PRCTICA N 5.

- DETERMINACIN DE CIDOS GRASOS DE ACEITE DE SACHA INCHI POR ANALISIS CUALITATIVO Y CUANTITATICO DE SUS RESPECTIVOS STERES METLICOS MEDIANTE CROMAGRAFA DE GASES

1 OBJETO
El presente mtodo internacional proporciona orientaciones generales para determinar, mediante cromatografa de gases con columna de relleno o capilar, la composicin cualitativa y cuantitativa de una mezcla de steres metlicos de cidos grasos obtenidos por una preparacin previa de una muestra de aceite de sacha inchi. El mtodo no es aplicable a los cidos grasos polimerizados.

2
2.1

PRINCIPIOS TERICOS
CROMATOGRAFIA DE GASES

La cromatografa de gases (CG) es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles. Incluye todos los sistemas cromatogrficos en los que la fase mvil es un gas. Existen dos tipos de cromatografa en fase gaseosa: la cromatografa gas-slido (CGS) y la cromatografa gas-lquido (CGL), segn se utilice una fase estacionaria slida o una fase estacionaria lquida (sobre un soporte slido, o directamente sobre la pared interna de la columna), respectivamente. De las dos modalidades, la primera tiene unas aplicaciones bastante limitadas, por lo que en la prctica, casi siempre que se hace alusin a la cromatografa de gases est implicada la CGL.

2.2 EL ACEITE DE SACHA INCHI

En comparacin a los aceites de todas las semillas oleaginosas utilizadas en el mundo, para consumo humano, el sacha inchi es el ms rico en cidos grasos insaturados, llega hasta 93,6%.

El promedio de los cidos grasos poliinsaturados est compuesto de: y y y 48,60% de cido graso esencial alfa linolnico Omega - 3 36,80% de cido graso esencial linoleico Omega - 6 8,28% de cido oleico Omega - 9

Presenta bajo contenido de cidos grasos saturados 6,39% en promedio, 3,85% de palmtico y 2,54% de esterico.

2.3 ANLISIS DE LOS CIDOS GRASOS CROMATOGRAFA GAS LQUIDO (GLC)

Fue descubierta en 1950 y a revolucionado el anlisis de cidos grasos. Esta tcnica es frecuentemente usada para estos compuestos. Es aplicable a muestras biolgicas que contienen estos lpidos, con una longitud de cadena en un rango de C 14 a C 24. El anlisis del GLC de los cidos grasos se realiza despus de su conversin apolar a los derivados del ster metlico. Procedemos a utilizar este mtodo para cuantificar los acidos grasos, en especial los polinsaturados, en aceite de sacha inchi para verificar la calidad de su produccin ya que en el mercado existen aceites denominados vrgenes o extra vrgenes , las cuales indican que la materia prima no ha sido tratada por calor, por lo tanto, no hay disminucin del contenido orgnico, que no necesariamente lo son.

3 REACTIVOS
3.1 Gas portador

Gas inerte (nitrgeno), perfectamente desecado y que contenga menos de 10 mg/kg de oxgeno.

3.2

Gases auxiliares

Aire u oxgeno, exento de impurezas orgnicas.

3.3

Patrn de referencia

Una mezcla de steres metlicos de cidos grasos puros, o los steres metlicos de una grasa de composicin conocida y, preferentemente, similar a la de la materia grasa objeto de anlisis, de los siguientes cidos grasos puros: palmtico, esterico, oleico y linoleico.

4 APARATOS

4.1 Cromatgrafo de gases

El cromatgrafo de gases constar de los siguientes elementos:

4.1.1

Sistema de inyeccin

Utilizar un sistema de inyeccin: a) con columnas de relleno, con un espacio muerto lo ms pequeo posible (en este caso, el sistema de inyeccin podr calentarse a una temperatura de 250C).
4.1.2 Horno

El horno podr calentar la columna a 180C y mantener dicha temperatura con una oscilacin mxima de 1C.

4.1.3

Columna de relleno

4.1.3.1 Columna de un material inerte a las sustancias que vayan a analizarse (acero inoxidable) y de las dimensiones siguientes:

a) Longitud: de 1 a 3 m. Con cidos grasos de cadena larga (ms de C20) es conveniente utilizar una columna relativamente corta. b) Dimetro interior: de 2 a 4 mm.
(*) Recomendacin: 710006 Columna de acero inoxidable con relleno standard, 6' long., 1/8" OD, 2 mm ID.

4.1.3.2

Relleno, que incluya los siguientes elementos:

a) Soporte: tierra de diatomeas lavada con cido y silanizada, u otro soporte inerte adecuado, con un margen estrecho de tamao de grano (margen de 25 m, entre 125 y 200 m); el tamao medio de grano estar en funcin del dimetro interior y de la longitud de la columna. b) Fase estacionaria: lquido polar de tipo polister (dietilenglicol succinato). La fase estacionaria deber constituir del 5% (m/m) al 20% (m/m) del relleno.
(*) Recomendacin Panreac: 705103 Chromosorb recubierto con fase estacionaria Dietilenglicol succinato / 10% en Chromosorb W-AW.

4.1.4

Columna capilar

(*) Recomendacin Panreac: 733060.25 Columna capilar FS-CW 20 M, 25 m long., 0,25 mm ID, 0,25 m espesor.

4.1.5

Detector a usar es un FID (Detector de ionizacin de llama) que opera con hidrgeno y aire, y se mantiene a 225C.

El detector usado fue un FID (Detector de ionizacin de llama) que opera con hidrgeno y aire, y se mantiene a 225 C. El aparato dispona de registrador e integrador.

4.2

Jeringa

Tendr una capacidad mxima de 10 l y estar graduada en 0,1 l.

4.3

Registrador

Si se emplea la curva del registrador para calcular la composicin de la mezcla analizada, se necesita un registrador electrnico de alta precisin compatible con los aparatos utilizados.

4.4 Integrador
La utilizacin de un integrador electrnico permite efectuar clculos rpidos y precisos. Debe proporcionar una respuesta lineal de sensibilidad adecuada y la correccin de la desviacin de la lnea de base debe ser satisfactoria.

5 PROCEDIMIENTO

5.1 Condiciones de ensayo

Al establecer las condiciones de ensayo debern tenerse en cuenta las variables siguientes: a) longitud y dimetro de la columna b) composicin y cantidad de la fase estacionaria c) temperatura de la columna d) flujo del gas portador e) resolucin exigida f) tamao de la muestra problema, determinado de modo que el conjunto del detector y el electrmetro d una respuesta lineal g) duracin del anlisis.

5.2

Muestra problema

5.2.1

Preparacin de los steres de metilo de los cidos grasos

Se trata una cantidad exactamente pesada de 0,25 g de cada aceite de sacha inchi con hexano como disolvente y potasa metanlica para la metilacin. Se mezcla bien y se deja reposar para que se separen dos fases.
5.2.2 Adicin de la muestra

Tomar con la jeringa 2 l de la solucin de steres metlicos preparados anteriormente de la fase superior e inyectarlos en la columna.

5.3 Anlisis
Tras el calentamiento programado, se contina la elucin a temperatura constante hasta que todos los componentes se hayan eluido.

6 EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

Se obtiene el cromatograma, con la lista de componentes identificados y cuantificados en %. A partir del cromatograma obtenido se identifican los estearatos de metilo de los distintos cidos grasos y se cuantifican por el mtodo de normalizacin interna, es decir, suponemos que el total de estearatos representan el 100 %, de manera que el total de las reas situadas debajo de cada pico representa el 100% de los constituyentes (elucin total). Utilizar las cifras que el integrador proporcione. Los tiempos de retencin aproximados de los cidos grasos son: y y y y TR palmtico = 6,51 TR esterico = 11,84 TR oleico = 14,24 TR linoleico = 16,74.

6.1

Mtodo de clculo
Caso general

6.1.1

Calcular el contenido de un componente dado (expresado como porcentaje en masa de steres metlicos), mediante la determinacin del porcentaje que representa el rea de su pico en relacin con la suma de las reas de todos los picos, aplicando la frmula siguiente:

Siendo: Ai: rea del pico correspondiente al componente i. A: suma de las reas de todos los picos.

Expresar el resultado con una cifra decimal.

La frmula que se aplicar a la muestra de referencia para obtener el porcentaje en peso del componente i es la siguiente:

Siendo: mi: peso del componente i de la muestra de referencia, m: suma de los pesos de los diversos componentes de la muestra de referencia.

A partir del cromatograma de la muestra de referencia calcular el porcentaje (rea/rea) del componente i del siguiente modo:

Siendo: Ai: rea del pico correspondiente al componente i, A: suma de las reas de todos los picos.

7 BIBLIOGRAFA
http://www.cybertesis.edu.pe/sisbib/2008/pariona_mn/pdf/pariona_mn.pdf http://www.quiminet.com/ar9/ar_hgsAhgsAaasd-la-cromatografia-de-gases.htm http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieriaquimica/contenidos/course_files/Tema_11.pdf http://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:h4ahmxsRAw4J:www.profeonline.c om/laboratorioquimico/mod_16/guias/lipidos_acidez_ac-grasoslibres.doc+determinacion+de+acidos+grasos+esenciales+en+aceites&hl=es&gl=pe &pid=bl&srcid=ADGEEShhf4VXHJ8hKc8B0wEkk7nQ70vWKrMb_Fp095BdBypddCBvapSkECJpbhjzycg07dL-3OHVIxzdklJcT_vvM3L9PtqqczDbxrr0pgiBOB7xxICELfomn8CVrPtcXsdKVIPZr&sig=AHIEtbRAG6VZuC6VxvXgzfh0kmiRcVxwqg http://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:AJqzPtvDj0kJ:personal.us.es/agcotro /Practicas%2520alimentos.doc+potasa+metan%C3%B3lica&hl=es&gl=pe&pid=bl&s rcid=ADGEESgohVwTX9F5pTWwoGBRVM74rv-SEsHVYs-2kmv0CFMU5EYiZ_t198nAhtQbdB3gkV0JMR_5Umj0PxY64RLQlbTRga_L8x2YaHbUtgmR2eXY4dH8TtEP03RLIaMg -WwODjnYFX&sig=AHIEtbQ82MFPKNFOtfUAH6P3qmmuGzVbmw http://www.analizacalidad.com/docftp/fi150acgrasos.pdf

y y y y

Nombre: Lissette Carmela Curihuamn Puican 08070044