Focar de infectii nosocomiale cu Klebsiella

pneumoniae
la nou-nascuti: valoarea investigatiei microbiologice
moleculare

Brindusa-Elena Lixandru1, Codruta Romanita Usein1, Maria Condei1,

Daniela Cristea1, Elena-Carmina Dragulescu1, Ileana Luminita Coldea1,
Felicia Antohe2, Irina Codita1,3

1
INCDMI Cantacuzino, Bucuresti
2
IBPC “N. Simionescu”, Bucuresti
3
UMF “Carol Davila”, Bucuresti
 Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

Klebsiella pneumoniae : introducere

Caracteristici :
> Enterobacteriaceae
> Bacili Gram-negativi
> Oxidaza-negativi
Aero-anaerob
Imobil
Tractul digestiv al omului (30%) si al animalelor
 3 subspecii: subsp. pneumoniae, ozenae, rhinoscleromatis
Testarea sensibilitatii la antibiotice :
« Grupul 2 » de Enterobacterii: producerea naturala de penicilinaza de nivel
scazut (SHV-1 cromozomala) inhibata de acidul clavulanic si tazobactam
 Rezistenta naturala la: aminopeniciline (ampicilina, amoxicilina)
carboxipeniiline (ticarcilina), ureidopeniciline (piperacilina)
Fara rezistenta naturala la C1G, C2G, carbapeneme, aminoside, quinolone,
TE, C, SXT
 Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

Klebsiella pneumoniae : impactul clinic


infectii oportuniste la pacientii imunocompromisi, diabet,
alcoolism, pacienti cu dispozitive invazive, nou nascuti

Tractul urinar si respirator: cele mai frecvente situsuri de
infectie

Raspandire rapida prin mainile personalului medical

A -2 a cauza a septicemiilor dupa E. coli

Rata de mortalitate crescuta

Focare cu tulpini rezistente (BLSE), diseminare clonala
 Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

Klebsiella pneumoniae: mecanisme de rezistenta la

beta-lactamine
 Producerea de β-lactamaze: mecanismul principal de rezistenta
la β-lactamine la bacteriile Gram-negative.
 plasmide cu gene de rezistenta
 BLSE (beta-lactamaze cu spectru extins):
 Prima BLSE descrisa la o tulpina de K. pneumoniae (1983)
 BLSE derivate din penicilinze TEM, SHV, prin modificarea 1 sau 2 aa din
situsul activ al enzimei
 Dupa 2000 CTX-M un grup nou BLSE cu raspandire modiala E. coli ++++, K
pneumoniae, Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis

 Cefalosporinaze plasmidice (ex: CMY-2): achizitia de gene de

tip AmpC prin intermediul plasmidelor de la speciile natural
producatoare (Enterobacter, Serratia, Morganella, Citrobacter
freundii)
 Carbapenemaze: KPC+++, VIM,NDM, OXA-48
 Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

Obiectiv:

Investigarea unor tulpini izolate dintr-un focar

de infectii nosocomiale intr-o sectie de nou-
nascuti
Conferinta Nationala de Microbiologie si Epidemiologie , Bucuresti, 2013

Material si metode

• 8 izolate clinice
• Provenienta
– 2 nou- nascuti
• Prelevate clinice:
– Hemocultura
– Secretie pulmonara/traheobronsica
– Secretie nazala
– Exsudat faringian
 Material si metode
• Confirmare diagnostic
 Metode conventionale: teste biochimice “in
house”
 Metoda automata VITEK
 Testarea sensibilitatii la antibiotice:
 Metoda disc difuziei Kirby Bauer (CLSI):
 amoxilcilina, amoxicilina+ acid clavulanic, ticarcilina, piperacilina, piperaclina + tazobactam, cefalexin,
cefuroxim, cefixim, cefotaxim, ceftazidim, aztreonam, ertapenem, imipenem, gentamicina,
tobramicina, amikacina, acid nalidixic, ofloxacin, ciprofloxacin, tetraciclina, cloramfenicol, trimetoprim /
sulfametoxazol

 Test de sinergie dublu-disc

 Detectare gene prin PCR :
 blaCTX-M
 blaTEM
 blaSHV
 Material si metode

Tipizare :
– Metode fenotipice:
• Lizotipare
• Antibiotipare
– Metode moleculare:
• Electroforeza in camp pulsator (pulsed field gel
electrophoresis = PFGE) a fragmentelor de
ADN genomic obtinute cu enzima de restrictie
XbaI
 Rezultate - teste fenotipice

 Toate cele 8 tulpini au fost confirmate ca

fiind K. pneumoniae
 Toate tulpinile au prezentat acelasi
pattern de sensibilitate / rezistenta:
 R: AMX, TIC, PRL, CXM, KF, CTX, CN, SXT
 I: AMC, CFM, CAZ, NA
 S: TZP, IMP, ETP, ATM, AK, TOB, CIP, OFX, C, TE

Fenotip BLSE

 Toate tulpinile au fost lizorezistente (netipabile prin

lizotipie)
 Rezultate - teste moleculare

Rezultate PCR
1 2 3 4 5 6 7 8 M+ 1 2 3 4 5 6 7 8 M+
1 2 3 4 5 6 7 8 M+

CTX grup1 SHV TEM

(CTX-M-15++++?)
Legenda
1-8– tulpini K. pneumoniae
9- martor pozitiv
10–martor negativ
11- apa
12- marker greutate moleculara
 Rezultate-teste moleculare
Rezultate PFGE
Legenda:
1,6,11-Salmonella
ser..Braenderup
H9812
2 - 5, 7 -10- tulpini
K.pneumoniae

Similaritate 100% a profilurilor obtinute - clonalitatea si inrudirea

epidemiologica a tulpinilor
 Concluzii

• Utilizarea metodelor fenotipce si

moleculare a permis confirmarea unui
focar de infectie nosocomiala care a
evoluat intr-o sectie de reanimare nou-
nascuti.
• Analiza PFGE reprezinta ”gold standard”
pentru demonstrarea clonalitatii tulpinilor
din focar