobremente caracterizadas durante muito tempo por uma colorao histoqumica e designadas clulas de Langerhans. Apenas 100 anos depois foram isoladas de diferentes tecidos (bao, gnglio linftico cervical e placas de Peyer) clulas com uma morfologia j vista nas clulas de Langerhans na pele chamaram-lhes clulas dendrticas por causa das longas dendrites que delas se projectam. Elas pareciam claramente um novo tipo de clulas dendrticas. O estudo das clulas dendrticas comeou, portanto, apenas em 1973.

Localizao das clulas dendrticas Onde que podemos ento encontrar clulas dendrticas em rgos, in vivo? Na pele de novo, designadas clulas de Langerhans (4% das clulas da epiderme); Caracterizadas pela expresso de molculas de adeso: caderinas E que ancoram as clulas de Langerhans aos queratincitos. Tambm so muito ricas numa protena do citoesqueleto, a actina F. Expressam igualmente molculas apresentadoras de antignios. Nos rgos linfides tambm possuem a capacidade de activar os linfcitos T. Em circulao no sangue perifrico, mas em baixa representatividade, So encontradas em menos de 1%. Mas so predominantes na linfa 20% das clulas circulantes na linfa. De facto, as clulas dendrticas usam os vasos linfticos para migrarem de um tecido perifrico para o gnglio linftico.

Distino das clulas dendrticas Alm da forma em estrela, no h nenhuma caracterstica especfica das clulas dendrticas. H contudo um conjunto de caractersticas que lhes so comuns, e que so analisadas para as distinguir: Morfologia Fentipo: devem-se excluir a presena de marcadores especficos de outras clulas: CD14, CD16, CD56, CD19, CD20, CD3. Contudo, algumas expressam CD11c. H molculas de integrinas que so teis para identificar as clulas in vivo. PRRs receptores, intra ou extracelulares que so expressos de modo a estas clulas identificarem. Molculas de activao dos linfcitos, com funo de activar linfcitos nos gnglios linfticos, e molculas coestimulatrias. Molculas para migrao receptores de quimoquinas. No s expressam receptores de quimoquinas como alteram a sua expresso durante o seu tempo de vida. Os receptores de quimoquinas so protenas transmembranares que identificam um ligando, ligando este que secretado num gradiente. Deste modo, seguindo o gradiente, as concentraes crescentes, as clulas dendrticas podem migrar no tecido ou no gnglio linftico.

Tipos de clulas dendrticas

Origem das clulas dendrticas Como j sabem, as clulas do sistema imune podem ter uma origem mielide ou linfide. A origem mielide a dos moncitos, macrfagos clulas do sistema imune inato. A origem linfide a dos linfcitos T e B. Uma particularidade que as clulas dendrticas podem derivar de ambas as linhagens, linfide e mielide. A primeira evidncia de que as clulas dendrticas provm da linhagem mielide foi encontrada em 1998 usando o modelo de transmigrao. Neste modelo, constri-se uma espcie de tecido numa camada de clulas em cultura, onde uma camada de clulas endoteliais se encontra sobre uma camada de colagnio e repousa num meio de cultura de clulas normal. Uma particularidade especial que a matriz de colagnio contm partculas fagocticas que podem ser fagocitadas eventualmente por moncitos-macrfagos. O que se fez foi depositar uma amostra de clulas mononucleares de sangue perifrico, contendo linfcitos B e T, macrfagos, moncitos, na superfcie apical das clulas endoteliais

e deixar incubar durante cerca de 1,5 h. Depois de fazer a purificao, removendo as clulas que permaneciam superfcie, deixou-se encubar por mais 48h. Durante este tempo, o que aconteceu foi que os moncitos presentes no sangue perifrico atravessaram a camada epitelial e permaneceram na matriz de colagnio. Na matriz, ficaram em contacto com as partculas fagocticas e eventualmente, englobavam-nas. Aps 24h, no meio recolhido da superfcie apical das clulas apicais era possvel encontrar, alm de algum contaminante (linfcitos), clulas com uma morfologia tpica de clulas dendrticas e que continham no seu interior partculas fagocticas. Analisando as clulas que permaneceram na matriz de colagnio tinham um fentipo completamente diferente, assemelhavam-se muito mais a macrfagos. O que esta experincia permite concluir, que as clulas dendrticas podem diferenciar-se a partir de moncitos do sangue perifrico e esta diferenciao d-se na presena de partculas fagocticas patognicas.

Em relao outra classe de clulas dendrticas, provenientes de precursores linfides, elas derivam das chamadas clulas T plasmacitides. As clulas T plasmacitides tm uma morfologia como a dos plasmcitos (linfcitos B) mas no expressam Ig. Expressam tambm o correceptor CD4 mas no CD3. Depois tm um marcador de APC (clulas apresentadoras de antignios) pois expressam MHC-II. Portanto, este um tipo de leuccito que tem capacidade de migrar e que apresenta caractersticas de linfcito B, T e de APC. So clulas fracas, difceis de manter em cultura. A nica forma de as manter em cultura e de as expandir adicionando IL-3 e outros factores, sendo que o mais importante a IL-3. Se o fizermos, as clulas sobrevivem, sofrem expanso e diferenciao em clulas dendrticas.

As clulas derivadas de precursores linfides designam-se clulas dendrticas plasmacitides enquanto as clulas derivadas de precursores mielides designam-se clulas dendrticas mielides.

Desde esta primeira descoberta, houve uma srie de tentativas para gerar clulas dendrticas in vitro. O importante a reter deste slide que um moncito do sangue perifrico pode diferenciar-se nas chamadas clulas dendrticas derivadas dos moncitos se mantidos num meio de cultura com GM-CSF. Este um tipo de clula dendrtica muito comum, utilizado at em investigao laboratorial, mas tambm em imunoterapia.

Funes das clulas dendrticas

Captao de antignios Processamento de antignios Apresentao de antignios Induo de resposta pelos linfcitos T

Tudo o que est relacionado com a induo de uma resposta imunitria pelos linfcitos T: As clulas dendrticas tm uma variedade de mtodos para captar antignios, mas o mais caracterstico a macropinocitose, na qual estas clulas so muito eficientes, em especial devido sua forma: A macropinocitose a captao de grandes quantidades de soluto de uma forma no especfica. Formam-se prolongamentos da membrana plasmtica que se estendem e voltam a fundir, formando vesculas que transportam solutos para o interior da clula. Assim, as clulas dendrticas passam a ter no seu interior antignios, no apenas provenientes dos patognios, mas, eventualmente, antignios endgenos, por exemplo, provenientes de clulas mortas. Deste modo, formam-se milhares de vesculas onde pode ocorrer a formao do complexo pptidoMHC-II, de modo a que o antignio seja preparado para apresentao s clulas T. Este processo muito eficiente as clulas dendrticas podem captar o volume de uma clula numa hora apenas. So clulas muito activas metabolicamente. A macropinocitose no o nico processo de captao de antignios, existem outros, como a fagocitose, ou outro mecanismo um pouco mais especfico, como o caso da endocitose mediada por receptores, intra ou extracelulares, que reconhecem especificamente componentes dos patognios e que podem facilitar a ingesto de patognios inteiros (bactrias, vrus) ou de partculas derivadas de patognios. Estes receptores so peculiares pois so caractersticos do sistema imune inato. Por agora, chamemos-lhes receptores do sistema imune inato. Em comparao com os receptores da imunidade adquirida (BCR, TCR), possuem diferentes caractersticas: Os receptores da imunidade inata esto codificados na linha germinativa os genes que os codificam no sofrem recombinao somtica; Os receptores da imunidade inata no so expressados diferentemente nos clones em geral, cada clula dendrtica tm a capacidade de expresso do padro completo do receptor;

 Os receptores da imunidade inata possuem uma especificidade pr-determinada no so seleccionados. Esto presentes, prontas para a sua funo, em caso de infeco ou no; Os receptores da imunidade inata tm uma diversidade reduzida em comparao com os receptores da imunidade adquirida, que podem existir em at 1015 formas diferentes, os receptores da imunidade inata apresentam uma diversidade que no excede os 103 Assim, todas estas caractersticas permitem-nos concluir que cada receptor do sistema imune deve reconhecer mais do que um patognio, completamente diferente do receptor da imunidade adquirida em que cada receptor reconhece apenas 1 antignio. Como que um nico receptor pode reconhecer vrios patognios? O facto que no h um reconhecimento de um patognio especfico, mas sim o reconhecimento de uma classe de molculas expressas pelos patognios. Assim, o receptor da imunidade inata liga-se a aos PAMPs pathogen associated molecular pattern. As PAMPs so classes de molculas expressas pelos patognios, podendo ser carbohidratos, lpidos, cidos nucleicos ou protenas. Cada receptor que reconhece uma PAMP designa-se PRR pattern recognition receptor, porque reconhece um padro de um patognio. Existe alguma variedade de PRR tendo sido recentemente proposta uma nova classificao. possvel dividi-los em 3 classes: Opsonizantes, fagocticos e instrutivos. Os opsonizantes so molculas solveis que podem induzir um sinal intracelular, tendo como aco opsonizar as partculas criam uma camada que torna mais fcil a captao da partcula. Os fagocticos tambm esto envolvidos na fagocitose mas so diferentes, pois podem participar na sinalizao das clulas T, mas nem todos os PRRs fagocticos tm a capacidade de gerar um sinal. Nem os PRRs opsonizantes nem os fagocticos so absolutamente essenciais para gerar um sinal nos linfcitos T estas classes de receptores no tem um papel instrutivo na activao dos linfcitos T. Contudo, a terceira classe de PRR, designada instrutiva, compreende a famlia dos Toll-like receptors e NLR, que podem estar ligados membrana ou presentes intracelularmente, podendo sinalizar usando molculas acessrias - no possuem sequncias sinalizadoras mas podem iniciar um sinal atravs destas

molculas acessrias no citoplasma. O papel principal destes receptores que a transduco de sinal essencial para dirigir a resposta imune mediada pelas clulas T. Sem a sinalizao pelo TLR, a imunidade proporcionada pelas clulas T no eficaz. Apresentam-se de seguida dois exemplos das duas ltimas classes, e instrutiva: PRR fagoctico a DC-SIGN uma molcula de adeso, com um domnio de reconhecimento de carbohidratos, um domnio transmembranar (ligao membrana da clula) e um intracelular, que contm uma sequncia sinalizadora. O que esta molcula faz ligar-se a carbohidratos numa forma dependente do clcio. Qual a utilidade desta molcula? So vrias as suas funes, sendo uma delas reconhecer patognios, havendo pelo menos 2 patognios que podem ser reconhecidos: Mycobacterium tuberculosis e HIV, como se pode ver na figura. No primeiro caso, podemos ver a vermelho a marcao da clula dendrtica e a verde o Mycobacterium tuberculosis. Na primeira hora, a clulas e o patognio esto lado a lado, verificando-se a captao deste ltimo quando h sobreposio da marcao vermelha e verde (amarelo). Ao fim de uma hora, apenas o Mycobacterium tuberculosis est no interior da clula mas no a molcula sinalizadora da clula dendrtica, que est sua superfcie. Com o HIV acontece basicamente o mesmo, mas o HIV no internalizado pelas clulas dendrticas, apenas sinalizada a sua presena s clulas T para facilitar a resposta destas. A segunda funo importante a funo migratria: as clulas dendrticas usam o DC-SIGN para atravessar os epitlios, movendo-se da periferia para os gnglios linfticos. Como est representado na figura, as clulas dendrticas ligam-se a integrinas designadas ICAM II, expressas pelas clulas endoteliais e desta forma podem transmigrar atravs do tecido. Se for feita uma marcao histoqumica especfica para DC-SIGN e ICAM II, possvel visualizar claramente a ICAM II nas vnulas de endotlio alto, na camada epitelial que deve ser atravessada pelas clulas dendrticas. A marcao especfica para DC-SIGN mais evidente, localizada nas clulas de morfologia estrelada.

A terceira funo do DC-SIGN promover a adeso entre as clulas dendrticas e os linfcitos T, que ocorre 15 a 20 minutos depois do encontro entre estas clulas. Durante este tempo, ainda no houve reconhecimento do antignio. O que o DC-SIGN faz facilitar encontro entre as clulas dendrticas e os linfcitos T, mas no necessrio para estabilizar a interaco nem para activar as clulas T. Para estabilizar o contacto, h outras molculas: LFA-1 que se liga a ICAM-1. Enquanto o DC-SIGN e os receptores fagocticos no so necessrios para a activao dos linfcitos T, os TLR so, pelo que so designados instrutivos. Toll-like receptors famlia de receptores (na figura esto apenas ilustrados os TLR para os quais so conhecidos os ligandos) expressos na superfcie celular ou no interior da clula (na membrana do retculo endoplasmtico ou no citosol). Estes receptores tm a capacidade de reconhecer classes de molculas de patognios, PAMPs, de um modo especfico. Note-se que os TLR intracelulares ligam-se a cidos nucleicos, o que inteligente da parte do sistema imune, visto que o momento em que a infeco intracelular o momento em que o patognio processado pelas APC pelo que h libertao de material nucleico no interior clula. Estes receptores localizam-se ento onde so necessrios. Estes receptores no so apenas compartimentalizados na mesma clula mas tambm em diferentes tipos de clulas dendrticas. Em particular, clulas dendrticas mielides expressam uma maior quantidade de receptores TLR superfcie, em especial TLR2, TLR4, enquanto as clulas dendrticas plasmacitides so positivas para TLR intracelular, especialmente, TLR9 e TLR8. Isto sugere que as classes de clulas dendrticas podem entrar em jogo consoante o reconhecimento de diferentes partculas. Por exemplo, sabe-se que as clulas dendrticas plasmacitides tm uma funo eficiente no reconhecimento de infeces virais.

Em relao estrutura destes receptores, esta foi estabelecida muito recentemente. Na figura apresenta-se TLR1 e TLR2 ligados ao pptidos e TLR4 ligado ao LPS. Tm o aspecto de um gancho. O reconhecimento do antignio induz a heterodimerizao com a qual se inicia a transduco de sinal. Qual ento a importncia do TLR para a activao dos linfcitos T? O mecanismo pelo qual essa activao ocorre foi estabelecido ainda antes da descoberta dos TLR, a partir de uma observao feita em 1989: Enquanto o antignio reconhecido pelas clulas B e T, proporcionando uma resposta forte, as bactrias mortas podem activar as clulas dendrticas atravs de receptores especficos.

Agora sabemos que as clulas dendrticas podem ser encontradas num estado imaturo nos tecidos perifricos e elas tornam-se maduras graas sinalizao pelo TLR. As clulas dendrticas imaturas tm um conjunto de caractersticas mais til captao do antignio enquanto as clulas dendrticas maduras tm caractersticas necessrias activao dos linfcitos T no gnglio linftico. A sinalizao pelo TLR regula esta maturao ao longo do tempo depois da estimulao.

O paradigma das clulas dendrticas e as suas misconcepes

Antes da descoberta do TLR, havia um paradigma das clulas dendrticas:
As clulas dendrticas captam antignios muito eficientemente O processamento de antignios nas clulas dendrticas muito eficaz As clulas dendrticas migram para os ndulos linfticos As clulas dendrticas induzem a resposta pelos linfcitos T

Um nico tipo de clulas dendrtica capaz de realizar todas estas funes ao mesmo tempo. Existe regulao das funes ao nvel da sinalizao pelo TLR.
As clulas dendrticas captam antignios muito eficientemente: a captao de antignios regulada ao longo do tempo consoante a sinalizao pelo TLR. Aqui possvel ver uma preparao de clulas dendrticas de diferentes tecidos, quer imaturas quer maturas por adio de antignio e depois com adio de partculas verdes. A capacidade destas clulas para captar as partculas medida ao longo do tempo. possvel ver que as clulas dendrticas tratadas com LPS esto muito mais verdes do que aquelas no tratadas. Mas a fluorescncia verde aumenta durante aproximadamente 40 minutos quando h adio de LPS e depois torna a diminuir. Portanto, verdade que as clulas dendrticas tm a capacidade de captar antignios mas fazem-no de uma forma regulada que varia em relao ao tempo. Esta regulao ocorre de acordo com a sinalizao pelo TLR.

O processamento de antignios nas clulas dendrticas muito eficaz: tambm no verdadeiro tambm este processo de degradao dos antignios regulado de acordo com o tempo pela sinalizao pelo TLR. De novo, nesta experincia encontram-se clulas dendrticas imaturas e maturas, tratadas com LPS s quais adicionado um antignio. Este pode ser detectado dentro das clulas por western blot em diferentes momentos. Podemos observar que nas clulas imaturas, o HRP bastante estvel e visvel depois de 18 horas, apesar de a densidade da banda diminuir, indicando um trimming. Nas clulas dendrticas maturadas com LPS, o HRP mantido durante perodos de tempo menores e j no visvel s 18 h. O que isto nos indica a capacidade das clulas de manter o antignio no seu interior e process-lo mais tarde mas tambm que o processamento do antignio est dependente da sinalizao pelo TLR. Este um conceito muito importante pois se o antignio for captado e processado, no haver material para estimular outras clulas dendrticas e clulas T, mas o que as clulas dendrticas fazem transportar o antignio dos tecidos para o gnglio linftico.

Se injectarmos um antignio associado a um fluorocromo num ratinho cujos macrfagos e clulas dendrticas (CD11c) estejam igualmente marcados, possvel observar que 24h depois, os macrfagos j no possuem no seu interior o antignio, ao passo que as clulas dendrticas sim. As clulas dendrticas migram para os ndulos linfticos: se colocarmos uma soluo com partculas com fluorescncia verdes na pele, ao fim de algum tempo, clulas com esta colorao vo estar presentes nos gnglios linfticos. Isto porque as clulas de Langerhans da epiderme foram activadas, captaram as partculas fluorescentes e activaram a sua capacidade migratria, atingindo o gnglio linftico. A capacidade migratria altera-se pois foi alterada a expresso nos receptores de quimoquinas: CCR6 importante para direccionar as clulas para a epiderme enquanto CCR7 importante para direccionar as clulas dendrticas para o gnglio linftico. Primeiro que tudo, esta alterao ocorre na presena da sinalizao pelo TLR. Experincias feitas com ratinhos knock out para CCR7 demonstram defeito na migrao das clulas dendrticas para os gnglios linfticos, sendo verificada uma menor frequncia de clulas dendrticas no ndulo linftico. Uma outra experincia para avaliar as capacidades migratrias das clulas dendrticas humanas, maturas e imaturas com ligandos para CCR6 ou para CCR7, revela que enquanto as clulas imaturas respondem ao ligando para CCR6, as clulas maturas respondem ao ligando para CCR7. Parece assim que o CCR7, que upregulated pela sinalizao pelo TLR, importante para o direccionamento para os gnglios linfticos. Mas h pelo menos duas doenas nos humanos em que possvel encontrar nos gnglios linfticos clulas dendrticas imaturas: histocitose das clulas de Langerhans e Linfadenite dermatoptica humana. Assim, pode haver outros mecanismos pelos quais as clulas dendrticas migram para os gnglios linfticos, ainda desconhecidos, existindo ento algumas clulas imaturas nos gnglios linfticos. As clulas dendrticas induzem a resposta pelos linfcitos T imaturos por aco de 3 tipos de sinal: sinalizao pelo TCR Sinal 1 um sinal coestimulatrio sinal 2 - e um terceiro

sinal, iniciado por um factor solvel e induzido por reconhecimento da PAMP por um PRR, em particular TLR. Se o linfcito T imaturo receber estes trs sinais, pode proliferar e diferenciar-se em clulas efectoras. O sinal 3 representa as citoquinas, citoquinas polarizadoras, que instruem os linfcitos T a torna-se clulas TH1 ou TH2. Por exemplo, se a clula dendrtica reconhecer LPS, a clula dendrtica vai secretar factores que induzem a diferenciao em TH1. Se as clulas reconhecerem compostos que so capazes de desencadear tanto a sinalizao por TLR como NLR, h secreo de uma combinao de citoquinas que induzem a diferenciao de linfcitos T H17. Se a migrao das clulas ocorrer independentemente do TLR, mas, por exemplo, dependente de factores como o de Helminth, podem induzir a diferenciao de linfcitos TH2. Se as clulas dendrticas no maturarem e ficarem em contacto com clulas apoptticas, como ocorre frequentemente com as clulas de Langerhans na pele, em que os queratincitos esto a morrer constantemente, as clulas dendrticas j no vo maturar, permanecendo anrgicas incapazes de reagir. A sinalizao do TLR essencial para a libertao das citoquinas correspondentes que vo induzir a diferenciao dos linfcitos T imaturos em clulas efectoras. Existe hoje em dia um novo conceito da maturao das clulas dendrticas que explica o efeito do envolvimento de um receptor polarizado em consequncia do reconhecimento de patognios. O que acontece depois do reconhecimento do patognio que a sinalizao pelo TLR induz uma maturao fenotpica e funcional. Uma maturao fenotpica por expresso de um conjunto de molculas necessria activao de linfcitos T, por exemplo, MHC, molculas coestimulatrias, receptores de quimoquinas, molculas de adesoe uma maturao funcional apenas definida pela capacidade de induzir a polarizao das clulas T, pela activao das clulas T e tolerncia. J no teremos ento um paradigma das clulas dendrticas mas sim um conceito de maturao das clulas dendrticas que explica o papel no reconhecimento de patognios pelo TLR e no comando da resposta imune.

Interferncia da funo das clulas dendrticas - utilidades e inconvenientes

Com aquilo que j sabemos acerca das clulas dendrticas, como que se poder interferir com a funo das clulas dendrticas de uma forma positiva e negativa?

Uma forma de usar negativamente os PRR numa clula dendrtica como ocorre por exemplo numa infeco de Mycobacteria. Este patognio capaz de mobilizar dois tipos de receptores numa clula dendrtica TLR e DC-SIGN. Para impedir a maturao das clulas dendrticas, permitindo a tolerncia, o patognio liberta ManLAM (clone do antignio) para o meio, identificado pelo DC-SIGN e que minimiza o efeito do TLR, deixando as clulas dendrticas imaturas.

As clulas dendrticas podem ser utilizadas em imunoterapia isolam-se moncitos do sangue perifrico do paciente, induz-se a sua diferenciao em clulas dendrticas in vitro que so maturadas por adio de antignios resultantes das clulas cancergenas do paciente e introduzidas em circulao, induzindo assim uma resposta imune contra o tumor. Este tipo de tratamento ainda no foi completamente testado e implantado pois no proporcionou os resultados clnicos esperados tendo sido sempre testado em doentes com prognstico irrecupervel.

Uma outra forma de utilizar vantajosamente as clulas dendrticas promovendo a sua funo in vivo por administrao de anlogos sintticos de PAMPs. Isto porque anlogos sintticos das PAMPs seriam preparaes limpas, capazes de induzir uma resposta imune. As vacinas recombinantes no tm efeitos secundrios mas no induzem uma resposta imune de longa durao, o que seria ultrapassado pela adio destes anlogos das PAMPs.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
9. Interaco entre as clulas apresentadoras de antignios e os linfcitos T
Resumo da aula terica: 11 de Maro de 2008 A interaco entre as clulas apresentadoras de antignios e os linfcitos um evento muito importante para a activao da resposta imune, fenmeno caracterizado por uma reorganizao molecular que torna possvel a comunicao destas clulas.

Temas a abordar:
Fases fsicas da interaco entre APC (clulas apresentadoras de antignios) e linfcitos T Estrutura do TCR Sinalizao pelo TCR Estrutura molecular da sinapse imune (SI) Formao da SI e respostas das clulas T Porque que as APC e os linfcitos T precisam de interagir? Sempre que h necessidade de desencadear uma reaco imunitria a um antignio. A APC capta o antignio (em muitos casos a APC uma clula dendrtica), migra e complexa-o com uma molcula do MHC para expressar superfcie o chamado complexo pptido-MHC. apenas no todo de um complexo pptido-MHC que o linfcito T consegue reconhecer o antignio, sendo que apenas o pptido no consegue estimular o desencadear de um sinal. O reconhecimento do complexo pptido-MHC pelo TCR resulta numa sinalizao intracelular no linfcito T iniciando a proliferao e diferenciao. Se o linfcito T for virgem (clulas que acabaram de abandonar o timo e que ainda no estiveram em contacto com um antignio), necessita de ser instrudo, o que acontece com o contacto com a APC - o chamado priming, que requer clulas dendrticas. O priming resulta em proliferao e diferenciao, sendo o resultado final uma
Em alternativa a virgem pode usar-se o termo ingls correspondente, naive.

populao de clulas efectoras e de clulas memrias. Este um evento raro pois linfcitos T especficos para um dado pptido so extremamente raros portanto, o priming das clulas T um evento raro. O objectivo do priming obter uma populao clonal de linfcitos T, que toda igual entre si, em que todas as clulas expressam o mesmo TCR e que podem ter quer uma funo efectora quer uma funo de memria. Como que ocorre a interaco entre APC e linfcitos T? H um primeiro evento, que a aquisio de contacto havendo depois 3 diferentes possibilidades: as clulas virgens formam lenta e dinamicamente um contacto com as APC pois necessitam de procurar o complexo pptido-MHC correcto, que conseguem reconhecer, evento este que ocorre com uma velocidade de menos de 1m/min. Uma vez que a clula virgem se torna numa clula efectora, o contacto precisa de ser mais estvel. Como isto acontece morfologicamente ainda no conhecido mas sabe-se que o contacto entre uma APC e uma clula efectora mais estvel, com uma velocidade de 1-2m/min. Em ambos os casos, uma vez que o TCR e o complexo pptido-MHC correspondente tenham contactado e tenha havido transduco de sinal, o movimento torna-se muito mais rpido os linfcitos T movem-se muito rapidamente superfcie da APC, a uma velocidade de aproximadamente 10 m/min. A velocidade do movimento deve-se ao facto de que o resultado da activao a proliferao o linfcito T no se pode ligar completamente APC devendo haver espao para as clulas em proliferao. Uma vez que ocorreu a proliferao, linfcito T e ACP desassociam-se e ocorre a migrao da clula T, quer para um rgo linfide secundrio, se tiver funo memria, ou para o tecido alvo, se tiver uma funo efectora. Quais so os requisitos moleculares para este contacto entre a APC e o linfcito T? Quais so as molculas que entram em jogo tornando possvel esta interaco? J foi mencionado: TCR, que reconhece o complexo pptido-MHC. O TCR T cell receptor um heterodmero expresso superfcie da maioria dos linfcitos T no sangue perifrico. A forma mais expressa deste heterodmero contem uma forma e uma . Ambas as cadeias esto divididas numa poro constante e numa poro varivel. A domnio que se liga ao antignio, as sequncias que so importantes para o reconhecimento do pptido esto contidas na regio V

de ambas as cadeias e . J foi definida a estrutura cristalina de alguns destes complexos TCR/pptidoMHC. Como se pode ver na figura um pptido (pptido HTLV-1, de um vrus) com uma molcula HLA-A (tipo de MHC) interage com este TCR especfico. Este TCR que contem estas sequncias V e J tem a capacidade para reconhecer de um modo muito especfico este pptido e no outros. Como que este reconhecimento especfico se mantm? Existem regies nos domnios V e V, designadas CDR complement determining region que so particularmente importantes para o reconhecimento do pptido. nestas sequncias que se encontra a maior taxa de mutao no TCR. Portanto, o TCR estabelece um contacto com o complexo pptido-MHC. Este contacto resulta numa transduco de sinal no linfcito T. Mas esta sinalizao no vai ocorrer se apenas o heterodmero TCR estiver na superfcie da clulas, alis, este heterodmero no conseguir apenas por si prprio atingir a superfcie da clula. Na superfcie dos linfcitos T, o heterodmero TCR est presente num complexo que contm CD3. O CD3 um multmero, formado por diferentes cadeias: duas , duas , uma e uma . o CD3 que torna possvel a transduco de sinal em consequncia do reconhecimento do complexo pptido-MHC pelo TCR o heterodmero TCR no tem capacidade de sinalizao, a sinalizao ocorre pela estimulao do complexo CD3. No complexo CD3 existem diferentes cadeias, duas das quais so particularmente importantes: e . A cadeia estabiliza o complexo TCR para que este seja expresso superfcie do linfcito T (observao de clulas com uma mutao na cadeia do CD3 que impossibilitava a produo desta protena revelou que estas clulas eram incapazes de expressar sua superfcie o TCR nesta clula, todos os restantes componentes do complexo TCR CD3 eram degradados no seu interior; esta situao pode ser corrigida transfectando a clula com um plasmdeo que codifique uma cadeia funcional, possibilitando a expresso de um complexo TCR-CD3 superfcie da clula). A cadeia , uma vez que se junta ao complexo, inicia a transduco de sinal pois esta cadeia contm sequncias designadas ITAMs immunereceptor tyrosine based activation motives. Estas sequncias so muito conservadas, sendo constitudas por 2 de resduos de tirosina separados por 9-12 aminocidos (Y tirosina; L leucina; V valina; X qualquer

aminocido). Os ITAMs existem tambm nos outros componentes do complexo CD3. Adicionalmente, os ITAMs no existem apenas nas clulas T, mas tambm no BCR e no receptor das Ig. Isto no suficiente para haver transduco de sinal necessria uma molcula adaptadora que modifique estes resduos de tirosina. A molcula adaptadora recrutada graas a um correceptor. De facto, a interaco entre TCR e complexo pptido-MHC induz tambm a ligao de um correceptor CD4 ou CD8 na superfcie do linfcito T. Os correceptores ligam-se parte mais externa ma molcula do MHC, cadeia principal. Uma vez que o correceptor foi recrutado para o complexo, o correceptor induz o recrutamento de uma cinase, a Lck. Esta molcula um adaptador de sinal capaz de fosforilar os resduos de tirosina presentes nas sequncias ITAM. Os resduos de tirosina fosforilados, especialmente aqueles da cadeia , actuam como local de encaixa para o ZAP-70, outra cinase, que, por sua vez, fosforila as protenas alvo.
1) Reconhecimento do complexo pptido-MHC pelo TCR 2) Recrutamento do correceptor CD4 ou CD8 3) CD4 ou CD8 liga-se parte externa do MHC 4) O correceptor recruta a Lck 5) Lck fosforila os resduos de tirosina nos ITAM da cadeia 6) Os resduos fosforilados so locais de ligao para ZAP-70, outra cinase, que est na base se uma cascata que, em ltima instncia, vai regular a expresso gnica para haver proliferao

O que importante reter que a fosforilao dos resduos de tirosina um dos primeiros eventos no processo de activao dos linfcitos T um dos primeiros eventos identificveis que do prova de que os linfcitos T foram activados.

Quo cedo que ocorre este evento? possvel monitorizar o aparecimento de fosfotirosina usando um anticorpo contra tirosina fosforilada nas sequncias ITAM e marcando o anticorpo com um fluorocromo verde, para seguir a colorao num conjugado APC-linfcito T ao longo do tempo, que indica, portanto, a presena de fosfotirosina. Na figura podemos observar que existe fosfotirosina logo aps 2 minutos da conjugao, e dura cerca de 30 minutos. Se examinarmos o conjugado aps 60 minutos, as clulas continuam associadas mas j no existe fosfotirosina a presena desta dura cerca de 30 minutos Fazendo o mesmo tipo de observao com o TCR (marcao vermelha), verificamos que esta modifica-se em pararelo com o padro da fosfotirosina. Primeiro, o TCR apresenta-se distribudo ao longo da interface entre APC e clula T, sendo que depois se concentra no mesmo local onde se encontrava a fosfotirosina. Portanto, a fosfotirosina e o TCR esto presentes e visveis na mesma rea, onde h contacto entre a APC e o linfcito T. Quais so as consequncias da fosforilao das protenas intracelulares, qual informao transmitida? At que ocorra transduco de sinal, o contacto entre APC e linfcito T dinmico, instvel. A transduco de sinal pelo TCR devido ao reconhecimento do complexo pptidoMHC induz a mudana de conformao de molculas de adeso, em particular, a integrina LFA-1, que passa de um estado de afinidade baixa para afinidade elevada. No estado de elevada afinidade, a LFA-1 liga-se fortemente ICAM-1 na superfcie da APC e estabiliza o contacto. Portanto, parte do objectivo da transduco de sinal pelo TCR passa por mudar a conformao das molculas de integrina para estabilizar o contacto entre APC e linfcito T. Ocorrem outros eventos: o aumento do Ca2+ intracelular. Este outro sinal de que a clula T foi activada. Podemos monitorizar este evento injectando as clulas T com um marcador fluorescente que muda de cor quando ocorre a activao. Na figura podem ver-

se dois linfcitos T que reconheceram o complexo pptido-MHC na mesma APC. Regista-se um aumento no Ca2+ intracelular que dura cerca de uma hora. Aps activao, os linfcitos T separam-se e o Ca2+ intracelular deixa de ser monitorizado. Enquanto o aparecimento da fosfotirosina um dos primeiros eventos, durando cerca de 30 minutos, o aumento do Ca2+ intracelular ocorre mais tarde e dura mais de uma hora. A sinalizao por Ca2+ intracelular depende do: citoesqueleto de actina reconhecimento do complexo pptido-MHC. Se a clula for tratada com uma droga que destrua o citoesqueleto ou se se tratar o conjugado com um anticorpo contra o MHC-II que destrua a ligao ao TCR, verifica-se o desaparecimento do fluxo de Ca2+ intracelular. Durante muito tempo, os imunologistas foram confrontados com um paradoxo: Havia uma situao em que linfcitos T virgens especficos para um antignio so raros, os complexos pptido-MHC so raros, a interaco entre o TCR e os complexos pptido-MHC fraca mas, apesar de todos estes factos, h estimulao dos linfcitos T e o sinal que esta estimulao induz duradoura, dura mais de uma hora. Vejam-se os nmeros na figura. Ento, como que possvel conciliar estas observaes? Uma das tericas que explica como isto ocorre a seguinte: O modelo prope que um nico complexo pptido-MHC numa APC pode activar diferentes TCR. J foi demonstrado que um complexo pptido-MHC pode estimular algumas centenas de TCR numa hora. O mecanismo pode ser comparado a um cinto: O TCR superfcie de um linfcito T percorre a superfcie da ACP de forma a contactar com os complexos pptido-MHC. Este sistema eficiente porque h um fornecimento contnuo de novos TCR, e aqueles que no iniciaram um sinal na primeira vez tm uma nova oportunidade de contactar com o complexo pptido-MHC. Este processo no interminvel, a transduco de sinal eventualmente pra porque os TCR que iniciaram um sinal so endocitados e destrudos. Este modelo chama-se serial triggering model e estabelece que durante a activao de linfcitos T especficos para um antignio, um nico complexo pptido-MHC na superfcie de uma APC

pode iniciar a transduco de sinal em mltiplos TCR superfcie do linfcito T. O sistema autolimitado e auto-amplificado. Auto-limitado porque os TCR que j iniciaram um sinal so endocitados e degradados no interior do linfcito T e auto-amplificado porque a clula fornece continuamente novos TCR para reconhecer o complexo pptido-MHC, reciclando os receptores que no iniciaram um sinal no primeiro contacto. Este modelo estabelece ento como que pode ocorrer activao dos linfcitos apesar de as condies necessrias para tal ocorrer serem raras. Depois desta sinalizao, as clulas permanecem em contacto, contacto este designado sinapse imune (SI). A sinapse imune e a sinapse neural tm algumas caractersticas em comum, apesar de serem diferentes. A SI tm a aparncia de um donut. No incio do contacto entre o linfcito T e a APC, o complexo TCR e o complexo pptido-MHC so encontrados nos extremos da rea de contacto. Na rea central esto distribudas as molculas de integrina. Desde que ocorra activao, h um movimento progressivo do complexo TCR/pptido-MHC para o interior da estrutura e as molculas de integrina movem-se para o exterior. O resultado final , de novo, uma estrutura em forma de donut, com um anel duplo, com uma interface em forma de donut. Esta estrutura contm o complexo TCR/pptido-MHC no centro e as molculas de integrinas em torno de toda esta rea. Esta estrutura designada sinapse imune matura. A primeira representao da SI surgiu em 1998, sendo designada Supramolecular activation cluster SMAC. A SMAC est dividida numa SMAC central cSMAC, onde se encontra o TCR, e uma SMAC perifrica p-SMAC onde se encontra a molcula de integrina LFA-1. Do lado da APC encontra-se o complexo pptido-MHC e a ICAM1, opondo-se ao TCR e LFA-1 do linfcito T. A SI demora cerca de uma hora para se formar. O rearranjo das molculas d-se como uma troca, passando o complexo TCR/pptido-MHC da periferia para o centro e o oposto para as integrinas.

Estas no so as nicas molculas que participam na formao da sinapse imune, por exemplo, o CD2, que participa na sinalizao pelos linfcitos T. Quando o linfcito T contacta com uma APC, na presena de antignio, o CD2, durante a activao, localiza-se no c-SMAC. Outras molculas localizam-se no p-SMAC da SI, como o caso do CD45. De novo, na presena do antignio, quando o linfcito T contacta com a APC, possvel representar a SI com fosfotirosina no c-SMAC e com CD45 na p-SMAC. O CD45 uma molcula de grandes dimenses e actua como uma fosfatase, isto , remove os grupos fosfato dos resduos de tirosina, inibindo a c-SMAC.

Com a transduco de sinal pelo TCR, estes so endocitados e destrudos. Contudo, esto presentes na SI. Como? A certo ponto da activao formam-se microdomnios onde se localizam os TCR, ento estes microdomnios fundem-se para formar a sinapse h uma sequncia temporal dos eventos que o permite, no um processo esttico. A transduco de sinal ocorre antes da formao da SI De que modo que a SI importante para a funo dos linfcitos T efectores? Quando se fala da funo dos linfcitos T efectores, refere-se secreo de citoquinas pelos linfcitos T CD4+ ou libertao de grnulos citotxicos pelos linfcitos T CD8+. Se se analisar uma SI estabelecida num linfcito T helper, CD4 +, que secreta IL-4, conjugado com dois tipos de APC um que oferece uma elevada concentrao de antignio e outro que oferece uma baixa concentrao de antignio. Apesar de haver contacto do linfcito T com ambas as APC, as citoquinas so polarizadas e secretadas na direco da APC que oferece o estmulo mais intenso. A polarizao das citoquinas espelha a transduco de sinal, o aparecimento de fosfotirosina, indicando que as citoquinas so libertadas na direco da SI maturada. Em relao aos linfcitos T CD8+, citotxicos, a sua funo libertar grnulos que foram poros nas clulas alvo provocando a sua lise. Contm o chamado compartimento secretor onde estes grnulos so observados. Nestas clulas, a SI pode formar-se de um modo ligeiramente diferente do que foi descrito,

porque acomoda estes grnulos secretores no interior da cSMAC. Portanto, nas clulas CD8 +, a SI formada por uma pSMAC que contm o CD45 e uma c-SMAC dividida em dois domnios, um que o compartimento secretor e o outro que o domnio de transduco de sinal, a c-SMAC propriamente dita. Esta designada sinapse secretora. O que particular nas CTL que, para atingir o seu objectivo no precisam de formar uma sinapse matura. possvel ver na imagem uma APC marcada em vermelho, carregada com duas doses diferentes de antignio, a interagir com um linfcito T. O linfcito T est marcado com um anticorpo especfico para CD2, estando localizado na c-SMAC quando h activao do linfcito. O que se pode ver que a CTL polariza os seus grnulos, o compartimento secretor na direco do alvo, da APC, mas esta polarizao no acompanhada por uma redistribuio do CD2 o CD2 permanece distribudo na superfcie do linfcito T, no se concentrando no interior do cSMAC. Esta designada sinapse ltica/secretora. Portanto, o aspecto da SI depende do tipo de estmulo que o linfcito T recebe e do tipo de linfcito T. Ento, o que a sinapse imune? No existe uma definio para a SI, o que possvel fazer descrever a morfologia e combinar esta informao com a funo. S possvel destacar aquilo que a SI no : Necessria para iniciar a sinalizao pelo TCR (a SI forma-se posteriormente sinalizao pelo TCR primeiro h o aparecimento de fosfotirosina, dois minutos aps o contacto, durando cerca de 30 minutos, e depois o aumento do clcio intracelular) Necessria para manter a sinalizao os linfcitos T, mesmo depois de reconhecer uma populao de APC, conseguem reconhecer uma nova populao de APC com uma dose elevada de antignio e manter o influxo de clcio. ento uma estrutura dinmica, podendo a transduco de sinal continuar com a formao de SI secundrias. Uma estrutura esttica uma estrutura diferente nas clulas CD4+ e CD8+. Uma estrutura prototpica para uma dada clula porque qualquer linfcito que interaja com uma APC pode constituir uma SI. Tambm os linfcitos T NK podem formar a SI Ento, se a SI no essencial para iniciar a transduco de sinal nem para a funo dos linfcitos T efectores, qual a sua funo? Um estudo recente do passado ano sugere que a SI ajuda no processo de diviso assimtrica dos linfcitos T, no qual se originam clulas filhas com destinos diferentes a partir de um mesmo progenitor por distribuio desigual de molculas durante a mitose. Props-se que a SI dirige a distribuio desigual de correceptores, integrinas e receptores de citoquinas na direco do lado do linfcito T que contm a SI. Este um processo que ocorre durante a proliferao das clulas T. Portanto, a outra parte da clula que est em proliferao no est ocupada por estas molculas. O resultado que um dos lados da

clula, aquele que contm a SI vai dar origem a um linfcito T efector, enquanto o outro vai originar uma clula memria. Assim, a SI assiste na diviso celular assimtrica e facilita a formao de clulas efectoras e clulas memria a partir de um nico linfcito T durante o priming.i Outra utilidade possvel da SI a da terminao do sinal, apesar de no ser necessria para o iniciar. Novas tcnicas que permitem analisar em maior pormenor a superfcie do linfcito T na interface com a APC durante a activao revelam que esta de facto pontuada pelos TCR. Numa fase inicial da activao h formao de microagregados de complexos TCR/pptido-MHC, mas algum tempo depois, estes microagregados fundem-se numa estrutura que se assemelha SI. Neste momento, a sinalizao fraca ou no est presente e o TCR est ubiquitinado. Pode-se questionar como que se regista a formao de uma SI ao fim de 30 minutos e no de 60 isto deve-se ao facto de existirem diversas formas de analisar esta interaco e neste caso o linfcito T foi activado com complexos pptido-MHC sintticos solveis e no na presena de uma APC. Podemos ento dizer que a SI: Est molecularmente definida; Pode ter a funo de favorecer a proximidade entre molculas sinalizadoras e efectoras na interface entre os linfcitos T e as APC; Pode ter a funo de assistir na determinao do destino dos linfcitos T por terminao do sinal ou por favorecer o desenvolvimento de clulas com diferentes fentipos.

Esta informao foi referida na aula como no estando presente no livro de texto, mas sendo um avano recente no

campo da investigao j descrito em dois artigos.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
10.Imunodeficincias Primrias
Resumo da aula terica: 13 de Maro de 2008

Introduo
As imunodeficincias primrias foram consideradas uma grande janela para se olhar para os componentes do sistema imunitrio. Na prtica, aquilo que possvel fazer experimentalmente num ratinho, que consiste em fazer um knockout de um determinado gene, estava a decorrer na natureza com as imunodeficincias primrias, ou seja, esse ratinho knockout para determinado componente do sistema imunitrio e, portanto, medida que estes foram sendo identificados foi possvel perceber qual era a importncia desses componentes. De que forma que atacar especificamente determinada mlecula iria afectar o sistema e os seus componentes. Imunodeficincias so defeitos que ocorrem num ou mais componentes do sistema imunitrio e que, portanto, afectam toda a resposta imunitria associada a esse componente. Designam-se imunodeficincias primrias quando esses defeitos so de natureza gentica ou ocorrem durante o desenvolvimento do prprio sistema imunitrio. Estes j se encontram presentes no indivduo quando nasce, mesmo que se manifestem mais tarde. As imunodeficincias secundrias so situaes em que existe perda da funo imunitria e estas so adquiridas pelo indivduo. Exemplos desse tipo de imunodeficincias so as infeces causadas pelo vrus HIV. Outras situaes em que isso acontece em casos de coma, quando o sistema imunitrio se encontra debilitado e no tem capacidade para manter as respectivas funes. Do mesmo modo, pode ocorrer de forma provocada, como acontece em caso de transplante ou de doena auto-imune pelo que pode ser necessrio uma teraputica imunossupresiva e aquilo que se vai fazer provocar uma imunodeficincia secundria. Estas so situaes que no se relacionam com a composio genmica intrnseca do indivduo, mas que so adquiridas de uma outra forma. Quanto s imunodeficincias primrias, a primeira foi descrita em 1952, e a razo para isso relaciona-se com o facto de at ento no existirem anti-biticos, e portanto a mortalidade era elevada, sobretudo a infantil. E como tal, sendo que as imunodeficincias primrias manifestam-se sobretudo na infncia seria de esperar, atendendo situao, que as crianas no sobrevivessem s infeces o tempo suficiente para se verificar se existia ou no um compromisso acentuado com a resposta imunitria. A partir do momento em que surgiram os primeiros anti-biticos, foi possvel perceber que algumas crianas tinham mais infeces do que seria de esperar e, portanto, comeou-se a descrever os primeiros casos de imunodeficincias primrias. 1

Desde essa altura j foram diagnosticadas cerca de 150 situaes diferentes, afectando cerca de 120 genes distintos. E do conhecimento que ainda existem muitas outras situaes por diagnosticar, sendo que esta rea tem assistido a um crescimento exponencial, essencialmente, nas ltimas dcadas. Como j foi referido, este tipo de imunodeficincias pode afectar apenas um (mais frequente) ou mais componentes da resposta imunitria, seja ela a resposta inata ou a resposta adaptativa. As consequncias vo depender do nmero e do tipo de componentes afectados. A grande funo do sistema imunitrio , obviamente, proteger os indivduos de infeces, logo quando h componentes que no funcionam a primeira manifestao ser a susceptibilidade s mesmas. O perfil infeccioso fornece informaes acerca dos ramos do sistema imunitrio que esto infectados e aqui tem que se pensar que a imunidade celular est dirigida sobretudo para patognios intracelulares e que a imunidade humoral se concentra em patognios extracelulares. Sendo assim, se so os anticorpos que no funcionam tem-se sobretudo infeces causadas por bactrias extracelulares e se so as clulas T que no funcionam tem-se infeces virais e bacterianas que infectam intracelularmente o organismo. As imunodeficincias primrias mais frequentes ocorrem no sexo masculino, pois apresentam uma hereditariedade ligada ao cromossoma X. As doenas hereditrias ligadas ao cromossoma X so aquelas que mais facilmente podem difundir ao longo de uma famlia, pois para ocorrer no sexo masculino basta que estes recebam o cromossoma X com a mutao em causa pois estes apresentam apenas um cromossoma desse tipo. Alm disso, mesmo que estes rapazes no se reproduzam, h sempre indivduos do sexo feminino portadores da doena que permitem a propagao da doena ao longo de vrias geraes. Assim, por um lado existem indviduos do sexo masculino que por fora da seleco natural no disseminam o cromossoma X com a mutao e por outro existem indivduos do sexo feminino que so portadores do cromossoma X com o gene defeituoso e que podem dar continuidade propagao da doena. As imunodeficincias, sendo mais frequentes do que se imaginava, as mais graves por um lado e tambm algumas menos graves por outro podem afectar componentes terminais do sistema imunitrio, atingindo o indviduo j na idade adulta, o que levou ao aparecimento de campanhas com o objectivo de sinalizar os sinais de alarme para a possibilidade de se estar perante um indviduo que apresente uma imunodeficincia primria. Estes sinais de alarme, de alguma maneira, fornecem uma orientao de que so sobretudo estas infeces recorrentes, graves, difceis de tratar que, eventualmente, podem afectar de forma grave o desenvolvimento ponderal, o crescimento da criana.

Do ponto de vista prtico, estas doenas correspondem, maioritariamente, a defeitos monognicos, isto defeitos ao nvel de um nico gene, o qual codifica uma protena indispensvel para o desenvolvimento e/ou formao de um ou mais elementos celulares. Partindo desse ponto, deve-se pensar no desenvolvimento das clulas hematopoiticas e de que modo se encontra organizado. De facto, quando se observa os grandes grupos das imunodeficincias primrias pode-se verificar que estes esto organizados ao longo dos reinos do desenvolvimento das clulas hematopoiticas.

Portanto, se existe afectao directamente ao nvel da clula estaminal, naturalmente que todo o sistema ficar comprometido. Se for ao nvel dos precursores mielides vo ocorrer alteraes ao nvel da resposta fagocitria, se for nos precursores linfides e afectar simultaneamente linfcitos T e B ou haver um compromisso severo da imunidade associada s clulas T, o que essencial para que as clulas B funcionem, vai haver uma imunodeficincia combinada e vai ser uma situao grave. Em contrapartida, existem situaes que afectam, exclusivamente, o desenvolvimento das clulas B e que correspondem s imunodeficincias de anticorpos, pelo que h complicaes ao nvel da imunidade humoral. Se for possvel identificar um defeito ao nvel das clulas

estaminais hematopoiticas consegue-se de alguma maneira determinar quais os elementos da resposta que estaro comprometidos.

Se se considerar as interaces moleculares ao nvel de toda a resposta imunitria, efectivamente, havero imunodeficincias relacionadas com bloqueios ao nvel do desenvolvimento celular. Por exemplo, quando h uma alterao na gnese constitucional dos receptores especficos das clulas B e T. Podem ser alteraes associadas a modificaes nos genes que codificam protenas fundamentais para a recombinao somtica ou ento genes que so fundamentais para a transduco de sinal pelas citocina. Em termos de transduco de sinal, se conhecida a localizao de uma dada molcula na cascata de sinal e qual o seu desempenho nos contactos intracelulares podese inferir sobre as eventuais consequncias para o sistema imunitrio.

Actualmente, pensa-se assim: esta molcula, logo as consequncias so estas. Antes disso, foi a descoberta destes defeitos que ensinou a funo de determinada molcula; foi quando se identificou um defeito 4

ao nvel da molcula X a que lhe correspondia a consequncia Y. Desse modo, h medida que essas situaes foram sendo identificadas, foi-se percebendo quais as funes que essas molculas tinham no sistema imunitrio. Hoje em dia, j se possui esse conhecimento e a partir da possvel afirmar que, provavelmente, a este e no a outro nvel que se encontra o defeito. As imunodeficincias esto organizadas em grandes grupos: imunodeficincias de anticorpos, imunodeficincias da imunidade celular, imunodeficincias combinadas, as quais so um grupo grande, uma vez que, grande parte da imunidade adaptativa das clulas B dependente das clulas T, logo quando as clulas T so afectadas, normalmente, existe um comprometimento das clulas B; defeitos dos fagocitos e defeitos do sistema de complemento.

Imunodeficincia Humoral, Celular e Combinada

Dfice de anticorpos so campos isolados no desenvolvimento ou na activao dos linfcitos B e originam infeces bacterianas recorrentes que ocorrem a partir da segunda metade do 1. ano de vida, pois corresponde altura em que desaparecem as IgG maternas que atravessarem a placenta. As bactrias que originam essas infeces so bactrias extracelulares, cuja fagocitose depende do processo de opsonizao, ou seja, depende da interaco de anticorpos com os antignios das bactrias em questo, pois de outra forma no so detectadas pelos fagocitos, graas sua cpsula articulada. Portanto, o que costuma haver susceptibilidade a este tipo de bactrias. Estas imunodeficincias podem ser tratadas com anti-biticos e visto que o problema a deficincia de anticorpos, estes podem ser administrados de forma exgena, fazendo a sua suplementao por via endovenosa e, mais recentemente, subcutnea.

(Clnica) Entretanto, como que se avalia um dfice de anticorpos? A primeira coisa que se pode fazer pedir um hemograma, mas neste caso com contagem diferencial, o que permite dizer se o nmero de leuccitos normal e se o nmero de cada uma das populaes dos mesmos tambm normal. Para alm disso, tambm se pode pedir a quantificao das imunoglobulinas sricas, o que permite verificar se estas esto a ser produzidas e se esto a ser produzidas de forma adequada relativamente a cada uma das classes existentes. Sendo assim, pode haver um dfice total de imunoglobulinas em que no existe quaisquer tipos de imunoglobulinas, mas tambm podem haver situaes particulares em que uma das classes se encontra em excesso e outra apresenta um dfice acentuado ou ento uma das classes em paticular encontra-se ausente. Os indviduos que no so do grupo sanguneo AB, por exemplo um indivduo T0, apresenta em circulao isohemaglutininas contra o grupo A e o grupo B, e portanto, a partir da quantificao deste tipo de imonuglobulinas pode-se verfificar se estas esto a ser produzidas de forma adequada. Depois, pode-se quantificar especificamente como que os linfcitos se distribuem recorrendo citometria de fluxo, utilizando marcadores especficos das clulas B, clulas T e clulas NK e fica-se, assim, a saber no grupo dos linfcitos quantos que correspondem a clulas B, clulas T e clulas NK. Assim, a partir desta tcnina tem se conhecimento no s do nmero total de linfcitos circulantes como tambm das diferentes populaes de linfcitos. Obviamente, se no se registar a presena de anticorpos nem de linfcitos T poder-se- estar perante uma imunodeficincia primria. De seguida, pode-se averiguar qual a resposta vacinao. Geralmente, a maioria das crianas so imunizadas precocemente, portanto, pode-se observar se h ou no resposta estimulao do sistema com antignios contra os quais elas foram imunizadas. Tambm se pode observar o que que acontece nos gnglios linfticos, visto que na presena de uma resposta secundria estes apresentam actividade, com formao de folculos e de centros germinativos e h que verificar se tal acontece ou no. Por fim, efectuam-se estudos funcionais em laboratrios hospitalares, em que as clulas do sistema imunitrio so colocadas perante mitognios de forma a constatar ou no a sua resposta proliferativa e secretora de imunoglobulinas.

Caso Clnico I
Este caso clnico referente a uma criana do sexo masculino que no momento tinha 3 anos. uma criana que esteve bem at aos 10 meses, mas que a partir dessa altura comeou a ter infeces recorrentes (otites, sinusites, pneumonias, erisipela infeco cutnea), tratadas sempre adequadamente com anti-biticos e a criana recuperava sem grandes problemas. O nmero de infeces ao longo do ano era de tal modo elevado que a criana foi levada a uma consulta de imunologia. Das observaes, constatou-se um desenvolvimento estaturoponderal e psicomotor adequados para a idade. No entanto, no decorrer do exame objectivo constatou-se que as amgdalas no eram visualizveis. Das informaes j captadas verifica-se que uma situao que no afecta o desenvolvimento global da criana, pelo que no se trata de uma imunodeficincia combinada grave. Por outro lado, a criana esteve bem at aos 10 meses o que sugere novamente que no seja uma imunodeficincia combinada grave, pois estas aparecem muito precocemente. As infeces recorrentes apresentadas pela criana que so causadas por bactrias e a ausncia de amgdalas refora a concluso a que se chegou anteriormente. Na anlise do hemograma com contagem diferencial este apresenta-se normal. Quanto dosagem de imunoglobulinas, verifica-se uma quantidade residual de IgG e as outras classes nem so detectveis no exame. Alm disso, na anlise do estudo das populaes linfocitrias verifica-se que apesar do nmero total de linfcitos ser normal, nesse total no existem linfcitos B (ausncia de clulas CD19+). No estudo da resposta humoral dos toxides da difteria e do ttano, partindo do princpio que a criana vacinada, no era de esperar que a resposta fosse ausente. O conjunto de todos estes dados j analisados sugerem que existe algo de errado com os anticorpos. Atravs de uma rvore genealgica deste rapaz, pode-se verificar que na famlia h uma srie de outros indviduos afectados que tm em comum o facto de serem do sexo masculino, e que a transmisso ocorre por via materna. Este padro compatvel com a transmisso ligada ao X recessivo. Assim, pode-se concluir que o dfice de anticorpos encontra-se ligado ao cromossoma X.

Normalmente, o diagnstico desta situao a agamaglobulinmia ligada ao X ou doena de Bruton (1 imunodeficincia a ser identificada, 1952). A causa desta imunodeficincia corresponde a uma mutao ao nvel do gene que codifica uma tirosina cinase, a Btk, sendo que esta fundamental para que haja transduco de sinal a partir do receptor das clulas B. Durante o desenvolvimento das clulas B, forma-se originalmente um prreceptor que utiliza a cadeia pesada rearranjada e um substituto da cadeia leve. preciso que haja transduco de sinal a partir deste pr-receptor B para que a clula pr-B passe a fase seguinte, que corresponde ao rearranjo da cadeia leve. Este checkpoint garante que haja um rearranjo funcional ao nvel da cadeia pesada. Da que a partir do momento em que no haja transduco de sinal ao nvel do pr-receptor B, porque esta mlecula est alterada, no existe nem sobrevivncia nem diferenciao das clulas B em direco a clulas B maduras. Como o gene btk se localiza no cromossoma X, tem-se uma situao ligada ao X, em que h um bloqueio no desenvolvimento dos linfcitos B, pelo que existem clulas pr-B na medula, mas no h linfcitos B em circulao, e como tal no so produzidas imunoglobulinas.

Tambm existem formas recessivas que possuem exactamente o mesmo fentipo, que so mais raras por serem formas recessivas autossmicas (o descendente tem de herdar um alelo paterno e materno ambos com a mutao, pelo que na ausncia de consaguinidade uma condio mais difcil de se realizar). Assim, as imunodeficincias autossmicas recessivas so mais raras em termos de frequncia. Contudo, podem possuir o mesmo fentipo desde que afectem o mesmo ou outros componentes desta linha de transduco de sinal ou pelo menos o pr-receptor B.

Caso Clnico II

Este caso clnico referente a uma criana que novamente do sexo masculino e tambm com 3 anos. Contudo, esta criana internada devido a uma pneumonia causada por uma bactria oportunista, Pneumocystis carinii, a qual no provoca doena em indivduos com o sistema imunitrio saudvel. Por outro lado, tambm 8

possui infeces sinusais recorrentes a Streptococci pyogenes desde um ano de idade. um situao diferente da anterior, pois tambm esto envolvidos organismos intracelulares. O hemograma no se apresenta normal, pelo que se verifica uma diminuio do nmero de glbulos brancos, com diminuio acentuada, particularmente, ao nvel dos neutrfilos. Essa diminuio dos neutrfilos no era de esperar visto que se tratam de infeces bacterianas, pelo que deveria existir uma proliferao acentuada dos mesmos. Quanto ao estudo das populaes linfocitrias este encontra-se normal, pelo que, ao invs da situao anterior, existem linfcitos B em circulao. No entanto, parece haver algum problema, e quando se efectua o doseamento das imunoglobulinas pode-se ver que no h IgA e praticamente nenhum IgG, mas as IgM s no esto presente como tambm esto em quantidades superiores ao normal. A IgM a primeira das imunoglobulinas a ser produzida. As clulas B produzem a primeira das imunoglobulinas e depois, aparentemente, no tem a capacidade de converter nem em IgA nem em IgG. Depois, no h anticorpos que sejam especficos, ou seja, no h uma maturao da resposta em termos de anticorpos. Assim, no h anticorpos contra antignios dos Streptococci pyogenes que est a infectar a criana e que a tem infectado continuamente. Portanto, este sistema imunitrio j devia reconhecer mais do que bem este antignio. E tambm no h resposta humoral ao toxides da vacinao da difteria e do ttano. Ao efectuarse a bipsia de um gnglio linfctico verifica-se que, apesar da criana estar infectada, no existem folculos secundrios nem centros germinativos. De facto, existem linfcitos B em circulao, existe IgM, mas no h a maturao da resposta ao nvel dos rgos linfides secundrios, pelo que no h nem IgG nem IgA. Isto compatvel com um dfice de anticorpos ao nvel da resposta secundria. Sendo um rapaz do sexo masculino, a hiptese mais provvel o Sindroma de hiper IgM ligada ao cromossoma X. A clula B activada quando recebe um estmulo ao nvel do seu receptor especfico superfcie e isto ocorre quando reconhece um antignio. O segundo estmulo recebe por interaco com uma clula T, em que vai reconhecer o pptido deste antignios ligada a MHC classe II superfcie da clula B e vai desencadear como resposta sinais de estimulao, nomeadamente, atravs da interaco entre CD40 superfcie da clula B e CD40L superfcie da clula T. Sem que haja ambos os estmulos no ocorre uma estimulao da resposta B, pelo que a clula B no activada.

O que acontece no Sindroma de hiper IgM ligado ao cromossoma X que o ligando do CD40 encontra-se mutado. Quando o ligando de CD40 est mutado no ocorre esta interaco, e portanto, no h activao dos linfcitos B, que depende da ajuda dos linfcitos T CD4+, mediada pela interaco. Associa-se a estas infeces 9

oportunistas tambm a imunidade celular, pois tambm a activao dos macrfagos depende de sinais recebidos atravs do receptor CD40. Assim, esta mutao no ligando CD40 afecta no s as clulas B, mas todas as clulas do sistema imunitrio que recebam sinais das clulas T atravs da interaco CD40/CD40L. Tambm no h neutrofilia em resposta a uma infeco bacteriana, porque os macrfagos no activados no secretam GM-CSF. Embora mais raras, h formas recessivas com o mesmo fentipo, provocadas por defeitos em CD40. Existem situaes em que a clula B no activada, por erro ao nvel do CD40 ligando ou do prprio CD40 em que h no fundo um defeito combinado humoral e celular. No entanto, a alterao pode no ser a este nvel, mas antes pode ser especfica dos processos de hipermutao somtica intraisotipo. Quando isto acontece, isto j no tem nada a ver com macrfagos, nem com as clulas T, sendo portanto um defeito meramente humoral. Assim, tambm se verifica o Sindroma de hiper IgM, pois no possvel passar de IgM para outras classes de imunoglobulinas. Vai haver uma ausncia de resposta secundria, pois no possvel fazer a maturao da resposta. No entanto, no h alteraes nem ao nvel dos macrfagos nem ao nvel dos neutrfilos, j que estes funcionam adequadamente por o defeito no ser ao nvel da interaco.

Os defeitos combinados so graves, quando h um defeito no desenvolvimento dos linfcitos T e que tambm pode ou no incluir defeitos no desenvolvimento dos linfcitos B com compromisso da imunidade celular e necessariamente da imunidade humoral T-dependente. A susceptibilidade a patognios intra e extracelulares por que so todos os graus da resposta imunitria que esto afectados.

Caso Clnico III

Este caso clnico refere-se a uma criana do sexo masculino com 6 meses de idade. Apresenta m progresso estaturo-ponderal, com irritabilidade e recusa alimentar. Tem apresentado otites recorrentes, tosse seca persistente (em relao com pneumonia a Pneumocystis carinii), candidase da regio oral e ano-genital e ainda diarreia intratvel (a bacilos coliformes enteropticos). No hemograma com contagem diferencial, possui 10

uma diminuio acentuada de leuccitos, em que praticamente no existem linfcitos. No estudo das populaes linfocitrias, constata-se que no existem linfcitos que marquem para CD3+ (marcador das clula T), logo no existem linfcitos T nesta criana. Os poucos linfcitos que existem marcam com CD20+ (marcador das clulas B), pelo que os linfcitos existentes so linfcitos B. Quanto ao doseamento de imunoglobulinas, verifica-se que apesar de existirem linfcitos B no existem imunoglobulinas. Isto deve-se ao facto da activao da resposta humoral ser T-dependente, logo os linfcitos B existentes mesmo que sejam normais no tm a capacidade de formar uma reposta adequada. Ausncia de resposta proliferativa das clulas mononucleadas a mitognios e antignios especficos (a que fora exposto anteriormente por vacinao-toxides da difteria e ttano- ou infeco antignio da Candida). Os indivduos nesta situao quando vacinados podem morrer devido infeco provocada pelas prprias vacinas. Este conjunto compatvel com um dfice combinado humoral e celular. Deste quadro clinco a forma mais frequente uma vez mais ligada ao cromossoma X e relaciona-se com uma alterao ao nvel da transduco de sinais mediados por citocinas. Do ponto de vista do desenvolvimento das clulas T aquilo que se passa que no transduco de sinal a partir do receptor para a IL-7. J as clulas B desenvolvem-se naturalmente pois o seu desenvolvimento no mediado por esse receptor. Do mesmo modo, vo haver alteraes no desenvolvimento das clulas T no associado com ausncia de sinal no receptor das citocinas mas uma ausncia de sinal ao nvel do prprio receptor das citocinas. Se houverem defeitos em qualquer dos componentes do receptor das clulas T, ou dos elementos que efectuem a transduco de sinal as manifestaes fenotpicas sero semelhantes.

Por outro lado, pode tambm haver alteraes na transduco de sinal que afecte o metabolismo e neste caso o metabolismo particular dos nucletidos. O que corre so deficincias enzimticas que desempenham um papel importante no metabolismo dos nucletidos, logo a ausncia das mesmas leva acumulao de substractos txicos que impedem que se desenvolvam linfcitos T. 11

Tambm podem existir defeitos ao nvel dos rearranjos somticos e quando tal acontece h um bloqueio na diferenciao das clulas pr-T e pr-B.

Por outro lado, pode-se ter alteraes que esto relacionadas com esse processo de recombinao somtica mas num passo seguinte, ou seja, o defeito est ao nvel das enzimas que so necessrias para que se efectue a reparao das quebras do DNA.

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Existem tambm situaes em que os defeitos so ao nvel do desenvolvimento embrionrio, em que o que est em causa um factor de transcrio de extrema importncia para o desenvolvimento do epitlio do timo e da pele. Portanto, as consequncias so a ausncia de timo e, consequentemente, graves problemas relacionados com a imunidade associada s clulas T e por outro vo haver alteraes cutneas graves. Existe outra situao associada ao desenvolvimento embrionrio que a Sndrome de DiGeorge que corresponde a uma deleco ao nvel do cromossoma 22 e que responsvel por alteraes ao nvel da imunidade celular e/ou aplasia/hipoplasia do timo, hipocalcmia sintomtica e/ou defeitos anatmicos das paratiroideias, e cardiopatia congnita. Nesta situao, o que existe de facto um defeito ao nvel do desenvolvimento embrionrio que afecta tambm rgos importantes/ fundamentais para a resposta imunitria. Do ponto de vista da distribuio, naturalmente o efeito associado cadeia comum do receptor das citocinas o que mais frequente, uma vez que est ligado ao cromossoma X. As SCID so doenas letais, excepto se a criana viver num ambiente estril permanentemente, que uma situao que no passvel de se puder prolongar no tempo; se fizer um transplante de medula ou se for sujeira a terapia gnica. A terapia gnica consiste, basicamente, em retirar clulas ao indivduo doente que sero sujeitas a um processo de enrriquecimento. Depois injectam-se essas clulas em retrovrus que contm o gene que se pretende corrigir de forma correcta. Portanto, se estas clulas forem infectadas e se passarem a integrar no cromossoma a cpia corrigida do gene, estas clulas podero ser re-inseridas no indivduo que passar a ter as suas prprias clulas estaminais capazes de produzir o produto do gene alvo.

Defeitos da Fagocitose
Tambm existem defeitos ao nvel da fagocitose. Nomeadamente, podem haver defeitos em molculas relacionadas com a migrao dos fagocitos para o espao extravascular, o que vai propiciar infeces causadas por bactrias pirognicas. Tambm possvel ocorrerem defeitos genticos num dos componentes do sistema da 13

NAPH oxidase, o que impede a produo do radical superxido, pelo que os fagocitos perdem a capacidade antibacteriana, permitindo, uma vez mais, infeces extra e intracelulares.

Defeitos do Complemento
Finalmente, tambm existem defeitos ao nvel da via do complemento. Esses defeitos no so, normalmente, muito graves.

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Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa Imunologia 11. Clonalidade linfocitria e amplificao Resumo da aula terica: 1 de Abril de 2008 Este um tema muito interessante. A imunologia dobrou a esperana mdia de vida no sc. XX atravs das vacinas. Este sculo agora vai ser o sculo das alergias e das doenas auto-imunes. - 25% tem ou ter doena auto-imunes; - 55% tem ou ter alergia. Hoje em dia ainda no h uma teraputica que consiga obter a cura para estas patologias. A questo : Porqu o gap que existe entre o que se sabe e o que se consegue fazer? O transational gap enorme. Neste momento sabe-se muito, s falta saber o que fazer com o que se sabe. O problema/ questo : O n de tecidos diferentes no organismo humano mais ou menos 270; Devido a esta variedade o nosso ciclo de vida o tempo que demoramos para atingir a sexual maturity de 20anos.; O ciclo de vida da bactria de 20 minutos; Coexistncia de formas de vida com tempos de reproduo, ciclo de vida, ciclos de reproduo muito diferentes, em que umas podem parasitar as outras; Quando h relao bactria/hospedeiro, as bactrias tm sempre uma vantagem enorme, porque se dividem muito mais depressa, logo podem variar na sua germ line (genes que utilizam durante o seu ciclo de vida), muito mais que ns. Devido a isto, uma estratgia evolutiva convencional no nos favorvel porque: Quando determinada populao dizimada por uma infeco causada por uma bactria, apenas sobrevive a fraco da populao que tem genes favorveis. Ou seja, que permitem a sobrevivncia. Mas quando esses genes so passados descendncia a bactria j variou imenso e por isso j no a mesma. Esses genes j no conferem a capacidade de sobrevivncia. Esse problema foi resolvido pela evoluo da seguinte maneira: Transferir para o tempo somtico individual (tempo de vida de cada um de ns), variao e seleco (principio evolutivo habitualmente aplicado evoluo das espcies), isto porque, impossvel competir com a velocidade de variao gentica dos microorganismos (bactrias, parasitas, etc.), por isso em vez de acumular alteraes genticas na germ line que demora 20 anos a ser transmitida prxima gerao, cada um de ns (o nosso sistema imunitrio) faz isso de novo.

O sistema imunitrio inventa genes somticamente, isto , constri genes de novo, e faz isso com a mxima diversidade possvel. O objectivo : Encontrar complementaridades especficas para cada um dos microorganismos que eventualmente nos infectam. Apesar disso, a maior parte das especificidades acabam por nunca ser usadas durante a vida.

Qual a consequncia desta estratgia evolutiva na maneira como as clulas e os rgos do sistema imunitrio foram evoluindo at serem como se apresentam hoje?

Ns fazemos cerca de um milho de milhes de protenas no sistema imunitrio. claro que cada clula no as tem todas. Aparte: Podemos ser comparados a um saco enorme cheio de regies variveis de anticorpos com apenas um bocadinho de corpo l no meio. Os mecanismos genticos que do origem diversidade, fazem-no, dando origem a apenas um rearranjo irreversvel por cada clula (como no podemos guardar os genes todos no genoma impossvel t-los todos na mesma clula). Logo, na evoluo no s cada um de ns inventa genes (para dar resposta rpida evoluo dos microorganismos), como cada um de ns inventa um gene diferente em cada clula. No h dois linfcitos iguais do ponto de vista estrutural (gentico e protena). Em cada clula so produzidas uma ou poucas protenas (anticorpos) e o que que se ganha com isso: Isto benfico porque existe o G 0 (resting state) para os linfcitos; Quando preciso um dos linfcitos (que tem caractersticas nicas), fazem-se muitos iguais a esse; Para alm disso, activa-se a clula para desempenhar as suas funes (ex: produzir anticorpos; produzir citocinas, etc.). Um milho de milhes de linfcitos diferentes

Cada um cria uma regio varivel diferente Pelos mecanismos utilizados para a gerao de diversidade o organismo teria capacidade para produzir muito mais. No mnimo 1000 milhes de milhes, ou seja, em cada momento temos 0,1% do que poderamos ter. Cada um de ns tem um sistema imunitrio diferente. Ns estamos continuamente a produzir linfcitos e a deixar morrer outros que eram bons a desempenhar as suas funes, para ir enriquecendo o potencial daquilo que ns fazemos. Em cada momento s podemos prender um milho de milhes, mas ao longo da vida, em vez de usar s esse 0,1% da riqueza potencial que temos, usamos na realidade, vrios por cento porque vamos mudando os linfcitos ao longo da vida. A gerao de diversidade um processo contnuo ao longo da vida. Cada um de ns faz mais ou menos um milho de linfcitos por segundo, o que quer dizer que um milho de linfcitos que eram competentes (bons), morre a cada segundo. H uma grande dinmica no sistema imunitrio que permite que a potencialidade da diversidade gentica (fazer regies variveis diferentes) v sendo monitorizada e adaptada (scanned) ao longo da vida. Muitos dos processos envolvidos so aleatrios, mas h coisas que preciso garantir. A evoluo tambm inventou maneiras de comearmos todos de maneira mais ou menos igual (com um repertrio mais ou menos fixo). (A partir deste momento o professor avisa que vai comear a fazer referncia aos slides.)

Estratgias evolutivas Moleculares

Aqui o que importante realar que a cytoprotection e a innate immunity esto em relao com processos gerais no organismo como: Coagulao; Angiognese; Sistema respiratrio; Enzimas respiratrios.

A imunidade adaptativa tem a haver com a proteco de toda a populao. Um indivduo protegido no se infecta e no transmite. As outras imunidades permitem a infeco e a eliminao do agente infeccioso, a imunidade adaptativa no permite sequer a infeco, caso o indivduo esteja imune. Isto foi importante para os vertebrados por que tm uma vida mais longa, logo, a probabilidade de encontrarem vrias vezes o mesmo microorganismo muito maior. Uma estratgia evolutiva necessria, devido actividade de mudana gentica e a nica que pode funcionar a que cobre todas as possibilidades e por isso obriga transferncia do princpio evolutivo de variao e seleco para o tempo somtico. Cada um de ns um fratal da evoluo biolgica (do ponto de vista do sistema imunitrio). O sistema imunitrio parece conseguir prevero futuro. Paradoxo de Landsteiner Todos os vertebrados tm um sistema imunitrio que capaz de produzir anticorpos especficos, protenas que especificamente reconhecem uma forma molecular que acabmos de inventar e que nunca existiu na evoluo. Isto confundiu muito os bilogos da 1 metade do sculo XX e foi por isso que o sistema imunitrio foi apelidado de Prometeico (adivinha o futuro). O sistema imunitrio capaz de adivinhar o futuro porque parece que j tem componentes estruturais e funcionais para reconhecer coisas que nunca tinham existido na evoluo e devido a essa razo que este sistema nos til, porque pode de alguma maneira prever as mutaes dos vrus e das bactrias. A diversidade a nossa grande fraqueza Existe uma grande diferena entre a dimenso e a complexidade do crebro humano e do chimpanz, sendo que nos separmos dele evolutivamente h 7 milhes de anos, no entanto, os nossos genomas so 98% idnticos. Temos SNPs exclusivos dos humanos, mas temos outros que so idnticos aos dos chimpanzs.

Aparte: Evoluo gua mole em pedra dura, sendo que a pedra dura so os mecanismos de conservao do ADN (linha germinada). Cada linfcito quando rearranja genes (VJ ou VDJ guiados pelas recombination signal sequencies (RSS)), h destruio de informao germinal e sntese de nova informao, durante o perodo de tempo entre o corte enzimtico e a nova ligao. A enzima responsvel por estes cortes a TNT que tem a propriedade notvel de inventar novas sequncias. Todo o mundo biolgico de extraordinria conservao, excepto estas clulas (linfcitos) que inventam e destroem informao germinal. Isto deu origem ao Paradoxo de Landsteiner.

1012- N de anticorpos diferentes que podemos produzir; 1017- Idade do universo em segundos; 1017- N mnimo de antignios no universo. Para que os nossos 1012 linfcitos cubram os 1017 antignios que existem, necessrio que haja muita degeneracy 1015- Limite mnimo do n regies variveis O repertrio do sistema imunitrio completo. Isto impe o domnio de identificao molecular que inclui no s estruturas microbianas e virais, mas tambm estruturas no infecciosas, e isto um problema (por ex. quando temos especificidades de Ig E contra camares).

Sistema de tolerncia Capacidade do sistema imunitrio de eliminar vrus ou bactrias que nos infectam mas no eliminar os nossos prprios componentes. Quando isto no funciona como deve ser surgem as doenas auto-imunes e as alergias. Resumo: Estratgias evolutivas celulares: O processo gentico, em cada clula, em cada linfcito diferente, nico e irreversvel na produo da regio varivel e portanto ter todas as regies variveis existentes em cada clula impossvel. possvel ter uma distribuio clonal das especificidades.

. The golden rule of immunology Cada linfcito s faz uma regio varivel, de tal maneira que a clula pode anunciar a regio varivel que sabe fazer na sua membrana e ser seleccionada a partir da. A expresso da regio varivel por cada linfcito absolutamente indispensvel para: Desde logo para o linfcito se diferenciar a partir dos seus percursores hematopoiticos; Para sobreviver, ou seja, todos os linfcitos utilizam a sua regio varivel, se no for para ficarem activos, pelo menos para se manterem vivos A clonalidade uma coisa crtica na evoluo do sistema imunitrio mas s faz sentido porque a evoluo inventou o Resting State. A maior parte destas clulas sobrevive porque utiliza a regio varivel com um determinado grau de interaco e de afinidade com o resto do corpo. Se deixarem de a usar, ou se durante a sua diferenciao criarem uma regio varivel aleatria (random) que no interage com o resto do corpo, morrem por apoptose. O que a evoluo inventou foi controlar n de clulas a partir da utilizao que cada uma dessas clulas faz da regio varivel que ela prpria inventou. Deixa morrer aquelas que deixaram de usar a regio varivel.

Quando preciso amplifica-se a regio varivel num processo de activao. Um linfcito activado hoje, no espao de uma semana tem 1000 iguais a ele. Cada linfcito divide-se a cada 18 horas, o que durante uma semana equivale mais ou menos a 10 divises. Uma clula B no estado estacionrio (resting state) sintetiza um anticorpo por segundo, quando est activada sintetiza 10000 por segundo. A capacidade de amplificao do sistema, se juntarmos diferenciao e proliferao de 10 000 000 numa semana.

Estratgias evolutivas de rgo

O desenvolvimento do sistema imunitrio aps a nascena completamente independente da estimulao externa. Durante o desenvolvimento, inicialmente (4-6 semanas), o nmero de linfcitos aumenta exponencialmente, depois (6-8 semanas), continuam-se a produzir linfcitos mas o seu nmero total mantm-se. De alguma maneira, as estratgias evolutivas de rgos no sistema so fixar o nmero de linfcitos, mas continuar a produzi-los ao longo da vida. Ao produzir novos linfcitos com novas regies variveis, a probabilidade de alguma ser repetida quase nula. Aps a sua produo, uma questo de regular a sua sobrevida a partir da especificidade que cada uma exprime, que o que diferencia as clulas umas das outras. O sistema tem assim a oportunidade de renovar o seu compartimento de linfcitos maduros medida das necessidades do organismo ao longo da vida. Quando necessrio, so activados.

No princpio evolutivo do sistema que : Transform of variation and selection to somatic life time h esta enorme gerao de diversidade. H um potencial gentico custa dos mecanismos que podem gerar diversidade gentica em cada um de ns, em cada clula diferente. Portanto, h um repertrio diferencial enorme, do qual vai emergindo (medula ssea e timo) o repertrio emergente e se vai acumulando periferia naquilo que normalmente apelidado de repertrio disponvel. No est a ser usado mas est disponvel. No Homem mais ou menos 1012, os tais que ns conseguimos fazer. Destes 1012, a manuteno deste pool de especificidade determinada por seleco (consoante a regio varivel apresentada) e por apoptose. Uns so criados e morrem logo, outros persistem anos, dependendo da especificidade que manifestam. Deste pool disponvel, quando somos infectados, seleccionado o repertrio actual. Aquele que produz os 10mg/ml de imunoglobulina que temos no soro. Este processo de seleco enorme (de 1015 a 109) e convm realar que s estamos a utilizar 0,1% do repertrio potencial e que depois tambm s utilizamos 0,1% do repertrio disponvel. Comentrio de quem desgravou: Peo desculpa mas esta aula uma completa nulidade em termos de contedos pertinentes. No vale absolutamente nada. Estava repleta de piadinhas estpidas e matria interessante nem vla. Enfim fez-se o que se pde.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
12. Citocinas e Celulas TH (Th1, Th2.. e Th17)
Resumo da aula terica: 3 de Abril de 2008

Breve reviso geral

A imunidade pode ser dividida em 2 pores complementares que interactuam entre si: Imunidade Inata Imediata No especfica No muda com estimulao Ausncia de memria Imunidade Adquirida Tardia Especfica Depende da apresentao de antignios Duradoura (memria)

importante notar que as caractersticas da imunidade inata faz com que esta seja menos eficiente, embora a baixa frequncia (< 1/105) e a expanso clonal necessria imunidade adaptativa, faam com que a primeira seja importante. A ausncia de especificidade, implica o reconhecimento de PRR1 seleccionados durante a evoluo, enquanto que a imunidade adquirida necessita da existncia de recombinao somtica que origina VRMs que sero posteriormente seleccionados especificamente.

Sistema Imunitrio

Podemos considerar 2 estados da matria no Sistema Imunitrio, que lhe confere complexidade, mas tambm flexibilidade: Forma slida (organizada) rgos linfides primrios e secundrios; Forma lquida (fluida) sangue e linfa;

Estes estados comunicam continuamente, havendo uma distribuio temporal especfica em cada local.

Dos linfcitos do sangue (30 min) deslocam-se para os gnglios linfticos (12h), particularmente linfcitos naive. No Bao permanecem 5horas. Linfcitos de memria circula para gnglios, bao e rgos perifricos (no acontece com as clulas T naive), permitindo actuar contra a inflamao. Posteriormente pelos linfticos voltam circulao sangunea.

Clulas T CD4+
Na imunidade adaptativa as clulas T CD4+ tm um papel central nos 2 tipos de resposta:
Resposta Citotxica Estimulao da reposta celular (cel Tc) Estimulao de respostas de hipersensibilidade retardada (DTH) Imunidade Intracelular (bacterianos ou virais) Estimulao da actividade fagoctica Resposta Humoral Estimulao de resposta humoral Imunidade Extracelular e Parasitas Estimula a Hipermutao somtica e a mudana de classe Aumenta produo IgG1, IgE e IgA Alergia

Na ausncia de interaco das clulas T CD4:

Resposta Citotxica Resposta CD8+ eficaz, mas curta durao Ausncia de clulas de memria

Resposta Humoral Permite Repostas das Clulas B (pelo grupo de antignios T independentes derivados proteicos)

Permite controlar a expanso de clulas autoreactivas Ausncia de hipermutao somtica (sendo uma forma de diminuir o risco de patologias Ausncia de mudana de classe autoimunes) Ausncia de seleco clonal

importante notar que o grupo de antignios T dependentes (derivados proteicos), na ausncia de CD4+, no vai originar resposta das clulas B.

Modelo de Cluster de 3 clulas

Defende que a activao celular de clulas CD8 se estabelecia com base na interaco num modelo de 3 clulas, isto , para activao temos necessariamente: - Clulas dentriticas activadas; - Clulas T CD4; - Clulas T CD8 que reconhecem antignios do mesmo agente microbiano.

Mas a probabilidade destas clulas com frequncias baixas se encontrarem ao mesmo tempo e no mesmo lugar muito baixa. Por isso este modelo foi superado.

Modelo do licenciamento
Este modelo tem uma flexibilidade temporal. Consiste em a clula CD4 ser activada na presena de clulas dentriticas e proporcionar auxlio s clulas CD8. Mas a clulas dendrtica tinha cerca de 3 dias para mostrar o pptido especfico no MHC I s clulas CD8 que reconheciam o mesmo agente microbiano. Posteriormente a estes 3 dias, j no originaria activao das clulas T CD8.

Assim contacto

no

h entre

directo

clulas CD4 e CD8, mas existe um contacto

indirecto atravs da clula dendrtica. Mas surgiram

problemas pois, depois de estudos conclui-se que esta forma passiva e aleatria de activao no era suficiente, pois o perodo de tempo no era suficiente para o encontro das clulas referidas.

Modelo licenciamento Amplificao por quimiocinas

Recentemente foram identificadas 2 quimiocinas, CCL3 e CCL4, que so produzidas pelas clulas dentriticas activadas pelas clulas T CD4. Estas quimiocinas activamente promovem a chamada das clulas T CD8 naive. Este factor aumenta a eficcia de apresentao antignica e o modelo aceite para a activao celular CD4-CD8.

Tem sido sempre referido o papel das clulas CD4 Th1 na activao de CD8, mas as clulas Th2 so tambm muito importantes e activam as clulas B.

Citocinas
As citocinas so protenas ou glicoprotenas com baixo peso molecular, secretadas por leuccitos e outras clulas. Apresentam funes: - Reguladoras: intensidade e durao da resposta; - Efectoras A resposta celular depende do tipo de receptores que apresenta superfcie, sendo que a interaco da citocina e receptor tem elevada afinidade, permitindo as baixas concentraes destas molculas.

Tipo de aco:

As citocinas induzem efeitos diversos, como: Estimulao/Inibio da activao celular; Estimulao/Inibio da proliferao e/ou diferenciao; Regulao da secreo de anticorpos e citocinas.

Propriedades das citocinas:

T CD4 Th1 e Th2 Diferenciao linfcitos T CD4 Th1:

Gerao e Regulao das Subpopulaes Th1/Th2:

Regulao Cruzada na promoo da diferenciao Th1 /Th2 a nvel intracelular:

(Caso clnico)

Th17: Exprime IL-17A, GM-CSF e TNF-, mas no IFN- e IL-4

(Nova populao)

Modelos de Autoimunidade
1. CIA Artrite induzida por colagnio a. Imunizao com colagnio tipo II e CFA induz inflamao articular com infiltrao por neutrfilos, macrofagos, DCs e linfocitos (T e B).

b. IL-1/TNF- e IFN-: citocinas mais abundantes no liquido articular c. TGF- , IL-10, IL-4 e IL-13 com papel regulador; 2.
EAE Encefalomielite autoimune experimental

IL-27
Pertence famlia da IL-12 e produzida por clulas dendrticas; IL-27R tem efeito regulador (WSX1), supressor (IL-27 bloqueia, via STAT1, IL-23R2 nas clulas naive)

IL-17E ou IL-25
Produzida por Celulas Th2, Eosinofilos e Mastocitos; Aco:

Aco de citocinas da imunidade passiva e adquirida nas clulas Th e Treg:

Notas: 1. PPR (pattern recognition receptors) so receptores que se ligam a PAMP (Pathogen-associated molecular patterns)

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
13. Linfcitos T citotxicos e imunidade a vrus
Resumo da aula terica: 8 de Abril de 2008

Temas a abordar
Vrus e o seu ciclo de vida Imunidade inata: clulas DC, M, NK Imunidade adaptativa: clulas B e T Mecanismos de evaso imune

A reter so os mecanismos de como os vrus infectam uma clula e se replicam para que se possa compreender como que o sistema imunitrio reage a vrus. O sistema imunitrio pode usar duas armas contra a infeco por vrus: uma delas a da imunidade inata, representada por clulas dendrticas, macrfagos e clulas NK, e a outra a imunidade adaptativa, executada pelas clulas B e T. tambm necessrio conhecer mecanismos de evaso imune para perceber como os vrus conseguem escapar ao reconhecimento pelo sistema imune.

Vrus
As caractersticas dos vrus so as seguintes: Constitudos por um ncleo de cidos nucleicos (DNA ou RNA) revestido por um envelope de protenas virais. Algumas destas protenas so a neuraminidase e a hemaglutinina, que so importantes na resposta imune Influenza. So obrigatoriamente microorganismos intracelulares so demasiado pequenos para transportar toda a maquinaria que permite a sua prpria replicao, portanto, tm de usar a maquinaria do hospedeiro para se replicar. No podem ser mortos por antibiticos. Existem mais de 50 vrus diferentes que afectam os humanos. No existe uma estratgia de vacinao contra vrus que seja eficaz - um facto que para alguns destes vrus, em particular para aqueles que causam infeces crnicas ainda no existe um plano de vacinao eficaz. Como que os vrus causam doena? Primeiro que tudo, precisam de invadir as clulas do hospedeiro: ligam-se a receptores na membrana da clula e entram nesta por endocitose isto j parte do ataque viral. Uma vez no

interior da clula, os vrus apoderam-se de toda a maquinaria intracelular para reproduo. Finalmente, os vrus replicam-se e depois abandonam a clula hospedeira para infectar outras clulas fazem isto causando quer a lise da clula (neste caso, chamado um vrus citoptico) ou destacando-se da clula hospedeira (neste caso, as consequncias so ainda mais perigosas para o hospedeiro porque a resposta imune desenvolvida para combater o vrus pode ser perigosa para o prprio tecido, e chamada patologia imune). Exemplos de vrus: Vrus citopticos agudos Vrus no citopticos Vrus latentes estes permanecem no interior da clula durante anos at, e depois so activados por vrios factores e causam lise da clula.

importante conhecer modelos imunes para os vrus citopticos agudos e no citopticos, que nos permitem conhecer a evoluo da doena e so mais fceis de aceder comparando com os humanos. Os vrus que servem de modelo nos ratinhos esto indicados em cima, tal como exemplos de vrus que provocam doena nos humanos. Comece-se por analisar o ciclo de vida do vrus da Influenza, que um vrus citoptico, para o qual o ser humano consegue desenvolver uma boa resposta imune. O ciclo de vida inicia-se pela adeso clula hospedeira, em que o vrus utiliza as protenas expostas superfcie viral, em particular a hemaglutinina. A hemaglutinina liga-se a receptores de cido silico (de natureza proteica) expressos superfcie da clula hospedeira e ocorrer endocitose, chegando assim o vrus ao compartimento intracelular. Uma vez no interior da clula, liga-se a um canal proteico M2 e aumenta o gradiente de pH no interior da vescula. Isto causa a libertao do material gentico do vrus que dirigido ao ncleo da clula, onde replicado o que possibilita a formao de novos vrus.

Estes novos vrus saem da clula usando como suporte outras protenas por exemplo, a neuroaminidase tem um papel importante na clivagem dos receptores de cido silico, pois se isto no ocorresse, as novas partculas ficariam retidas na mesma clula. Os vrus so assim libertados e podem infectar outras clulas.

Como que estamos protegidos deste tipo de vrus? H vrios meios de proteco: Barreiras fsicas: pele, mucosas E outras mais eficazes: Imunidade inata imediata e no especfica, sendo importante como primeira linha de defesa, mas insuficiente para conter a infeco. Imunidade adquirida necessria para eliminar completamente a infeco. Demora mais tempo a actuar, especfica pois necessita da participao de linfcitos T e B que expressam receptores especficos. Confere memria imunitria aps activao: a proliferao clonal origina linfcitos T e B que ficam em repouso e que quando so activados possibilitam uma resposta mais rpida, intensa e eficaz.

Imunidade inata
mais rpida e no especfica. Mais eficaz contra vrus extracelulares, portanto, quando o vrus ainda no infectou nenhuma clula. Depende da actividade das clulas do sistema imune, clulas que so apresentadoras de antignio: macrfagos e clulas dendrticas, capazes de produzir e libertar citocinas com actividade anti-viral e interfero do tipo I (IFN-I). Participao das clulas NK, que so capazes de lisar clulas infectadas com vrus, directa ou indirectamente - citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos (ADCC).

Portanto, as clulas dendrticas e os macrfagos so capazes de interagir com os vrus e produzir citocinas e interfero do tipo I. A forma como as clulas dendrticas e os macrfagos respondem a uma partcula viral tanto por endocitose das clulas infectadas que esto em apoptose, por exemplo, ou por endocitose da partcula viral revestida por anticorpos. Portanto, difcil a deteco directa. Uma vez dentro da clula, podem ser reconhecidos: no compartimento endossmico no citosol.

 O reconhecimento no compartimento endossmico baseia-se no facto de que os macrfagos e clulas dendrticas expressam neste compartimento os Toll-like receptors (TLR). J foi detectado nesta localizao um subgrupo especfico destes receptores: TLR3, TLR7, TLR8 e TLR9, que so especficos para material gentico, reconhecendo cidos nucleicos do vrus processados. A via citoslica est dependente de PRRs que reconhecem cidos nucleicos dos vrus, por exemplo MDAS, RIG-I ou DAI. As vias citoslica e endossmica no se excluem mutuamente, alis, ocorrem em simultneo e sustentam-se uma outra. Ocorre sempre vazamento de partculas antignicas, de cidos nucleicos, do endossoma para o citosol e estes ficam disponveis para serem identificados pelos TLR citoslicos. Para alm disso, os macrfagos e clulas dendrticas tm a capacidade de realizar autofagia, isto , so capazes de englobar o seu prprio compartimento. Esta forma de endocitose interna disponibiliza novo material para o compartimento endossmico. De qualquer modo, o reconhecimento do vrus quer pelos TLR endossmicos ou pelos TLR citoslicos induz a transcrio de interfero famlia de citocinas, composta por IFN- e IFN- (tambm existe IFN-, que completamente diferente destes ltimos dois este secretado por linfcitos inflamatrios efectores como as clulas NK, os linfcitos T CD8 e os linfcitos T CD4 Th1, sendo designado interfero do tipo II). Foram assim designadas pela sua capacidade de interferir com a aco do vrus. O IFN- e IFN- tm a funo de: inibir a replicao do vrus aumentar a expresso de MHC classe I e TAP, (contrariando a aco do vrus, que tem a capacidade de diminuir a expresso de MHC classe I) o que aumenta a apresentao de antignio em todas as clulas, contribuindo para a activao de linfcitos CD8 Activa directamente clulas NK
Os efeitos imediatos do infero do tipo I so interferir com a replicao viral na clula infectada e sinalizar nas clulas vizinhas a possibilidade de infeco para que estas se possam preparar. Outras aces so o alerta das clulas do sistema imune de que a infeco est eminente e tornar as clulas infectadas por vrus mais vulnerveis s clulas NK.

Como que se d a resposta imunitria ao vrus? A produo de interfero do tipo I o primeiro evento verificado quando ocorre infeco viral. Aps o pico de IFN-I, verificase um pico de actividade das clulas NK, devido s elevadas concentraes de IFN-I. Aps algum tempo que se verifica o pico na actividade dos linfcitos T, especialmente dos citotxicos. Se no ocorrer resposta por

parte dos linfcitos T citotxicos (CTL), s com a aco do IFN e das clulas NK no h reduo da contagem viral. O papel dos eventos imunes que ocorrem antes da resposta das CTL conter a infeco durante o tempo necessrio para que os linfcitos sejam activados e mobilizados como clulas efectoras. O principal sinal para a activao destas clulas dado pelas clulas NK. Clulas NK Constituem 10% dos linfcitos circulantes. So capazes de provoca a lise de clulas infectadas com vrus de um modo muito semelhante ao das CTL, por libertao de grnulos citotxicos. A lise celular no est dependente de apresentao de sinal pelo MHC: As clulas NK no expressam receptores especficos e no vem o antignio no contexto da molcula de MHC - Importante diferena entre as clulas NK e as CTL

A molcula de MHC classe I superfcie das clulas inibe a actividade das clulas NK. Num caso de no infeco (a), as clulas NK tm dois tipos de receptores, o inibitrio e o activador, ligados aos respectivos ligandos nas clulas-alvo. O sinal enviado pelo receptor inibitrio que reconhece o MHC I superfcie da clula-alvo no efectada dominante em relao ao enviado pelo receptor de activao a clula no mata. A infeco viral reduz os nveis de MHC I superfcie da clula-alvo, removendo o sinal inibidor, e neste caso a clula NK mata a alvo porque apenas o receptor
activador se encontra a enviar sinal. Assim, o MHC no necessrio para uma funo de reconhecimento nas clulas NK, mas antes para enviar um sinal inibitrio.

Outra diferena importante na actividade das clulas NK que estas no so capazes de gerar memria imunitria a resposta das clulas NK a mesma independentemente do nmero de vezes o vrus em questo infecte o organismo.

Imunidade adaptativa
Durante o tempo de produo de citocinas e de actividade NK, o sistema imune inato capaz de activar a imunidade adaptativa, que tem dois componentes: por um lado, h activao das clulas B, que libertam anticorpos estes apenas so eficazes contra vrus que se encontrem no meio extracelular ou contra clulas infectadas com vrus que expressem antignios virais. Por outro lado, h a activao das respostas celulares, mediadas pelos linfcitos T, em particular pelas CTL, principalmente por morte das clulas infectadas.

Respostas humorais So mediadas por anticorpos tetrmeros constitudos por duas cadeias leves e duas cadeias pesadas que reconhecem antignios muito especficos na sua forma nativa, ou seja, o reconhecimento no requer processamento do antignio esta uma importante diferena entre clulas B e T. A poro formada apenas pelas cadeias pesadas bastante importante pois dela que est dependente a actividade efectora do anticorpo. Na resposta a vrus possvel distinguir diferentes isotipos de anticorpos, sendo IgA e IgG os mais eficazes na neutralizao do vrus: IgM a primeira imunoglobulina a ser secretada, surgindo numa forma tetramrica. Aglutina partculas virais, formando grandes complexos, o que dificulta a ligao ao receptor no hospedeiro. Esta aglutinao no neutraliza necessariamente a capacidade de o vrus infectar a clula, mas , de facto, a primeira linha de defesa. IgA bloqueia a ligao dos vrus a clulas hospedeiras (imunidade nas mucosas, est presente em vrias secrees). IgG neutraliza o vrus; activa a lise (responsvel pela imunidade sistmica) e as clulas NK, tal como a secreo de citocinas. A neutralizao de vrus feita por ligao dos anticorpos neutralizadores a protenas essenciais infeco da clula hospedeira. Os vrus recobertos por anticorpos no se conseguem ligar ao receptor a infeco evitada Por outro lado, a ligao aos anticorpos pode desencadear a lise celular mediada pelas clulas NK. A clula infectada pode expressar protenas virais, como a neuraminidase, que so reconhecidas por anticorpos IgG. A poro constante dos anticorpos reconhecida pelo receptor CD16 ou FcRIII, activando as clulas NK para a libertao de grnulos que provocam a apoptose da clula-alvo.

Tipo de clula activada por anticorpos Neutrfilo

Susbtncias libertadas Enzimas lticas

Eosinfilo

Enzimas lticas; perforinas

Clula NK

Granzimas; TNF; perforinas

Macrfago

Enzimas lticas; TNF

Respostas celulares A clulas T citotxicas CD8+ reconhecem complexos pptido-MHC I (pMHC I). Para tal, tem de ocorrer apresentao de antignio viral. Este pode ser feito tambm pelas APC (clulas apresentadoras de antignio). Estas obtm vrios tipos de partculas a partir das clulas apoptticas: cidos nucleicos Complexos HSP/pptido (heat shock protein = HSP) so protenas intracelulares que funcionam como chaperones, que tm vrias funes, entre elas, a capacidade de activar linfcitos T, por terem duas propriedades: so capazes de activar clulas dendrticas, funcionando como adjuvantes, e podem ligarse aos seus receptores nas clulas dendrticas canalizando os pptidos para complexao com MHC. (ZIHAI LI; In vitro
reconstitution of heat shock proteinpeptide complexes for generating peptide-specific vaccines against cancers and infectious diseases; Volume 32, Issue 1, January 2004, Pages 25-28)

Remanescentes celulares.

Os pptidos antignicos que se ligam ao MHC para apresentao so gerados no interior das clulas por digesto de protenas antignicas. As protenas derivadas dos compartimentos intra e extracelulares esto presentes em diferentes compartimentos intracelulares. Elas so processadas a pptidos por duas vias de degradao intracelular e ligam-se s duas classes de MHC em compartimentos celulares separados. Os pptidos derivados da degradao de patognios intracelulares so formados no citosol e transportados ao reticulo endoplasmtico, onde o MHC classe I se liga aos pptidos. Em contraste, os microorganismos extracelulares e as protenas so captadas por fagocitose e endocitose e so degradadas nos lisossomas e outras vesculas da via endoctica. neste compartimento celular que o MHC classe II se liga aos pptidos. Deste modo, a classe de MHC marca os pptidos como sendo de origem extracelular ou de origem intracelular. No entanto, possvel s clulas dendrticas fazerem crosspresentation/cross-priming: o MHC classe I pode fazer apresentao de antignios exgenos. Um antignio que cross-presented um antignio do meio extracelular apresentado s CTL pelas APC. Antes julgava-se que o MHC I apenas podia apresentar pptidos derivados de protenas sintetizadas na clula. Contudo, em algumas circusntncias, os antignios de meio extracelular podem ser apresentados nas molculas MHC I e estimular directamente a imunidade pelas CTL cross presentation. Este um mecanismo pelo qual o sistema imune monitoriza tecidos e fagcitos para detectar a presena de antignios estranhos, sendo a nica via pela qual o sistema imune pode detectar e responder a infeces virais ou mutaes que ocorrem exclusivamente nas clulas do parnquima e no nas APC derivadas da medula ssea. Neste processo, as APC adquirem protenas de outros tecidos atravs de endocitose (especialmente fagocitose ou macropinocitose). O antignio internalizado pode ento ser processado atravs de duas vias: [Fagossoma-citosol:] O antignio transferido do fagossoma para o citosol, onde hidrolizado pelo proteossoma em oligopptidos, que so depois transportados pelo transportador associado

com o processamento de antignios para as molculas MHC I no retculo endoplasmtico ou fagossomas. [Vacuolar:]O antignio clivado em pptidos por proteases endossmicas, particularmente a catepsina S, e liga-se ao MHC I provavelmente no prprio compartimento endossmico. Dependendo da natureza do antignio, uma ou ambas as vias podem contribuir para a crosspresentation. O resultado da cross-presentation pode ser tanto a imunidade como a tolerncia: se os antignios so adquiridos isoladamente, o resultado a tolerncia; se so adquiridos com sinais imunoestimulatrios, o resultado a imunidade. Uma das fontes de sinais imunoestimulatrios que levam imunidade so as clulas apoptticas, que libertam sinais de perigo que promovem o desenvolvimento de imunidade.
Rock, Kenneth L.; Shen, Lianjun Cross-presentation: underlying mechanisms and role in immune surveillance. Immunological Reviews. 207(1):166-183, October 2005.

Como que ocorre o processamento dos antignios exgenos nas clulas dendrticas e nos macrfagos? Clulas dendrticas Macrfagos

Portanto, as respostas celulares consistem em: Os linfcitos T CD4+ e CD8+ secretam citocinas (IFN-, TNF) o que aumenta a actividade microbicida inata.

Os linfcitos T citotxicos CD8+ (CTL) exercem actividade citoltica directa sobre as clulas infectadas.

Portanto, a aco citoltica das CTL pode ser independente de contacto ou dependente de contacto por libertao de citocinas ou por induo da apoptose nas clulas-alvo. A funo das CTL matar clulas que perdem a capacidade de funcionar devido a uma infeco intracelular. No fundo, o sacrifcio da clula serve para evitar a disseminao da infeco para clulas saudveis. As clulas T citotxicas efectoras contm grnulos lticos armazenados, que so lisossomas modificados que contm uma mistura de protenas especializadas chamadas citotoxinas. Logo que as clulas T so activadas por antignios especficos nos rgos linfides secundrios comeam a produzir estas substncias que armazenam em grnulos. Depois, as clulas T CD8 efectoras migram para os locais de infeco onde reconhecem complexos pptido-MHC I especficos apresentados pelas clulas infectadas. Pela ligao ao TCR, a clula T liberta os seus grnulos na direco superfcie da clula infectada, sobre uma parte da sua superfcie, evitando as clulas vizinhas e a prpria clula T. Quando a clula-alvo morre, o linfcito T sintetiza novos grnulos e volta a atacar outra clula, matando muitas clulas infectadas sucessivamente.

Aps contacto com uma CTL, o DNA da clula-alvo comea a ser fragmentado pelas nucleases da prpria clula estas clivam entre os nucleossomas dando origem a fragmentos de tamanho mltiplo de 200 bp em comprimento, caracterstico da apoptose. Assim, o ncleo acaba por se desagregar e ocorre perda da integridade da membrana e da morfologia normal da clula a clula destri-se a si prpria desde o interior. As clulas que ocorrem na membrana so detectadas pelos fagcitos, o que acelera a morte celular por fagocitose e digesto. A digesto dos cidos nucleicos no interior da clula tambm atinge o material gentico do vrus, evitando a infeco de outras clulas se estes conseguissem escapar da clula apopttica. As CTL podem induzir apoptose de dois modos: Atravs das citotoxinas que libertam Via Fas

Apoptose causada pelas citotoxinas Os grnulos citolticos contm: Perforinas e granulisinas protenas que perturbam a membrana. Serina proteases granulares: granzimas Inibidor de perforinas: calreticulina Enzimas lisossomais (catepsinas) com papel no processamento de granzimas (catepsina C) e na proteco das CTL contra a perforina (catepsina B) Molculas efectoras armazenadas pelas clulas T: ligando Fas

Aco das perforinas Estas protenas polimerizam para formar poros transmembranares de 160 . O poro permite a entrada de gua e sais para o interior da clula e facilita a entrada de granzimas.

 Aco da granzima B As granzimas so serina proteases. Quando libertada, a granzima B usa poros para se translocar para o interior das clulas-alvo. No citoplasma, a granzima B activa a caspase-3, que est presente em todas as clulas como prenzima inactiva. A caspase 3 activa liberta da inibio a CAD (caspase activatable DNase). A CAD uma nuclease que se trasnloca para o ncleo e cliva o DNA da clula entre os nucleossomas.

Dano mitocondrial

Os componentes dos grnulos citotxicos danificam as mitocndrias por dois mecanismos distintos: 1) libertao de factores prapoptticos do espao intermembranar 2) disrrupo do potencial transmembranar mitocondrial Apoptose pela via Fas

As CTL activadas expressam sua superfcie o ligando Fas, que um homotrmero, que se liga s molculas Fas superfcie da clula-alvo. Isto leva a que as caudas citoplasmticas do receptor se aproximem e se liguem a molculas adaptadoras, em particular FADD, que por sua vez interagem com a pr-caspase 8, que se transactiva a caspase 8 cliva ento outras caspases que levam activao da CAD a clula-alvo entra em apoptose. Indivduos que no possuem molculas Fas funcionais no so capazes de controlar as suas populaes linfocitrias nem de remover as clulas autoimunes estas so outras funes desta via. Assim, sofre de ALPS (autoimmune lymphoproliferative syndrome), que se caracteriza por orgos linfides secundrios aumentados na ausncia de infeco e em respostas imunes que atacam clulas sanguneas saudveis e hepatcitos.

Em relao ao exemplo da resposta imunitria Influenza, veja-se ainda:

Quais as diferenas entre a resposta imunitria a um vrus citoptico (ex: Influenza) e a um vrus no citoptico?

Mecanismos de evaso imune

Antigenic drift Consiste em novas mutaes que provocam a perda de imunidade, levando a que hajam indivduos com diferentes nveis de imunidade estirpe que predomina num dado momento. Este tipo de evoluo causa epidemias limitadas, apenas nos indivduos no imunes estirpe em questo.

Antigenic shift Por exempo na Influenza, a cada 15 a 50 anos surge uma estirpe estruturalmente muito diferente do seu antecessor, que leva a pandemias (epidemia a nvel mundia), tendo consequncias mais graves que o drift antignico. Estas estirpes resultam da combinao de cadeias de RNA de vrus que infectam espcies diferentes, dando origem a um vrus recombinante com vantagem competitiva muito superior shift antignico. Interferncia com a via de MHC I Inibio do processamento do antignio Degradao do MHC-I Inibio da TAP (transporter associated with antigen processing: existe na membrana do RE, importando, com gasto de ATP, pptidos preferencialmente de 8 ou 9 aa com resduos hidrofbicos ou bsicos na extremidade C para ligao ao MHC-I) Reteno do complexo pMHC-I Degradao do complexo pMHC-I

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
14. Respostas Humorais
Resumo da aula terica: 10 de Abril de 2008

O timo est historicamente associada a emoes e afectos; distmico, ciclotmico, hipertmico e hipotmico so adjectivos que caracterizam a patologia psiquitrica. J. Miller e R. Good identificaram este como o rgo linfide primrio para subpopulaes de linfcitos linfcitos T. Por outro lado, os linfcitos B tema central desta aula tm origem no fgado fetal e medula ssea, em humanos e roedores, e na bursa de Fabricius (da a denominao de linfcitos B), em aves. Isto tem importncia na medida em que vai haver proximidade entre linfcitos B e os aparelhos gastro-intestinal e reprodutor, que constituem um acesso relativamente fcil para agentes patognicos entrarem no corpo humano. A nvel de imunidade humoral, h proteco contra a aco de toxinas atravs da aco dos seus principais elementos: anticorpos (imunoglobulinas) e cascata do complemento. Os plasmcitos so clulas secretoras de anticorpos.

Mecanismos patognicos das bactrias

Fixao a clulas do hospedeiro: Ligam-se membrana celular com molculas compridas (p. ex., pili das Gram negativas); Secretam molculas de adeso que ligam a clula epitelial ao baterium (p. ex., Bordetella pertussis). Proliferao intensa Invaso dos tecidos do hospedeiro Leso das clulas hospedeiras induzida por toxinas: Endotoxinas (componentes da parede celular); Exotoxinas (molculas secretadas).

Mecanismos de evaso microbiana

Secreo de proteases, molculas com capacidade de inactivar (atravs de clivagem) os agentes da imunidade humoral (molculas de Ig): Fragmentos isolados de Fab e Fc no so capazes de aglutinar e captar microrganismos (p. ex., N. gonorrhoeae, N. meningitidis e H. influenzae).

Mudana nos antignios de superfcie atravs de converso gnica: Variao antignica associada a patogenicidade (10-20 genes silenciosos para pilina) (p. ex., N. gonorrhoeae). Inibio da fagocitose, j que uma das formas de eliminar a presena de microorganismos a aco de clulas com capacidade fagoctica (granulcitos, neutrfilos, eosinfilos, mastcitos, macrfagos), por um mecanismo de bloqueio que impede a sua eficcia: Diversidade dos polisacardeos capsulares que previnem a fagocitose (84 serotipos de S. pneumoniae); S. pyogenes exprime protena M; S. aureus recobre parede com fibrina do hospedeiro (coagulase +). Sobrevivncia dentro de clulas fagocticas (aps endocitose): Listeria monocytogenes capaz de se evadir do fagossoma e de migrar da clula epitelial; Micobactrias bloqueiam fuso lisossomal ou resistem ao stress oxidativo (atravs de aco enzimtica, conseguem controlar, dentro do fagossoma, a actividade cataltica, o valor de pH, etc.). Evaso ao sistema do complemento (bloqueio da cascata): Lpido A de Gram (confere resistncia lise do complemento); Pseudomonas secretam elastase que inactiva C3a e C5a.

Classes de imunoglobulinas

Importante: IgG a mais abundante entre todas as imunoglobulinas disponveis no soro e tem capacidade de activar o sistema do complemento (IgG3 a mais activa), sendo que a subclasse IgG1 a mais activa em geral; IgM a primeira imunoglobulina a ser expressa superfcie de bactrias e a que mais capacidade tem na activao do sistema do complemento; IgE pode induzir formas tetramricas especiais na activao da cascata do sistema do complemento, uma imunoglobulina seleccionada para a imunidade anti-parasitria e tem um papel importante na mediao de alergias; IgD tem um papel a nvel da regulao de linfcitos B, mas a sua funo praticamente desconhecida; IgA a classe de imunoglobulinas mais secretada (em termos quantitativos, pode alcanar os 5 gramas por dia por indivduo), o que tem a ver com a produo de secrees no lmen gastrointestinal, nas vias respiratrias e na pele, onde tem um papel fundamental na proteco contra a invaso bacteriana; Nem a IgA, nem e IgE nem a subclasse IgG4 participam na activao do sistema de complemento.

Sumrio:

Receptores Fc
Em relao estrutura das imunoglobulinas, a regio HD que apresenta os segmentos variveis que vo reconhecer o antignio. Por outro lado, a regio C reconhecida por um conjunto de efectores (receptores Fc) que esto presentes superfcie das clulas, o que vai permitir s clulas que os exprimem que a actividade efectora seja muito mais dirigida e mais especfica, na medida em que os elementos do complexo C se associam aos seus respectivos receptores Fc. Trs tipos de receptores Fc servem para a IgG (I, II e III); Poly-IgR est envolvido no transporte de IgA e IgE atravs da placenta; FcRn transporta IgG e fundamental para a imunizao passiva do feto, que garantir o bemestar e a sade do beb.
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Imunidade humoral mediada por anticorpos

Neutralizao Opsonizao Activao do complemento (via clssica) Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) Transcitose

Neutralizao
A partir do momento em que uma toxina entra numa clula, ela passa a ser patognica e poder levar lise celular. Os anticorpos podem bloquear a entrada de toxinas na clula e, por isso, diz-se que tm um efeito neutralizador. Por outro lado, actuam tambm sobre partculas microbianas quer vrus, quer bactrias impedindo que alguns microorganismos dentro da clula levem sua destruio.

Opsonizao
A opsonizao a capacidade de envolver determinado agente microbiano ou partcula por factores quer de fagocitose, que do sistema do complemento, e assim intensificar a sua destruio e eliminao. um mecanismo de potenciao da fagocitose, na medida em que superfcie das clulas fagocticas (macrfagos e neutrfilos) existem receptores Fc (FcRs) que reconhecem quer os factores do complemento que se ligam bactria, quer a regio constante das imunoglobulinas, permitindo a captao de antignios por ligao s regies Fc dos anticorpos. Crosslinking induz fagocitose, leso oxidativa e digesto enzimtica. Ocorre, ainda, activao de mastcitos e basfilos.

Activao do complemento (via clssica)

Na forma solvel e circulante, a IgM pentamrica tem uma forma plana, mas, quando reconhece antignios na superfcie celular, muda a sua configurao para uma forma de agrafo, expondo a sua parte central de modo a poder ligar-se a estes. Passa, assim, a ter capacidade de activar o sistema do complemento, o que no acontece na forma plana (no se liga aos antignios). Por outro lado, o receptor que reconhece a IgM, o C1q (primeiro factor do sistema do complemento), apenas se activa se reconhecer pelo menos dois domnios do anticorpo. Deste modo, se estiverem presentes IgMs na forma pentamrica, o C1q facilmente se liga a dois domnios desta imunoglobulina, o que j no acontece com a IgG (a maioria das suas subclasses tem capacidade de activar o complemento), que circula na forma monomrica. Apesar de ser um anticorpo de classe predominante e tendo partida um papel mais relevante na resposta humoral, a IgG no a mais importante em termos de capacidade de
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activao do complemento. Isto acontece porque fundamental haver proximidade fsica entre duas molculas de IgG para que se possa dar incio cascata do complemento, por fixao de uma s molcula de C1q.

Antibody-dependent cytotoxicity (ADCC)

cell-mediated

Uma clula NK (natural killer) no possui receptores como os linfcitos T ou B, mas poder destruir uma clula efectora (clula alvo especfica, que poder ser mesmo um agente microbiano ou bactria), se esta sua superfcie tiver anticorpos que se ligam a receptores Fc das clulas NK, direccionando a sua funo efectora citotxica. Isto confere especificidade lise celular. Os eosinfilos tambm tm uma funo efectora anti-parasitria, mediada pela IgE.

Transcitose
As imunoglobulinas tm capacidade de mudar de posio; por exemplo, durante a gravidez, existe a possibilidade de serem transferidas da me para o feto, o que ocorre sobretudo nas ltimas quatro semanas de gestao. Importante: As principais subclasses envolvidas na transcitose placentria (transferncia placentria da imunidade humoral) so a IgG1, a IgG3 e a IgG4, e o seu transporte mediado por FcRn. O transporte de IgG2 menos eficiente. No grfico esquerda temos a concentrao srica de IgG, IgA e IgM presentes nos primeiros doze meses e depois at aos vinte anos de idade de um indivduo. Isto permite-nos ter uma ideia clara da importncia dos anticorpos IgG maternos transferidos durante o desenvolvimento fetal nos primeiros cinco a seis meses de vida do beb. Naturalmente que esta fase de maior facilidade da resposta humoral ser potenciada se a me, aps o parto, produzir grandes quantidades de IgA, que passar para o beb atravs do leite materno. Esta uma outra forma de transcitose (IgA e IgM podem atravessar epitlios em superfcies mucosas, transporte esse mediado por poly-IgR).
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Fases do desenvolvimento dos linfcitos B

Vamos agora recordar como que conseguimos alcanar a fase de clula produtora de anticorpos linfcitos B e plasmcitos. Comea-se com uma clula-me clula percursora linfide que a mesma que origina linfcitos T, clulas NK e clulas dendrticas (estas tambm vo ter um percursor mielide). Obtm-se, assim, uma quantidade significativa de clulas pr-B, que correspondem expresso da cadeia pesada da imunoglobulina. A esta vai juntar-se um receptor (constitudo pelas chamadas surrogate light chains), passando-se fase de clulas pr-B. Esta corresponde importante fase de seleco de linfcitos B, em que se verifica que esse receptor no reconhece elementos do prprio organismo como sendo antignios (de outro modo, estas clulas poderiam ser potencialmente auto-reactivas). Existe, tambm, um receptor que reage com a regio varivel da cadeia pesada e da cadeia leve que capaz de reconhecer um antignio. De seguida, tem-se uma clula B madura que sai do local original de produo, que poder ser o fgado fetal durante o desenvolvimento embrionrio ou, mais tarde, a medula ssea (quando passa a haver espao para albergar tecido hematopoitico a nvel do osso). Quando nascem, os bebs ainda tm alguma hematopoiese a nvel do fgado, mas ao fim de um ano e para o resto da vida esta assumida na totalidade pela medula ssea. Finalmente, tem-se a gerao de plasmcitos, aps o encontro dos linfcitos B com os seus respectivos antignios, com ou sem presena de linfcitos T, e a produo de grandes quantidades de imunoglobulinas. Os plasmcitos circulam ento da medula ssea para os gnglios linfticos e para o bao (tecido linfide secundrio).

Subpopulaes de linfcitos B
Os linfcitos B dividem-se em duas grandes populaes: as clulas B B-1 e as clulas B B-2.

Clulas B B-1 So uma populao minoritria no adulto (cerca de 5%), mas so a principal populao durante o desenvolvimento fetal (inclusivamente, o seu desenvolvimento s ocorre durante o perodo prnatal). Posteriormente, auto-renovam-se in situ. So os linfcitos B predominantes no peritoneu e na cavidade pleural. Expressam a glicoprotina CD5, que denominada de marcador de clulas T, mas esta no tem um papel funcional. Expressam grande quantidade de IgM, mas pouca de IgD. Tm respostas de isotipo IgA e IgM. Os seus anticorpos tendem a ter baixa afinidade e ligam-se a uma srie de antignios diferentes (poliespecificidade). Produzem anticorpos naturais presentes em ratinhos germ-free, direccionados para antignios prprios. So importantes para a compreenso de como que o sistema imunitrio faz a distino entre aquilo que prprio e aquilo que estranho.

Clulas B B-2 Constituem a populao maioritria no adulto. Expressam IgM e IgD superfcie. Localizam-se nos rgos linfides secundrios. Tm origem na medula ssea.

Antignios para os linfcitos B

Relativamente s clulas que activam os linfcitos B, estas so de dois grandes tipos, consoante necessitem, ou no, da presena de linfcitos T para o fazerem: antignios timo-dependentes e antignios timo-independentes (TI). Antignios timo-dependentes Contacto com linfcitos Th; Contacto clula-a-clula e secreo de citocinas (IL-3, IL-4, IL-5).

Respostas imunitrias mais fortes; Gerao de linfcitos B de memria persistentes; Recombinao class-switch, todas as classes de imunoglobulinas.
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Nota: Recombinao class-switch (CSR): troca das classes ou dos tipos das imunoglobulinas que permite que um linfcito B, que partida nasce s com IgM, passe mais tarde a exprimir IgG, IgE ou IgA; a presena dos linfcitos T que determinar essa possibilidade.

Antignios timo-independentes

Antignios TI-1 Tm actividade mitognica (p. ex., LPS); So activadores policlonais; Elevada concentrao de antignios activa linfcitos B independentemente do receptor de linfcitos B (PRRs); Baixa concentrao activa atravs do receptor de linfcitos B.

Antignios TI-2 So protenas polimricas repetitivas ou polissacridos bacterianos com unidades repetidas (macromolculas que apresentam monmeros repetidos ou que tm padres moleculares sequenciais repetitivos), de modo a que o linfcito B que apresenta os seus anticorpos superfcie reconhea o mesmo antignio em toda a molcula quando se aproxima dos receptores de superfcie; Activao feita atravs do crosslinking do receptor de linfcitos B, na ausncia de linfcitos T; No actuam como mitognicos nem como activadores policlonais; Activam linfcitos B maduros e inactivam linfcitos B imaturos; Citocinas Th1 so necessrias para proliferao e CSR. Respostas imunitrias mais rpidas mas mais fracas; No h gerao de linfcitos B de memria; Maioria das imunoglobulinas secretadas IgM.

Interaces entre linfcitos B e T na resposta humoral

Resposta do linfcitos B nos tecidos linfides

Linfcitos B da zona marginal do bao Esta populao capaz de uma resposta rpida ( a populao B que mais rapidamente responde a uma ameaa). O bao tem, deste modo, um importante papel como o primeiro rgo linfide secundrio e como o maior filtro dos antignios circulantes no sangue. Estas clulas proliferam aps o contacto com o antignio na presena ou ausncia de linfcitos T, gerando clulas de memria e plasmcitos.

Linfcitos B do folculo Os folculos distribuem-se pelos gnglios, bao e mucosas e podero ter dois tipos de resposta de diferenciao aps contacto com o antignio:
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Semelhante que ocorre nos linfcitos B da zona marginal, gerando respostas rpidas, parcialmente eficazes, mas que no geram memria. Presena de linfcitos T, clulas dendrticas e apresentao antignica persistente que leva a uma grande actividade proliferativa, e a organizao de um centro germinativo, que acaba por ser o local da troca por excelncia, da gerao de diversidade quer em termos de aumento da diversidade de regies variveis, quer alterao da regio Fc das imunoglobulinas CSR. Temos, deste modo, a gerao de uma populao B de clulas de memria, a partir das quais se diferenciam os plasmcitos (clulas cuja semi-vida no est ainda claramente definida, mas que os estudos apontam para a dcada), em que algumas podero permanecer como activos produtores de anticorpos.

Linfide das mucosas (MALT)

Um exemplo de um rgo produtor de imunoglobulina (considerado o tecido linfide mais importante do sistema imunitrio) o MALT, que se distribui pela pele, epitlio respiratrio, urinrio e tudo o que tem a ver com cavidade. O tecido linfide organiza-se, distribuindo-se: Linfide da mucosa, imediatamente abaixo do epitlio; Regio submucosa, em agregados linfides designados placas de Peyer.

Notas: Secreo de IgA depende da colonizao microflora comensal (Germ-free tm menos IgA); Linfcitos B activados alteram a regio constante da IgH de Cpara C

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Recombinao class-switch (CSR) para isotipo IgA

O mecanismo que leva ao class-switching depende estritamente da presena de uma enzima (tal como a recombinao somtica de RAG-1 e 2) AID (activation-induced deaminase), enzima capaz de clivar os segmentos gnicos que necessitam de outras cadeias, fazendo assim a transferncia de uma globulina da IgM superfcie para a IgG ou para a IgA, atravs da eliminao do fragmento do seu DNA intermedirio [topo da prxima pgina, esquerda].

A imunidade das mucosas: intestino

A diferenciao de clulas B dentro do intestino, antignio T-dependente ou T-independente, leva produo de diferentes anticorpos [em cima, direita]. A presena de clulas dendriticas, que activam linfcitos T, leva tambm activao de linfcitos B, atravs da produo de citocinas e da juno de CD 40L (factor essencial na diferenciao destes linfcitos). Por outro lado, na ausncia de clulas T e na presena de antignios, os linfcitos B podem tambm diferenciar-se, proliferar e levar produo de clulas produtoras de anticorpos.

Mecanismo de transporte transepitelial de IgA

IgA produzido na presena de TGf-, igualmente associado produo por clulas activadoras, que entram no sangue por leso do linfide das mucosas. Esta imunoglobulina transportada para o lmen atravs da associao com um receptor designado poly Ig-receptor (presente na membrana baso-lateral), que depois transportado para a membrana apical, onde sofre lise. A IgA libertada em dmeros associados a uma poro desse poly Ig-receptor, o pptido J (componente secretor), a pea que vai permitir que a
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IgA dimrica seja mais tarde re-captada para a circulao sangunea e reciclada, superfcie de clulas epiteliais do intestino, que o reconhecem. Grande parte das imunoglobulinas produzidas diariamente, aproximadamente 3,5-5g dirias, eliminada para o exterior.

Sistema do complemento
Numa experincia em que trabalhou com soro de carneiro e imunizao com o vrus da clera, Pasteur reparou que o soro obtido de carneiros imunizados era capaz de provocar a lise de bactrias de uma placa de cultura onde o enxerto se encontrava. Por outro lado, numa experincia semelhante, esse soro foi inactivado pelo calor e verificou-se que perdia a capacidade de neutralizar e destruir as bactrias. Essa capacidade era restabelecida ao adicionar soro de carneiro que nunca tinha contactado com o vrus da clera. Assim se percebeu que dois elementos presentes no soro permitiam a lise de bactrias: Componente especifico anticorpos; Componente inespecifico, que existia em contacto com o agente bacteriano, completando a funo do ltica dos anticorpos complemento.

O sistema do complemento (constitudo por mais de mais de trinta molculas) consiste numa cascata enzimtica (cascata proteoltica sequencial de proenzimas zimognios), que permite a amplificao do efeito. Os seus factores (protenas plasmticas ou membranas) so produzidos e circulam sob a forma inactiva, no sendo capazes de gerar dano para o hospedeiro, nem para os agentes microbianos. S so activados aps clivagem. A sua capacidade de inactivao tem a ver com a forma, reversvel ou irreversvel, como se ligam covalentemente superfcie microbiana, membranas celulares (p. ex., de clulas tumorais e de eritrcitos) e molculas de Ig, podendo inclusivamente provocar doenas. Por esta razo, tem de haver uma intensa regulao para impedir que o seu efeito protector na imunidade humoral possa de alguma maneira prejudicar o hospedeiro, atravs da sua activao nos tecidos normais. O sistema complemento divide-se em 3 vias: Via clssica (activao por complexos imunes adquirirda); Via alternativa ou alterna (activao por agentes microbianos na ausncia de Igs inata); Via das lectinas (activao com base na MBP inata).

Funes efectoras da cascata do complemento

Lise de clulas, bactrias e vrus; Opsonizao: promove a fagocitose de antignios particulados (tambm uma propriedade das imunoglobulinas); Regulao da inflamao, por ligao a factores do complemento, desencadeando funes celulares especficas (factores reguladores);
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Clearance imunitria: em situaes em que o sistema do complemento no capaz de destruir os agentes microbianos por opsonizao, pode participar na captao e depurao dos microorganismos da circulao sangunea, atravs da ligao e remoo aos complexos imunes.

Vias de activao do complemento

Via clssica Assim designada pois foi a via descoberta inicialmente, no sculo XIX; Depende de anticorpos. Via alternativa ou alterna Mais antiga do ponto de vista evolutivo (verdadeiramente clssica); Independente de anticorpos. Via da lectina Mais recente; Propriedades intermdias da clssica e alternativa. Todas trs tm como objectivo a gerao de um complexo na clula alvo que, por saturao do lquido osmtico no interior da bactria (em relao ao exterior), leva sua lise.

Via Clssica
C1q liga-se a duas molculas de IgG. Esta uma estrutura trimrica composta por seis cadeias, cada uma composta por trs sub-cadeias. Corresponde ao primeiro elemento da cascata da via clssica, ao qual se vo ligar o C1r e C1s (dois domnios globulares, um com funo de ligao e outro com funo ltica). O C1r o primeiro a ligar-se ao C1q activado, aps reconhecimento de dois domnios CH2 da cadeia pesada dos anticorpos IgG ou IgM.
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Aps ligao do C1r, este altera a sua conformao, ficando assim acessvel para ligao ao C1s, que assim adquire a capacidade de activar a lise de um outro factor, o factor C4 , em factor C4a e C4b. O que est dentro do grnulo, que vai abrir na cascata, um pequeno fragmento habitualmente designado por fragmento A. Este libertado e vai ter uma funo pr-inflamatria, com [] para toxinas. H uma excepo que o factor C2, em que o factor C2a que se liga cadeia da via clssica do complemento, ligando-se covalentemente ao factor C4b. A combinao C4b2a forma aquilo a que se chama a C3 convertase da via clssica. Este complexo tem a capacidade de levar activao de inmeras molculas de C3, e estas s molculas seguintes da cascata, novamente em C3b e C3a, sendo o C3b o elemento chave central da cascata da via clssica e da via alterna. A C3 convertase d origem a uma outra convertase, a C5 convertase, a partir do momento em que se fixa o C4b2a a um fragmento de C3b.

Via alterna ou alternativa

Esta via comea com o factor C3, que tem como particularidade a capacidade de se hidrolisar espontaneamente, no necessitando da aco de outras convertases da via clssica para produzir dois fragmentos. Esta hidrlise espontnea permite que o C3b, forma activa, reconhea directamente a parede das bactrias e dos vrus num cofactor de lise. Na imagem direita, podemos observar a ligao tioster presente no factor C3 que lhe confere a instabilidade para a hidrlise espontnea. A seleco dos factores do complemento para composio molecular dos ambientes de superfcie uma seleco que ocorreu ao longo de milhes de anos, e que confere via alterna a sua antiguidade. O primeiro factor a fixar-se covalentemente superfcie da bactria o factor C3b, ao qual se liga o factor B, que depois catabolizado em factor Bb e Ba, e essa reaco permitida pelo factor D.
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Normalmente, a combinao de C3 convertase da via alterna (C3b,Bb) degrada C3 em C3b e C3a, tal como a C3 convertase da via clssica, mas altamente instvel, tendo habitualmente uma meia-vida de cinco minutos. No entanto, na presena do factor P, a sua sobrevida aumenta at cerca dos trinta ou quarenta minutos, o que permite que um nico complexo de C3b convertase da via alterna seja capaz de produzir cerca de dois milhes de factores C3b, que vo recobrir completamente uma superfcie bacteriana, num minuto. Finalmente, para chegarmos C5 convertase da via alterna h a associao de mais uma molcula de C3b ao C3b,Bb. C5 convertase, quer da via clssica quer da via alterna, o complexo de factores capaz de catabolizar e activar C5, a C5a e C5b. A via alterna naturalmente mais lenta que a via clssica, mas apesar disso permite o reconhecimento indirecto das bactrias e dos vrus. Mesmo que no seja eficaz na destruio e lise, poder levar opsonizao.

Molculas que so reconhecidas pelo factor da via alterna Partculas e agentes microbianos: Bactrias Gram -; LPS de bactrias Gram -; Algumas bactrias Gram +; cido teicico das Gram +; Paredes celulares de fungos e leveduras; Alguns vrus, como herpes, ortomoxivirus (Influenza), paramixovrus (sarampo, parotidite, VSR) e retrovrus; Parasitas (trypanossomas). Por outro lado, a via alterna reconhece tambm membranas celulares, clulas tumorais, superfcie de eritrcitos, molculas que podem aproveitar a capacidade modificadora que a C3 convertase da via alterna tem de produzir C3b (forma activa do complemento).

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Outros elementos no microbianos: IgG, IgA e IgE em complexos imunes; Complexos imunes de coelho e cobaia; CVF (cobra venon factor); Clulas tumorais; Eritrcitos heterlogos (murganho, coelho e galinha); Polmeros aninicos (dextran sulfato); Hidratos de carbono puros (inulina, agarose).

Via das lectina ou via mannose binding-lectin (MBL)

Inicia-se, semelhana da via clssica, com um factor, o MBL (em amarelo na figura) que semelhante ao C1q da via clssica do complemento. A diferena que esta MBL no se liga a anticorpos, mas sim a resduos de manose (resduo muito comum nas paredes bacterianas), presentes na superfcie dos microorganismos, como certas estirpes de Salmonella, Listeria e Neisseria. Por outro lado, o C1r e o C1s da via clssica so substitudos pelas MASP (mannose associated aerine proteases), MASP-1 e MASP-2, de forma homloga via clssica, e toda a cascata seguinte semelhante. Este complexo MBL, MASP-1 e MASP-2, funciona como o C1qrs da via clssica, induzindo activao e clivagem do C4 e do C2. A C5 convertase cliva C5 em C5a e C5b. O passo seguinte a activao do C6, do C7,e do C8 at ao factor que leva formao de um poro na parede ou na membrana da clula. O C6 e o C5b ainda no tm nenhuma ligao verdadeiramente rgida capaz de levar a leso da membrana da clula. Isto obtido com a produo de C7, e este complexo C5b,C6,C7,C8 j capaz, s por si, de lisar a membrana de eritrcitos. No sendo clulas nucleadas, estes no tm capacidade de mobilizar rapidamente grandes fragmentos da sua membrana (elevada coeso membranar), no sendo capazes de eliminar esse complexo. J uma clula nucleada consegue rapidamente libertar-se desse complexo, mantendo-se vivel. Se se associar o complexo C7, C8 e C9, forma-se o poro, e o efeito irreversvel, com a lise da bactria. Observa-se, deste modo, o dinamismo e complexidade do sistema complemento.

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Via comum: gerao do membrane attack complex (MAC)

Resumo:

Importante: A disfuno ou ausncia do complemento conduz a patologias com incapacidade de eliminar bactrias: imunodeficincias. Isto implica processos inflamatrios crnicos, com acumulao de factores anafilotxinas: C4a, C3a, e C5a (mais importante).
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Regulao do sistema do complemento

Cascata dinmica; Risco contnuo para lise das membranas celulares; Potencial inflamatrio muito potente (anafilotoxinas: C5a, C4a, C3a).

Regulao da cascata dinmica

Existe um factor, o C1 inibidor (C1Inh), que quando sofre mutao responsvel por uma doena, o edema angioneurtico hereditrio (EANH), que afecta 1/1000 pessoas em Portugal. Este C1Inh responsvel pela remoo dos complexos C1r:C1s, que esto ligados ao C1q, levando sua dissociao deste ltimo. Deste modo, limita o tempo que cada molcula de C1 est activa. Na ausncia de C1 inibidor, no h remoo destes factores, e assim h activao espontnea da cascata. Este o primeiro travo ou regulador. Existem outros reguladores a nvel da via clssica [em baixo, esquerda], como o C4BP (C4 binding-protein), um factor solvel que liga o C4 em circulao, impedindo-o de se ligar ao C1qrs. Por outro lado, existem tambm factores de membrana: o CR1 (receptor do complemento tipo 1) e o MCP, tambm capaz de eliminar a C3 convertase.

A nvel da via alterna [em cima, direita], o factor B dissociado do factor C3b por aco dos mesmos factores de membrana da via clssica, o CR1 e o MCP, e existe ainda a possibilidade de o factor H eliminar o C3b, expondo-o aco ltica do factor I, semelhana do que ocorre com a via clssica. Na via clssica o C4b bloqueia o C4 e submete-o aco ltica do factor I; na via alterna o factor H que se fixa ao C3b activado. Existem ainda outros factores, como o DAF (antibody decay accelerating factor), factor de membrana implicado na hemoglobinria paroxistica nocturna, uma doena mortal em cinco anos, que se
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caracteriza por urina escura (os rins no filtram a hemoglobina- hemoglobinria). Este factor permite, quando presente, a dissociao das C3 convertase da via clssica bloqueando a sua excessiva actividade. Quando est mutado faz com que a via clssica seja excessivamente activa, surgindo a lise de eritrcitos, clulas do prprio que so imediatamente lisadas pelo complexo C5b,C6,C7,C8. Por outro lado, na via alterna, o factor DAF tambm tem um importante papel. Os factores reguladores so os mesmos, a ciso da C3 convertase da via alterna C3b,Bb vai considerar o factor C3b isolado, a sua lise pelo factor I, e depois h segmentao do factor inactivo (cuja actividade no conhecida).

Factores reguladores do sistema do complemento

Estes so os trs factores conhecidos, reguladores finais da via comum: Protena S: bloqueia a dissociao do C7 das membranas das clulas; HRF (homologous restriction factor); MIRL (membrane inhibitor of reactive lysis): factor de membrana (tal como o HRF) que impede o C8 de se fixar, e portanto de evoluir para a [] de C9.

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Sumrio:

Evaso microbiana ao complemento

Tal como para as citocinas, existe perigo de evaso das bactrias actividade do complemento, destacando-se: Pseudomas aeruginosa: produz elastase, que destri as anafilotxinas (C3a ou C5a), inibindo a actividade pr-inflamatria e a acumulao de infiltrados, auxiliando a permanncia destas bactrias sem serem identificadas e destrudas; um dos mais frequentes no ambiente hospitalar. Cadeias longas superfcie da parede da bactria: por ser longas, impedem que os factores do complemento se fixem superfcie bacteriana, bloqueando assim o seu sucesso, como o caso da Salmonella e da E. coli. Vrus: tm o papel de mimetismo dos factores reguladores do complemento, bloqueando pores de protenas, e a prpria actividade do complemento.

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Imunodeficincias
Ausncia de C1, C2 e C4 Lpus uma doena autoimune com papel humoral predominante. Surge porque se formam complexos imunes, isto , o anticorpo reconhece o antignio e, por ausncia de C1, C2, C4, estes complexos imunes circulam e vo-se fixar nos espaos intercelulares das clulas endoteliais. Estas podem, atravs da associao do complexo C3b, desencadear a cascata, levar destruio dessas clulas endoteliais e, assim, contribuir para uma infeco crnica e doena.

Ausncia de C3 Por outro lado, no dfice de C3 exclusivamente, a manifestao no atravs da formao de complexos imunes, mas manifesta-se sobretudo atravs de imunodeficincias, perda da capacidade para eliminar bactrias e, por isso, elevada susceptibilidade para infeces bacterianas, especialmente por Streptococcus pneumoniae. Isto ocorre principalmente em indivduos a quem retirado o bao (por esta razo, hoje em dia opta-se por reparar o bao em vez de o retirar). Na ausncia de bao verifica-se uma incapacidade para depurar os complexos imunes circulantes, acabando as bactrias por circular por mais tempo e, como o complemento no tem capacidade de provocar lise de algumas bactrias, h elevado nmero de infeces.

Receptores do complemento: especificidade, funo e distribuio

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Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
15. Vacinao
Resumo da aula terica: 15 de Abril de 2008 Este primeiro slide ilustra de alguma forma a interaco entre hospedeiro e patognio. () Todos os dias enfrentamos vrias agresses ambientais, o que nos leva necessidade de desenvolver um sistema imune para que possamos controlar as doenas infecciosas. Para controlar as doenas infecciosas, necessrio conjugar a utilizao de frmacos com vacinas, fazer o controlo do vector e, mais importante, central neste esquema, a educao, pois sem ela no possvel aplicar um programa de controlo da doena. A certo ponto til saber a endemicidade antes, durante e depois de qualquer programa de controlo Voltando ao assunto inicial, a patognese. A patognese da doena depende da interaco do patognio com os componentes do nosso sistema imunitrio: o inato e o adquirido. A primeira coisa que precisamos de saber se vamos estudar uma resposta imune como que o patognio vive, tal como um actor que faz pesquisa sobre o tipo de pessoa que a sua personagem. O patognio pode ser um organismo de diversas classes: vrus, bactria, fungo, protozorio, verme. E consoante a sua classe, tem diferentes estilos de vida que vo determinar o mecanismo de defesa a desenvolver. Podem ser analisados vrios parmetros como o local onde se encontram (intra ou extracelular), a sua capacidade de persistncia ou o seu modo de reproduo, e tudo isto vai colocar diferentes problemas. Podemos ver o sistema imune e o patognio como o yin e o yang o patognio necessrio para o desenvolvimento do sistema imune e o desenvolvimento do patognio travado por mecanismos do sistema imune.

Sobre o sistema imune, pode dizer-se que apropriado e flexvel, caractersticas condicionadas pela variedade de formas, estilos de vida e componentes antignicos que os patognios possuem. Isto necessita de sistemas de reconhecimento e de controlo de uma srie de mecanismos efectores igualmente complexos. Problemas nestes sistemas do origem a diversas patologias, que resultam da no activao ou activao em grau excessivo dos mecanismos referidos. Ento, o que que o sistema imune inato faz? Providencia uma resposta imediata para isolar e destruir um patognio. O seu sistema de reconhecimento muito mais restrito do que o da imunidade adquirida, consistindo de PARRs que interagem com as PAMPs. O sistema imune adquirido tem diferentes caractersticas: tem um repertrio especfico e infinito, que foi desenvolvido at este ponto em que se pode tornar um problema uma variedade to grande pode compreender formas contra o prprio organismo, o que resulta em doenas autoimunes. H uma variedade de mecanismos efectores, basicamente serolgicos que incluem os anticorpos, mas tambm celulares, atravs da funo dos linfcitos T reguladores e citotxicos, mecanismos estes que, se no funcionarem correctamente, do origem a patologia. Em relao memria, o tpico

principal devido sua importncia para as vacinas. A memria algo chave no fabrico de vacinas pois aquilo que se pretende estimular uma memria imunitria protectora e duradoura. O que que acontece quando algo entra no organismo? O patognio entra e a primeira coisa a fazer tentar conter o patognio e evitar a sua disseminao - ocorre uma resposta inflamatria e h a predominncia das defesas inatas. Em poucos dias a resposta imune adquirida est formada, com foco na imunidade especfica, resolvendo a infeco. Ao longo de todo este processo, em algum local e de algum modo o patognio encontra um modo de contornar os mecanismos de defesa do hospedeiro. Quando o patognio entra, dentro de um minuto, os mecanismos da imunidade inata comeam a actuar atravs do complemento, dos anticorpos e factores antibacterianos. Pouco depois, j os fagcitos, etc, esto a actuar e depois leva cerca de 4 a 7 dias at se verificar a existncia de memria. Portanto, este primeiro perodo da resposta imune crtico.

Vacinas
As vacinas, sem a infeco, so o modo mais eficaz de controlar doenas infecciosas. O que se procura no futuro so modos de controlar o cancro, doenas autoimunes ou mesmo o controlo da populao (existe um contraceptivo feito na ndia na forma de vacina, que interfere com os espermatozides). Tm sido relacionadas com o aparecimento de resistncia a

antibiticos, frmacos e pesticidas, mas tm um lado positivo: estamos na era molecular, existem ferramentas muito poderosas com as quais trabalhar, o que tem levado a grandes sucessos mas tem grandes riscos e existem ainda necessidades por preencher. O problema das vacinas que tem de haver obrigatoriamente uma parceria entre o conhecimento acadmico, a indstria farmacutica e o governo. Em Portugal, todas as vacinas distribudas so importadas, pois estas 3 unidades no se coordenam. Como que se desenvolve uma vacina? A primeira coisa a saber se existe um mecanismo de proteco. Se existe, preciso definir os alvos do mecanismo de proteco e depois criar memria. necessrio que se estimule a resposta certa, evitando que se gerem consequncias patolgicas. Por outro lado, prefervel utilizar patognios mortos ou atenuados para reduzir o risco de doena. O problema disto como criar memria. No se entendem muitos mecanismos relacionados com o modo como que gera a memria imunitria.

Para alm disso, precisamos de uma resposta imunitria protectora que seja apropriada s caractersticas do patognio em questo.

Actualmente, as preocupaes na criao de vacinas consistem em que a vacina seja segura, eficiente, estvel e rentvel, de modo a que uma dose seja suficiente, e combine vrias vacinas. Tambm necessrio que as pessoas aceitem o tratamento e autorizem a que as crianas sejam vacinadas (em algumas religies, no o so).

H muitas vacinas, baseadas em diferentes mecanismos. Actualmente, h at a possibilidade de injectar DNA codificante de protenas. O DNA incuo, barato, evita o problema dos anticorpos da me, estimula todas as respostas imunes. Se expresso em clulas eucariticas, obtida a protena nativa na sua conformao original. Alm disso, pode adicionar-se vacina vrias sequncias de DNA e elementos que manipulem a resposta imune, como citocinas, para modelar a resposta Th1 ou Th2. E como est o mercado? No oramento da indstria farmacutica, a percentagem dedicada criao de vacinas muito reduzida. uma indstria dominada pelos E.U.A., estes tm os melhores centros de investigao no que diz respeito a vacinas. O paradoxo aqui que h um elevado risco de, uma vez criada uma vacina comercializvel, ela v eliminar o seu prprio mercado. Portanto, no h muito interesse na vacinao. De vez em quando h uma exploso, como com o aparecimento do bioterrorismo, que o novo alvo da vacinao, no qual se tem trabalhado muito. A vacinao um tema associado aos aspectos scio-culturais da populao, por exemplo, a esperana mdia de vida: Se viverem em Andorra, a prioridade na criao de vacinas ser contra o cancro por exemplo, pois a esperana mdia de vida elevada e essa das principais doenas observadas na populao como causa de morte. Se, por outro lado, viverem no Botswana, o importante ser criar vacinas contra as causas de morte mais frequentes, SIDA e outras infeces. J foi calculado pela OMS o nmero de mortes que pode ser prevenido pela vacinao: estima-se que em 2001 seria mais de 2 milhes. Em frica, a vacinao apenas atinge cerca de 50% das pessoas, se este nmero fosse aumentado, muitas seriam as mortes evitadas. Por outro lado, a vacinofobia: no acontece muito no nosso pas, mas, por exemplo nos E.U.A., em

1999, uma vacina foi retirada do mercado por provocar priso de ventre numa criana. Se tal se desse por exemplo no Botswana, provavelmente no aconteceria, no por ser apenas uma ou mais crianas, mas porque a sua necessidade maior, mais importante do que os seus efeitos adversos, e as pessoas continuariam a pedi-la. Este slide muito importante porque todas as vacinas actuais seguem os princpios de Pasteur: contm microorganismos inactivos, protenas, ou DNA que estimula a formao de clulas memria. As vacinas do futuro sero baseadas no conhecimento do genoma do patognio e na utilizao de novos adjuvantes e imunomoduladores com foco no sistema imune inato que sejam teis tanto para as vacinas protectoras convencionais (como para a malria) e novas vacinas teraputicas para o HIV, o cancro, a autoimunidade, a aceitao de enxertos, etc. Isto pode mudar o futuro. No que que consiste a imunoterapia? Temos as vacinas convencionais que induzem a memria e a proteco contra a infeco, normalmente aguda, mas existem outras. As vacinas teraputicas tm uma diferena chave em relao s anteriores: lida-se com o patognio uma vez, no se bloqueia totalmente a sua entrada no organismo. um desafio imunolgico muito diferente tentar destruir o patognio quando ele j entrou de evitar a sua entrada (vacina convencional). O que se precisa de fazer depois aumentar/mobilizar uma linha de aco da resposta imune, atravs de anticorpos, citocinas dirigidas actividade dos Th1 ou Th2, para tratar a doena e infeco crnica o problema de muitas infeces crnicas que no estimulam uma resposta imune eficaz, por isso que so crnicas, ajustam-se para persistir apesar de uma resposta imune fraca. As vacinas reguladoras controlam os mecanismos de regulao do sistema imune. Controlam a autoimunidade ou as falhas nos mecanismos de regulao do sistema imune. A transplantao um caso em que se pretende o contrrio do habitual, isto , que no seja reconhecido o enxerto como estranho ao organismo, tentando-se com a vacina interferir nos mecanismos de regulao com esse objectivo. Uma vacina nestes casos seria ptima pois o indivduo no teria de tomar imunosupressores para o resto da sua vida. Por outro lado, as vacinas tero de estar ajustadas ao grupo etrio. Em relao a doenas virais: H dois modos de estimular imunidade contra os vrus, utilizando o vrus enfraquecido ou impedido de se replicar. No primeiro caso, preciso preocuparmo-nos com a segurana, visto que h a possibilidade de causar patologia, com a capacidade de estimular imunidade protectora, dirigir a vacina para o local onde o vrus se encontra para estimular a resposta imune no local

certo e tambm, que a aco da vacina seja duradoura. Uma outra verso da vacinao contra vrus feita com mutantes incapazes de se replicar pois so knock-out para uma protena necessria a esse processo. Contudo, possuem os genes que so determinantes antignicos para gerao da imunidade e do proteco se a vacina for assim administrada. Se, depois se fizer complementao (transfeco do vrus com a protena para a qual este era knock-out), este volta a ter a capacidade de proliferar e infectar, mas se for transferido para o organismo que foi vacinado, como este j tem memria contra o vrus, no vai causar infeco. J foram referidas as vacinas teraputicas ser que uma vacina pode ser eficaz aps infeco? um problema importante, e o que est a preocupar as pessoas que trabalham na vacina contra o HIV. A imunidade gerada contra patognios que persistem ou que continuam a replicar-se diferente daquela que se gera quando o patognio entra no organismo. Portanto, uma vacina profiltica pode no funcionar aps infeco, pelo que necessria uma nova abordagem ultrapassar os mecanismos de evaso e diminuir a patologia. Este slide apresenta as provas que em teoria tornam possvel uma vacina contra o cancro: h evidncia de que h imunidade contra o cancro, por exemplo, h casos de remisso espontnea de tumores em indivduos imunocompetentes; h um aumento da incidncia de cancro em indivduos imunocomprometidos; em muitos casos possvel ver clulas imunes acumuladas em torno do tumor, isto provavelmente porque as clulas cancergenas, tal como uma bactria estranha ao organismo, expressam antignios novos, no do prprio. H mecanismos que o cancro usa para se evadir ao controlo do sistema imune. Como que as pessoas hoje em dia tentam criar vacinas contra o cancro? Tentam estimular a imunidade de vrios modos: pela formao de anticorpos induzindo uma resposta pelas antibody depedent citotoxic cells (ADCC); pela induo de apoptose; tentando aumentar a apresentao de antignio pelo tumor um indivduo com um tumor pode ser tratado se se obtiverem moncitos perifricos a partir de uma amostra de sangue, que em cultura, se diferenciam em clulas dendrticas. Depois de se obter uma biopsia do tumor, recolhem-se as protenas estranhas que este possui e coloca-se na cultura de clulas dendrticas. Estas vo captar o antignio das clulas tumorais e so de novo injectadas no indivduo, apresentando o antignio s devidas clulas T, o que aumenta a resposta imune contra as clulas cancergenas.

H uma srie de doenas infecciosas que so os maiores alvos da vacinao neste momento, na tentativa de as erradicar. So particularmente frequentes nos pases subdesenvolvidos. [patologias causadas por infeces ver slides da aula conhecimentos no obrigatrios]

possvel transpor a hiptese da higiene para este tema da vacinao e da terapia contra parasitas o contacto com estes parece fortalecer o sistema imunitrio, especialmente no que diz respeito resposta Th2. Se tivesse uma doena, por exemplo, IBD, sabese que a resposta imunitria a esta doena estimulada pelo contacto com ovos do parasita Trichuris suis, o que conduziu ideia de fazer uma terapia com parasitas este parasita inverte a resposta imune de Th1 para Th2. No uma verdadeira vacina que cria imunidade contra uma doena especfica, mas uma doena que indirectamente favorece os mecanismos de resposta IBD. No fundo, ainda estamos a fabricar vacinas do mesmo modo que Pasteur o fazia.

Se queremos melhorar as defesas do hospedeiro aps o encontro com o patognio, temos de melhorar os mecanismos que conseguem ser contornados pelo patognio, tornando-os mais eficazes o problema que apenas ele sabe como faz-lo. Se h algum mecanismo de proteco biolgica contra patognios, h tambm algum patognio em algum local de que algum modo sabe esquivar-se. Chamamos a estes genes que do essa capacidade ao vrus genes de evaso ao hospedeiro. So genes que, devidamente estudados e podem ter diversas aplicaes. So genes que evoluram ao longo de milhares e milhares de anos, fazendo dos vrus os melhores modelos de como escapar ao ataque do sistema imune. Do-nos novas perspectivas sobre a interaco patognio-hospedeiro e novas evidncias para explorar a biologia celular e as respostas imunes. Se tivermos um vrus e retirarmos do seu genoma estes genes que lhe permitem resistir resposta imune e persistir no organismo provocando doena, podemos criar um organismo atenuado que sirva como vacina. Para alm disso, como tem muitos recursos em termos de imunomodulao, podem ser usados para tratamento de cancro e em vacinas teraputicas. Por fim, se o vrus for devidamente manipulado, pode tambm constituir uma ferramenta til para terapia gnica. Como que se identificam? Pela homologia da sequncia, por exemplo, com citocinas ou receptores de citocinas, o que lgico pois estas esto relacionadas com a manipulao da resposta imune. Mas os vrus tm outras formas de manipulao da resposta imune que no tm obrigatoriamente uma correspondncia nas sequncias do nosso genoma. A nica forma que temos de os identificar clonando genes e aplicando-os em ensaios funcionais. Veja-se agora o quadro seguinte: J sabemos quais so muitas das protenas estruturais no vrus (So aquelas que se encontram na cpsula viral, cuja sequncia se encontra no genoma do vrus), quais so aquelas necessrias replicao viral, mas estas so poucas em proporo ao nmero de genes no genoma cuja funo se desconhece. Como os genes para a maior parte das protenas estruturais e enzimas so conhecidos, os restantes tero

evoludo para a manipulao do hospedeiro, particularmente em mecanismos de sinalizao s possvel identific-los em ensaios funcionais e tero inevitavelmente um impacto na patognese da infeco viral. O que se faz ento clonar estes genes e aplic-los em ensaios funcionais transfectam-se clulas e o que se verifica por exemplo a interferncia com o interfero, que muito importante na resposta infeco por vrus; a interferncia com o ciclo celular e a apoptose numa primeira fase, evitam-na (o que daria a oportunidade ao vrus de se replicar) mas mais tarde, o objectivo poder ser estimular a apoptose, de modo a libertar os vrus formados. Este slide ilustra de um modo simples a importncia da imunidade inata na fase aguda da infeco. Se esta no travada rapidamente, pode resultar em morte. Como que uma clula sinaliza que foi infectada por vrus ou por uma bactria? Atravs dos Pattern recognition receptors (PRRs). Uma vez que reconhece que est infectada, a clula pode libertar interfero e induzir a sua apoptose. Mas, como j se viu, o vrus tem a capacidade de modular a resposta do hospedeiro, portanto bvia a razo de se querer modular os Toll-like receptors (TLR): eles tm o papel principal na imunidade inata. E porqu modular a aco do interfero? No s dos primeiros mecanismos a ser posto em prtica numa infeco viral, mas crtico e essencial para a resposta imune pois induz imensos genes que inibem o crescimento celular e aumentam a susceptibilidade apoptose. A caracterstica chave deste sistema que quando um vrus entra numa clula, o interfero capaz de induzir nessa mesma clula um estado de anti-vrus e estimula a resposta adquirida, limitando a extenso da infeco.

Neste grfico observa-se o que acontece se for removida a resposta ao interfero em ratinhos em caso de infeco viral, a mortalidade extremamente elevada, demonstrando a a importncia deste sistema.

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Imunologia
16. Tolerncia e Auto-Imunidade
Resumo da aula terica: 17 de Abril de 2008
Objectivo compreender como o Sistema Imunitrio distingue as clulas do corpo em relao quilo que estranho.

O SI evoluiu ao longo de muitos milhares de anos para defender o nosso organismo de infeces (vrus, bactrias, parasitas). Porm, estes organismos tambm desenvolveram estratgias para escapar ao SI. Da que o SI possua mecanismos complementares para destruir os organismos, podendo ser muito agressivo (provocar dano e morte celular). Facilmente se compreende que deve ter sido uma grande vantagem em termos de seleco natural, no ser capaz de controlar estas respostas (de modo a evitar o dano ao organismo). Por essa razo, o SI desenvolveu um sistema eficaz para distinguir o que faz parte do organismo daquilo que estranho ao organismo, protegendo (no atacando) as clulas prprias, mas atacando violentamente o que estranho. Actualmente, verifica-se um decrscimo acentuado de infeces, sobretudo no mundo
Nota: At meados do sc. XX, o principal objectivo da Imunologia era controlar doenas que eram causadas por microorganismos, desenvolvendo estratgias para tornar o SI imune a essas infeces assim se desenvolveram muitas vacinas.

Ocidental (melhor higiene, cuidados sanitrios, vacinas); ao mesmo tempo que ocorria esta diminuio, havia um predomnio da preocupao sobre o SI como a fonte da doena em si:

resposta imunitria desadequada a um antignio partes do organismo atacadas e destrudas pelo SI produz tolerncia, inibindo o SI ou o frmaco relacionada com a rejeio do rgo pelo SI

A grande questo saber como contornar estes problemas, quando o SI tem que ser tolerante ao antignio ou a tecidos do prprio organismo.

Conhece-se muito sobre as clulas, genes e molculas do SI, mas falta integrar este conhecimento, percebendo como comunicam as clulas entre si, de modo a eliminar a tolerncia. A autoimunidade e a tolerncia no parecem ser propriedades de clulas, mas sim do comportamento e interaco entre si num organismo.

Como que as doenas auto-imunes aparecem? Evitam a auto-imunidade

Auto-imunidade

1 - Como estes antignios (e os tecidos que os possuem) no so eliminados pelo SI, existe uma tendncia crnica destas doenas (resposta

imunitria persistente), ao contrrio do que acontece numa infeco viral (e.g. gripe).

2 - Existem tantas doenas auto-imunes (tantos mecanismos diferentes), que existe praticamente um exemplo por cada mecanismo efector do SI.

Exemplos: - doena pode ser causada por (auto-)anticorpos (produo estimulada por Th2), como o caso da miastenia gravis. Estes so especficos para o receptor de Ach, inibindo a contraco muscular, levando a atonia; - clulas Th1 e macrfagos (estimulados por Th1) podem tambm levar destruio de tecidos (e.g. artrite reumatide).

- clulas T citotxicas CD8+ (CTL) que destroem tecidos como as clulas beta dos ilhus de Langerhan, levando a diabetes mellitus auto-imune.

- Mecanismo de Aco:
Bastante semelhante s condies normais, mas a diferena reside na inactivao dos mecanismos reguladores.

1) Activao das clulas T citotxicas (diabetes). As clulas CD8 vo-se activar em clulas citotxicas, sendo necessrio (1) reconhecimento de antignio e (2) co-estimulao (dependente da interaco de uma clula CD4 delta que estimula as clulas DC a produzir os co-estimuladores que estimulam a CD28 da CD8). Apesar do mecanismo efector final estar dependente de CD8, vai tambm estar dependente de CD4 . Este o mesmo mecanismo da resposta viral, mas neste caso contra o prprio organismo (a insulina, em particular). 2) Activao das clulas T auxiliares Mecanismo semelhante ao anterior, com

envolvimento de MHC II e das clulas CD4. Nestas activaes possvel constatar o papel das clulas dendrticas na auto-imunidade, podendo ser alvo de investigao e tratamento Exemplo: CTLA-4 usado no tratamento da artrite reumatide, liga-se com maior afinidade a B7 do que CD28, bloquando a activao das clulas T. 3) Activao das clulas naive estmulo tctil activa as clulas naive que vo migrar para os tecidos perifricos, sendo co-estimuladas por clulas DC, produzindo CTL que mata a clulaalvo.

Esta migrao celular est dependente de quimioquinas, havendo tentativas teraputicas de

bloqueio destas para que no ocorra a migrao celular para os tecidos perifricos.

4) DCs precisam de ser licenciadas para activar clulas CD8 as clulas DC precisam de ser activadas pelas clulas CD4 atravs de CD40 para que possam co-estimular as clulas CD8.

Tolerncia
O que provoca problemas so os mecanismos que evitam a leso (a auto-imunidade): a tolerncia. - Consiste numa ausncia de resposta imune; - modulada por factores ambientais regulam o estado de tolerncia.

Existem vrias hipteses/modelos (apresentadas por ordem cronolgica) que procuram explicar o fenmeno de tolerncia (muitas no consensuais):

Eliminao clonal ; Ignorncia perigo/danger; Previlgio; Anergia; Immune deviation; Clulas T reguladoras.

1) Eliminao Clonal: Linfcitos so formados no timo. H uma seleco positiva e uma seleco negativa. Os clones que reconhecem antignios do prprio so apresentados no timo e so eliminados, pelo que s saem do timo linfcitos T que no reconhecem antignios do prprio. Mas todos ns temos clulas na periferia que reagem a antignios prprios (no h 100% de eficcia).

Esta teoria tambm pode ser denominada de tolerncia recessiva, uma vez que atingida no por mecanismo regulador, mas por mecanismo de eliminao de todas as clulas no timo que podem causar auto-imunidade. Logo, se injectssemos clulas que fossem capazes de reconhecer os nossos rgos, o SI nada faria para o impedir da a teoria ser recessiva. Isto iria requerer uma eficincia absoluta na eliminao dos linfcitos agressivos pois no haveria outro mecanismo de evitar a auto-imunidade.

2.1) Ignorncia imune Immune Ignorance: A tolerncia decorrente da

ignorncia imune. Existem em ns clulas que so capazes de destruir as clulas beta do pncreas, mas no havendo nenhuma

inflamao, estas clulas no vo ser activadas e vo ignorar as clulas beta (no migram nem destroem estas clulas). Logo: Situao normal no h aproximao, migrao ou activao das clulas CD8. Infeco os antignios do indivduo vo ser apresentados ao mesmo tempo que os antignios do tecido que est a ser infectado e constata-se migrao para o pncreas, onde as CD8 iro provocar doena. A observao suporta este argumento: muitas doenas autoimunes surgem como consequncia de infeces.

2.2) Perigo - Danger: Existe um outro modelo parecido ao anterior que diz que no tanto uma questo de ignorncia (pois as clulas CD8 sabem que existem essas clulas-alvo, dado que existem os antignios e h interaco), mas se existir danger (substncia como o LPS, produzida por microorganismo que causa infeco) h activao das clulas, devido coestimulao.

3) Imunoprivilgio: Hipteses anteriores no explicam como que em algumas situaes, mesmo com infeco, no existe uma queda da tolerncia.

O imunoprivilgio procura explicar como existe preveno da resposta auto-imune em locais especiais. Esses mecanismos dependem de vrios factores: 1 existncia de barreiras nos capilares que vascularizam esses locais SNC, olho, testculos e placenta. - O feto possui metade das molculas MHC de origem materna e metade de origem paterna. Se transplantar um rgo da criana para a me, o rgo rejeitado, mas o feto no rejeitado, pois a placenta cria um ambiente que privilegiado em termos de respostas imunes. A placenta tambm possui uma enzima que degrada o triptofano, o qual essencial para que os linfcitos T se dividam. Sem triptofano, mais complicado desenvolver respostas imunes na placenta. Inibidores dessa enzima levam a aborto. Se os progenitores do feto forem geneticamente iguais entre si, mesmo com inibidores da enzima constata-se que no ocorre aborto do feto. - Temos tambm a cmara anterior do olho. Se h uma infeco no humor aquoso, h perda de viso, pelo que h mecanismos que previnem infeces do olho. Se ocorrer traumatismo do globo ocular, vai haver inflamao e migrao de antignios que so transportados do olho para os gnglios linfticos que drenam o olho, onde vai haver activao de linfcitos T que migram para ambos os olhos, causando inflamao. Pelo que o privilgio por si s no evita a auto-imunidade, embora contribua para tal.

2 Existncia de citocinas com funo anti-inflamatria que evitam resposta em determinados locais. Como o caso do TGF, que interage com o ligando Fas (Fas-L),. As clulas TCD4 activadas passam a expressar Fas-L, que interage com o Fas levando morte por apoptose da clula B anrgica. Portanto, o Fas-L faz com que as clulas B activadas nestes

locais morram em vez de serem capazes de destruir o tecido-alvo. O Fas-L sem TGF atrai neutrfilos.

4) Anergia: Activao sem co-estimulao resulta em anergia/tolerncia. Uma clula T para ser activada necessita no s de reconhecer o antignio, mas tambm de co-estimulao. S as DC que podem providenciar esta co-estimulao e activar clulas pirmide. Se uma clula T interage com um tecido antes de interagir com uma DC, pode reconhecer um antignio no tecido, mas na ausncia de co-estimulao. O que acontece que a clula no activada. Se interagir com uma DC primeiro activada normalmente.
Nota: A partir deste ponto a bibliografia utilizada ser o captulo de auto-imunidade do Janeway (dado esta matria no existir no Parham), complementando cada slide da aula.

Para

ocorrer

diferenciao da clula T naive, necessrio uma clula que d tanto o sinal antignio-especfico como o sinal cosendo

estimulatrio,

crucial na preveno de respostas auto-imunes. Na linha superior, temos uma clula T que reconhece um pptido viral na superfcie de uma DC, ocorrendo activao,

co-activao, proliferao e diferenciao numa clula efectora capaz de eliminar qualquer clula infectada pelo mesmo vrus. Contudo, as clulas T naive que reconhecem antignios (prprios) em clulas que no conseguem fornecer o sinal co-estimulatrio, ficam anrgicas no se diferenciam em clula efectora e no podem ser estimuladas ulteriormente por uma DC que apresente o mesmo antignio. 5) Immune Deviation: O termo immune deviation utilizado para descrever a polarizao da resposta imune (atravs da injeco de um antignio) numa resposta

dominada por Th1 ou por Th2. um mecanismo de tolerncia que envolve a interaco ente clulas T e mostra a existncia de uma relao inversa entre a imunidade humoral e a imunidade mediada por clulas, ou seja, a immune deviation (mostrando o paradigma Th1/Th2).

Outro mecanismo de controlo da resposta imune ser a manipulao do balano de citocinas que determina se uma resposta de clulas T CD4 predominantemente Th1 ou Th2. possvel transitar entre estas respostas, de Th1 para Th2, atravs da

administrao de IL-4, e de Th2 para Th1 atravs da administrao de IFN- ou seja, existe aqui o conceito de immune deviation. Deste modo, a modulao do padro de expresso de citocinas pelos linfcitos T pode inibir a doena auto-imune.

A tolerncia depende de: a) ausncia de resposta de clulas T b) presena de resposta de clulas T: - Mantm a tolerncia atravs da secreo de citocinas que suprimem o desenvolvimento de uma resposta inflamatria agressiva mediada por clulas T. O controlo da expresso desta citocinas pelos linfcitos T (modulao imune) pode ser um alvo de teraputica.

- Existem 2 tipos de linfcitos T CD4:

Th1 secretam IFN- Th2 secretam IL-4, IL-5, IL-10 e TGF

- Muitos casos de doena auto-imune esto associados com a activao das clulas Th1, que por sua vez activam macrfagos e levam a cabo a resposta imune. Na EAE, encefalomielite alrgica experimental, a activao relativa dos subgrupos Th1 e Th2 pode ser manipulada.

A EAE geralmente causada por clulas Th1 que produzem IFN- como resposta protena bsica da mielina, mas no produzem TGF. Se alimentarmos ratinhos com esta protena, encontramos clulas CD4 no crebro que produzem citocinas como TGF e IL-4, mas j no produzem o IFN-. O TGF, dos Th2, suprime, ento, a aco dos linfcitos inflamatrios Th1. Tambm podemos dizer que neste caso a proteco especfica para o tecido e no especfica para o antignio. Contudo, existem evidncias de que as clulas Th2 tambm esto envolvidas na patologia destas doenas.

6) Clulas T reguladoras: A tolerncia dominante pode ser

demonstrada atravs de modelos de tolerncia e pode afectar o decurso da resposta auto-imune. Em alguns modelos de tolerncia, possvel demonstrar que clulas T especficas, suprimem activamente as aces de outras clulas T que possam causar dano tecidual (como o caso acima). A tolerncia nestes casos dominante no facto de poder ser transferida por clulas T, que so designadas por clulas T reguladoras. Por outras palavras, se transplantarmos clulas T reguladoras supressoras para um

indivduo, conseguimos obter resposta, pelo que so dominantes. A depleco das clulas supressoras agrava a doena e os seus mecanismos de aco so controversos. Ratos recm-nascidos podem tolerar enxertos de pele alognicos, atravs da injeco prvia medula ssea alognica. um tipo de tolerncia altamente

especfica e que pode ser transferida para os ratos. Logo, a tolerncia neste modelo dominante e activa, pois as clulas transferidas previnem os linfcitos do rato recipiente rejeitarem o enxerto.

Atente-se ainda no seguinte estudo:

Resumo do artigo: - Indivduos humanos que expressem uma forma deficiente do factor de transcrio AIRE (regulador auto-imune), desenvolvem uma doena auto-imune em vrios rgos. - Ratos AIRE -/- permitiram mostrar que este factor de transcrio regula a autoimunidade atravs da promoo da expresso ectpica de antignios perifricos restritos a tecidos especficos em clulas do estroma medular tmico. - Estes mutantes exibiram um perfil de doenas auto-imunes dependentes da ausncia de AIRE nas clulas do estroma tmico. - Epitlio tmico medular AIRE -/- mostrou uma reduo especfica na transcrio ectpica de genes que codificam antignios perifricos. Estas descobertas demonstram a importncia da tolerncia tmica no controlo da auto-imunidade

Consideraes finais:

Clulas autoreactivas: Existem clulas T e B autoreactivas em pessoas saudveis As clulas autoreactivas esto naturalmente activadas Autoreactividade fisiolgica essencial para prevenir autoimunidade Autoimunidade pode resultar da insuficincia de clulas reguladoras E no da presena ou activao anormal de clulas agressivas autoreactivas

Por fim, podemos ter um modelo isolado A, em que as diferentes teorias explicam cada comportamento de modo isolado, ou um modelo integrado B, em que existe interdependncia destes mecanismos:

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Imunologia
17. Imunodeficincias Secundrias
Resumo da aula terica: 22 de Abril de 2008

Classificao das Imunodeficincias

A aula de hoje sobre imunodeficincias secundrias. Como vocs j sabem, as imunodeficincias dividem-se em imunodeficincias primrias (doenas raras, geralmente congnitas) e secundrias (a maioria, todas adquiridas).

Imunodeficincias Secundrias
Ao contrrio das imunodeficincias primrias, as secundrias envolvem geralmente vrios componentes do sistema imunitrio, condicionados por factores extrnsecos ao sistema imunitrio. Devemos ter presente a fisiologia normal do sistema imunitrio, em especial o impacto da idade: por exemplo, as imunoglobulinas do recm-nascido provm quase todas da me. Por outro lado, vamos falar da senescncia (envelhecimento) do sistema imunitrio [ver tpicos no slide].

Imunodeficincias: principais causas

Se vos perguntasse qual a imunodeficincia secundria mais frequente, certamente todos pensariam na infeco pelo HIV. No entanto, importante ter em conta que

a principal causa de imunodeficincia secundria a m nutrio prteo-calrica. Em segundo lugar vm as infeces, com o HIV cabea.

Imunodeficincia associada infeco VIH

Hoje no vamos abordar os mltiplos mecanismos que podem gerar imunodeficincia secundria (tm a ver com a fisiologia normal do S. I.), pelo que vamos falar sobretudo da infeco associada ao VIH. E isto por vrias razes: em primeiro lugar, pela elevada prevalncia desta doena, nomeadamente em frica, e pelo nmero de mortes que lhe esto associados. A infeco em Portugal tem seguido o curso dos outros pases europeus. De acordo com este estudo de 2004, Portugal mesmo o pas estudado em que a incidncia do VIH maior. Vrus da imunodeficincia humana O HIV um vrus e-Gram (?), um retrovrus porque tem uma enzima (transcriptase reversa) que vai gerar o seu DNA e este introduz-se nas clulas do hospedeiro. Depois tem um envelope que inclui a glicoprotena gp120 que vai permitir a sua interaco com os receptores na clula do hospedeiro. As principais clulas-alvo do HIV so os linfcitos T CD4, mas como os moncitos tambm expressam CD4, essas clulas tambm so infectadas pelo HIV.

Co-receptores Os co-receptores que facilitam a infeco das clulas so da famlia dos receptores das quimiocinas: CXCR4 (ou X4, tem como ligando a quimiocina SDF-1) CCR5 (ou R5, ligandos: RANTES; MIP-1; MIP-1). Essas quimiocinas podem tentar bloquear o receptor que o vrus usa para entrar. Sabe-se que h vrus que usam X4 e outros que usam R5. O CXCR4 expresso constitutivamente por quase todos os linfcitos. Em contrapartida, o CCR5 s expresso por linfcitos T activados. Como os vrus X4 s so capazes de estabelecer uma infeco quando j h um enfraquecimento do sistema imunitrio, a maioria das infeces agudas so por CCR5. Patognese: O vrus geralmente transmitido atravs das mucosas, como no caso dos contactos sexuais. Como em qualquer outra infeco, o vrus transportado at aos gnglios regionais, atravs das clulas dendrticas. Quando chegam aos gnglios, as clulas dendrticas vo apresentar o vrus a linfcitos T CD4 activados que expressam CCR5. Por isso, estas (T CD4) vo ser as clulas preferenciais para o vrus infectar, multiplicar e disseminar.

Resposta citotxica Em paralelo com essa disseminao ideal, vo ser desencadeadas as respostas para controlar essa infeco; como estamos a falar de organismos pluricelulares, as principais respostas efectoras so mediadas pelos linfcitos T CD 8 (citotxicos), que vo provocar a lise das clulas afectadas.

Sendo assim, vai haver esta expanso macia de linfcitos T CD8 especficos para o vrus que vo, por um lado, provocar a lise das clulas que exprimem protenas virais de superfcie (principalmente linfcitos T CD4), e por outro lado produzir uma grande quantidade de citocinas que suprimem a replicao viral, bem como as tais quimiocinas que bloqueiam os receptores que o vrus usa para entrar. Atravs destes dois mecanismos vai diminuir a virmia (quantidade de vrus que est em circulao), portanto vai controlar a replicao viral. Por outro lado, as citoninas de replicao viral no impedem a formao de um pool de clulas infectadas pelo vrus de forma latente; ou seja, o vrus ficou integrado no genoma das clulas, mas como no est a ser expresso, a clula no reconhecida pelos CD8. Este pool de clulas vo ter um papel importante na patognese da doena. Resposta humoral Paralelamente resposta dos CD, h obviamente uma resposta humoral, com a produo de anticorpos de acordo com os processos que aprenderam. Por estes mltiplos mecanismos, os anticorpos vo tambm controlar a virmia. Por outro lado, vo fazer imunocomplexos com o vrus, eu vo impedir que o vrus esteja em circulao. Estes dois mecanismos levam a uma diminuio da virmia. Este slide paradigmtico da evoluo do vrus se no houver teraputica. Temos uma fase aguda, em que o vrus entrou no organismo e atinge uma grande quantidade em circulao. Depois, devido resposta do sistema imunitrio, temse uma diminuio da virmia. O ponto da seroconverso, o momento a partir do qual possvel diagnosticar a infeco pelo HIV pela concentrao de anticorpos anti-HIV circulantes. Actualmente, j possvel determinar a presena do vrus por outros mtodos. Como se

v, a descida da virmia ocorre mesmo antes da seroconverso. Isto mostra que o papel das clulas CD8 mais importante do que as clulas B para controlar a infeco. No entanto, no volta aos nveis anteriores. Depois h um perodo (fase crnica) de durao varivel, que no tem manifestaes clnicas. Finalmente, a partir de determinada altura (SIDA), o nvel de CD4 baixa muito, o que favorece o surgimento de infeces oportunistas (infeco que no ocorre em indivduos imunocompetentes).

Causas da depleo progressiva de linfcitos T CD4+ associada infeco VIH? Este estudo mostra que os indivduos com a virmia mais alta tm a probabilidade mais alta de morrer (pois). Assim, os dois principais factores determinantes da evoluo da doena so a virmia e o nvel de linfcitos T CD4, embora ainda no se tenha conseguido determinar o contributo relativo de cada um. O vrus infecta clulas que exprimem CD4 (a maioria delas, R5), e por aco da transcriptase reversa produz o seu prprio DNA que integrado no genoma da clula. Depois, a transcrio do genoma viral activada, e d-se a produo das protenas virais.

Como muitos destes componentes so txicos para a clula, durante muito tempo pensou-se que a causa da diminuio dos linfcitos T CD4 era devida sua destruio causada pelo vrus. Com a aplicao da terapia HAART, verificou-se que a descida da virmia estava associada ao aumento de linfcitos T CD4, o que corroborava esta hiptese. Portanto, pensou-se que se se conseguisse inibir o vrus, o CD4 recuperava.

Segundo esta hiptese, ao fim de dois anos conseguia-se erradicar o vrus.

No entanto, esta hiptese foi logo alvo de muitas crticas. Uma delas era que o nmero de clulas infectadas era demasiado baixo. Outra era que os hospedeiros naturais do SIV (vrus da imunodeficincia smia) tinham uma tinham uma virmia muito elevada, mas no apresentavam diminuio de CD4. Finalmente, estes modelos no tinham em conta o papel geral da activao crnica do sistema imunitrio. Quando se teve em conta a activao geral do sistema imunitrio viu-se que em paralelo com a descida da

virmia havia tambm uma descida na activao dos linfcitos. Isto tem importncia porque vrias etapas do ciclo de vida do vrus dependem da activao da clula, como os factores de transcrio celular, como o NFkB. Muitos destes factores induzem uma activao macia dos linfcitos. Portanto, se pensarmos em termos da dinmica das populaes linfocitrias, a maioria das respostas imunitrias tem que ser controlada; assim, quando se monta uma resposta secundria, a maioria das clulas activadas devem sofrerem apoptose. Ora, como o vrus infecta principalmente as clulas da resposta primria ou secundria, e como estas deveriam morrer na maior parte por apoptose, as clulas mortas pelo vrus no devem ser a principal causa para o nmero total de linfcitos diminudo. mais ou menos consensual que a diminuio das clulas CD4 comea com a actuao do vrus a vrios nveis, no s porque destri as clulas imunitrias, mas tambm porque compromete os principais locais de homeostasia dos linfcitos T, nomeadamente o gnglio linftico, o timo e a medula ssea. Assim: - h uma inibio da linfopoiese a estes nveis; - d-se uma activao macia do S. I. (que serve de substrato replicao do vrus). A progresso do HIV um processo multifactorial que envolve a hiperactivao crnica do sistema imunitrio

O que acontece na Infeco aguda? O vrus de RNA, que tem a sua transcriptase reversa. Esta enzima comete imensos erros, pelo que com a presso selectiva do S. I. (ou seja, os CTL), os vrus tm tendncia a sofrer mutaes. Assim, v-se pelo grfico, que quando a presso selectiva reduzida, o vrus no tem tendncia a apresentar muitas mutaes; quando a presso selectiva muito elevada, tambm no porque os vrus no se conseguem replicar. No entanto, para uma resposta intermdia, a presso selectiva propcia a que o vrus sofra elevadas mutaes (escape viral). Por outro lado, pode ter-se em conta o papel dos linfcitos T reguladores, que regulam a actividade dos outros linfcitos.

Exposed uninfected subjects Ser possvel encontrar uma imunidade protectora contra o HIV-1? muito difcil devido elevadssima taxa de mutao do vrus.

Long-term non-progressors Outra rea diz respeito aos indivduos nos quais a SIDA progride muito lentamente. Isto pode dever-se a vrios factores. Por exemplo, a mutao no receptor CCR5 faz com que ele no seja expresso adequadamente

nas clulas. Assim, o vrus progride muito mais lentamente para SIDA. Etc

HAART and immune reconstitution Outra rea a reconstituio imunolgica aps teraputica anti-retroviral. Esta teraputica teve uma grande importncia no controlo da doena. A subida dos CD4 nos primeiros momentos aps HAART deve-se essencialmente redistribuio das clulas: as clulas de memria retidas nos gnglios so libertadas na circulao. Alm disso, d-se uma diminuio da sua apoptose. Depois, h um aumento funcional destas clulas, que passam a ser capazes de proliferar. Assim, a esperana que depois os linfcitos T possam ser produzidos no timo. No entanto, esta teraputica no pode ser interrompida, seno os nveis do vrus voltam aos valores anteriores; por isso, conclui-se que o vrus fica retido em reservatrios virais. Uma possvel abordagem teraputica seria fazer interrupes peridicas da teraputica anti-retroviral, para que o organismo, nesse perodo, pudesse combater o vrus, como se fosse uma vacina endgena.

HIV2 infection - An attenuated HIV disease O HIV2 um virus que tem baixos nveis de circulao, progride lentamente para SIDA e tem um impacto reduzido na mortalidade mesmo na ausncia de tratamento. Assim, pode dar pistas acerca de qual a

melhor resposta protectora em relao ao HIV-1.

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Imunologia
18. Homeostasia e inter-relao
Resumo da aula terica: 29 de Abril de 2008

Reconhecimento do prprio organismo

O problema de hoje em dia da imunologia, particularmente na introduco da medicina molecular, que o seu progresso foi agendando a anlise molecular dos seus componentes, genes, molculas, clulas. No entanto, esquecemos de ver o organismo inteiro. Quais so a propriedades do sistema que tem uma massa molecular singular e no sao explicadas pelas molculas e clulas e pela sua organizao dinmica? O sistema imunitrio tem um domnio de reconhecimento molecular, dominio das formas moleculares que consegue reconhecer estruturalmente, que universal, e dentro do corpo tem acesso a tudo: face das molculas que esto dispostas ao solvente surface das molculas Aos receptores de anticorpos que se ligam a clulas surface e ao interior das molculas clulas partem molculas e protenas em pedacinhos junto com o MHC expostos superficie. Portanto, o sistema tambm tem acesso parte de dentro da clula.

O sistema tem uma estratgia evolutiva para termos um mecanismo de reconhecimento e defesa da variabilidade gentica dos micrbios. A especificidade do reconhecimento a base da memria ex: ganhamos imunidade ao sarampo reconhece antignios microbiticos introduzidos por seres vivos que se reproduzem e que so estranhos ao organismo. H uma enorme potencialidade de variabilidade de genes, logo isto s podia funcionar numa estratgia que reconhecesse tudo. Porque seno os micrbios e vrus rapidamente descobriam qual a falha do sistema. Esta estratgia exige a transferncia dos princpios bsicos da evoluo, variao e seleco, do tempo germinal para o somtico. Duas clulas x acabam de se dividir da clula me e no tm a mesma molcula de ADN. Somos todos diferentes uns dos outros.

Reportrio Imunolgico
O facto do reportrio imunolgico das regies variveis dos anticorpos e receptores das clulas T ser completo tem consequncias na evoluo e na fisiologia do sistema. Nomeadamente, como o domnio de identificao molecular completo ele inclui obviamente estruturas no infecciosas consequncias: alguns so alrgicos aos camares por exemplo, outros de ns temos doenas autoimunes (10%). Do ponto vista do reconhecimento, o corpo est includo no domnio de reconhecimento do sistema. As primeiras coisas que a evoluo teve de fazer foi desenvolver mecanismos de aquisio de tolerncia ao corpo coexistncia pacfica. Como consequncia, durante muitos anos a imunologia teve cortada do resto do corpo. Pensava-se que a tolerncia era por ignorncia, que o sistema imune no reconhecia nada no corpo - ideia avanada no princpio do sc. XX e abandonada hoje em dia. Muitos livros ainda tm essa ideia como fundamental e est errada. A tolerncia s se consegue por educao e por conhecimento com o reconhecimento dos seus componentes moleculares. Outro grande problema se de repente os vertebrados tm um sistema imune que reconhece todas as formas moleculares incluindo as do prprio organismo e o sistema tem uma flexibilidade dinmica enorme, pode amplificar a multiplicao de anticorpos - 1 milho de vezes numa semana. Ento tm um sistema para funcionar de maneira a modular todos os outros sistemas do organismo. Por exemplo, a hipertenso essencial que se deve produo aumentada da renina - pode ser corrigida experimentalmente aumentando um pouco o nvel de anticorpos. De repente a evoluo deu aos vertebrados um sistema geral de homeostasia que percebemos mal e at onde chega. Sabe-se que alguns anticorpos que ns fazemos contra antignios do pneumococos so uns que reagem muito bem com LDLs oxidadas. Ou seja quem for infectado pelo pneumococos fica mais resistente aterosclerose - doena grande do futuro. Manipular o sistema, melhorar clnica, controlar os outros sistemas do organismo. J falmos das consequncias desta estratgia evolutiva de inventar clulas e linfcitos que produzem protenas de novo, que destroem informao da germline, que sintetizam ADN sem template, que inventam sequncias e proteinas novas; essa estratgia implica mecanismos de funcionamento que so readout da estratgia inicial. Do ponto vista das estratgias celulares o mais importante era que as clulas tivessem em repouso porque s assim que se explica a vantagem evolutiva de cada linfcito s fazer uma regio varivel. Mas tambm no vale a pena que as clulas fiquem em repouso, por isso a evoluo inventou a activation dependece amplification.

Nmero de linfcitos constante

A estrategia do orgo no sistema fixar o nmero de linfocitos mas apesar disso continuar a produzir linfocitos o tempo todo 1 milhao clulas B produzidas por segundo estratgia do sistema continuar a produzir linfcitos para o resto da vida. Destas s algumas vo ser aceites no sistema e para uma ser aceite tem outra de ser eliminada que j la esteja. Por cada clula para a qual se faz uma positive selection, para que essa clula seja isso, outra tem de ser negative selected. Positive and negative selection - duas faces da mesma moeda selectiva. A vantagem disto poder-se fazer turn over portanto o organismo que acaba de inventar um milho de linfcitos no ltimo segundo pode test-los. a diferena entre o 1012 e o 1015. O 1012 o que pode se expressar de diversidade, 1015 o que pode se fazer de diversidade. Estratgia que permite que expressemos no s 1012 mas muitos 1012 consecutivos, em cada momento da vida. A seleco de cada um dos repertrios que cada um de ns tem neste momento faz-se a dois nveis: o total de 1015 o repertrio que se chama potencial nmero de variaveis que conseguimos fazer. Destes vai emergindo dos orgos primrios um reportrio disponvel, as clulas que so aceites no repertrio disponvel so as que usam a regio variavel ou seja o linfcito para ser linfocito maduro e se diferenciar tem de usar as suas regies variaveis. Os linfocitos s so feitos e s sobrevivem se tiverem regies variaveis que estejam a ser utilizadas. Portanto muito fcil saber se o linfocito que acaba de ser produzido vai integrar o pool de linfocitos ou nao: porque se nao utilizar a regio variavel morre. A seleco do potencial faz-se ento por diferential apoptom. Temos ento o reportorio disponvel configurado e daqui que os antigenios vo comear a seleccionar por activaao e amplificao o reportorio actual: as que esto activadas normalmente, as que esto a ser utilizadas agora, as que fazem as imunoglobulinas do soro, as que fazem as clulas reactivadas que andam pelo nosso corpo a ajudar este o reportrio actual. Como o que o sistema sabe que uma regio varivel de um linfocito novo vai integrar ou no o reportorio disponvel? Para integrar novos temos de eliminar os que j l esto mas como isto feito no sabemos. O nmero de linfcitos deve ser fixado no organismo, apesar da seleco contnua destes, ao longo da evoluo de alguma maneira o nmero de linfcitos tem de ser contado. No sabemos como. No sabemos porque que a tartaruga nasce para ter 300 anos e a mosca menos e ns cerca de 70. Como se contam os neurnios? a mesma complicao. No entanto, sabemos que muito mais que da cabea no expandem. Temos as amgdalas e o bao que podem ficar enormes. No questo de espao com os linfcitos. Se pegarem no fgado de um indivduo, cortarem-lhe um pedao, a outra metade cresce outra vez para refazer o que falta - capacidade regenerativa do fgado - e sabe quando que deve parar. A maneira como se conta deve estar relacionada com a anlise da capacidade do nosso organismo para os linfcitos e no s.

Propriedades emergentes do sistema

Propriedades emergentes propriedades cuja explicao no pode ser reduzida a cada um dos componentes. Emerge da organizao do sistema e no atribuida a cada um dos componentes. Ex: mquina que tem conexes entre as reas d entrada e de sada. Estas mquinas podem aprender. Supondo por exemplo uma mquina que fala. Quando se ensina a mquina a ler chegamos ao fim e depois de vrias tentativas de aprendizagem, a mquina l Shakespeare! Moral da histria: se formos a mquina e formos estudar a mquina que j sabe e a que no aprendeu, os seus parmetros so idnticos, no h diferena nenhuma. A nica grande diferena o peso das conexes entre as clulas que se interligam umas s outras. Na mquina que j aprendeu, umas desparecem, outras so reforadas em relao mquina que no sabe nada. Mudou a organizao das clulas e no as clulas em si. Com uma mquina simples, pode se dar problemas mquina at que ela aprenda. Problemas em sries de (1)s e (0s). A mquina ir reproduzir aquilo de certa forma. Analisando o grfico (slide) percentagem de respostas certas nas tentativas de um exame que se fazia mquina. Ao princpio no acerta uma, a partir dos 400 ciclos de aprendizagem j chega aos 75% e depois no falha uma. O que a mquina aprendeu, sabe ler agora, onde est essa sabedoria? No est nas clulas, mas sim na organizao das conexes destas. Uma mquina que aprende, uma propriedade emergente do sistema. No dos seus componentes. Se formos analisar os componentes vamos verificar que os sistemas tm propriedades que ultrapassam as propriedades dos seus componentes. Ns no somos sacos de molculas. Se fossemos, j h muito que tinhamos conseguido inventar a vida de novo. No conseguimos, como sabemos. Alm das molculas que temos, temos a organizao histrica dessas moleculas, sendo que vida h s uma. Se pusermos todas as molculas E.coli num tubo de ensaio no teremos uma E.coli viva. Muitos dos casos que vo tratar na clnica no depende das clulas s vezes, mas de muito mais para alm disso. Estamos longe de perceber isto, no sabemos ainda responder, mas sabemos que importante.

Transmisso de anticorpos progenia

O sistema imune um sistema individualizado que se diferencia progressivamente e vai se constituindo medida que existimos, dentro de cada um de ns, acompanhando a evoluo. um sistema revolucionrio que transfere de cada um de ns os principios evolutivos da seleco aos progenitores. A evoluo faz-se por transferncia de caracteres adquiridos. A mulher transimite sua progenia a aprendizagem que fez. Uma me no aleitamento transmite ao filho os seus anticorpos e por exemplo, a experincia que tem do ambiente onde a crianca est a nascer. A crianca quando nasce, j nasce com os anticorpos que a me produziu por ela mesma. O sistema imune comea com o antignio x da me, e mesmo que a criana tivesse o seu destino traado para fazer o seu prprio ensinamento imunidade contra o antignio x - os anticorpos que a me passa ao filho vo influenciar como a crianca vai desenvolver os seus prprios anticorpos (recursividade). E assim se determina a evoluo das prximas geraes. Pergunta: Os anticorpos transmitidos no duram s 6 meses? Sim, mas influenciam como o sistema imune da criana se vai desenvolver. H uma rede de interaces a este nvel que tem em conta todos estes factores.

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Imunologia
19. Transplantao e Alergia
Resumo da aula terica: 06 de Maio de 2008

Introduo
O sistema imunitrio evoluiu para distinguir aquilo que estranho ao nosso organismo daquilo que faz parte ao nosso organismo de maneira a atacar e destruir coisas que so estranhas como o caso de vrus e bactrias. Obviamente quer no caso da transplantao quer no caso das alergias existe uma resposta do sistema imunitrio contra algo que estranho ao organismo. Por exemplo um rgo transplantado para o sistema imunitrio o mesmo que uma bactria, algo que preciso eliminar. Por isso a resposta imunitria a um transplante (no caso da alergia a mesma coisa) no fundo uma resposta imunitria normal como a que feita a um vrus ou bactria, ou seja vai haver inicialmente depois da entrada do vrus, bactria ou transplante no organismo uma resposta do sistema imunitrio inato que actua durante algum Fig.1- Aces do sistema imunitrio tempo. Depois comea a haver uma predominncia da imunidade adquirida na resposta imune e vai haver futuramente tanto mecanismos efectores, como mecanismos da prpria imunidade adquirida, como o caso das clulas citotxicas, os anticorpos, e os mecanismos comuns imunidade inata como o complemento (que muito importante na reaco aos transplantes). Tambm a aco dos fagcitos, tenta terminar com a bactria, vrus ou transplante. O transplante s tem algumas particularidades que a forma como o sistema imunitrio estimulado por este, que deriva do facto de ao contrario de bactrias e vrus, o prprio transplante, que habitualmente so clulas tambm humanas, vai ter clulas que tem a capacidade de apresentar antignios directamente a linfcitos T, ao contrrio dos vrus e bactrias que obviamente no tem molculas de MHC para apresentar antignios. Quando uma bactria entra no organismo (fig.2) vai ento haver estimulao de fagcitos, assim como estimulao de outros factores necessrios para matar essa bactria e para induzir inflamao. Muito importante a activao de clulas dendrticas linfides que os linfticos segregam para esta zona. Estas clulas dendrticas capturam os antignios e levamnos novamente para os centros germinativos dos gnglios linfides onde os apresentam s clulas B e T o que leva sua activao. Esta activao de clulas T e B vai dar origem
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formao de anticorpos atravs da formao de centros germinais, e a actuao de clulas efectoras que juntamente com os anticorpos vo migrar novamente para o local de infeco onde vo interagir com outras clulas para matar as clulas infectadas, bactrias ou no caso dos transplantes, rejeitar os transplantes. Portanto todos estes mecanismos que vocs j viram, so exactamente iguais aos utilizados na transplantao.

Figura 2.- Estgios na infeco e na defesa do hospedeiro

As clulas dendrticas so absolutamente fundamentais uma vez que tm a capacidade nica de estimular clulas T. atravs de receptores que as clulas dendrticas detectam a inflamao e ou padres associados a patognios. Assim, vai haver a activao dessas clulas dendrticas que vo, devido a essa activao, migrar para os gnglios linfticos onde se tornam menos fagciticas e melhores a apresentar antignios, estimulando assim a activao de clulas T.

Para a activao das clulas T necessrio que haja co-estimulao, para alem de haver reconhecimento do antignio. Esta co-estimulaao s acontece quando as clulas dendriticas esto maturas.
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Depois das clulas T serem activadas vo migrar para os tecidos perifricos onde dependendo das caractersticas funcionais de cada tipo (podem ser 1) citotxicas reconhecendo os antignios e eliminando os patognios, podem ser 2) Th1 interagindo com os macrfagos e estimulando-os a produzir citocinas e a fagocitar os patognios, podem ser 3) Th2 que interagem com as clulas B e fazem com que estas produzam anticorpos, podem ser 4) Th17 que vo para a periferia e interagem com os neutrfilos activando-os para que estes possam ter a sua aco pr-inflamatria nesse tecido) e neste contexto que as clulas activadas vo tentar eliminar a substncia estranha ao nosso organismo seja ele vrus, bactria, transplante ou alergnico.

Para a aco efectora destas clulas preciso que ocorra interaco entre a clula efectora e a clula alvo e importante que haja molculas de adeso que estabilizem a interaco entre elas. Ocorre ento uma sinapse imune e polarizao da clula efectora. Esta liberta os seus grnulos com enzimas que actuam no caso das clulas citotxicas marcando as clulas alvo, no caso das Th1 ou Th2 vo estimular ou modificar a forma como as clulas B so estimuladas.

Alergia e transplantao

A alergia habitualmente definida como uma resposta imune contra estmulos que so incuos como so as protenas do leite, as protenas do plen ou as protenas dos caros. So aquelas coisas que em principio quando entram em contacto com o nosso organismo no vo provocar qualquer dano mas ainda assim o sistema imunitrio tem uma resposta inflamatria violenta contra estes antignios. A alergia est a aumentar a sua importncia sendo que em alguns pases a taxa de populao afectada por este problema aproxima-se mesmo dos 50%. Nos ltimos 20 anos nos pases ocidentais as doenas alrgicas tm aumentado numa taxa muito elevada. Quando ns falamos de alergia geralmente estamos a designar as doenas de hipersensibilidade tipo I, no entanto existem tambm hipersensibilidades de tipo II, III e IV.

 As doenas de hipersensibilidade tipo I so mediadas por molculas de IgE. Este vai-se ligar a mastcitos e a basfilos e quando surgem as molculas de antignios, estas, vo se ligar s molculas de IgE que esto na superfcie dos mastcitos e basfilos induzindo a sua activao e fazendo com estas libertem grnulos que contm mediadores inflamatrios originando as reaces qumicas que ns conhecemos como associadas a estas doenas alrgicas.

As doenas de hipersensibilidade de tipo II so mediadas por IgG, portanto uma imunoglobina de classe diferente, e so causadas por pequenas molculas que se ligam covalentemente a componentes da superfcie das clulas humanas produzindo estruturas modificadas que so percebidas como estranhas ao sistema imunitrio. A resposta das clulas B a esses novos eptopos produz IgG, a qual, no momento da ligao s clulas modificadas, causa a sua destruio atravs da activao do complemento e da fagocitose. O antibitico penicilina um exemplo de uma molcula pequena reactiva que pode induzir a reaco de hipersensibilidade de tipo II. Por exemplo a penicilina liga-se as plaquetas e estas so ento fagocitadas mediadas pelo IgG que como sabem promove a opsonizao e fagocitose das partculas que esto cobertas por esta imunoglobina. As doenas de hipersensibilidade de tipo III so devidas a imunocomplexos pequenos e solveis, formados por antignios proteicos solveis ligados IgG produzida contra eles. Alguns desses imunocomplexos depositam-se nas paredes dos vasos sanguneos pequenos ou nos alvolos pulmonares. Os imunocomplexos activam o complemento e iniciam uma resposta inflamatria que lesa o tecido, prejudicando a sua funo fisiolgica. Quando os anticorpos ou outras protenas derivadas de espcies animais so administradas teraputicamente aos pacientes, as reaces de hipersensibilidade do tipo III so um efeito colateral potencial. Por exemplo a injeco de soro de cavalo ou burro para tratar o ttano j que este neutralizar a protena do ttano. O problema que esse mesmo soro tem outras protenas diferentes das dos humanos e portanto ia-se gerar imunidade contra essas protenas do soro que se depositavam nos glomrulos renais e 5

vasos sanguneos provocando uma reaco inflamatria sistmica nestes vasos.

As doenas de hipersensibilidade tipo IV so mediadas por clulas ao contrrio das restantes que so mediadas por imunoglobinas. Podem ser clulas Th1, Th2 ou clulas citotxicas. 1. A maioria das reaces so causadas por clulas CD4Th1. Por exemplo, a reaco inflamatria em torno de uma picada de insecto causada por clulas Th1 CD4 que respondem a eptipos pptidicos derivados do veneno e de outras protenas do insecto introduzidas pela picada. 2. Uma maioria das reaces de hipersensibilidade tipo IV derivada de clulas T CD8 citotxicas. Elas surgem quando pequenas molculas reactivas lipossolveis passam atravs das membranas celulares e ligam-se covalentemente s protenas humanas intracelulares. A degradao dessas protenas quimicamente modificadas produz pptidos anormais que se ligam molcula HLA da classe I e estimulam a resposta das clulas T cittoxicas. 3. A doena alrgica crnica, por exemplo a asma alrgica quando se torna crnica comea a haver uma contribuio muito importante de clulas Th2 que no deixa de ser uma resposta puramente mediada por IgE mas onde h uma componente muito importante dessa clulas.

Alergia de hipersensibilidade tipo I mediada por IgE

Neste caso a IgE produzida por clulas B e para haver esta produo de IgE necessrio que estas clulas faam uma mudana de istipo sob a aco de citocinas produzidas por clulas Th2 previamente exposto a um antignio. A IgE uma vez produzida vai ser capturada por receptores FcIRI que existem na superfcie dos mastcitos e basfilos que ficam assim cobertos desta molculas de IgE. Depois mais tarde em nova exposio a esse antignios, por exemplo um individuo que tenha sido sensibilizado pelos antignios do plen e se mais tarde num dia de primavera, onde existem muitos plens no ar que podem entrar em contacto com a mucosa nasal ou 6

com a superfcie do globo ocular onde existem algumas destas clulas que esto cobertas de IgE especifico para os antignios do plen, vai induzir desgranulao dessas clulas e vai provocar os sintomas de alergia como a rinite alrgica comicho nos olhos corrimento nasal, etc. Esta resposta mediada por IgE, evolutivamente parece ter sido muito importante em respostas contra parasitas.

Caractersticas dos antignios

Os antignios tm vrias caractersticas que os tornam bons para estimular IgE. 1. Habitualmente so protenas que tem actividade enzimtica e que contm pptidos com capacidade de se ligar ou ser apresentados a molculas de MHC classe II. Isso essncial porque se no houver apresentao a molculas de MHC classe II no h estimulao de clulas T. O facto de serem proteases muito importante porque se demonstrou, e so resultados muito recentes, que estas proteases conseguem clivar as tight junctions entre o epitlio e desta forma criar uma permeabilidade no epitlio por exemplo nas vias respiratrias e portanto havendo o acesso de clulas dendriticas que esto em baixo a estes antignios que esto nas vias respiratrias. 2. Habitualmente necessrio que haja uma dose baixa para eles actuarem j que uma dose muito elevada destes antignios no leva sensibilizao. 3. So tambm solveis, de base peso molecular estveis caractersticas que facilitem por exemplo que passem atravs do muco nas vias respiratrias.

Atopia
Outra designao que se encontra frequentemente atopia. Atopia definida como a caracterstica dos indivduos que tm susceptibilidade para a produo de IgE e como tal so muito mais susceptveis a desenvolver doenas alrgicas. Pessoas atpicas: Alto IgE total em circulao Alto n eosinfilos em circulao Susceptibilidade a alergia Histria familiar de atopia 7

1. Estas pessoas atopicas podem ser identificadas atravs da sua histria familiar de doenas

alrgicas. O facto de haver uma componente familiar sugere fortemente que h uma componente gentica que torna as pessoas mais susceptveis s doenas alrgicas. Existem vrios genes que podem conferir uma maior susceptibilidade alergia mas que esto dependentes das interaces com o meio. 2. Actualmente j se sabe mais sobre como identificar essas pessoas atravs da sua histria qumica. Pode-se determinar por exemplo a quantidade de IgE no soro e atravs do nmero de eosinfilos em circulao. 3. Outra teoria a teoria da higiene. Num meio ambiente mais limpo e menos susceptvel a infeces torna os indivduos mais susceptveis de desenvolverem hipersensibilidade. 4. Tambm a condio foi um factor que durante muitos anos tm sido relacionado com o aumento da susceptibilidade hipersensibilidade j que sociedades mais desenvolvidas as pessoas esto mais sujeitas poluio e aumenta assim o risco de desenvolvimento de hipersensibilidade. Em cidades com muita poluio geralmente h uma maior percentagem de habitantes com asma alrgica.

Alergia
A higiene hypothesis baseou-se em dados epidemiolgicos que mostraram que em pases em desenvolvimento, onde existem mais infeces, existe muito menos asma alrgica. Os estudos essenciais foram feitos com asma alrgica, apesar de ser verdade para outros tipos de doenas alrgicas. O que acontece que medida que os pases se desenvolvem, o nmero de doenas infecciosas diminui e vai aumentando a prevalncia de doenas alrgicas nessa populao. Mesmo dentro do prprio pas e com as mesmas condies, indivduos com muitos irmos tm menor probabilidade de desenvolverem doenas alrgicas face ao nmero de infeces que acresce, e esto mais vezes doentes do que indivduos com poucos irmos. A frequncia das infeces acresce tambm em crianas que frequentam o infantrio face a crianas que ficam com a famlia, mas ficam com menos doenas alrgicas.

Tambm o que se verificou foi que crianas que so infectadas com o vrus da hepatite A e o vrus do sarampo, tm uma menor probabilidade de desenvolver doenas imunolgicas e, tambm que crianas positivas para a tuberculina tm menor tendncia para doenas alrgicas. No entanto, isto talvez no seja 100% verdade, porque a histria bem mais complexa do que estes primeiros resultados sugerem. 8

No puseram a hiptese de que como, nos pases em desenvolvimento, as crianas com asma tm uma menor capacidade de sobrevivncia perante as saudveis, isso pudesse justificar a menor incidncia de doenas alrgicas nesses pases? Estes dados so provenientes de estudos controlados, em que controlamos os novos casos de asma e, apesar de nesses pases ser mais difcil de explicitar estes casos, foram feitas atravs de pessoas que procuravam e identificavam novos casos de asma e isso permitia controlar de perto os dados.

Outra questo foi o que que aquele acrscimo pode mostrar? Pode mostrar que algumas infeces aumentam o risco de asma alrgica. Por exemplo, animas infectados com o vrus da gripe, estes animais manifestam mais asma, ou crianas que nos primeiros anos de vida so infectadas com o vrus sinsicial respiratrio apresentam menor probabilidade de desenvolver asma alrgica. Aquilo que parece ser um factor que as infeces respiratrias, como acontece no vrus sinsicial respiratrio e da gripe, tendem mais a promover o desenvolvimento de asma alrgica enquanto que tipos de infeco com via de entrada pela mucosa oral, tendem mais a proteger da asma alrgica. Ento existem muitos dados no prximo slide que mostram que a infeco por parasitas poder ser o factor mais importante nesta nova pgina que pode vir. Portanto, medida que as populaes deixam de estar infectadas por parasitas, e as infeces das populaes actualmente tm muitos parasitas inspirais, parece que h uma maior predisposio para a asma. O problema destes estudos populacionais que existem sempre muitas variveis, nos pases em desenvolvimento existe muitas infeces e com dificuldades o que dificulta a exactido dos dados.

Quanto ao mecanismo, j falamos que o primeiro passo no mecanismo transmisso da doena a exposio ao alergnio, vai haver a tal sensibilizao, h introduo de imunoglobulinas e uma imonuglobulina capturas. Depois, quando h uma nova exposio ao antignio induz a sua desgranulao e as manifestaes clnicas dependem do local onde as clulas parecem reagir superfcie: os mastcitos, basfilos, macrfagos e tudo isso que vamos ver agora. Por isso, se este alergnio vai entrar pela via respiratria, vai haver queixas de asma alrgica e, no caso de contactarem com a superfcie da mucosa nasal, vai ter queixas de rinite alrgica.

Uma condio para ela se tornar crnica como o aumento de clulas Th2 nesse tecido, onde h aumento de eosinfilos vai haver uma perpetuao da inflamao linftica. O que est aqui representado uma fase de sensibilizao, onde h uma interaco entre as clulas Th2 que so activadas e uma clula apresentadora de antignio (clula detrtica), depois vai propiciar a secreo de citocinas que fazem a clula T transformar-se numa clula B que produz IgE. Considerando os mastcitos, vai haver uma fase inicial em que h degradao desses mastcitos e uma fase mais lenta em que h precisamente alterao do metabolismo basal mediado por clulas TH2 com actividade mxima. Existem vrias citocinas que so muito importantes para a tendncia alrgica mediada pelo processo Th2: IL-4 inibe o switch de imunoglobulinas para a produo de IgE IL-5 muito importante para atrair e acumular eosinfilos IL-13 muito importante para o aumento da secreo mucosa nas vias respiratrias e do aumento da contractilidade da musculatura respiratria com estmulos que so endgenos (isto no caso da asma alrgica)

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Isto um quadro de um pulmo no alrgico e de um pulmo alrgico. Vem que junto s vias respiratrias existem grandes intensidades inflamatrias. Quanto ao processo de instalao, temos a representao de vrios locais onde pode ser uma entrada de antignio e, dependendo desses locais vai haver uma manifestao local. O que eu vos queria chamar ateno que no caso de alergnios ingeridos como o caso das alergias aos amendoins (caso raro em Portugal), por razes ainda desconhecidas alguns entram em circulao e induzem uma libertao sistmica de mediadores como a histamina e todas as substncias presentes nos basfilos e mastcitos, isto vai provocar uma inflamao generalizada, induz a entrada em choque e pode at provocar a morte. Esta situao rara em Portugal porque as nossas crianas no comem manteiga de amendoim mas pode ocorrer em seres humanos por reaco alrgica ao veneno de abelhas e vespas em que a entrada do alergnio que est no veneno se d por via intravenosa, podendo haver um choque anafiltico e uma resposta fatal.

No fim desta fase da alergia s quero falar de alguns estudos que realam algumas coisas importantes de reter. Este um estudo feito na Austrlia que foi feito por P. Holt, estudou uma populao de vrios milhares de crianas desde a gravidez das mes at aos dez anos de idade. No principio, quando as mulheres estavam grvidas no sabiam que crianas iam desenvolver alergia e o que eles pensaram foi que podiam seguir por esta populao, fazer um estudo perspectivo, tirar amostrar de sangue em vrios pontos, rever os nveis de IgE, mastcitos e tudo o resto, para verificar depois mais tarde quais os factores que mais cedo permitiriam prever quais as crianas que desenvolviam asma. Em alguns destes resultados, em crianas ao fim de seis anos, verificaram que havia dois factores que eram muito importantes: um era se a criana era atpica ou no atpica, definida com histria familiar de doenas alrgicas, quantidade mais elevada de IgE e todos esses factores da atopia, concluindo que uma criana atpica tem o dobro da probabilidade de desenvolver asma aos seis anos. A atopia pode ser relacionada com a quantidade de infeces respiratrias no primeiro ano de vida e, verificaram que se a criana tiver uma infeco respiratria no primeiro ano de vida e for atpica 11

passa a ter uma possibilidade trs vezes superior de desenvolver asma e, se no for atpica tem probabilidade duas vezes superior. Se tiver duas ou mais infeces respiratrias durante o primeiro ano de vida, se no for atpica tem um risco quatro vezes maior de desenvolver asma alrgica e, se for atpica, tem um risco enorme de desenvolver asma alrgica. Portanto, da combinao do fundo gentico com os factores ambientais, neste caso a infeco por um pequeno vrus, que ir aumentar o risco de desenvolver asma alrgica. Os dados deste grupo esto a sugerir como que isto pode acontecer e sugerem que durante a fase da infncia, as vias respiratrias esto em maturao e so muito susceptveis a alguns estmulos patognicos nomeadamente as infeces virais que provocam inflamao e essa inflamao vai alterar a funo das vias respiratrias. Se isto for combinado com a sensibilizao para respostas Th2, por exposio aos alergnios, tambm vai provocar inflamao, podendo esta combinao dar origem asma alrgica. O que isto sugere que h vrias atitudes, tomadas na infncia, que vo contribuir para prevenir casos de asma alrgica, um deles as intolerncias a alergnios, uma vez que este grupo tem agora um ensaio clnico multisptico, nos Estados Unidos, na Europa e na Austrlia esto a tentar dar oralmente alergnios para tentar induzir tolerncia a estes alergnios. Outra situao prevenir infeces, infelizmente no h nenhuma boa vacina para poder prevenir estas infeces respiratrias e, em muitos casos h tratamentos agressivos destas infeces na infncia para tentar impedir que esta inflamao se torne em alergias crnicas e proceda a uma maior leso das vias respiratrias.

Este um outro estudo que eu trouxe o ano passado, e que at foi perguntado em exame, mas considero que estava enganado o ano passado e esta histria no estava totalmente certa. Houve estudos feitos em animais que mostraram que ratinhos sem as clulas NKT (IL4-IL13) no desenvolvem alergia. Se lhes pusermos clulas NKT de um animal sem IL-4 e IL-13 tambm no desenvolver asma. No entanto, se lhe pusermos NKT de animais normal, ficam como animais normais, o que sugeriu que as clulas NKT so essenciais para os ratinhos terem asma alrgica. No mesmo grupo vai estar um estudo do New English Journal of Medicine, que diz que em seres humanos com asma, existiam nas vias respiratrias muitas clulas CD4, que se presumiu serem clulas Th2, no entanto, quando se foi marcar descobriram que a maioria eram clulas NKT. Sugeriu, dado os resultados nos ratinhos e dado que estas clulas NKT expressam CD4, que estas clulas NKT dos doentes humanos eram importantes para desenvolver asma. Outros estudos publicados neste jornal sugerem, porm, que isto talvez no seja verdade. Estudos recentes tm vindo a sugerir que as clulas reguladoras, das quais estamos a falar, podem controlar atravs de respostas mltiplas ou directamente atravs de clulas Th2 a sensibilizao alrgica e prevenir a doena alrgica. Se o grupo de linfcitos est sempre a ser renovado, uma pessoa pode no ser alrgica a algum tipo e passar a ser alrgica?

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Sim, frequentes as pessoas serem sensibilizadas durante a vida por exemplo, comum uma pessoa no ser alrgica e depois desenvolver alergia perante certo alimento. E o contrrio no pode ocorrer? Acontece tambm, por exemplo certas alergias infantis que depois passam com a idade.

Transplantao
Vocs sabem que por vezes um rgo transplantado e rejeitado e sabe-se, actualmente, que para haver rejeio necessrio criar clulas T. Isto pode testar-se de vrias maneiras, por exemplo um animal sem clulas T no desenvolve rejeio ao rgo transplantado, se lhe introduzirmos clulas T, ele passa a rejeitar o transplante portanto, as clulas T so essenciais rejeio. Se h um novo transplante deste dador, acontece que a rejeio mais rpida, o que prova que existe uma memria caracterstica da imunidade adquirida para estas respostas.

Na designao de transplantao existem vrios tipos: um transplante singnico aquele que tem a mesma composio gentica do indivduo que vai receber o transplante, logo no h rejeio. Transplante alognico o proveniente de uma pessoa com cdigo gentico diferente, neste caso h sempre rejeio e, no caso de um transplante xenognico, que um transplante de outra espcie, vai haver uma rejeio e uma reaco muito desagradvel. Agora conceitos difceis

Comecemos pela diferena entre os antignios major e minor que d sempre confuso, o que acontece que a resposta de rejeio de um transplante muito diferente da resposta a uma bactria. O que acontece que as clulas do transplante, ao contrrio das bactrias, tm capacidade de apresentar antignios directamente, portanto quando h uma apresentao directa de antignios, atravs das molculas de MHC do prprio dador. As clulas do dador tm molculas de MHC que podem apresentar directamente antignios s clulas T do recipiente, isto a apresentao directa. No entanto, tambm possvel ao longo do tempo que estas clulas/antignios do dador possam ser capturadas por clulas dendrticas do recipiente, processados a perto e apresentados dentro de uma molcula de MHC do prprio recipiente, isto a apresentao indirecta. 13

A diferena que na apresentao directa como h um maior nmero de diferenas relativamente ao dador, dado que at as molculas de MHC so exgenas, induz uma reposta muito mais vigorosa que a apresentao por via indirecta. No inicio do transplante vai haver um predomnio da apresentao directa porque nessa altura existem muitas clulas dendrticas do dador no rgo transplantado, com o tempo essas clulas vo desaparecer e vo sendo substitudas por clulas dendrticas do recipiente que vo colonizar o tecido, vm da medula ssea e vo para o tecido onde vo ser sempre cada vez mais e vo apresentar antignios, vai assim haver um predomnio desta apresentao indirecta. No entanto, a confuso habitual concluir que a apresentao indirecta contribui para rejeio crnica e a apresentao directa para resposta aguda. A apresentao indirecta , no entanto, suficiente para provocar uma resposta aguda, logo no existe essa relao supracitada.

Os antignios major so as molculas de MHC desenvolvidas sobretudo na apresentao directa e que so major porque estimulam muito mais leuccitos, gerando uma resposta muito mais violenta. Os antignios minor so quaisquer protenas polimrficas que podem ser processadas e apresentadas por uma molcula de MHC do prprio indivduo. No rgo do dador, que clulas que vo ter o MHC do dador? Por exemplo no fgado? Como vocs sabem o MHC de classe I expressa por todas as clulas do prprio organismo, por isso todas as clulas, por exemplo no caso do transplante de fgado, vo ter MHC regulador. O MHC de classe II actua sobretudo em clulas apresentadoras de antignio e sabe-se tambm que um conjunto de clulas endoteliais podem tambm induzir a expresso de MHC de classe II, o endotlio do rgo transplantado tambm pode ter MHC II no contexto da inflamao. Qual o papel das clulas endoteliais? Estas so capazes de estimular e activar linfcitos T do recipiente e isso pode contribuir para a inflamao. No se esqueam ento destes dois conceitos, da apresentao directa que se faz com as clulas do dador e da apresentao indirecta que se faz com as molculas de MHC do recipiente que actua nas molculas do dador e as apresenta.

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 Na rejeio aguda o que acontece aquilo que j sabemos para uma resposta contra bactrias, migrao de clulas dendrticas para os gnglios linfticos, activao de clulas T que migram para a periferia e rejeitam o transplante. A rejeio hiperaguda o caso particular que acontece em doentes que esto hipersensibilizados, doentes que tiveram transfuses sanguneas de um indivduo semelhante ao dador podem ter produzido anticorpos especficos para os antignios desse tecido. o que acontece tambm nos xenotransplantes em que j existem anticorpos especficos para os genes do transplante. Neste caso, esses anticorpos preexistentes ligam-se ao endotlio do transplante e provocam rapidamente uma destruio do endotlio. Ao contrrio da rejeio aguda que demora 7 a 10 dias, esta uma resposta adquirida, a rejeio hiperaguda pode demorar menos se horas. A rejeio crnica causada por uma ateriolosclerose (no confundir com aterosclerose), uma destruio progressiva dos vasos sanguneos porque ocorre um espessamento das suas paredes at que eles deixam de ser funcionais, existem vrios factores que contribuem para este efeito como a inflamao e as clulas T. Existem vrios factores que, imediatamente a seguir ao rgo ser transplantado, vo contribuir para uma maior probabilidade de rejeio crnica, como por exemplo o tempo de isqumia-perfuso porque quando o rgo esta a ser transplantado no h sangue a circular e depois comea a circular de repente, essa falta de oxignio pode provocar leso que vai a longo tempo contribuir para uma maior probabilidade de rejeio crnica. Tambm infeces pelo citomegalovrus (CMV) provocam rejeies no transplantado, comum porque estes so imunodeficientes e tambm a prpria aco txica do imunosupressor, o mais utilizado a ciclosporina, sabe-se que contribui para haver esta esclerose nos vasos e rejeio do rgo transplantado.

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O feto um caso particular da espcie de alotransplante, o que acontece que a composio gentica do feto vai ser no s determinada pelo cromossoma da mo mas tambm pelo cromossoma do pai por isso metade das molculas de MHC do feto so diferentes das MHC da me. Ns sabemos que o feto habitualmente no rejeitado apesar de muitas causas de infertilidade se deverem a uma valncia dos mecanismos que previnem esse fenmeno e levam rejeio do feto no incio da gravidez. Sabe-se, neste momento, que existem muitos factores que contribuem para a evitar a rejeio do feto, tendo sido este mecanismo dos mais importantes para a sobrevivncia e proliferao da espcie. Por essa razo existem barreiras passagem de clulas da me para o feto, o trofoblasto tem, na superfcie de contacto, molculas que so imunosupressoras e que diminuem a activao de clulas T, nomeadamente por diminurem os nveis de triptofano que o aminocido essencial para a adaptao dos leuccitos e que expressa o FAZ que mata as clulas T que so activadas.

Agora sobre um transplante de medula, transplante de clulas estaminais hematopoiticas que o nico caso em que clulas estaminais so lanadas cirurgicamente para produo dos elementos do sangue e serve para colmatar um grande nmero de doenas como imunodeficincias, neoplasias e tambm a terapia genica, que uma utilizao mais rara. Essas clulas estaminais obtmse todas da medula ssea, do sangue perifrico e do sangue do cordo umbilical. Os dadores so totalmente autlogos, singnicos ou alognicos, neste caso costumam-se utilizar irmos que em 25% dos casos tm as mesmas molculas de MHC. Para o transplante de medula conveniente que haja uma destruio da medula do doente e h uma preparao da medula do dador para eliminar as clulas T, as clulas estaminais so injectadas por via intravenosa e migram at medula. No caso do transplante autlogo, ao prprio doente retirada a medula para destruio de clulas neoplsicas e clulas T, depois destruda toda a medula do dador e introduzida no dador estas remodelaes. Um dos problemas destes fenmenos que se existem clulas T na medula, estas podem ser activadas por clulas dendrticas e vo as clulas T do dador destruir os rgos do prprio recipiente, o que chama um enxerto contra o hospedeiro. No se eliminam totalmente as clulas T porque se sabe que as clulas T que permanecem na medula so importantes para reduzir a probabilidade de regresso do tumor, estes doentes morrem menos. Para aprofundar o estudo sobre este tema aconselhamos o estudo do capitulo 10 (Reaces excessivas do sistema Imune) do livro de Texto O Sistema Imune por Peter Parham. 16

Questes de exemplo do exame terico de Imunologia

Retiradas da base de perguntas de exame do instituto

1. Qual dos seguintes processos sucede primeiro durante o desenvolvimento dos linfcitos B? a. Rearranjo da cadeia leve b. Rearranjo da cadeia pesada c. Expresso de IgD d. Expresso de IgM 2. Relativamente infeco pelo vrus HIV a. O HIV-2 tem uma patogenicidade superior ao HIV-1 b. O HIV-1 infecta preferencialmente linfcitos T citotxicos c. Tanto o HIV-1 como o HIV-2 so adenovrus d. Alguns receptores para quimiocinas (chemokines) fazem parte do seu mecanismo de entrada nos linfcitos T 3. Qual dos genes ao ser mutado em ratinhos leva ao desenvolvimento de doenas autoimunes? a. Foxp3 b. RAG c. AID d. Todos os anteriores 4. Que propriedade partilhada pelo receptor das clulas T (TCR) e pelo receptor das clulas B (BCR)? a. O nmero de locais de ligao ao antignio b. A existncia de formas ligadas membrana e outras secretadas c. A ocorrncia de hipermutao somtica das suas sequncias d. Nenhuma das anteriores

5. A patologia alrgica (febre dos fenos) caracterizada por: a. Uma secreo exagerada das citocinas IFN- e TNF- b. Uma representao exagerada de linfcitos T CD8+ em circulao c. Um desequilbrio na representao relativa das classes de Ig circulantes d. Uma expanso exagerada de neutrfilos, macrfagos e eosinfilos

6. Os linfcitos encontram-se normalmente em estado de repouso, at receberem sinais especficos de activao. Qual a afirmao falsa? a. Os linfcitos B estimulam os linfcitos T

b. Os linfcitos T estimulam os linfcitos B c. As clulas dendrticas activam linfcitos B d. As clulas dendrticas activam linfcitos T 7. Qual das seguintes afirmaes a respeito dos TMO (transplantes de medula ssea) a mais correcta? a. A maioria dos TMO so autlogos b. A indicao principal para TMO o tratamento de leucemias e linfomas c. A doena enxerto vs hospedeiro (graft vs host disease) a complicao precoce mais frequente d. Todas as anteriores 8. Qual falsa? a. A diversidade das sequncias do TCR superior da cadeia de MHC classe I b. A diversidade das sequncias da cadeia pesada do BCR superior dos receptores de reconhecimento de padro. c. Ambas as cadeias que constituem o heterodmero MHC I so polimrficas d. Todas as anteriores 9. Qual das afirmaes acerca dos linfcitos CD4+/CD25+/Foxp3+ falsa? a. A sua aco pode diminuir a eficcia de imunoterapia de cancro b. A sua aco pode diminuir a imunidade a agentes infecciosos c. S so gerados perante induo na periferia pois o gene Foxp3 no expresso no timo. d. Algumas doenas autoimunes esto associadas a uma deficincia no nmero destas clulas 10. Qual das seguintes PAMP no reconhecido por receptores das famlia Toll-like? a. manose b. flagelina c. Lipossacrido d. DNA no metilado 11. A recombinao somtica de fragmentos genticos V/D/J ocorre: a. Mediante o reconhecimento de sequncias heptmero-espaadora-heptmero(?) b. Por aco da enzima AID c. Exclusivamente em linfcitos B e T d. Todas as anteriores so correctas 12. A imunoglobulina IgE caracteriza-se por: a. S ser produzido por clulas B que recebem sinais de linfcitos Th2 em clulas germinais b. () c. Desempenhar um papel importante nas respostas a infeces em parasitas d. Todas as anteriores 13. A cadeia polipeptdica pr-TCR (pT):

a. b. c. d.

fruto do rearranjo VJ somtico expresso em timcitos CD4-/CD8-/DN crucial para o desenvolvimento dos linfcitos T Todas as anteriores

14. Qual das afirmaes acerca do isotipo IgG1 de anticorpos falsa? a. O respectivo mRNA regulado por splicing alternativo dos genes M e J b. Est ausente em linfcitos B imaturos presentes na medula ssea c. um isotipo particularmente eficaz enquanto neutralizador de antignios. d. Requer mudana de classe (class switching) para a sua gerao 15. No timo, o factor de transcrio AIRE controla a expresso de protenas tipicamente abundantes em tecidos perifricos. Este fenmeno importante para a tolerncia do prprio porque: a. Promove a seleco primitiva das clulas T efectoras especficas b. Induz a deleco de clulas T potencialmente auto-reactivas c. Aumenta o nmero de respostas imunitrias protectoras iniciadas ao nvel do timo d. Todas as anteriores

Chave 1. b) 2. d) 3. a) 4. d) 5. c) 6. c) 7. d) 8. c) 9. c) 10. a) 11. c) 12. b) 13. b) 14. a) 15. b)