• Q1. Care sunt principalele diferențe între cromatografia de lichide de înaltă
performanță și cea de gaze? • Q2. Ce tip de detector de GC este utilizat cel mai frecvent? Explicați principiul său de lucru și care sunt limitele sale? • Q3. Care sunt gazele purtătoare utilizate în mod obișnuit în analiza GC atunci când se utilizează detectorul FID? • Q4. Care sunt caracteristicile dorite ale unui detector GC? • Q5. Ce înțelegeți prin specificitatea unui detector? • Q6. Care sunt tipurile de coloane capilare cel mai frecvent utilizate? • Q7. Ce înțelegeți prin eficiența coloanei și cum se exprimă? • Q8. Ce înțelegeți prin programarea temperaturii în analiza GC? • Q9. Când este util modul de lucru izoterm? • Q10. Ce măsuri ati adopta pentru a prelungi durata de viață utilă a unei coloane? Ans1. • În HPLC faza mobilă este un lichid; în cromatografie în fază gazoasă faza mobilă sau purtătorul este un gaz. • Cromatografia de gaze se aplică pentru analiza compușilor volatili; compușii nevolatili pot fi ușor analizati prin HPLC. • Cromatografie de gaze nu poate fi utilizata pentru analiza moleculelor cu masă moleculară mare; HPLC are aplicații pentru separarea și identificarea compușilor cu greutate moleculară foarte mare. • HPLC necesită presiuni de lucru mai mari decât GC, deoarece lichidele necesită presiuni mai mari decât gazele pentru transport prin intermediul sistemului. • Coloane HPLC sunt scurte și late, în comparație cu coloanele GC. Ans2. Detectorul cel mai frecvent utilizat este detectorul cu ionizare in flacără. Compusul separat care a ajuns la detector este ars cu ajutorul gazului combustibil și produce ioni și electroni care pot conduce electricitate prin flacără. Prin aplicarea unei diferențe mari de potențial la vârful arzătorului și la electrodul colector localizat deasupra flăcării si se măsoara curentul dintre electrozi. Detectorul este dependent de debitul masic și răspunsul nu este afectat de schimbările debitului de gaz purtător. Cu toate acestea, detectorul nu detecteaza gaze anorganice, cum ar fi CO, O2, NH3, N2, CS2, CO2, etc. Ans3. Atunci când se utilizează detectorul FID gazele inerte frecvent utilizate în analiza sunt azot si heliu. Azotul este mai frecvent utilizat, deoarece este mai puțin costisitor decât heliu. Puritatea gazului purtător ar trebui să fie mai mult de 99,995%, de aceea ar trebui folosite capcane on-line pentru a preveni umezeala reziduală sau alte impurități de la intrarea în sistem. Ans4. Alegerea detectorului pentru analize are la baza criteriile: • Reproductibilitate la modificări ale concentrației compușilor de eluat. • Domeniu dinamic liniar larg. • Sensibilitate ridicată. • Ar trebui să aibă volum intern mic pentru a da peak-uri înguste și, de asemenea, sa facilitează spălarea urmelor din proba anterioara. • Ar trebui să fie, de preferință, non-distructiv. Ans5. Detectoarele se împart în trei categorii, în funcție de răspunsul la compușii eluati: • neselectivi – dau răspuns pentru toti compusii din faza mobila cu excepția gazului purtător. • selectivi - răspund la o anumită clasă de compuși cu proprietăți fizice sau chimice comune. • specifici - răspunsul la un singur compus specific. Ans6. Coloanele capilare sunt în general tuburi lungi de 10 - 100 m, cu un diametru interior cuprins între 0,1 - 0,5mm, realizat din material flexibil, cum ar fi silice topită. Tipuri de coloane capilare: • Wall coated open tubular (WCOT) - peretele intern este acoperit cu o peliculă foarte fină de lichid adsorbant • Surface coated open tubular (SGOT) - peretele interior este căptușit cu un strat de suport solid pe care este absorbită faza lichidă. Coloanele sunt flexibile și înfășurate în mai multe bobine; fixate în interiorul cuptorului. Ans7. Prin utilizare continuă, o coloană își pierde treptat puterea de rezoluție originală. Eficiența coloanei este exprimată pe baza conceptului teoriei talerelor. In timpul separarii, fiecare component de separat petrece un timp finit în fiecare taler teoretic. Eficiența coloanei este cu atat mai buna cu cat înălțimea talerului este mai mică, ceea ce inseamna un număr de talere (N) cat mai mare.
unde N = număr de talere teoretice; tr = timpul de retenție al unui peak
w = lățimea peak-ului la bază; N poate fi de asemenea exprimat ca: unde w1/2 este lățimea peak-ului la jumătatea înălțimii Eficiența coloanei este exprimată în termeni de înălțime echivalentă a talerelor teoretice (HETP): HETP = L/N, unde L = lungimea coloanei în de mm; o valoarea mică a HETP semnifică o eficiență mai mare coloanei. Ans8. Programarea temperaturii înseamnă schimbarea temperaturii coloanei cu o viteză predeterminată în timpul ciclului de analiză. Aceasta are aceeași influență asupra timpului de eluție a componentelor separate ca programarea gradientului în analiza HPLC. Programul de temperatura ajută la reducerea timpului de analiză permițând eluarea timpurie a componentelor mai puțin volatile. Ans9. Modul de lucru izoterm este util atunci când este necesară o rezoluție ridicată pentru separarea compușilor cu interval de fierbere îngust. Temperatura este setată la mijlocul intervalului de puncte de de fierbere ale constituenților. Acest lucru permite obtinerea unei rezolutii bune la separarea unor componenti cu puncte de fierbere mici, dar ar putea conduce la peak-uri cu largite in cazul componentilor cu puncte de fierbere mai mari, datorită retenției lor în coloană timp mai indelungat. Ans10. • Conditionarea coloanei înainte de prima utilizare sau după depozitare timp îndelungat. • Aveți grijă să nu depășească limita superioară de temperatură specificată de producător • A se evita injectarea soluțiilor care sunt puternic acide sau bazice în natură • Spalarea coloanei prin injectare cu solvenți cum ar fi metanol, clorură de metilen sau hexan pentru a îndepărta contaminarea coloanei după utilizare excesivă.