Bioactivare și ingineria

proteinelor

I. Bioactivare – Prof. Stancu Izabela – Cristina

c1
S.L.Dr.ing. Iuliana Biru
Examen: 50 p
Laborator: 30 p
Tema de casă: 20p:
• 10 p Bioactivare
• 10 p Ingineria
proteinelor
Conținut - Bioactivare

1. Notiuni introductive de bioactivarea biomaterialelor pentru medicina regenerativa si inginerie tisulara.

Polimeri (bio)activi / (bio)functionalizati. Clase de aplicatii.
2. Compusi macromoleculari – componente pentru suprafete si produse implantabile.

Proprietatile polimerilor utile pentru medicina regenerativa si inginerie tisulara.

Limitari si provocari in aplicatiile de medicina regenerativa si inginerie tisulara.

Exemple tip studiu de caz.

3. (Bio)activarea pentru sinteza de matrici extracelulare sintetice si fabricarea de substraturi implantabile

Clase de grupe functionale pentru biofunctionalizari

Polimeri derivati naturali ca platforme 3D pentru regenerare tisulara.

Decorarea cu peptide de adeziune celulara.

Hidrogeluri biomimetice ca analogi de matrice extracelulara. Peptide colagen mimetice. Biopolimeri de

origine marina si utilizarea lor in reconstructia si regenerarea tisulara.

Biofunctionalizarea si reticularea pentru controlul proprietatilor mecanice in concordanta cu testutul

vizat.

Bioactivare pentru degradare controlata

Bioactivare pentru fenomene biomimetice. Proteine anionice pentru biomineralizare. Dendrimeri.

4. Polimeri bioactivati pentru aplicatii in diagnosticare si terapie
1.Noțiuni introductive - bioactivarea biomaterialelor pt
medicină regenerativă și inginerie tisulară . Polimeri
(bio)activi / (bio)functionalizați. Clase de aplicații.
obiective
• Înțelegerea necesității și utilității bioactivării/biofunționalizării
• Termeni specifici – bioactivitate, matrice bioactivă
• Exemple de polimeri sintetici și naturali biodegradabili.
• Polimeri (bio)activi / (bio)functionalizați. Clase de aplicații.
1.1. Noțiuni introductive - bioactivarea biomaterialelor pt medicină regenerativă și inginerie
tisulară .

Termeni utili
https://www.merriam-webster.com/dictionary/regenerative%20medicine
Merriam-Webster Dictionary definition of regenerative medicine: a branch of medicine concerned
with developing therapies that regenerate or replace injured, diseased, or defective cells, tissues, or
organs to restore or establish function and structure NOTE: Regenerative medicine treatments include
stem cell therapy to stimulate tissue repair and regeneration at the site of damage or the
transplantation of tissues or organs made or grown outside the body.

❖ TERMIS – Tissue Engineering & Regenerative Medicine International Society

Societatea Internațională de Inginerie Tisulară și Medicină Regenerativă

❖ Principala revistă științifică a domeniului

Tissue Engineering

https://termis.org/tissue-engineering-journal
Tissue engineering and regenerative medicine have the potential to extend human
life in ways once thought impossible, such as cultivating lab-grown tissue and
creating 3D-printed organs. From scientific research to clinical applications and
industrial commercialization, Tissue Engineering covers the entire field, including
advance manufacturing, bioprinting, nanotechnology, stem cell biology, and more.
TERMIS - Grupuri tematice:
Bioactivare / Biofuncționalizare – se
referă la ajustarea compoziției, proprietăților și
funcționării unui biomaterial / implant / dispozitiv
medical pentru a stimula interacțiunile cu celulele
relevante și cu țesutul gazdă, în sensul inducerii
și/sau stimulării regenerării tisulare.

Indiferent de rolul lor, biomaterialele bioactivate

trebuie să favorizeze interacțiuni:
❖ Biochimice (de exemplu prin bioactivare cu
componente ECM)
❖ Celulare

• Ultimele 2 decade – o gamă foarte largă de

biomateriale care au potențial de stimulare al
adeziunii și proliferării celulare.
• Numeroase proiecte de cercetare dedicate
investigării biomaterialelor ce ghidează
regenerarea tisulară; de obicei – biomateriale
biodegradabile sau parțial biodegradabile.
• Majoritatea consideră ca aspecte cheie relația
comportament celular – proprietăți fizico-chimice
sau mecanice ale substratului (scaffold)
implantabil.
Aspecte investigate:
• în general - influența compoziției/proprietăților asupra interacțiunilor cu celule
• puțin – capacitatea macrofagelor de stimulare a regenerării tisulare și mobilizarea
celulelor stem endogene spre defectul tisular și inițierea regenerării
• în general – implanturi în organisme sănătoase cărora li se ”fabrică” defecte model;
Puțin – potențialul unui biomaterial implantat într-un organism în condiții
patologice specifice.
• Multe teste celulare in vitro - în 2D, cu un singur tip de celule
• Mai puține teste celulare in vitro– 3D, cu co-culturi, sau agregate celulare 3D
(sferoizi, organoizi)
• In vivo – multe studii în animale mici, a căror relevanță nu este 100%

• Generație de biomateriale avansate dezvoltate în ultimii ani – biomimetice,

bioactive, bioresponsive
• Multe aspecte trebuie lămurite pentru stimularea regenerării tisulare.
 Sursă de documentare:

https://home.liebertpub.com/publications/tissue-engineering-parts-a-b-and-c/595
Context mai cap femural grefă vasculară
larg/varietate de
produse comerciale
implantabile
cupă
acetabulară
stent coronar
tijă femurală
din titan
ureteral
Cercetarea biomaterialelor → acoperit cu
stent
Soluții medicale avansate titan poros
pentru repararea, menținerea tijă femurală Dispozitiv
sau refacerea funcțiilor unor acoperită cu intrauterin
organe și țesuturi afectate în hidroxapatită
condiții patologice sau
traumatice specifice Componente
articulare pt
genunchi pansament

BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
1.2. Polimeri (bio)activi / (bio)functionalizati. Clase de aplicatii.

Clasificare generală:

a.Sintetici b.Naturali ne-/ c.Sintetici

nebiodegradabil biodegradabili: biodegradabili:
i Proteine Poliglicolida PGA
Polietilena PE proteine structurale Polilactida PLA
Poli(met)acrilați proteine plasmatice Policaprolactona PCL
Polipropilenă PP enzime
Polidioxanona PDO
factori de creștere
Poliamide Poliuretani PU
Polizaharide
Poliuretan PU Policarbonati
Polianhidride
 a.Sintetici nebiodegradabili
Polietilena Poliacrilați Polipropilenă Poliamidă Silicon

• Catetere • Lentile • Protezarea • Catetere • Catetere

• Fire de intraoculare articulațiilor • Stenturi • Tuburi
sutură • Ciment osos degetelor • Implant de
• Implanturi • Proteza • Grefe sân
faciale urechii medii • Plase
• Tendoane Polimetacrilat de abdominale
• Componente metil (PMMA) Poliuretan
articulare Poli(2-hidroxietil Mase
metacrilat) moleculare între • Stimulatoare
Mase (PHEMA) 200000 - cardiace
moleculare între Copolimeri 700000 g/mol • Grefe vasculare
30000 - Mase • Implant de sân
6000000 g/mol moleculare între
200000 - 700000
g/mol
 chimice

sintetici
polimeri
Exemple
structuri
PS

PVC

PHEMA

PMMA
poli(N-izopropil acrilamida) (PNIPAM)

BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
Polimerii sintetici nebiodegradabili:

+ proprietăți mecanice adaptabile unor aplicații de înlocuiri tisulare

+ caracter hidrofil sau hidrofob, dependent de structura chimică

- nu sunt recunoscuți de celule – în general nu sunt bioactivi

- lipsa biodegradabilității limitează aplicațiile acestor polimeri pentru inginerie

tisulară, medicină regenerativă și eliberarea controlată a unor medicamente sau
molecule bioactive
 c.Sintetici biodegradabili
PGA PLA PGLA PCL
• Insolubil în • Mai hidrofob decât • Mai hidrofob • Semicristalin
majoritatea PGA decât PGA
solvenților • Stabilitate termică • Stabilitate termică • Se degradă cu
• Înalt cristalin (45- redusă redusă viteză mai mică
55%) • sfărâmicios decât PLA
• Degradare prin - diferite scaffolduri
difuzia apei și Policarbonați - sisteme de
scindarea • Degradare Polianhidride eliberare controlată
grupelor ester enzimatică • Alifatice - - electrospinning
-Suturi resorbabile - Eliberare controlată degradare rapidă - printare 3D
- Pt eliberare mai (zile) - Grefe piele, os,
eficentă – copolimeri • Aromatice – ca atare sau
cu PGA, PCL și Pglu degradare mai compozite
- -policarbonați pe lentă
bază de tirozină – - Eliberare controlată
ingineria țesutului - Proprietăți
dur mecanice limitate
Exemple

poli(butirolactonă) (PBL) poli(valerolactonă) (PVL)

https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/material-
matters/biodegradable-aliphatic-polyesters.html
b. Naturali Polizaharide: ciclodextrine,
celuloză, amidon, pectină, gumă
guar, arabinoglucan, caragenan
Din plante
Proteine: din soia

Poliesteri

Polizaharide: chitosan,
hialuronan, condroitin sulfat
De origine
Polimeri biodegradabili Proteine: colagen, fibroină, gelatină, fibrină...
animală
naturali
Rășini (șelac)

Polizaharide (alginat,
dextran)

De origine Poliesteri PHA

microbian
ă Poliamide: poli(gamma
glutamat)

Polianhidride polifosfați
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
• Componentă structurală – perete celular
• Microfibrile cristaline – proprietăți mecanice + rezistență la
Ex. - Polizaharide atac enzimatic
• Utilizată ca microceluloză, nanoceluloză, carboximetil
• Complecși de celuloză, hidroxipropil metil celuloză, hemiceluloză.
incluziune
• Eliberarea
medicamentelor
hidrofobe
• Interacțiuni cu
colesterol
• Aditivi în biomat pt
oftalmologie,
dermatologie

• Diferite mecanisme de biodegradare

Grupe funcționale: -OH, -COOH, -NH2
• Diferite tipuri de interacțiuni cu celulele;
Caracter: anionic/cationic
• Unele actiune antimicrobiană;...
1.2.1. polimeri bioactivi/biofuncționalizați. Clase de aplicații.

➢ Bioactivitatea = capacitatea de
a afecta mediul biologic
înconjurător.
➢ Langer and Vacanti - “tissue
engineering” – anii 1990

• Materialele biomimetice și
bioactive – esențiale pentru
inginerie tisulară și direcții
medicale noi – medicina
regenerativă și chiar medicina
personalizată;
• Materialele bioactive și
biomimetice – prioritate
recunoscută la nivel mondial, în
toate strategiile de CD
Matrici pentru medicina regenerativă - Provocări tehnice specifice

❑ Anual sute de produse cu matrici polimerice – aprobare pentru utilizare clinică

❑ Noi aplicații în medicina regenerativă – biomaterial + celule / inginerie tisulară
sau terapie pe bază de proteine terapeutice
❑ Necesitatea unor matrici polimerice:
❑ cu proprietăți chimice, fizice și mecanice versatile și controlabile,
❑ cu compatibilitate cu celulele bazată pe biomimetism – ECM
❑ Domeniul matricilor polimerice bioactive – dezvoltarea de materiale și tehnici
pentru a asigura proprietăți biologice și fizice capabile să stimuleze răspunsuri și
interacțiuni specifice de la sisteme celulare.
❑ În ingineria tisulară – matricile polimerice permit/ajută/ghidează organizarea
ierarhică a celulelor în structuri tip țesut. Sunt necesare:
❑ Ingineria matricilor cu control geometric, arhitectural și în timp al efectelor
pentru medierea răspunsului celular;
❑ Sunt necesare strategii noi în chimia polimerilor sintetici (în mod normal ne-
bioactivi). Aceștia sunt interesanți din punct de vedere mecanic + posibilitate
de biodegradare, dar nu sunt bioactivi.
❑ Design rațional al unor matrici compatibile cu celulele, manipulabile biofizic
și biochimic pentru controlul interacțiunilor celulare și subcelulare.
Designul matricilor polimerice pentru inginerie tisulară și medicină regenerativă
include:
• Porozitate controlată
• Bioactivitate și biodegradabilitate controlate

Matrice bioactivă = poate controla interacțiunile la interfața biomaterial-celule

prin:
❖ Complecși receptor-ligand pentru adeziune și migrare celulară specifice;
❖ Molecule ce stimulează biodegradarea
❖ Molecule/secvențe ce permit controlul fenotipului celular
❖ Molecule/secvențe ce permit controlul adeziunilor focale
❖ Molecule/secvențe ce permit controlul proprietăților mecanice pentru
mecanotransducție

Analogii de matrice extracelulară (EMA) = biomateriale ce mimează

micromediul tisular prin combinarea de materiale cu proprietăți funcționale
specifice unui țesut.
EMA – 2 categorii principale: Materiale biomimetice
nanostructurate
Analogi bioactivi ai factorilor de creștere (pro-
morfogenici sintetici)
BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback), Ch 2
 ❑ Polimeri bioactivi/ biofuncționalizați

Cazuri:
• Natural bioactivi:
❖ biopolimeri din matricea extracelulară implicați în
interacțiuni/activitate celulare - Ex: colagen, • Proteine
fibronectină, acid hialuronic (în cartilaj). Multe • Glicoproteine
dintre aceste molecule – modulare și multidomeniu. • Glicozamino
– Pot fi folosiți ca atare sau ca bioactivatori ai altor glicani
sisteme;
❖ Factori de creștere

• Cu bioactivitate dobândită:
❖ Polimeri de origine naturală ce nu prezintă • Alginat-RGD
bioactivitate dar sunt conjugați/combinați cu • Celuloza-BMP2
molecule/secvențe bioactive: alginat, celuloză,
fibroină etc
❖ Polimeri sintetici modificați să permită degradare și PCL-g-COL-g-CS = PCL + type II
invazie celulară/tisulară: PLA, PCL etc collagen + chondroitin sulfate
pt proliferare condrocite
Exemplu de ”bioactivare fizică” – de fapt o combinație de polimeri: sintetic
biodegradabil neadeziv pt celule = conduct exterior + colagen la interior, intraluminal
Exercițiu – asociați Colagen
1 - Polimer sintetic biodegradabil
PLA-PGA
2 - Polimer sintetic biodegradabil bioactiv
3 - Polimer natural biodegradabil gelatină
4 - Polimer natural PCL-
VEGF
5 - Polimer natural bioactivat
Gelatină-
6 - Polimer natural bioactiv
alginat
Alginat-
Alginat RGD
de calciu Nanoceluloză
nanoceluloză -alginat-
-BMP2 gelatină

PLA-gelatină
Nanoceluloză
-alginat
nanoceluloză
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
1.3. Evoluția biomaterialelor - categorii

- Inițial –pentru înlocuirea părților afectate - materiale deja

existente
I. BIOINERTE
- performanțe limitate de reacția de corp străin → inflamație,
formare capsulă fibroasă, integrare modestă
Atribute:
❖ Proprietăți mecanice
similare țesutului înlocuit
❖ Netoxice
❖ Inerte

- Interacțiunea cu țesuturile = problemă complexă ce necesită produși mai

complecși
- Caracterul bioinert – insuficient pentru numeroase aplicații
- 1986, the Consensus Conference of the European Society for Biomaterials:
❖ biomaterial = “a nonviable material used in a medical device intended to
interact with biological systems, ”
❖ biocompatibility = “ the ability of a material to perform with an appropriate
host response in a specific application ” [Williams 1987 ].

Aspecte investigate:
• Anii 1980: încapsularea
implanturilor → cercetări
biofizice și imunologice pentru
înțelegerea răspunsului
molecular, biochimic, celular ce
duce la răspunsul țesutului cu
interpunerea unei capsule
fibroase între țesut și implant
BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
Bioinerția – realitate sau utopie?
Suprafața biomaterialului – în contact cu
fluide: sânge, salivă, urină, fluid peritoneal,
fluide oculare etc. – NU se pot evita
interacțiunile cu proteine sau alte molecule.
Se formează un înveliș proteic ce influențează
comportamentul implantului în țesut.

• Răspunsul declanșat de
depunerea proteinelor pe
suprafața biomaterialelor, cu
schimbarea conformației lor.

• Suprafața biomaterialului -
induce modificări
conformaționale  transformă
proteinele gazdă în proteine
străine, antigeni – care
stimulează răspuns de corp străin NU există biomateriale total inerte!
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
II. BIOMIMETICE, BIOINTERACTIVE, BIOACTIVE

- cercetarea unor Biorecunoaștere

biomateriale capabile să
controleze interacțiunea cu Nespecifică unui anume tip de celule
mediul fiziologic pentru
stimularea regenerării;

- Colagen, Fibrină, Acid

hialuronic – prezente în
ECM
- Intuirea recunoașterii
acestor substanțe de către
celule
- Secvența arginină – glicină –
acid aspartic (RGD) –
stimulează nespecific
adeziune celulară (inclusiv
monocite și macrofage)
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
Biomateriale colagenice – spectru larg de recunoaștere celulară  răspuns
imun, adesea cu formare de țesut fibrotic

• Biomaterialele colagenice NU reproduc compoziția ECM reale.

• Anumite componente matriceale necesare reglării proceselor

regenerative lipsesc.

• Ex. colagenul din piele conține proteine precum α1 – microglobulină, ce

intervine în modularea activității macrofagelor [Santin & Cannas 1999 ]

Biomaterialele comerciale biomimetice – performanțe clinice bune, NU

mereu satisfăcătoare.

Necesită
îmbunătățire!
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
III. BIOMATERIALE BIOMIMETICE PENTRU
BIOACTIVITATE NATURALĂ

➢ 1990 - cercetarea unor noi biomateriale capabile să îmbunătățească

performanțele clinice ale implanturilor și interacțiunea cu mediul
fiziologic pentru stimularea regenerării;

➢ Regenerarea tisulară impusă atât pentru integrarea implanturilor

permanente și pentru regenerarea tisulară completă asistată de
biomateriale biodegradabile.
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
Domeniu
extracelular Adeziunea celulară – critică
pentru regenerare

Domeniu Ancorarea celulelor pe biomateriale –

transmembranar importanță majoră:
• interacțiunea cu bioliganzi
Domeniu specifici,
citoplasmatic • semnalizarea celulară: biochimică,
mecanică

Proteinele responsabile de adeziunea celulară la matricea pericelulară sau

intercelulară – receptori membranari – integrine.

Integrinele – protein heterodimerice proteins compuse din subunități α (18

tipuri) asociate fizic cu subunități β (8 tipuri)
 BIOMIMETIC, BIORESPONSIVE, AND BIOACTIVE MATERIALS. An Introduction to Integrating Materials with Tissues,
Edited by Matteo Santin, Gary Phillips, John Wiley & Sons, Inc. ISBN 978-0-470-05671-4 (hardback)
Biomaterial

Membrană celulară

Citoplasmă

Proteinele responsabile de adeziunea celulară la matricea pericelulară sau

intercelulară – receptori membranari – integrine.

Integrinele – proteine heterodimerice compuse din subunități α (18 tipuri)

asociate fizic cu subunități β (8 tipuri)
❑ ECM modulează comportamentul celular prin bioliganzi precum
hialuronan și molecule ce conțin –RGD-

❑ -RGD- în colagen, fibrinogen, fibronectină, vitronectină, și glicoproteine

ECM

❑ Interacțiunile celulă - celulă și celulă - ECM – mediate de lectine, proteine

ce se leagă de carbohidrați specific și necovalent [Sharon & Lis 1993 ].

BIOACTIVAREA unor biomateriale

1. Biomimarea ECM – EMA, suprafețe bioactive, matrici

pentru IT
2. Biomimarea componentelor membranei celulare
3. Biomimarea căilor de semnalizare celulare
1.4. Justificarea/utilitatea bioactivării

Rolul implanturilor/biomaterialelor bioactivate

în succesul reconstrucțiilor și regenerării tisulare

❑ societate educată ”better health, better living”

❑ îmbunătățirea soluțiilor terapeutice: implanturi
performante, terapii personalizate
❑ înțelegerea mai bună a interacțiunilor material-țesut
❑ controlul comportamentului tisular/celular
❑ modele 3D in vitro
Adesea design-ul simplificat – limitează
performanța și funcționalitatea in vivo
Exemplu.

• din gelatină
 De ce BIOACTIVARE?

necesită:

Specii bioactive = molecule sau fragmente ce

stimulează/intensifică interacțiuni cu celule sau
țesuturi pentru controlul unor procese de
vindecare, regenerare sau integrare
exemple de situații practice care necesită
bioactivare sau modificare a substratului
A

B
A
 B

Pentru detalii vizitați

https://www.poly-an.de/
B

Nanosfere fluorescente
PMMA pt marcarea
celulelor pentru STED
Pentru stimularea
legării celulelor pe plăci
2. Compusi macromoleculari – componente pentru suprafete si
produse implantabile.

• Proprietatile polimerilor utile pentru medicina regenerativă si

inginerie tisulară.
• Limitari si provocari in aplicatiile de medicina regenerativa si inginerie
tisulara.
22. proprietățile
polimerilor utile pentru aplicații în inginerie tisulară și
medicină regenerativă (TERM)
 Corelare permanentă

Proprietăți mecanice
(în stare hidratată în mediul fiziologic) ➢ Extrudare
• Rigiditate
• Rezistență ➢ Injecție

Permeabilitate ➢ Turnare
Degradare
➢ Depunere film

➢ Ingineria suprafețelor

• Pentru adeziune celulară

• Pentru biodegradare
• Pentru mineralizare
• etc
3. Polimeri bioactivați pentru în analize / studii de
dezvoltare a celor 2 clase de mai sus – plăci de
cultură, senzori, etc
2.3.
Bioactivare
Curs 3
2.3.
 3. (Bio)activarea pentru sinteza de matrici
extracelulare sintetice si fabricarea de
substraturi implantabile

3.1. Clase de grupe functionale pentru biofunctionalizari

3.2. Polimeri naturali și derivatii lor ca platforme 3D pentru regenerare tisulara.
3.3. Decorarea cu peptide de adeziune celulara.
3.4. Hidrogeluri biomimetice ca analogi de matrice extracelulara. Peptide colagen
mimetice. Biopolimeri de origine marina si utilizarea lor in reconstructia si regenerarea
tisulara.
3.5. Bioactivare pentru fenomene biomimetice. (Proteine anionice pentru biomineralizare.)
 3.1. Clase de grupe funcționale pentru
bioactivări / biofuncționalizări
GRUPE FUNCȚIONALE:
❑ SUBSTRAT SUBSTRAT BIOACTIVAT
❑ AGENT DE BIOACTIVARE OMOGEN

SUBSTRAT

SUBSTRAT BIOACTIVAT
HETEROGEN SAU ACOPERIT

PERECHEA SUBSTRAT – AGENT DE BIOACTIVARE – factori cheie:

- COMPATIBILITATE CHIMICĂ
- SOLUBILITATEA, CARACTERUL HIDROFIL
• Bioactivarea:
• în sistem omogen (în soluție, substratul și ag de bioactivare dizolvate)
• În sistem heterogen (la interfață S-L, S-G, L-L)
Parteneri în sistemul de bioactivare 2 posibilități:

1) SUBSTRAT BIOACTIVAT
OMOGEN
SUBSTRAT

• Polimeri naturali 1. Polimeri naturali

• Polimeri sintetici ce conferă 2) SUBSTRAT BIOACTIVAT
• Sisteme bioactivitate HETEROGEN SAU ACOPERIT
multicomponente: (proteine, enzime)
amestecuri, 2. Peptide de
copolimeri, rețele adeziune celulară
(semi)interpenetrate - 3. Factori de creștere
(semi)IPN 4. Molecule sau
• Compozite polimerice fragmente de
molecule ce
stimulează un
efect biologic
important în
regenerare
tisulară
IPN sau semiIPN
 IPN sau semiIPN

Rețea complexă – 2 sau mai multe

tipuri de polimeri reticulați
împreună

Amestec IPN

Semi(IPN) – un polimer este

nereticulat, prins fizic în
ochiurile rețelei formate de al
doinea

IPN – ambii polimeri formează

rețele care se întrepătrund,
moleculele fiecărui polimer
trecând prin ochiurile rețelei
semiIPN celulilalt
 3.1. Clase de grupe funcționale pentru
bioactivări / biofuncționalizări
MODIFICAREA GRUPELOR LATERALE - AMINO ACIZI, PEPTIDE, PROTEINE
❑ Moleculele de proteină și peptide – cel mai intens utilizate în bioactivări
❑ Proteinele ori ai unor activități specifice în organism  intens utilizate in vitro și in vivo
❑ Proteinele pot fi folosite în metode sensibile și specifice de detecție - existența unei
cantități suficiente de proteină care leagă specific o anumită moleculă de interes 
măsurarea cantității; dacă proteina nu are o componentă detectabilă, poate fi
modificată în acest sens, prin adăugarea unui tracer de detecție. Rezultă complex
proteic cu o componentă detectabilă, care permite cuantificarea, și o componentă ce
prezintă abilitatea de a interacționa cu ținta
❑ Aminoacizii – rol esențial

Bioconjugate Techniques, Third Edition. DOI: © 2013Elsevier Inc. All rights reserved. 2013 http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-382239-0.00002-9
 Proteinele pot fi utilizate atât ca substrat implantabil cât
și ca agent de bioactivare
Proteine - exemple
Colagen
Sericina si Fibroina
Elastina

Fibrina Fibrina

http://lauragarrison.wordpress.com/tag/fibrin/

http://www.timsmithmd.com/fibrinogen-clotting-factor-and-inflammatory-protein/

http://www.seiren.com/english/products/medical/sericin/
http://www.pharmtech.uni-
halle.de/deutsch/ag-
http://tisseel.com/us/how_tisseel_works.html http://bilingualbiology11a.blogspot.ro/2014/01/histology-ii.html biopharm/elastin-forschung.htm
 Aminoacizi și grupe 7 aa cu
funcționale catene
relativ
Prolina – singurul iminoacid - nepolare
α-amină secundară – structură și
unică  răsucirea lanțului hidrofobe
polipeptidic
Pro  structuri împachetate
compact

Aa hidrofobi – în interiorul
moleculelor de proteină
sau în zone unde pot
interacționa cu alte
molecule nepolare precum 2 aa
lipide. aromatici
cu catene
De obicei în zone neexpuse
relativ
apei și moleculelor hidrofile nepolare și
hidrofobe

Bioconjugate Techniques, Third Edition.

DOI: © 2013Elsevier Inc. All rights reserved. 2013
http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-382239-0.00002-9
 Aa hidrofili – în exteriorul
moleculelor de proteină
unde pot interacționa cu
apa.

Bioconjugate Techniques, Third Edition.

DOI: © 2013Elsevier Inc. All rights reserved. 2013
http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-382239-0.00002-9
 Grupe funcționale frecvent utilizate în bioactivare/biofuncționalizare – grupe ionizabile
ale aa: acid aspartic, acid glutamic, lizină, arginină, histidină, tirozină

-NH2

-COOH

-SH

Bioconjugate Techniques, Third Edition.

DOI: © 2013Elsevier Inc. All rights reserved. 2013
http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-382239-0.00002-9
MODIFICAREA (poli)zaharidelor – grupe -OH, -COOH

Polizaharidele sunt în general utilizate ca substrat

implantabil sau ca aditiv pentru controlul
hidratării, viscozității (în cazul printării 3D de
exemplu), propr mecanice etc. Celuloza
Unele polizaharide formează ușor geluri – utilizate
în încapsulare de celule; bioinks; bioprintare 3D
Chitina

Monomer = monozaharide Amidon

---Cn(H2O)m; rol energetic, structura celulara
 MODIFICAREA (poli)zaharidelor
– la grupele -OH, -COOH

Bioconjugate Techniques, Third Edition.

DOI: © 2013Elsevier Inc. All rights reserved. 2013
http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-382239-0.00002-9
 ACID GULURONIC – G Chitosan [2]
Alginat [1] ACID MANURONIC - M

Acid hialuronic [4] Dextran sulfat [3]

1 - http://www1.lsbu.ac.uk/water/alginate.html (10.03.2015)
2 - http://www.altakitin.com/?Products (10.03.2015)
3 - http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Dextran+Sulfate&lang=1 (10.03.2015)
4 - http://www.chemistry-in-context.com/articles/0128/ (10.03.2015)
- Functiuni chimice în polimeri naturali – Polizaharide

Polizaharide microbiene sau vegetale:

(A) Alginat
(B) Psl (P. aeruginosa)
[http://journal.frontiersin.org/Journal/10.3389/f
micb.2011.00167/full#sthash.LW9EUZio.dpuf]
- Functiuni chimice in polimeri naturali –Polizaharide

[Xunpei Liu and Surya K. Mallapragada (2011). Bioinspired Synthesis of Organic/Inorganic Nanocomposite Materials Mediated
by Biomolecules, On Biomimetics, Dr. Lilyana Pramatarova (Ed.), ISBN: 978-953-307-271-5, InTech, DOI: 10.5772/18411.
Available from: http://www.intechopen.com/books/on-biomimetics/bioinspired-synthesis-of-organic-inorganic-nanocomposite-
materials-mediated-by-biomolecules]
 3.2. Polimeri naturali și derivații lor ca
platforme 3D pentru regenerare tisulară.

❑ Hidrogelurile sintetice – permisive / nu stimulează adeziunea

celulară

❑ Hidrogelurile naturale – în multe cazuri bioactive

- Platforme 3D pentru cultivarea celulelor
- Micromedii hidratate, rețele tridimensionale elastice
- Limite și dezavantaje

❖ Încorporarea unor semnale biochimice și mecanice pentru

mimarea ECM

din Tibbitt and Anseth, Biotechnol Bioeng. 2009 July 1; 103(4): 655–663. doi:10.1002/bit.22361.
În regenerarea tisulară asistată/ghidată de/cu biomateriale –
înțelegerea și mimarea rolului ECM
Interacțiunea celule – ECM: Celulele primesc semnale din micromediul învecinat
❖ Bidirecțională prin ECM și, la rândul lor, influențează ECM adesea
❖ Dinamică remodelând-o.

Rolul ECM asupra celulelor:

❑ Asigură semnale de adeziune
❑ Locuri de legare pentru factorii de creștere
❑ Local – activitate enzimatică în faza de migrare celulară

ECM secretată de celule:

❑ Rețea polimerică complexă
❑ Interacțiuni fizice și chimice
❑ Răspunde / în relație directă cu propr mecanice, nevoia de oxigen și nutrienți, etc
❑ Specificitate tisulară

Biomaterial-proteine
bioactivare
Biomaterial-celule
 strategii

Ghidarea Micromedii integrare celule și biologie

restaurării/regene extracelulare instructive moleculară cu
rării tisulare pt TE biomateriale

❖Terapii celulare ❖Strategii fizice

❖Scaffolduri – terapii acelulare ❖Biofunctionalizare chimică

Hidrogeluri – cărămizile scaffoldurilor ECM-mimetice

”materials equipped
with molecular cues
mimicking certain • Scaffold-uri cu gradient de
aspects of structure or proprietăți,
function of natural • Porozitate controlată,
extracellular • Încărcate cu molecule bioactive
microenvironments” (Lutolf
& Hubbell, 2005)
Habilitation Thesis - Prof. STANCU Izabela-Cristina, 6/11/2020
 Hidrogeluri sintetice sau de origine naturală?

- asemănarea cu matricea hidratată, elastică, a țesuturilor; cu componente

macromoleculare

Hidrogelurile sintetice – nu Hidrogelurile naturale – pot conține

În țesuturi – interacțiuni conțin elemente de elemente de recunoaștere
celulă-celulă recunoaștere celulară -
GF acumulare dat. GAGs interacțiuni celulă-polimer - celulară – pot stimula interacțiuni
limitate celulă-polimer
Săpt 4

22.03.2022
În regenerarea tisulară asistată/ghidată de/cu biomateriale –
înțelegerea și mimarea rolului ECM
Interacțiunea celule – ECM: Celulele primesc semnale din micromediul învecinat
❖ Bidirecțională prin ECM și, la rândul lor, influențează ECM adesea
❖ Dinamică remodelând-o.

Rolul ECM asupra celulelor:

❑ Asigură semnale de adeziune
❑ Locuri de legare pentru factorii de creștere
❑ Local – activitate enzimatică în faza de migrare celulară

ECM secretată de celule:

❑ Rețea polimerică complexă
❑ Interacțiuni fizice și chimice
❑ Răspunde / în relație directă cu propr mecanice, nevoia de oxigen și nutrienți, etc
❑ Specificitate tisulară

Biomaterial-proteine
bioactivare
Biomaterial-celule
3.2.1. Polimeri naturali:

Polimerii naturali – clase principale: proteine, polizaharide, lipide...

Avantaje:
• Netoxice
• Majoritatea formează ușor (hidro)geluri
• Multe metode de prelucrare
• în multe cazuri bioactive: colagen, gelatină, fibrină
• În multe cazuri biodegradabile – se pot utiliza în TE
• majoritatea – adaptate fizico-chimic utilizării ca micromediu pt
reconstrucția unui țesut sau organ

Dezavantaje:
• Proprietăți mecanice insuficiente pentru reconstrucție osoasă
• Lipsa / insuficienta interacțiune cu celulele
• Lipsa vascularizației
• Uneori metode de stabilizare pot fi toxice (reticularea proteinelor cu
glutaraldehidă, formaldehidă), insuficient de stabile
 Polimeri naturali:
Ca atare Derivați

Poli(/oligo)zaharide: Derivați de polizaharide / oligo:

Ciclodextrine (oligo), celuloză,
hemiceluloză, amidon, pectină, gumă
guar, caragenan, alginat, dextran,
chitosan, condroitin sulfat, acid
hialuronic
2-hidroxipropil ciclodextrine,
hidroxipropil metil celuloza,
carboximetil celuloza,
metoxipectine, alginat dialdehidă,
alginat metacrilat, bioconjugați

Proteine: Derivați de proteine:

Colagen, proteină din soia, caseină, Gelatină, derivați metacrilați,
albumină, fibroină bioconjugați

Predominant - Rol de:

• platformă 3D (inclusiv bioink pt printare 3D) pentru celule
• scaffold
• acoperire
• Sistem de livrare/eliberare substanțe bioactive (de ex. factori de creștere)
 1)nereticulat
2) reticulat

Polimeri naturali 4

De obicei utilizați:
1. Ca atare

2. Ca hidrogel (scaffold, injectabil, printabil, microparticule)

3. Matrice compozită

4. Acoperire

3 2
Polimeri naturali

Clase reprezentative:
❑ Bioactivi pt regenerare tisulară: colagen, acid hialuronic,
fibronectină – stimulează adeziunea celulară.

❑ Netoxici nebioactivi: alginat, fibroină, celuloză

3.2.1.1 Derivați de alginat
a. Bioconjugate de alginat – peptide de adeziune celulară 
derivați de alginat adezivi pentru celule

❖ Tehnici de bioconjugare specifice grupelor

reactive din alginat și din peptidele bioactive

Peptide bioactive - interacțiunea cu celule:

From
S Bubenikova, IC Stancu, L Kalinovska, E Schacht, E Lippens, H
Declercq, M Cornelissen, M Santin, M Amblard, J Martinez,
Chemoselective cross-linking of alginate with thiol-terminated
peptides for tissue engineering applications, Carbohydrate
Polymers, ISSN: 0144-8617, 88 (4), 1239, 2012
▪ Alginatul nebioactivat – necitotoxic, stimulează interactiuni celulă-celulăclustere celulare
▪ Bioconjugatul Alg-cRGD – stimulează adeziunea celulară pe hidrogel

Celule bine aderate,

întinse pe hidrogel
From
S Bubenikova, IC Stancu, L Kalinovska, E Schacht, E Lippens, H Declercq, M Cornelissen, M Santin, M Amblard, J Martinez, Chemoselective cross-linking of
alginate with thiol-terminated peptides for tissue engineering applications, Carbohydrate Polymers, ISSN: 0144-8617, 88 (4), 1239, 2012 – Anexa1c4
 b. Alți derivați de alginat
• Bioconjugați cu peptide (de adeziune celulară)
• Alginat oxidat (AO) (En. Oxidized alginate - OA /
alginate dialdehyde - ADA)
• (metacriloil) alginat sau alginat metacrilat
(https://www.sigmaaldrich.com/catalog/substance/algin
atemethacrylate1234598765 )
• Acid alginic, alginat de Na, K, NH4, Ca și propilen glicol
alginat = E400-405 în EU – cu aplicații în domeniul
industriilor alimentară, textilă și farmaceutică
• În general utilizați ca pansamente, pt fabricare
scaffolduri și pt imobilizare substanțe sau celule prin
picurare în CaCl2
• Nedegradabili enzimatic în organismul uman
• Proprietățile mecanice și degradarea depind de masa
moleculară (MW): MW mare- degradare lentă
• Permite modificare pentru aplicații în ingineria tisulară
• Sub formă de geluri, microparticule, nanoparticule, https://www.sigmaaldrich.com/catalog/s
earch?term=alginate&interface=All&N=0
substraturi poroase (bureți liofilizați), scaffolduri &mode=match%20partialmax&lang=en&
printate 3D, acoperiri region=RO&focus=product
b1. Oxidare alginat  pentru creșterea biodegradabilității

Cu NaIO4, permanganat de potasiu, apă oxigenată

 Metode de reticulare – pentru formarea de hidrogeluri
Cele mai comune
pt alginați, se ▪ AO cu grad de oxidare redus (1-5%) – cu cationi divalenți (e.g., Ca2+) :
păstrează și pt AO ▪ (1) low molar mass of OA
▪ (2) reduction of the cooperative interaction between
carboxylate groups and calcium ions due to decreasing of the
Ionic chain stiffness and oxidation of the guluronic unit.
▪ Degradarea AO reticulat cationic este controlată de scindarea
hidrolitică a lanțului pt unitățile oxidate.
▪ Unitățile G au afinitate mai mare față de cationi în comparație cu
unitățile M  tăria gelului depinde de compoziție.

▪ Formare de hidrogeluri cu polimeri cu grupe –NH2 (de exemplu

chitosan, proteine..).
Covalent
▪ În cazul celor metacrilați – polimerizare cu formare de rețea
32

-(C-C(CH3))-n
 Reakasame, S., & Boccaccini, A. R. (2017). Oxidized Alginate-Based Hydrogels for Tissue
Engineering Applications: A Review. Biomacromolecules, 19(1), 3–21.

b2. GELATINĂ – ALGINAT oxidat doi:10.1021/acs.biomac.7b01331.

Lu, L., Zhang, P., Cao, Y., Lin, Q., Pang, S., & Wang, H. (2009). Study on partially oxidized
sodium alginate with potassium permanganate as the oxidant. Journal of Applied Polymer
Science, 113(6), 3585–3589. doi:10.1002/app.30328.

AO - Grupările aldehidă formate

la oxidare sunt reactive

Formarea
hidrogel OA-
gelatină

ÎN ABSENȚA
ORICĂRUI AGENT 33
DE RETICULARE
SUPLIMENTAR!
b3. GELATINĂ – ALGINAT convențional
NU este ”adeziv” pt celule Hidrogel bicomponent
Alg
NU este biodegradabil
Alg-Gel

Este ”adeziv” pt celule

Gel Este biodegradabil

Sol Alg-
Sol Alg + Sol Gel
Gel

Se formează AlgCa-Gel
Microparticule – 1) picurare în sol CaCl2
(semi-IPN)
2) Incubare în soluție de reticulant pt Gel (soluție de aldehidă glutarică)
Se formează AlgCa-Gel reticulată
(IPN)
 +
AlgCa – hidrogel cu
Sol + + + +
+
moleculele de Alg
Gel- + + +

+
+
reticulate cu Ca
+
Alg +
Semi- +

+
+

+
+ Moleculele de Gel
IPN + + +

+
+

+ nu sunt legate
+

+
+
chimic, ci doar
+

prinse în rețeaua
Alg
+ + ! Agent retic f eficient DAR TOXIC
AG

AlgCa – hidrogel cu
+ moleculele de Alg
+

+
+ +
+
+ reticulate cu Ca
+

IPN
+ +
+

+
Moleculele de Gel
+ +

+ +
+

+
SUNT legate chimic,
+
+ +

+ +
+ formând a doua
+
+

+
rețea polimerică, în
ochiurile primei
rețele
 3.2.1.2. Alte polizaharide

a. Celuloza și derivații săi: celuloză microcristalină, esteri, eteri, etc

• Unități structurale D glucoză legate  1→4

• Hidroxipropil metil celuloza (HPMC) – eteri parțial O-metilată și O-(2-

hidroxipropilată) – aditiv inclusiv pentru printare 3D

• Carboximetil celuloză (CMC) – control eliberare medicamente

• Nanoceluloza – substrat nanostructurat pentru inginerie tisulară, aditiv cheie

pentru printare 3D (în general TEMPO-oxidată) (2,2,6,6-Tetramethylpiperidine 1-
oxyl =TEMPO);
• ”An alginate and nanocellulose consisting bio-ink, commercialized under the
trademark CELLINK, was designed to mimic the cells natural environment
combining the shear thinning behavior of CNFs and the versatility of alginate ”

Bioinspired 3D printable pectin-nanocellulose ink formulations, Carbohydrate Polymers 220

(2019) 12–21; https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2019.05.026 - Anexa2c4
Alte polizaharide
Hialuronic acid / hialuronan și derivații :
• MW mare (105-107 Da); GAG neramificat nesulfatat
• Polianion, se auto-asociază; leagă molecule de apă
• În ECM reglează adeziunea celulară, mobilitatea
celulară, diferențierea și proliferarea, intervine în propr
biomecanice ale țesuturilor
• Lubrifiant în aplicații biomedicale – 1% HA (MW 106 Da)
– gel; la aplicarea de efort – sol – injectabil prin ac
• Degradabil de către 3 enzime
• Aplicații: scaffolduri, aditiv, bioactivator
3.2.2. Derivați de colagen/gelatină

• Colagen - principala proteină structurală, fibrilară

• Degradabilă de către colagenază (metaloproteinaza)
• Modulează activitatea celulelor
• Aplicații în regenerare răni, piele, os, țesuturi, + reconstrucție
• Gelatina – derivați prin hidroliza
• Tip A – punct isoelectric – pH 7-9
• Tip B – punct isoelectric între 4.7-5.4
• Stimulează interacțiunea cu celule; adeziv celular
• Diverse tipuri de scaffold, componente în compoziții mai
complexe, acoperiri...
• Hidrogeluri adezive pt celule
• Substraturi 2D, 3D, ”2.5D” (micro/nano-fibroase)
Substraturi ”2.5D” (micro/nano-fibroase) pe
bază de gelatină
2,5D - Celulele migrează de la suprafața probei,
colonizând matricea fibroasă în profunzime
3.2.3. Derivați de (met)acriloil ai polimerilor naturali
GelMA
AlgMA
MuMA
X
e.g.anhidridă SerMA...
X
X metacrilică
Leg C=C reactivă
Rol de: prin polimerizare
• platformă
3D,
• scaffold
• acoperire

Avantaje:
Hidrogeluri
➢ Grade de substituție hibride
➢ Se evită anumiți reticulanți toxici naturak-
➢ Lărgirea bibliotecii de hidrogeluri de origine naturală sintetice –
➢ Posibilitatea interacțiunii cu polimeri/monomeri sintetici ECM-mimetice
 GelMA = gelatină metacrilată (gelatină metacrilamidă)

GelMA - pHEMA GelMA - pAAm

s-IPNs novel IPNs

sequential or block-
simultaneous copolymers
IPNs

From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel, M Dierick, L Van
Hoorebeke, H Declercq, M Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter,
8 (37), 9589, 2012 – Anexa3c4
A Serafim, C Tucureanu, DG Petre, DM Dragusin, A Salageanu,
S Van Vlierberghe, P Dubruel, IC Stancu, New Journal of
Chemistry, 38 (7), 3112-3126, 2014 – Anexa4c4
 cellular
interactions GelMA-pAAm
MTT 24h

MTT 7 days
↑ GelMA

L929
cells, 7
days

pHEMA
control
From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel, M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37), 9589, 2012
A Serafim, C Tucureanu, DG Petre, DM Dragusin, A Salageanu, S Van Vlierberghe, P Dubruel, IC Stancu, New Journal of Chemistry, 38 (7), 3112-3126, 2014
Bicomponente - derivați metacrilați de gelatină și mucină

❖ Development of
MuMA
❖ MuMA-GelMA
hybrids

Sample GelMA:MuMA feed GF, %

ration (wt/wt)
S0 1:0 98.56  1.12
S1 1000:1 98.00  1.43
From
S2 100:1 99.49  0.43 Serafim, A et al., MATERIALE
S3 50:1 99.01  0.71 PLASTICE, 55(1): 68-74, 2018
S4 25:1 97.18  2.11 – Anexa5c4
 Tema 1 – 2p
Polistirenul este un polimer sintetic cu multiple aplicații în industrie, inclusiv pentru
fabricarea consumabilelor de tip plăci pentru culturi celulare.
Dați 2 exemple de tratamente de bioactivare folosite în practică pentru produse
comerciale tip plăci din polistiren pentru culturi celulare. Prezentați răspunsul într-un
tabel în care să indicați:
• Numele produsului comercial (link către produsul respectiv) 0,5p
• Compania producătoare (link către produsul respectiv) 0,5p
• agentul de modificare/bioactivare 0,5p
• scopul pentru care se realizează bioactivarea. 0,5p
 Tema 2 – 3 puncte
Dați 2 exemple în care polimeri naturali sunt utilizați ca scaffold pentru regenerare
tisulară și 2 în care polimeri naturali sunt folosiți ca bioactivator pentru acoperirea
unor implanturi.
Indicați referințele bibliografice care susțin exemplele alese.
Bioactivare
Curs 7
 3. (Bio)activarea pentru sinteza de matrici
extracelulare sintetice si fabricarea de
substraturi implantabile

3.1. Clase de grupe functionale pentru biofunctionalizari

3.2. Polimeri naturali și derivatii lor ca platforme 3D pentru regenerare tisulara.
3.3. Decorarea cu peptide de adeziune celulara.
3.4. Hidrogeluri biomimetice ca analogi de matrice extracelulara.
3.5. Bioactivare pentru fenomene biomimetice. (Proteine anionice pentru biomineralizare.)
Derivați de colagen / gelatină
Obținere derivat polimerizabil GelMA

GelMA
Gelatină metacrilată /
metacrilamidată sau
metacriloil gelatină

Reacție de acilare (de

ex. cu anhidrida
metacrilică) la –NH2
din Lys, pt a grefa
grupări polimerizabile
C=C.
Formare de
hidrogeluri prin
polimerizare
radicalică cu formare
de rețea

Scientific RepoRts| (2019) 9:6863 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-42186-x

NH2 DS = 60% DS = 100%
C=C C=C

gelatină
GelMA GelMA
Formarea hidrogelurilor GelMA – efectul DS asupra densității rețelei

DS = 60% DS = 100%

Creșterea gradului de
substituție generează
hidrogeluri cu rețea mai
densă
 Obținere hidrogeluri GelMA

Reticulare prin polimerizare

Marele avantaj practic al polimerilor naturali (met)acrilați – Formarea de
hidrogeluri prin polimerizare radicalică cu formare de rețea

Avantaje – utilizarea de inițiatori netoxici – eliminarea agenților de reticulare

toxici precum aldehida glutarică

Grupe C=C polimerizabile Polimerizare cu formare de rețea

 Gradul de
substituție
(DS) al
derivaților
metacrilați
determină și
proprietățile
mecanice,
afinitatea fața hidrogeluri
de medii
apoase etc ale
hidrogelurilor
formate
Aplicație:
Analizați figura
și explicați ce
efect are
creșterea
gradului de hidrogeluri
substituție de
la 60% la 100%
asupra propr.
hidrogelurilor.
De ce? Scientific RepoRts| (2019) 9:6863 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-42186-x
 GelMA
– afinitate față de
celule pt că își
menține situsurile
adezive pt celule
(e.g. RGD).
- poate îmbunătăți
adeziunea
celulară și poate
stimula
comportamentul
celulelor
(proliferare și
diferențiere)
atunci când este
combinată cu alte
materiale inactive
față de celule.

Scientific RepoRts| (2019) 9:6863 | https://doi.org/10.1038/s41598-019-42186-x

 3.3. Decorarea cu peptide de
adeziune celulară
- Formă de bioactivare a polimerilor
- Reacții:
• în soluție
• la interfață

Substrat adeziv pt
Substrat neadeziv pt celule celule
Polizaharide sau proteine decorate fizic
sau covalent cu peptide adezive celular
Deja studiat în secț 3.2– alginat peptide
Bioactivarea gelatinei și
derivaților ei cu peptide de
adeziune celulară
• Creșterea afinității față de celule
• Hidrogeluri mai interactive față de celule
(hidrogelurile convenționale pot pierde din
adeziunea față de celule datorită reducerii
accesului celulelor la fragmentele bioactive ca
urmare a reticulării)

Exemple de peptide
CGGKRSR (MW = 1218.895
Gelatină B sau
g/mol), CGGFHRRIKA (MW =
Gelatină B metacrilamidată (GelMA)
1827.389 g/mol),
CGGRGD (MW =
1615.2 g/mol) and
CGGc(RGDfK) (MW =
1048.932 g/mol)

Bioconjugați peptidă-Gelatină B sau

peptidă-Gelatină B metacrilamidată
 Peptide concentration [GelMA-c(RGD)] GelMA Peptide concentration
in GelMA-c(RGD) bioconjugate, (mg) (mg) in the hydrogel [GelMA-
c(RGD)]/GelMA,
(mg peptide/g [MAG-c(RGD)])
(ng peptide/g final hydrogel)
0 0.00 750.00 0
1 26.87 723.13 35828
0.1 2.69 747.31 358.67
0.01 0.27 749.73 3.6

Osteoblaste MC3T3
❖ Bioconjugatul
GelMA-RGD
stimulează afinitatea
față de celule.
❖ Poate fi folosit
pentru acoperirea
unor hidrogeluri sau
produse
implantabile, sau în
compoziția acestora
3.4.
Hidrogeluri
biomimetice
ca analogi
de matrice
extracelulară
Tipuri
• Sintetice
• Naturale
• Hibride Ex. Hidrogelurile pe bază
de GelMA
• Permisive
• Adezive pt celule
• Rețele simple, monocomponente
• Sisteme multicomponente
• Rețele IPN
HIDROGELURI cu componente cu
afinitate celulară
• Colagen
• Gelatină sau GelMA
• Nanoceluloză
• Polimer sintetic – gelatină sau GelMA
• ...
Hidrogeluri ECM-
mimetice pe bază de
polimeri naturali –
Ex. gelatină
Sub formă de:
• Bureți poroși
• Membrane
• Particule
• Substraturi micro/nano-fibroase
• Structuri tubulare
• Printate 3D...
Exemplu: From
Fabrication and biocompatibility evaluation
substrat fibros din gelatină, fabricat prin electrofilarematerials
of nanodiamonds-gelatin electrospun
designed for prospective tissue
regeneration applications. Materials, 12(18)
Substrat fibros – fibre submicronice (aprox 500 nm); 2019

- stimulează adeziunea și proliferarea celulare

Matrice hidratată, elastică
Aplicație - tub pt reconstrucție nervoasă
 Hidrogeluri hibride natural-sintetice –
soluție pt bioactivarea polimerilor

Ch 4. Combinations of biopolymers and synthetic polymers for bone regeneration, A. T. NEFFE , K. K.

sintetici

JULICH-GRUNER and A. LENDLEIN, DOI: 10.1533/9780857098104.1.87

Hidrogelul natural bio-
adeziv poate fi folosit
prin diverse strategii:

• La nivel molecular
• Copolimerizare
• Acoperirea
suprafeței
• Grefare
Hidrogeluri hibride pe bază de GelMA
Exemplu GelMA - pHEMA

Monomer
sintetic

s-IPNs novel IPNs

sequential or block-
simultaneous copolymers
IPNs
 GelMA - pAAm

acrilamidă
 GelMA-pHEMA

Afinitatea față de
apă – controlată
prin raportul
GelMA:pHEMA
Polimerul mai
hidrofil mărește
afinitatea față de
medii apoase.

Rezultă substraturi
poroase cu
porozitate
dependentă de
afinitatea față de
apă (obținere prin
liofilizare)

From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel,
M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M
Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37),
9589, 2012
 From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel,
M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M
GelMA - pAAm Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37),
9589, 2012

Afinitatea față
de apă –
controlată prin
raportul
GelMA:pAAm și
reticulantul
folosit (de ex
MBA)

Rezultă
substraturi
poroase cu
porozitate
dependentă de
afinitatea față de
apă (obținere
prin liofilizare)
 GelMA-pAAm

Afinitatea față de apă

Modulul de compresiune

From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel, M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M
Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37), 9589, 2012

A Serafim, C Tucureanu, DG Petre, DM Dragusin, A Salageanu, S Van Vlierberghe, P

Dubruel, IC Stancu, New Journal of Chemistry, 38 (7), 3112-3126, 2014
 From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel,
M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M
GelMA-pHEMA Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37),
9589, 2012

cellular A Serafim, C Tucureanu, DG Petre, DM

Dragusin, A Salageanu, S Van Vlierberghe, P
interactions Dubruel, IC Stancu, New Journal of
Chemistry, 38 (7), 3112-3126, 2014

↑ GelMA

pHEMA
control
 From
DM Dragusin, S Van Vlierberghe, P Dubruel,
M Dierick, L Van Hoorebeke, H Declercq, M
Cornelissen, IC Stancu, Soft Matter, 8 (37),
9589, 2012

Degradare in vitro A Serafim, C Tucureanu, DG Petre, DM

Dragusin, A Salageanu, S Van Vlierberghe, P
Dubruel, IC Stancu, New Journal of
Chemistry, 38 (7), 3112-3126, 2014

Degradare enzimatică GelMA-pHEMA (pHEMA nebiodegradabil)

 Alte hidrogeluri multicomponente
pe bază de gelatină

Gelatina – în IPN bioactivează hidrogeluri cu componente permisive, neaderente

HADSCs inside (a) Gel/Alg/PAAm and (b) Gel/Alg scaffolds during chondrogenesis From
Dinescu, S., et al. Stem Cells
International, 2015
GelMA-MuMA
Gelatină metacrilată + mucină metacrilată  hidrogel mixt bicomponent

Combină propr
componentelor individuale

MATERIALE PLASTICE ♦55♦No. 1 ♦2018 http://www.revmaterialeplastice.ro

 ”increasing the MuMA content leads to a
higher viability of the L929 (e.g.: the
computed value for S1 was of 0.47 ± 0.02,
while the value calculated for S4 was of
0.53 ± 0.05)”

MATERIALE PLASTICE ♦55♦No. 1 ♦2018 http://www.revmaterialeplastice.ro

Gel(M)A – platformă 3D pentru IT
și MR
• Mimează colagenul din matricea extracelulară
• Hidrogelurile Gel(M)A – mimează ECM
• Adezive față de celule
• Reticulabil în condiții blânde, chiar în prezența
celulelor (LAP, Irgacure)
• Prelucrabil prin diferite metode
• Permite bio-printare 3D
Exemplu – produs comercial

TissueFab® - GelMA-
UV bioink

https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-
aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Bulletin/1/gelma-uv-905429-mk.pdf
 3.4.
Hidrogeluri
biomimetice
ca analogi
de matrice
extracelulară

Utilizate
Utilizate
ca atare,
ca
ca
acoperire
scaffold
Gel(M)A – platformă 3D pentru IT
și MR
• Mimează colagenul din matricea extracelulară
• Hidrogelurile Gel(M)A – mimează ECM
• Adezive față de celule
• Reticulabil în condiții blânde, chiar în prezența
celulelor (LAP, Irgacure)
• Prelucrabil prin diferite metode
• Permite bio-printare 3D
Precursori pentru (bio)printare 3D
• Nou domeniu aplicativ
• Presupune materiale bioactive pentru: menținerea viabilității în timpul
printării și tratamentelor de stabilizare (reticulare), stimularea
interacțiunii cu celulele imobilizate în precursor, recrutarea celulelor
țesutului gazdă etc
• Necesitatea combinării caracterului bioactiv specific cu alte proprietăți
necesare pt aplicația țintă și metoda de fabricare aleasă: reologice,
stabilizare, proprietăți mecanice post-implantare, biodegradare etc

Precursori bioactivați cu proteine ECM, peptide de adeziune celulară sau factori

de creștere
Exemplu – produs comercial

TissueFab® - GelMA-
UV bioink

https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-
aldrich/docs/Sigma-Aldrich/Bulletin/1/gelma-uv-905429-mk.pdf
 Bioactivare la suprafața
implantului, la interfața
biomaterial-țesut
Ex. plasă polipropilenă (sintetic
hidrofob) pt fixarea peretelui
abdominal

1. Activare în plasmă CO2

2. Bioconjugare GelMA
3. Reticulare GelMA –
polimerizare cu formare de
hidrogel
4. Bioactivare suplimentară cu
PRP

Plasă PP bioactivată
Activitate – Ce este PRP? Dați
exemple utilizare în regenerare
tisulară
Plasă PP bioactivată cu
GelMA (PPG) sau MuMA
(PPM) + PRP (XXXP)

Fibroblastele aderă optim

pe PPG și PPGP

Proteine folosite cu
succes pt bioactivarea
unor implanturi inerte,
hidrofobe,
nedegradabile
 3.5. Bioactivare pentru fenomene
biomimetice. Proteine/specii anionice
pentru biomineralizare nanobiocompozit
❖ Bio-inspirație - de la
participarea proteinelor
anionice din ECM a țesutului
dur la biomineralizare
❖ Analiza fenomenului de
biomineralizare
Mimarea
Matrici cu
proteinelor
afinitate față
osoase active
de calciu
în mineralizare

”Despite extensive data it is not yet clear which

of these molecules is absolutely essential for
physiologic calcification in each of the calcified
tissues”
Matrix proteins and mineralization: an overview - 1996;35(1-4):357-63. doi:
 Exemple specii anionice Sisteme
Distribuție
(afinitate pt Ca2+) experimentale

❖ gelatină-alginat
Ionii Ca2+ - afinitatea față de (I.-C. Stancu et al., 2011)

anumite structuri organice –

esențială pt inițierea mineralizării ❖ gelatină-caseină
biomaterialelor ❖ pHEMA-caseină
(D.-M. Dragusin et al., 2011; D.
M. Dragusin, Giol, Serafim, et
în
al., 2011; D. M. Dragusin,
Serafim, et al., 2011; Lungu et
al., 2010; A. Serafim, Vasile, et
 Polimeri anionici (polimeri sintetici al., 2014)
fosforilați, alginat – 1 – COO-/ per
unitate structurală; proteine cu ❖ Dendrimeri PAMAM
pe (I.-C. Stancu, 2010) (Mocanu et
afinitate față de Ca2+ caseină – al., 2011) (A. Serafim, Cecoltan,
proteină fosforilată) Vasile, et al., 2015) (A. Serafim,
Vasile, et al., 2013)
 Dendrimeri poliamidoamină
(PAMAM) cu grupe terminale –COOH ❖Fibre gelatină (RSC
Advances, ISSN: 2046-2069, 5
 Bioactivare cu fosfatază alcalină…. (116), 95467, 2015)

Habilitation Thesis - Prof. STANCU Izabela-Cristina, 6/11/2020

 1. Polimeri anionici pot induce formare fază minerală
1.1. polimeri anionici – componente ale biomaterialului

Formare fază minerală pe hidrogeluri nanofază minerală pe hibride Cas-pHEMA

Gelatină-Alginat, incubate în SBF, 3 săpt

nanofază minerală pe hibride Cas-pAAm hybrids

IC Stancu, et al. Journal of Materials Science: Materials in Medicine, 22 (3), 451,

2011
DM Dragusin, et al. Optoelectronics and Advanced Materials-Rapid
Communications, 1842-6573, 5 (12), 1320, 2011
DM Dragusin, et al. Digest Journal of Nanomaterials and Biostructures, ISSN:
1842-3582, 6 (4), 1909, 2011
1. Polimeri anionici pot induce formare fază minerală
1.2. polimeri anionici – modificarea chimică a unor polimeri pt a prezenta
grupe anionice

OH COOH
Acid bromo
acetic

pHEMA pHEMA

Grupele anionice stimulează mineralizarea

Effects of negatively charged groups (carboxymethyl) on the calcification of poly(2-hydroxyethyl methacrylate), 2002,
Jul;23(14):3053-9. doi: 10.1016/s0142-9612(02)00069-8.
 Mimarea proteinelor
anionice - copolimeri
sintetici cu grupe fosfat

I.C. Stancu et al. / Biomaterials 25 (2004) 205–213

2. Imobilizarea unor (nano)specii anionice pot induce formare fază minerală

1. Fibre din gelatină încărcate cu nanospecie anionică Mineralizare in vitro în

timpul culturii celulare

Electrospun fish gelatin fibrous scaffolds with improved bio-interactions due to carboxylated nanodiamond loading, RSC Advances, ISSN: 2046-2069, 5 (116), 95467, 2015
3. Imobilizarea unor molecule bioactive pot induce formare fază minerală

Imobilizare Fosfataza alcalină – enzimă stimulează biomineralizarea

pHEMA + AlkP

Fază minerală formată după 7 zile și 17 zile în SBF, + beta-glicero fosfat

R. Filmon , M. F. Basl , A. Barbier & D. Chappard (2000)

Poly(2-hydroxy ethyl methacrylate)-alkaline phosphatase: A composite biomaterial allowing in vitro studies of bisphosphonates on the
mineralization process , Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition, 11:8, 849-868, DOI:
10.1163/156856200744057
 Utilizarea unor
Specii grupe/elemente cu
anionice pot afinitate față de
stimula calciu poate stabiliza
mineralizarea faza minerală
Creșterea formată
stabilității
mineralului
Relație
compoziție-
Concentrație prea distribuție-
mare (-) poate proprietăți
inhiba formarea
fazei minerale
 In vitro validation of cell-interactivity
Bionanocomposite ce formează structură
poroasă
Bioactive Injectable
Macroporous
Biomaterials for Bone
Regeneration,
183/2012 –PCCA-2011-
3.2-0885 collaborative
project

Histological appearance at 28 days post implantation

Nanocomposite particles with

improved microstructure for 3D
culture systems and bone
regeneration, JOURNAL OF
MATERIALS SCIENCE-MATERIALS
Osteoblast pe microparticulă nanostructurată IN MEDICINE, 28(10), Article
Number: 153, 2017

Procedeu de obținere a unor

substraturi bionanocompozite
hidratate pentru creștere celulară
și regenerare/modelare tisulară,
Brevet nr. 132544 data eliberării
29.05.2020

Habilitation Thesis - Prof. STANCU Izabela-Cristina, 6/11/2020

concluzii
❑ Bioactivarea polimerilor, componentelor, suprafețelor – necesară pt proiectarea
unor substraturi cu proprietăți predictibile, care să stimuleze regenerarea
tisulară
❑ Bioactivarea – prin diferite metode, specific pentru aplicația țintă

❑ Proteinele și peptidele – agenți de bioactivare principali